几种外用中药成份对离体人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的:体外观察几种常用外用中药有关成分对血管内皮细胞增殖作用的影响,初步探讨其对创伤愈合的可能作用。方法:采用MTT比色法观察中药人参皂苷Rg1、Rh1、黄芪多糖、鹿茸多肽、川芎嗪、麝香酮、桂皮醛和乳香水提物对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的影响。结果:9.75mg/L-2.5g/L的黄芪多糖对HUVEC未表现出增殖促进作用;1.94mg/L-0.5g/L的人参皂苷Rh1促进HUVEC的增殖(P＜0.05或P＜0.01),31mg/L的人参皂苷Rg1抑制细胞增殖(P＜0.05);1mg/L-0.5g/L的鹿茸多肽明显促进HUVEC的增殖,以10mg/L作用最明显(P＜0.01),桂皮醛2g/L时促进HUVEC的增殖(P＜0.05);1g/L的麝香酮明显抑制HUVEC的增殖(P＜0.01);0.5kg/L-2.5kg/L(生药)乳香水提物明显抑制HUVEC的增殖(P＜0.01),抑制增殖率为35.56%-55.56%。川芎嗪0.125g/L-0.5g/L明显抑制HUVEC的增殖(P＜0.01)。结论:益气温阳药物人参(Rh1)、鹿茸(鹿茸多肽)、肉桂(桂皮醛)促进HUVEC增殖;通络活血药物麝香(麝香酮)、乳香(乳香水提物)、川芎(川芎嗪)抑制HUVEC增殖。     

小檗碱对IL-1或TNF诱导的多形核白细胞与内皮细胞粘附的影响

目的:通过研究小檗碱对IL-1、TNF诱导的多形核白细胞(PMN)与血管内皮细胞粘附及粘附分子表达的影响,探讨小檗碱抗炎作用机制。方法:以小檗碱加IL-1、TNF处理人PMN或人脐静脉内皮细胞(HUVEC)后,用蛋白染料染色法研究小檗碱对PMN与HUVEC粘附的作用,用细胞ELISA、APAAP法研究小檗碱对细胞表面粘附分子表达的影响。结果:小檗碱与IL-1或TNF共同处理HUVEC,能抑制IL-1、TNF诱导的PMN与HUVEC间的粘附增强,且能下调由IL－1、TNF诱导的HUVEC表面粘附分子ICAM-1表达的增高;小檗碱与TNF共同处理PMN,能抑制TNF诱导的PMN与HUVEC的粘附增强,亦能降低TNF诱导的PMN表面粘附分子CD18的表达。结论:通过抑制细胞表面粘附分子的表达而抑制PMN与内皮细胞的粘附,可能是小檗碱发挥抗炎作用的机制之一。     

丹参注射液对H-7402细胞与HUVEC粘附的影响

目的循环中的肿瘤细胞必须牢固地粘附在血管壁上,才能进一步穿过血管壁,继续生长繁殖形成转移灶.本研究从肿瘤细胞与血管内皮细胞粘附的角度,研究活血化瘀药丹参注射液影响肿瘤转移的细胞及分子机制.方法以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为血管内皮细胞模型,药物及TNF(10×105U/L)处理HUVEC24h后1.倒置显微镜下观察细胞形态,研究丹参对TNF所致血管内皮损伤的保护作用;2.以蛋白染料染色法研究丹参对H-7402细胞与HUVEC粘附的作用(以A值表示);3.用细胞ELISA法观察HUVEC表面粘附分子ICAM-1的表达.结果1.丹参对TNF所致血管内皮损伤有保护作用;2.TNF处理HUVEC24h后,H-7402与HUVEC的粘附A值为0.167±0.012,与对照(0.035±0.009)比,P＜0.01.若加入丹参0.125mg、0.25mg、1.25mg、2.5mg、12.5mg,则粘附A值分别为0.158±0.015、0.126±0.018、0.102±0.012、0.084±0.005、0.064±0.008,与TNF比,有显著差异,说明丹参可抑制TNF导致的H-7402与HUVEC粘附增加;3.TNF处理HUVEC24h后,HUVEC表面粘附分子ICAM-1表达的A值为0.238±0.008,与对照(0.087±0.009)比,P＜0.01.若加入丹参0.125mg、0.25mg、1.25mg、2.5mg、12.5mg,则A值分别为0.209±0.016、0.194±0.011、0.175±0.013、0.145±0.006、0.108±0.014,与TNF比有显著差异,说明丹参可下调TNF诱导的HUVEC表面粘附分子ICAM-1表达的升高.结论丹参可通过下调血管内皮细胞粘附分子ICAM-1的表达及保护内皮细胞的完整结构而抑制肿瘤细胞与血管内皮细胞的粘附,从而抑制循环中的肿瘤细胞穿过血管壁,这可能是丹参抑制肿瘤血行转移的机制之一.     

