补肾方含药血清拮抗谷氨酸兴奋性神经毒作用及其机制的初步研究

目的：研究补肾复方含药血清(BS)对谷氨酸诱导凋亡PC12细胞的保护作用；并观察BS对谷氨酸诱导凋亡的PC12细胞胞浆内钙信号转导机制的影响。方法：采用MTT法测定谷氨酸致损伤后PC12细胞的存活力；采用荧光显微镜技术观察BS对谷氨酸所诱导PC12细胞凋亡的影响；以流式细胞术观察BS对谷氨酸诱导凋亡的PC12细胞胞浆内游离钙离子浓度的影响；运用蛋白免疫印迹(Western—blotting)技术观察BS对凋亡的PC12细胞CaMKⅡ的影响。结果：20％浓度BS含药血清可以拮抗谷氨酸的兴奋性神经毒作用，抑制PC12细胞凋亡；加％浓度BS含药血清能够拮抗谷氨酸诱导凋亡的PC12细胞胞浆内钙离子浓度的升高，抑制CaMKⅡ的磷酸化水平增高。结论：BS含药血清具有拮抗谷氨酸兴奋性神经毒的作用，其神经保护作用的机制可能与减轻钙超载，调控钙信号通路关键信号分子的磷酸化有关。     

补肾方含药血清对谷氨酸诱导凋亡的 PC12细胞胞浆内游离钙浓度及钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ磷酸化的影响

目的:运用中药血清药理学方法,研究补肾复方含药血清(BS)对谷氨酸(Glu)诱导凋亡的PC12细胞胞浆内游离钙离子浓度([Ca2 ]i)及钙信号转导通路下游的关键信号分子钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)磷酸化的影响.方法:采用谷氨酸诱导PC12细胞造成凋亡模型,以荧光探针Fluo-3/AM对活细胞染色,结合流式细胞技术观察BS对谷氨酸诱导凋亡的PC12细胞胞浆内[Ca2 ]i的影响;采用Western-blotting技术观察BS对谷氨酸诱导凋亡的PC12细胞CaMKⅡ磷酸化的影响.结果:20%浓度BS含药血清能够拮抗谷氨酸诱导凋亡的PC12细胞胞浆内钙离子浓度的升高,抑制CaMKⅡ的磷酸化水平增高.结论:补肾中药神经保护作用的机制可能与减轻钙超载,调控钙信号通路关键信号分子的磷酸化有关.     

具有拮抗谷氨酸神经毒作用的中药集群筛选

目的从治疗缺血性脑中风中药中筛选具有拮抗谷氨酸神经毒作用的活性中药。方法以PC12细胞为对象,用200 mmol.L-1谷氨酸(G lu)造成细胞损伤模型,MTT法检测细胞活力。结果毛冬青、苏木、茜草、虎杖4种中药可明显提高谷氨酸诱导的PCI2细胞还原M IT的能力(P<0.05)。结论毛冬青、苏木、茜草、虎杖4种中药对谷氨酸所致的细胞损伤具有较好的保护作用。     

脑力智宝提取物及其含药血清对PC12细胞缺氧损伤的保护作用

目的：研究脑力智宝对神经细胞缺氧损伤的影响。方法：采用血清药理学方法,体外培养PC12细胞,研究脑力智宝对连二亚硫酸钠引起PC12细胞缺氧损伤的影响。结果;脑力智宝可明显对抗缺氧引起的PC12细胞形态改变,降低LDH的漏出,增加细胞的存活率。结论：脑力智宝提取物及其含药血清对缺氧引起的PC12细胞损伤具有保护作用。     

