抗结核分枝杆菌感染的免疫机制研究

结核病是结核分枝杆菌感染引起的疾病,机体抗结核的保护性免疫可分为非特异性免疫和特异性免疫两种,后者以特异性细胞免疫为主。αβ、γδT细胞的激活、增殖在机体抗结核分枝杆菌感染的免疫应答中起重要作用。现对宿主抵抗结核分枝杆菌感染的免疫机制及相关研究进展做一综述。     

γδT细胞与抗结核感染免疫

γδT细胞是T细胞的一种,在机体抗结核杆菌感染中发挥重要的作用。本文通过介绍γδT细胞的发生、发育和分布、抗原识别和活化、信号传导和其所具有的功能,阐述该细胞在抗结核分枝杆菌感染免疫反应中的具体作用。     

Tγδ17和Tγδ22细胞在健康成人外周血中的比例

目的:观察健康成人外周血中αβT细胞和γδT细胞中辅助性T细胞17(TH17)样细胞和TH22样细胞的比例。方法:采集18名正常人外周血用荧光抗体染色后用流式细胞仪检测αβT细胞、γδT细胞中白细胞介素-22(IL-22)、IL-17和γ干扰素(IFN-γ)表达细胞的百分比。结果:将正常人外周新鲜全血中CD3+T细胞分成γδT细胞和αβT细胞两群。TH1样细胞在αβT细胞中比例为14.31%,明显低于在γδT细胞中的61.07%(P0.01),而TH17样细胞在αβT细胞中的比例为1.16%,明显高于在γδT细胞中的0.27%(P0.01),TH22样细胞在αβT细胞中与γδT细胞中的比例分别为1.06%和0.91%,差异无统计学意义(P0.05)。结论:在γδT细胞中存在IL-17和IL-22均阳性的Tγδ17细胞和仅产生IL-22的Tγδ22细胞,但比αβT细胞中的TH17样细胞和TH22样细胞少。     

The proportions of Tγδ17 cells and Tγδ22 cells in healthy adult peripheral blood

目的:观察健康成人外周血中αβT细胞和γδT细胞中辅助性T细胞17(TH17)样细胞和TH22样细胞的比例.方法:采集18名正常人外周血用荧光抗体染色后用流式细胞仪检测αβT细胞、γδT细胞中白细胞介素-22(IL-22)、IL-17和γ干扰素(IFN-γ)表达细胞的百分比.结果:将正常人外周新鲜全血中CD3+ T细胞分成γδT 细胞和αβT细胞两群.TH1样细胞在αβT细胞中比例为14.31%,明显低于在γδT细胞中的61.07%(P<0.01),而 TH17样细胞在αβT细胞中的比例为1.16%,明显高于在γδT细胞中的0.27%(P<0.01),TH22样细胞在αβT细胞中与γδT细胞中的比例分别为1.06%和0.91%,差异无统计学意义(P>0.05).结论:在γδT细胞中存在IL-17和IL-22均阳性的Tγδ17细胞和仅产生IL-22的Tγδ22细胞,但比αβT细胞中的TH17样细胞和TH22样细胞少.     