旁路活化补体协同TNF-α对血管内皮细胞ICAM-1表达和粘附作用的影响

目的 :探讨旁路活化补体协同TNF -α对血管内皮细胞ICAM - 1表达及中性粒细胞 -内皮细胞(PMN -EC)粘附的影响。方法 :采用酵母多糖活化人血清 (ZAHS)单独、和TNF -α协同作用于体外培养的内皮细胞单层 ,用直接细胞计数和改良细胞ELISA方法检测中性粒细胞 -内皮细胞粘附率的变化和细胞间粘附分子 (ICAM -1)的表达。结果 :旁路活化补体单独作用于内皮细胞对PMN -EC粘附和ICAM - 1的表达仅有轻微影响 ;和 4 0 μg/L的TNF -α共同作用可以明显促进PMN -EC粘附率和ICAM - 1的表达。结论 :旁路活化补体对TNF -α诱导的PMN-EC粘附及ICAM - 1的表达具有促进作用 ,从而引起炎症反应     

大蒜素抑制大鼠血管内皮细胞增殖并诱导其凋亡的机制北大核心

背景:大蒜素具有抗纤维化和抗血管生成作用,既往研究已经证实了大蒜素对成纤维细胞过度增殖的抑制作用,但大蒜素对于血管内皮细胞增殖和凋亡的影响及其确切机制尚未明确。目的:观察大蒜素对血管内皮细胞形态、增殖和凋亡的影响及其可能机制,为大蒜素下一步临床应用提供理论基础。方法:血管内皮细胞常规培养至对数期,按照大蒜素质量浓度分为对照组(0 mg/L)、低质量浓度组(25 mg/L)、中质量浓度组(50 mg/L)和高质量浓度组(100 mg/L),干预24 h后使用CCK-8法检测细胞活力,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,AO/EB双重染色法和AnnexinV-FITC双重染色法检测细胞凋亡率,PI/RNase法检测细胞周期分布,Western blot和RT-PCR检测PCNA、Bax、BcL-2蛋白和基因的表达水平。结果与结论:用0,25,50,100 mg/L大蒜素处理24 h后,血管内皮细胞的活力以时间剂量依赖性方式显著降低,24 h IC_(50)值为103.27 mg/L。随着大蒜素质量浓度的增加,血管内皮细胞的凋亡率上升(P<0.01);G_(1)期细胞数减少(P<0.01),G_(2)期细胞数增加(P<0.01);与对照组相比,大蒜素组PCNA和Bcl-2的表达降低(P<0.01),而Bax的表达显著升高(P<0.01)。结果表明,大蒜素具有抑制血管内皮细胞增殖并促其凋亡的作用,作用机制可能与调控PCNA、Bcl-2及Bax表达有关。     