通窍活血汤含药血清对谷氨酸损伤的PC12细胞的保护作用

目的:从细胞水平研究通窍活血汤含药血清(TQHXD)对谷氨酸(Glu)损伤的PC12细胞的保护作用,为该方剂的临床应用提供依据。方法:SD大鼠灌胃给予通窍活血汤提取液,每日2次,每次4 g.kg-1,连续5 d,制备通窍活血汤含药血清。采用PC12细胞和终浓度为12.5 mmol.L-1的谷氨酸共培养,造成神经细胞损伤模型。光镜观察5%,10%,20%的TQHXD对损伤PC12细胞形态改变的影响;台盼兰染色法、AO/EB染色法及LDH法观察TQHXD对损伤的细胞膜通透性的变化影响;MTT法检测TQHXD对PC12细胞增殖及活性的影响及对培养上清液中NO浓度的影响。结果:倒置显微镜下可见,正常组细胞胞体较损伤组略大,呈强折光性,细胞数量多,突起长。模型组细胞数量显著减少,折光性明显减弱,细胞突起减少、缩短。TQHXD和PC12细胞共培养24 h后,活细胞数明显增加,细胞折光性增加,损伤细胞形态接近于正常细胞;台盼兰染色后,TQHXD组活细胞比率明显上升,AO/EB染色后被EB染色的数量较少。MTT法检测结果显示,与模型组比较,各浓度TQHXD组的吸光度A均升高且有显著性差异。各浓度的TQHXD组细胞培养上清中LDH,NO含量相对模型组明显减少,两者有显著性差异。结论:TQHXD对Glu损伤的PC12细胞有明显的保护作用。     

培补肝肾复方中药对PC12细胞损伤模型的保护作用

目的探讨培补肝肾复方对1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP )所致PC12细胞损伤模型的保护作用.方法采用血清药理学方法,制备中药含药血清,以肾上腺嗜铬细胞瘤克隆化细胞株PC12细胞为材料,利用MPP 建立经神经生长因子(NGF)诱导前后的PC12细胞的损伤模型,观察不同给药剂量的培补肝肾中药血清对PC12细胞的作用.结果形态学检查发现等效剂量培补肝肾中药复方血清可显著提高PC12细胞的存活数,减低细胞损伤程度.结论培补肝肾复方中药血清可对抗MPP 引起的细胞损伤,对体外培养的PC12细胞具有保护作用.     

软脉胶囊含药血清对PC12细胞缺氧损伤的保护作用

目的:研究软脉胶囊对神经细胞PC12缺氧损伤的影响.方法:采用血清药理学方法,研究软脉胶囊含药血清对连二亚硫酸钠引起的PC12细胞缺氧损伤的影响.结果:软脉胶囊可明显对抗缺氧引起的PC12细胞形态改变,降低LDH的漏出,增加细胞的存活率.结论:软脉胶囊含药血清对缺氧损伤引起的PC12细胞损伤具有保护作用.     

奇壬醇对谷氨酸损伤的PC12细胞保护作用研究

目的探究奇壬醇对谷氨酸损伤的PC12细胞的保护作用及其机制。方法采用谷氨酸损伤PC12细胞建立模型,用MTS法考察奇壬醇对谷氨酸损伤的PC12细胞存活率的影响,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白caspase-3、Bcl-2和Bax的变化。结果谷氨酸造模浓度为12.5 mmol/L,奇壬醇组细胞的存活率高于模型组(P 0.01)。模型组细胞凋亡率明显高于对照组(P0.01),奇壬醇组细胞的凋亡率显著低于模型组(P 0.01)。与对照组相比较,模型组caspase-3和Bax蛋白的表达显著升高,Bcl-2蛋白的表达显著降低,而与模型组相比较,奇壬醇组caspase-3和Bax蛋白的表达量显著降低,Bcl-2蛋白的表达显著升高,差异均有统计学意义(P 0.01)。结论谷氨酸能诱导PC12细胞凋亡,而奇壬醇通过抑制谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡,发挥其对PC12的保护作用。     

脑力智宝及其含药血清对硝普钠诱导的PC12细胞凋亡的影响

目的探讨中药脑力智宝对PC12细胞凋亡的抑制作用及机制。方法以硝普钠(sodium nitro- prusside,SNP)诱导的PC12细胞凋亡为模型,采用血清药理学方法,用荧光显微镜观察细胞形态学的改变,流式细胞仪检测DNA含量及凋亡细胞百分率,免疫组织化学检测Bcl-2蛋白的表达,以DPH为荧光探针检测细胞膜的流动性。结果脑力智宝提取物及含药血清能减轻SNP引起的细胞核形态学的改变,减少凋亡细胞数,使SNP诱导的PC12细胞凋亡百分率明显下降,凋亡峰显著降低,并能提高Bcl-2蛋白的表达,增加细胞存活率,增加膜流动性。结论脑力智宝对SNP诱导的PC12细胞凋亡具有抑制作用。并可能是通过促进Bcl-2蛋白表达,增加细胞膜流动性等途径而抑制细胞凋亡的。     