神经酰胺对人γδT细胞和αβT细胞的诱导凋亡作用

目的: 观察神经酰胺对人γδT细胞和αβT细胞的诱导凋亡作用。方法: 用结核杆菌低分子多肽抗原(Mtb-Ag)和CD3单抗(CD3mAb)分别刺激正常人外周血单个核细胞,获得Mtb-Ag激活的T细胞(γδT细胞为主)及CD3mAb激活的T细胞(αβT细胞为主);用不同浓度的神经酰胺(C2-Cer)分别作用于γδT细胞和αβT细胞,培养3 h后收获细胞,应用Annexin-V-FITC/PI染色,流式细胞术检测不同亚群T细胞的凋亡,应用四甲基噻唑氮蓝(MTT)比色法检测T细胞的活性。结果: Mtb-Ag激活的T细胞中γδT细胞比例可达70%~90%,CD3mAb激活的T细胞中αβT细胞比例>90%;与对照组比较,低浓度的C2-Cer (≤ 10 μmol/L)对人γδT细胞和αβT细胞的诱导凋亡作用和细胞活性抑制作用均不明显(P>0。05);而高浓度的C2-Cer对γδT细胞和αβT细胞的诱导凋亡作用和细胞活性抑制作用存在显著差异:100 μmol/L的C2-Cer诱导γδT细胞、αβT细胞凋亡比例分别增加10。4%(P>0。05)及73。5%(P<0。01),活细胞区(R1区)的细胞比例分别为对照组的88。1%(P>0。05)和7。8%(P<0。01);而500 μmol/L时诱导γδT细胞和αβT细胞凋亡比例分别增加71。9%和73。8%(P<0。01),R1区的细胞比例分别为对照组的36。5%和2。7%(P<0。01)。结论: 神经酰胺能诱导活化的人γδT细胞和αβT细胞发生凋亡,诱导γδT细胞发生凋亡所需的C2-Cer浓度明显高于诱导αβT细胞所需浓度。     

MtbAg体外激活扩增的人γδT细胞表面L-选择素的动态变化

目的: 研究结核杆菌抗原(MtbAg)激活扩增的人外周血γδT细胞表面L-选择素(CD62L)的表达。方法: 用MtbAg和rIL-2刺激人外周血单个核细胞(PBMC)促使γδT细胞增殖,用CD3单克隆抗体(CD3mAb)和rIL-2刺激人PBMC促使αβT细胞增殖。取新鲜PBMC和刺激后培养3~21天的γδT细胞和αβT细胞,用多色荧光抗体标记,在流式细胞仪上检测γδT细胞表面CD62L的表达,并与αβT细胞作比较。结果: 新鲜未刺激PBMC中γδT细胞CD62L表达率为43.9%,明显低于αβT细胞的76.6%;用MtbAg或CD3Ab激活后培养第6天时CD62L在γδT细胞的表达(90.7%)和在αβT细胞表达(87.2%)均达到高峰;以后CD62L表达逐渐下降,15~21天γδT细胞CD62L的表达在低水平(16.2%~10.6%)维持,αβT细胞表面的CD62L表达(23.6%~17.5%)亦在低水平维持。结论: 新鲜PBMC中γδT细胞CD62L表达明显低于αβT细胞,但在激活后增殖过程中CD62L在γδT细胞的表达,与αβT细胞相似,呈现先上升再下降的趋势,最后稳定在低水平。     

γδT细胞的分类及其功能特质研究的新进展

γδT细胞是一群不同于αβT细胞的T淋巴细胞群,其表面T细胞受体由γ链和δ链组成。而γδT细胞本身亦是一群高度异质性细胞,其亚类种类多、表型多变、功能丰富。γδT细胞除传统的Vδ1、Vδ2和Vδ3γδT细胞外,还可根据其功能差异分为调节性γδ、产生IL-17的γδ、产生干扰素的γδT细胞、人类错配修复基因2特异性γδT细胞以及白细胞介素6γδT细胞。γδT细胞各亚类间生物学特性各异,在机体肿瘤、感染及自身免疫性疾病等的发生、发展中均有重要作用,被认为是机体连接天然免疫与适应性免疫功能的桥梁。     

人外周血γδT细胞激活后IL-2和IFN-γ表达的特点

目的: 探讨人外周血γδT细胞在不同刺激剂激活后产生Th1型细胞因子IL-2和IFN-γ的不同特点。方法: 健康成人外周血单个核细胞(PBMC)用佛波醇酯(PMA)、离子霉素(ionomycin)和抗CD28单抗(mAb)以不同组合刺激6~8h后;用流式细胞术胞内细胞因子检测法测定γδT细胞和αβT细胞IL-2和IFN-γ的表达;或用结核杆菌抗原(Mtb-Ag)刺激γδT细胞加IL-2扩增3~8天后检测γδT细胞IL-2的表达。结果: PBMC经PMA+ionomycin刺激后,与αβT细胞中产生IL-2细胞(14.0%)相比,γδT细胞中极少数细胞(1.1%)表达IL-2;但分泌IFN-γ细胞在γδT细胞中(56.1%)明显多于αβT细胞(8.5%)。如加抗CD28mAb联合刺激后,IL-2产生细胞在αβT细胞中明显增加,但在γδT细胞中未见增加;而IFN-γ表达细胞在两类细胞中均有明显增加;PBMC用Mtb-Ag激活后扩增3天后在γδT细胞中开始检测到IL-2表达,第5~6天时达高峰,第8天时逐渐下降。结论: 多克隆短时刺激对PBMC中γδT细胞表达IFN-γ能力强于αβT细胞,但产生IL-2很少;MtbAg能诱导γδT细胞表达IL-2,但过程较慢。     