黄芪多糖对高糖所致血管平滑肌细胞增殖变化的影响

目的: 旨在观察体外高糖环境对大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)所致的增殖变化以及黄芪对其的影响。方法: 原代培养VSMC,分为正常对照组、25 mmol/L高糖剌激组、高糖剌激加低、中、高浓度黄芪多糖组(终浓度分别为100、200 和400 mg/L)。MTT方法分析细胞增殖率,RT-PCR检测分析MKP-1 mRNA转录及用ELISA法检测炎症因子MCP-1水平。结果: 与对照组相比高糖可以诱导VSMCs增殖(P<0.05),而中、高浓度黄芪多糖可以显著抑制该作用(P<0.05);高糖环境明显下调MKP-1 mRNA表达(P<0.05),但低浓度黄芪多糖可使MKP-1 mRNA上调,恢复到正常水平,在中、高浓度黄芪多糖时可使MKP-1 mRNA上调,显著高于对照组;高糖刺激组可促使VSMCs MCP-1分泌明显升高,低浓度黄芪即可降低高糖诱导MCP-1的水平(P<0.05),在高浓度组最明显。结论: 黄芪多糖防治糖尿病心血管并发症的作用可能与上调MKP-1 mRNA表达、抑制VSMCs增殖和MCP-1分泌相关。     

外用中药有效成分对血管内皮细胞增殖作用的影响

目的 :观察常用外用中药有效成分对血管内皮细胞增殖作用的影响 ,初步探讨其促进皮肤创伤愈合的机制。方法 :采用MTT比色法观察中药人参皂苷Rg1、Rh1、黄芪多糖、鹿茸多肽、麝香酮和桂皮醛、乳香水提物对人脐静脉内皮细胞 (HUVEC ,从健康产妇脐带中分离 )增殖的影响。结果 :在 2 4 4mg/L - 0 5g/L浓度范围内黄芪多糖对HUVEC未表现出增殖促进作用 ;在1 94mg/L - 0 5g/L浓度范围内人参皂苷Rh1促进HUVEC的增殖 (P <0 0 5或P <0 0 1) ,与对照组相比增殖率为 33 33% -111 11% ;在 1 94mg/L - 0 5g/L浓度范围内人参皂苷Rg1都有…     

小檗碱对人脐静脉内皮细胞增殖与凋亡的作用

目的：观察小檗碱对人脐静脉内皮细胞增殖与凋亡的作用，以探讨小檗碱抑制肿瘤生长与转移的机制。 方法： 用小檗碱与体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）共同孵育，以MTT法检测细胞的增殖活性，免疫细胞化学法检测增殖细胞核抗原（PCNA）的表达，荧光染色法观察凋亡细胞核形态，用Rhodamine123染色，激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位。 结果： 不同浓度小檗碱与HUVEC共同孵育可明显抑制HUVEC的增殖(P<0.05，P<0.01)，呈现一定的浓度依赖性和时效性；20 mg/L小檗碱与HUVEC共同孵育48 h，可显著降低细胞核PCNA的表达（P<0.01），并可见凋亡细胞数增多、线粒体膜电位明显降低（P<0.01）。 结论： 小檗碱抑制血管内皮细胞的增殖，并促进血管内皮细胞凋亡，从而抑制肿瘤血管形成，可能是小檗碱抑制肿瘤生长与转移的机制之一。     

黄芪多糖对2型糖尿病患者外周血内皮祖细胞PI3K/Akt/eNOS信号通路的影响

背景：前期研究证实黄芪通过P38MAPK通路促进内皮祖细胞增殖,其影响是否通过PI3K/Akt/eNOS途径实现？ 目的：观察黄芪多糖对2型糖尿病患者外周血内皮祖细胞蛋白激酶B、内皮型一氧化氮合酶表达的影响。 方法：采用密度梯度离心法获取糖尿病患者外周血单个核细胞,培养7 d后鉴定内皮祖细胞。观察0,50,200,800,3 200,6 400 mg/L黄芪多糖分别干预6,12,24,48 h对内皮祖细胞影响的量效和时效关系;用黄芪多糖及黄芪多糖与PI3K抑制剂LY294002联合干预糖尿病患者内皮祖细胞,Western blot检测磷酸化Akt及磷酸化内皮型一氧化氮合酶的表达水平。以未进行任何处理健康人内皮祖细胞作为对照组。 结果与结论：糖尿病患者内皮祖细胞的增殖能力较对照组明显下降(P  < 0.05)。黄芪多糖显著增加糖尿病患者内皮祖细胞的增殖能力,当黄芪多糖在200~800 mg/L质量浓度范围,干预6~24 h可呈时间及剂量依赖性增强内皮祖细胞的增殖能力(P < 0.01),并呈剂量依赖性升高内皮祖细胞磷酸化Akt及磷酸化内皮型一氧化氮合酶的表达(P < 0.05);PI3K抑制剂LY294002能阻断黄芪多糖诱导的Akt、内皮型一氧化氮合酶的磷酸化(P < 0.05)。说明黄芪多糖通过激活PI3K/Akt/eNOS信号通路促进内皮祖细胞增殖和向内皮细胞的分化。     

百草枯对人胚肺成纤维细胞增殖及黏弹性影响

目的 研究百草枯对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)增殖及黏弹性影响,探讨百草枯中毒初期对肺细胞的损伤及后续肺纤维化的发病机制。方法 用含不同浓度百草枯 (0、100、200 mg/L) 的MEM培养基处理生长状态良好的MRC-5细胞12 h,换正常MEM培养基继续培养24 h后收集细胞,一部分细胞通过流式细胞仪检测细胞周期确定细胞的增殖情况,另一部分通过微管吸吮技术检测细胞的黏弹性。结果 经过不同浓度百草枯处理后,细胞的增殖指数较对照组明显降低(P<0.05),且百草枯浓度越大,细胞的增殖指数越低。经过百草枯处理后MRC-5细胞的黏弹性各项参数均明显小于正常组MRC-5细胞(P<0.05);其中100或200 mg/L百草枯处理组,MRC-5细胞的黏弹性要小于50 mg/L百草枯处理组(P<0.05);而100与200 mg/L百草枯处理组之间,MRC-5细胞的黏弹性无明显差异(P>0.05)。结论 百草枯中毒初期人胚肺成纤维细胞受到损伤,增殖指数下降,细胞黏弹性降低,中毒后的代偿性修复是导致肺纤维化的重要原因,为临床治疗提供新的思路。     

小檗碱对人高转移肺癌细胞与脐静脉内皮细胞黏附的影响

目的： 探讨小檗碱对人高转移肺癌细胞株PG细胞与人脐静脉内皮细胞（HUVECs）黏附的影响及其机制。方法：用MTT法检测不同浓度（2.5-40 mg/L）的小檗碱对HUVECs增殖的影响,用2.5、5和10 mg/L小檗碱分别处理人高转移肺癌细胞株PG细胞6、12和24 h, 用虎红染色法测定小檗碱对PG细胞与HUVECs黏附能力的影响, 用荧光抗体染色法测定小檗碱对PG细胞表面黏附分子CD44s表达的影响, 用双光子各向异性度成像系统观察小檗碱对PG细胞膜流动性的影响。结果：（1）2.5、5和10 mg/L小檗碱作用HUVECs 6、12和24 h后对其生长无影响。（2）用不同浓度小檗碱处理PG细胞6、12和24 h后,与TNF-α刺激后的HUVECs相互作用后,能够显著抑制其黏附率,且呈浓度依赖性(P<0.05, P<0.01)。（3）各剂量组的小檗碱均能使PG细胞表面的CD44s分子表达增高（P<0.05或P<0.01）。（4）小檗碱作用PG细胞24 h后能够抑制PG细胞膜的流动性,且随药物浓度的升高这种抑制作用增强。结论：小檗碱对PG细胞与HUVECs的黏附具有抑制作用,可能与小檗碱增加PG细胞表面黏附分子表达、降低其细胞膜流动性有关。     