γδT细胞概述及癌症免疫治疗中的应用

γδT细胞是一群不同于αβT细胞的T淋巴细胞群,其表面T细胞受体由γ链和δ链组成。而γδT细胞本身亦是一群高度异质性细胞,其亚类种类多、表型多变、功能丰富。γδT细胞除传统的Vδ1、Vδ2和Vδ3γδT细胞外,还可根据其功能差异分为调节性γδ、产生IL-17的γδ、产生干扰素的γδT细胞、人类错配修复基因2特异性γδT细胞以及白细胞介素6γδT细胞。γδT细胞各亚类间生物学特性各异,在机体肿瘤、感染及自身免疫性疾病等的发生、发展中均有重要作用,被认为是机体连接天然免疫与适应性免疫功能的桥梁。本文就γδT发生、亚群的分类、细胞表型及分布、活化、功能及癌症免疫治疗方面进行综述。     

乙醇及二甲基亚砜对人γδT细胞和αβT细胞凋亡与细胞活性的影响

目的观察不同浓度的乙醇及二甲基亚砜(DMSO)对人γδT细胞和αβT细胞凋亡与细胞活性的影响. 方法分别用结核杆菌低分子多肽抗原(Mtb-Ag)、CD3单抗(CD3mAb)刺激正常人外周血单个核细胞,分别获得Mtb-Ag激活的T细胞(αβT细胞为主)及CD3mAb激活的T细胞(γδT细胞为主);用不同浓度的乙醇及二甲基亚砜分别作用于γδT细胞和γδT细胞4、24 h后,应用Annexin-V-FITC/PI染色,流式细胞术检测不同T细胞亚群的凋亡,应用四唑盐(MTT)法检测T细胞的活性. 结果 Mtb-Ag激活的T细胞中γδT细胞比例可达70%～90%;CD3mAb激活的T细胞中γδT细胞比例>90%;与对照组相比,除浓度为1.0%及2.0%的DMSO作用于γδT细胞24h的诱导凋亡作用明显(P<0.05)及浓度为2.0%的DMSO作用于γδT细胞4h对细胞活性抑制明显(P<0.05)外,低浓度乙醇及DMSO(≤2.0%)对人γδT细胞和γδT细胞的诱导凋亡作用及对细胞活性的抑制作用均无显著性(P>0.05);与对照组相比,除5.0%乙醇作用于γδT细胞4 h及5.0% DMSO作用于γδT细胞4 h诱导细胞凋亡作用不明显(P>0.05)外,高浓度乙醇和DMSO(5.0%)对γδT细胞和γδT细胞的诱导凋亡作用及对细胞活性的抑制作用均增加(P<0.05). 结论乙醇及二甲亚砜(DMSO)均可诱导人γδT细胞和αβT细胞凋亡,且能抑制二者的细胞活性.     