黄芪多糖通过激活AMPK减轻同型半胱氨酸对人血管内皮细胞的损伤

目的:探讨黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)能否减轻同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)对人血管内皮细胞的损伤及其可能的机制。方法:培养人脐静脉内皮细胞,分为正常对照组、APS组[APS(200mg/L)处理24 h]、Hcy组[Hcy(1 mmol/L)处理24 h]和Hcy+APS组[Hcy(1 mmol/L)和APS(200 mg/L)共同处理24 h]。采用MTT法检测细胞活力,采用试剂盒法检测内皮细胞中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和超氧化物歧化酶(superoxidase dismutase,SOD)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,采用RT-q PCR检测SOD1、过氧化氢酶(catalase,CAT)和NADPH氧化酶2(NADPH oxidase 2,NOX2)的mRNA表达,并采用Western blot检测腺苷酸活化蛋白激酶α(AMP-activated protein kinaseα,AMPKα)和磷酸化AMPKα(phosphorylated AMPKα,pAMPKα)的蛋白水平。结果:与对照组相比,Hcy组内皮细胞活力明显下降,LDH活性升高,细胞内MDA含量,SOD活性下降,SOD1和CAT的mRNA表达水平显著下降,而NOX2的mRNA表达水平明显升高(P0.05)。APS能够抑制Hcy引起的细胞活力下降、LDH活性升高及MDA含量增加;增加SOD活性,提高SOD1和CAT的mRNA表达水平,减少NOX2的mRNA表达水平(P0.05)。AMPK抑制剂Compound C则可以显著降低APS对Hcy引起的内皮细胞损伤的修复作用。结论:APS可通过活化AMPK调控细胞内氧化应激从而抑制Hcy对血管内皮细胞的损伤。     

重组可溶性人CD40L诱导人脐静脉内皮细胞损伤

目的:探讨重组可溶性人CD40L(rsh CD40L)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的损伤作用及其在动脉粥样硬化中的作用。方法:应用rsh CD40L刺激人脐静脉内皮细胞12 h;MTS法观察HUVECs的生存活性,ELISA法测内皮细胞E-选择素(E-selectin)、细胞间黏附分子(ICAM)-1、组织因子(TF)、组织因子途径抑制物(TFPI)表达的变化,比色法测脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果:与正常组比较,不同浓度的rsh CD40L(0.5、1、2、3 mg/L)对内皮细胞的生存活性无明显影响;0.5 mg/L rsh CD40L即可增加内皮细胞E-selectin、s ICAM-1、TF、TFPI的分泌,差异有统计学意义(P0.01),同时增加内皮细胞MDA的含量、降低SOD活性(P0.05)。结论:0.5~3 mg/L rsh CD40L对内皮细胞生存活性无明显影响,但已经引起内皮细胞功能障碍,增加内皮细胞炎症和外源性凝血反应,诱导内皮细胞脂质过氧化物损,使其抗氧化能力下降。     

Down-modulation of monocyte transendothelial migration and endothelial adhesion molecule expression by fibroblast growth factor: reversal by the anti-angiogenic agent SU6668

Basic and acidic fibroblast growth factor (bFGF and aFGF, respectively) and vascular endothelial growth factor (VEGF) exert angiogenic actions and have a role in wound healing, inflammation, and tumor growth. Monocytes and endothelial cells are involved in these processes, but the effect of FGF and VEGF on monocyte-endothelial cell interactions has not been defined. We observed that monocyte adhesion to resting or cytokine (tumor necrosis factor-alpha or interleukin-1 alpha)-stimulated human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) was markedly inhibited (40 to 65%) by culture (1 to 6 days) of HUVECs with aFGF or bFGF. Monocyte transendothelial migration induced by C5a and chemokines (MCP-1, SDF-1 alpha, RANTES, MIP-1 alpha) was also suppressed (by 50 to 75%) on bFGF-stimulated HUVECs. VEGF did not have these effects at the concentrations used (10 to 20 ng/ml), although like bFGF, it promoted HUVEC proliferation. Culture of HUVECs with bFGF and aFGF significantly down-regulated intercellular adhesion molecule-1, vascular cell adhesion molecule-1, and E-selectin expression on resting or tumor necrosis factor-alpha-stimulated HUVECs, but had no influence on platelet endothelial cell adhesion molecule (PECAM)-1 and VE-cadherin expression. bFGF also inhibited MCP-1 production by HUVECs. The inhibitory effects of bFGF on monocyte transendothelial migration and adhesion molecule expression were reversed by SU6668, an anti-angiogenic agent and bFGF receptor tyrosine kinase inhibitor. Our results suggest that bFGF and aFGF may suppress endothelial-dependent monocyte recruitment and thus have an anti-inflammatory action during angiogenesis in chronic inflammation but inhibit the immunoinflammatory tumor defense mechanism. However, SU6668 is an effective agent to prevent this down-regulatory action of bFGF on monocyte-endothelial cell interactions.     