乙醇及二甲基亚砜对人γδT细胞和αβ细胞凋亡与细胞活性的影响

目的　观察不同浓度的乙醇及二甲基亚砜 (DMSO)对人γδT细胞和αβT细胞凋亡与细胞活性的影响。方法　分别用结核杆菌低分子多肽抗原 (Mtb Ag)、CD3单抗(CD3mAb)刺激正常人外周血单个核细胞 ,分别获得Mtb Ag激活的T细胞 (αβT细胞为主 )及CD3mAb激活的T细胞(γδT细胞为主 ) ;用不同浓度的乙醇及二甲基亚砜分别作用于γδT细胞和γδT细胞 4、2 4h后 ,应用Annexin V FITC/PI染色 ,流式细胞术检测不同T细胞亚群的凋亡 ,应用四唑盐(MTT)法检测T细胞的活性。结果　Mtb Ag激活的T细胞中γδT细胞比例可达 70 %～ 90 % ;CD3mAb激活的T细胞中γδT细胞比例 >90 % ;与对照组相比 ,除浓度为 1 0 %及 2 0 %的DMSO作用于γδT细胞 2 4h的诱导凋亡作用明显 (P <0 0 5 )及浓度为 2 0 %的DMSO作用于γδT细胞 4h对细胞活性抑制明显 (P <0 0 5 )外 ,低浓度乙醇及DMSO(≤ 2 0 % )对人γδT细胞和γδT细胞的诱导凋亡作用及对细胞活性的抑制作用均无显著性 (P >0 0 5 ) ;与对照组相比 ,除 5 0 %乙醇作用于γδT细胞 4h及 5 0 %DMSO作用于γδT细胞 4h诱导细胞凋亡作用不明显 (P >0 0 5 )外 ,高浓度乙醇和DMSO(5 0 % )对γδT细胞和γδT细胞的诱导凋亡作用及对细胞活性的抑制作用均增加 (P <0 0 5 )。结论     

HIV-1与γδT细胞相互作用机制的研究进展

γδT细胞是外周血T淋巴细胞的重要组成部分,分为Vδ1T和Vδ2T细胞亚群。γδT细胞在控制HIV-1感染中发挥着重要作用。HIV-1感染会增加Vδ1T细胞数量而减少Vδ2T细胞数量,这种改变会破坏机体γδT各亚型之间的比例平衡,导致Vδ2/Vδ1倒置。该综述阐述了γδT细胞免疫调控的特点以及HIV-1感染对Vδ2T细胞功能影响的研究进展。     

γδT细胞在结核感染免疫反应中的作用

T淋巴细胞根据其表面抗原识别受体(T—cell antigen receptor，TCR)类型的不同分为TCRαβT细胞和TCRγδT细胞。TCR是由α、β各一条链或γ、δ各一条链组成的异质二聚体；每条链均由不变区(C)和可变区(V)两个亚单位组成。αβT细胞占外周血T淋巴细胞的绝大多数，约在90％以上，由CD4^ 或CD8^ 单阳性T细胞组成。而γδT细胞在正常人外周血中仅占T细胞的0．5％～10％。     

结核患者外周血αβT和γδT细胞亚群免疫亚型细胞分布的探讨

目的:检测健康成人和结核患者外周血αβT细胞亚群以及γδT细胞亚群分布情况.方法:采集健康成人及结核病患者外周血,用不同荧光素标记单抗染色后,用流式细胞术检测 αβT细胞免疫亚型CD45RA+CD27+初始型细胞(Tnaive)、CD45RA-CD27中央记忆型T细胞(Tcm)+、CD45RA-CD27-效应记忆型T细胞(Tem)和CD45RA+CD27-效应型T细胞(Teff);γδT细胞中Vδ1、Vδ2、Vδ1-Vδ2-(即Vδ3-8)4种免疫亚型的百分率.结果:与健康成人比较,结核患者CD4+αβT细胞中Tnaive、Teff细胞的百分率降低(P<0.01),Tem细胞的百分率升高(P<0.01),Tcm细胞差异无统计学意义(P>0.05).结核与健康成人比较,患者CD8+αβT细胞中Tnaive、Tcm细胞的百分率降低(P<0.01和P<0.05),Tem、Teff细胞的百分率升高(P<0.01).与健康成人比较,结核患者Vδ1γδT细胞中Tnaive、Tcm细胞的百分率降低(P<0.05),Tem细胞的百分率升高(P<0.05),Teff细胞差异无统计学意义(P>0.05);结核患者Vδ2γδT细胞中Tcm细胞的百分率降低(P<0.05),Tem、Teff细胞的百分率升高(P<0.05,P<0.01),Tnaive细胞差异无统计学意义(P>0.05);结核患者Vδ3-8γδT细胞中Tem细胞的百分率升高(P<0.05),Tnaive、Tcm、Teff细胞差异无统计学意义(P>0.05).结论:结核病患者外周血中αβT和γδT细胞亚群分布均有显著改变.     

TCRγδ/δ2在结直肠癌患者外周血和肿瘤组织中的表达及相关性

目的 检测TCRαβ、TCRγδ及TCRδ2在结直肠癌患者外周血和肿瘤组织中的表达和相关性,为以γδT细胞为基础的免疫治疗提供依据.方法 使用流式细胞仪检测TCRαβ、TCRγδ及TCR δ2三者在结直肠癌患者外周血、正常肠道粘膜组织、癌旁组织及癌组织中的表达;分析结直肠癌患者外周血中TCRδ2与组织中TCRγδ和TCRδ2表达水平的相关性.结果 外周血中TCRγδ和TCRδ2在结直肠癌组中表达高于对照组（P＜0.05）.TCRγδ和TCRδ2在癌旁组织和癌组织中的表达高于正常肠道粘膜组织（P＜0.05）.当外周血TCRδ2升高到较高水平时,癌旁组织中TCRγδ和TCRδ2水平同步升高（P＜0.05）,而癌组织中TCRγδ和TCRδ2水平反而降低（P＜0.05）.结论 结直肠癌患者外周血Vδ2T细胞的水平与癌组织中浸润的γδT细胞和Vδ2T细胞具有相关关系,为Vδ2T细胞的局部介入治疗提供了理论依据.     

TCRγδ/δ2在结直肠癌患者外周血和肿瘤组织中的表达相关性

［摘要］目的　检测TCRαβ、TCRγδ及TCRδ2在结直肠癌患者外周血和肿瘤组织中的表达和相关性,为以γδT细胞为基础的免疫治疗提供依据．方法　使用流式细胞仪检测TCRαβ、TCRγδ及TCRδ2三者在结直肠癌患者外周血、正常肠道粘膜组织、癌旁组织及癌组织中的表达;分析结直肠癌患者外周血中TCRδ2与组织中TCRγδ和TCRδ2表达水平的相关性． 结果　外周血中TCRγδ和TCRδ2在结直肠癌组中表达高于对照组（P＜0.05）．TCRγδ和TCRδ2在癌旁组织和癌组织中的表达高于正常肠道粘膜组织（P＜0.05）．当外周血TCRδ2升高到较高水平时,癌旁组织中TCRγδ和TCRδ2水平同步升高（P＜0.05）,而癌组织中TCRγδ和TCRδ2水平反而降低（P＜0.05）．结论　结直肠癌患者外周血Vδ2 T细胞的水平与癌组织中浸润的γδ T细胞和Vδ2 T细胞具有相关关系,为Vδ2 T细胞的局部介入治疗提供了理论依据．     

γδT细胞在缺血再灌注损伤机制中作用的最新进展

缺血再灌注损伤是临床常见且极其重要的问题,包括心肌梗死、卒中、急性肾功能衰竭、肝休克、肠系膜缺血及器官移植后再灌注损伤等各种常见的临床疾病,因此研究缺血再灌注损伤的机制显得尤为重要。现今越来越多的事实证明淋巴细胞参与缺血再灌注损伤,而其中主要是T细胞,因此各种T细胞的亚型被广泛研究,包括NKT细胞、TH17细胞、γδT细胞、CD₄⁺T细胞和CD₈⁺T细胞等,研究发现γδT细胞在缺血再灌注损伤中发挥着重要的作用。1γδT细胞概述19世纪80年代γδT细胞被定义为一个新型的T细胞,其以多个独特的性质被人们所熟知,无论是解剖分布位置、发育途径、细胞表型、还是抗原识别机制,都与αβT细胞有着显著的区别。γδT细胞作为一种特殊的T细胞亚群,由γ链、δ链和CD3分子共同构成了γδT细胞的抗原识别受体,主要以非     