TLR4激动对内皮细胞粘附功能的影响及阿托伐他汀的干预研究

目的：观察Toll样受体4（TLR4）激动对脐静脉内皮细胞（HUVECs）氧化低密度脂蛋白受体LOX-1的调节和对单核细胞与HUVECs粘附率的影响，以及LOX-1在内皮细胞粘附功能中的作用，并观察阿托伐他汀的干预作用方法：RT-PCR方法检测TLR4、LOX-1 mRNA表达水平，流式细胞术检测TLR4、LOX-1蛋白表达水平，细胞计数法计算单核细胞与HUVECs粘附率。结果：脂多糖(1 mg/L) 孵育24 h上调HUVECs TLR4、LOX-1 mRNA和蛋白的表达，增加单核细胞与HUVECs粘附率,抗LOX-1抗体部分抑制LPS介导的单核细胞与HUVECs粘附率的增加，阿托伐他汀（10 μmol/L）抑制脂多糖介导的上述效应。结论：TLR4激动上调LOX-1表达及增加内皮细胞粘附功能，LOX-1在LPS介导的单核内皮细胞粘附功能中起部分作用，阿托伐他汀可能通过抑制TLR4表达及TLR4 介导的LOX-1表达而发挥其内皮细胞保护作用。     

HDL3抗脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤

目的: 研究高密度脂蛋白3(HDL3)预处理对脂多糖(LPS) 损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用,并探讨其可能机制。方法: 以不同浓度(50、100和200 μg/L)HDL3预处理HUVECs 18 h,再加入1 mg/L LPS作用6 h。MTT法检测细胞活力,Annexin V/PI双标后流式细胞术检测细胞凋亡,荧光显微镜观察单核细胞与HUVECs黏附,ELISA法检测培养液中VCAM-1含量,细胞免疫组织化学及Western blotting法检测细胞核内NF-κB p65的水平。结果: 与对照组相比,LPS作用后HUVECs增殖活力降低,细胞凋亡及单核细胞黏附显著增加,VCAM-1和核内NF-κB p65水平增加;HDL3预处理可以恢复HUVECs增殖活力,降低细胞凋亡及单核细胞与HUVECs的黏附,减少VCAM-1分泌,并抑制NF-κB p65的核转位,且呈浓度依赖性。结论: HDL3可拮抗LPS 对HUVECs的损伤作用,其机制可能与抑制NF-κB所介导的炎症反应有关。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体参与雷帕霉素诱导血管内皮细胞功能损伤的体外研究

目的: 探讨雷帕霉素对内皮细胞凋亡和增殖、迁移能力的影响,以及肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)表达水平的变化。方法: 用浓度为0、1、10、100 μg/L 的雷帕霉素孵育内皮细胞24 h,应用CCK8法检测血管内皮细胞的增殖能力,Transwell小室和划痕试验检测细胞迁移能力,DAPI染色观察凋亡细胞核形态改变,Western blotting法检测caspase-3活性以显示血管内皮细胞的凋亡,并用 Western blotting检测TRAIL在凋亡的内皮细胞中的表达。结果: 雷帕霉素(1-100 μg/L)能诱导血管内皮细胞凋亡并抑制其迁移能力(P<0.01)。除雷帕霉素1 μg/L外, 10 μg/L和100 μg/L雷帕霉素均能抑制内皮细胞增殖能力(P<0.01),同时雷帕霉素(10-100 μg/L)使TRAIL蛋白表达增加,两者作用均呈浓度依赖性(P<0.01)。结论: 雷帕霉素能诱导内皮细胞发生凋亡并抑制其增殖和迁移能力。TRAIL表达上调与雷帕霉素诱导血管内皮细胞损伤有一定的相关性。