不同结核杆菌抗原刺激外周血T细胞亚群产生干扰素的比较

目的：比较磷酸化抗原（HDMAPP）、结核杆菌耐热抗原（Mtb-HAg）和结核杆菌低分子耐热抗原Mtb-HAg（10 k）刺激外周血T细胞产生γ-干扰素（IFN-γ）的反应能力方面的特点及差异.方法：采集正常人外周血,分别用HDMAPP、Mtb-HAg和Mtb-HAg（10 k）刺激培养14 h,再加入莫能霉素继续培养6h,收集细胞,加入荧光标记单抗进行表面分子和胞内染色,然后在流式细胞仪上检测各实验组中CD3＋ αβ细胞和CD3＋ γδ细胞胞内IFN-γ的表达.结果：正常人各抗原实验组CD3＋ αβ细胞和CD3＋γδ细胞胞内产生IFN-γ＋细胞比率较阴性组对照组升高（P＜0.01）.各抗原刺激组CD3＋γδ细胞产生IFN-γ＋细胞比率明显高于CD3＋αβ细胞（P ＜0.05 ～P＜0.01）.3种抗原刺激组间CD3＋αβ细胞和CD3＋γδ细胞无明显不同（P＞0.05）.结论：HDMAPP、Mtb-HAg和Mtb-HAg（10 k）均可以刺激外周血中T细胞中αβ和γδ细胞群产生IFN-γ,均可特异性诱导刺激CD3＋γδ细胞产生IFN-γ,HDMAPP、Mtb-HAg（10 k）对CD3＋γδ细胞产生IFN-γ的表达量高于Mtb-HAg.     

病原体抗原刺激的正常人外周血CD4^＋T细胞对γδT细胞的影响

CD4 T辅助（Th）细胞和γδT细胞在抗微生物感染中发挥着重要作用，两者相互作用有待阐明。本文报道以胞内感染体结核杆菌、人类VI型疱疹病毒及胞外寄生虫阴道毛滴虫刺激活化从正常人外周血经洗淘法分离纯化的CD4 T细胞，结果各组活化的细胞均表现明显增殖和产生以白介素-2（IL－2）、γ干扰素（IFN－γ）显著升高为主的Th1型细胞因子分泌谱。利用细胞隔离渗透性共培养体系，将抗原活化的CD4 T细胞和γδT细胞共培养，结果显示γδT细胞的增殖和细胞毒作用均可为CD4 T细胞产生的可溶性因子所显著增强。这提示在抗感染免疫中，CD4 Th1细胞可通过Th1型细胞因子促进γδT细胞功能。     

CD277~(+/-)的备选抗原递呈细胞在γδ T细胞识别不同抗原中的限制性递呈作用

目的研究CD277~(+/-)备选抗原递呈细胞(APC)在γδT细胞识别抗原中的限制性递呈作用。方法将流式分选的结核患者胸水或脐带血中的γδT细胞,用CFSE标记后与CD277~(+/-)备选抗原递呈细胞按1∶1比例混合培养,加或不加HMBPP或多肽E7刺激,使用流式细胞术检测γδT细胞增殖情况;以Transwell小室共培养法研究细胞相互接触对其增殖的影响。结果磷酸化抗原HMBPP或结核特异性多肽E7的体外刺激作用下,结核患者胸水和脐带血中的CD277~(+/-)的备选抗原递呈细胞都可引起γδT细胞不同程度的活化增殖,且CD277~+细胞的活化作用强于CD277~-细胞。不同个体来源的单核细胞系的备选APCs相对于淋巴细胞系的备选APCs更容易引起γδT细胞的增殖,其中以CD1a~+CD277~+CD14~-CD1b~-CD1c~-的细胞的抗原递呈效应最为明显,且通过小室实验证实了γδT细胞的增殖过程需与APCs相接触来实现。结论 CD277分子对γδT细胞识别不同抗原有一定限制性递呈作用,需进一步研究相关分子机制从而为γδT细胞的抗结核免疫机制以及相关的免疫治疗提供依据。