丹酚酸B对谷氨酸诱导的 PC12 细胞兴奋毒保护作用的研究

目的:研究丹酚酸B对谷氨酸诱导PC12细胞兴奋毒的保护及作用机制。方法:以谷氨酸损伤PC12细胞24 h为模型,采用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞存活率;LDH法检测乳酸脱氢酶的漏出率;AO/EB双染法荧光显微镜和PI单染流式细胞术检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞内活性氧的含量;Western blotting法检测细胞内Caspase-3蛋白的表达。结果:丹酚酸B可明显抑制谷氨酸诱导的PC12细胞的损伤,阻止细胞LDH的释放,在50～200μmol.L-1剂量呈一定的量效关系;同时,丹酚酸B明显降低谷氨酸诱导的活性Caspase-3蛋白的表达,抑制谷氨酸引起的ROS的累积,降低PC12细胞的凋亡率,在50～200μmol.L-1剂量呈量效相关性。结论:在一定剂量范围内,丹酚酸B对谷氨酸损伤的PC12细胞有保护作用,其保护的机制可能与丹酚酸B减少ROS的生成,阻止氧化损伤的发生,抑制Caspase-3途径依赖的凋亡相关。     

盐酸川芎嗪对谷氨酸损伤PC12细胞的保护作用

目的:探讨盐酸川芎嗪对谷氨酸诱导PC12细胞损伤的保护作用。方法:以谷氨酸损伤的PC12细胞为模型,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活状况,测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性来反映细胞损伤程度。结果:用谷氨酸(25mmol/L)和PC12细胞共同孵育24h后,细胞活性明显下降,不同浓度的盐酸川芎嗪(19.5、39.0、78.0μg/mL)预处理1h后可明显提高谷氨酸诱导的PC12细胞还原MTT的能力,抑制该细胞LDH的释放。结论:盐酸川芎嗪能明显减轻PC12细胞的谷氨酸损伤,对神经细胞的损伤有一定的保护作用。     

过氧化氢诱导PC12细胞凋亡及芍药苷的保护作用

 目的探讨过氧化氢诱导PC12细胞凋亡及芍药苷保护作用的可能机制。方法MTT测定细胞存活率,流式细胞仪测定细胞凋亡率,DCFH-DA为细胞内荧光探针,测定细胞内ROS浓度,流式细胞仪检测线粒体跨膜电位。结果200μmol·L^-1H₂O₂可诱导PC12细胞凋亡,细胞内ROS浓度增加,细胞线粒体跨膜电位明显下降。预先经过0.1,1和10μmol·L^-1浓度的芍药苷处理后,H₂O₂诱导的PC12细胞凋亡明显减少,同时明显减弱H₂O₂对细胞内ROS浓度和线粒体跨膜电位的影响。结论芍药苷可抑制过氧化氢诱导PC12细胞凋亡,其作用机制可能与其抑制细胞内ROS累积,稳定细胞线粒体跨膜电位有关。     

补阳还五汤含药血清对缺氧缺糖损伤PC12细胞形态和活力的影响

目的:探讨补阳还五汤含药血清对缺氧缺糖(oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤PC12细胞形态和活力的影响.方法:采用中药血清药理学方法制备补阳还五汤含药血清,以5％,10％,20％的含药血清作用于OGD损伤PC12细胞,于倒置显微镜下观察细胞形态,用四甲基偶氮唑盐法检测细胞活力.结果:PC12细胞OGD损伤后形态发生改变、细胞活力降低;5％,10％补阳还五汤含药血清作用于OGD损伤PC12细胞12,18,24 h,均可减轻细胞形态损伤、提高细胞活力(P＜0.01);而20％补阳还五汤含药血清随作用时间的延长对OGD损伤PC12细胞的形态和活力具有双向调节作用.结论:一定浓度的补阳还五汤含药血清对OGD损伤PC12细胞的形态和活力具有保护作用.     

人参皂甙Rg1对多巴胺诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的 :探讨人参皂甙Rg1对多巴胺诱导PC12细胞凋亡的保护作用及可能机制。 方法 :采用PC12细胞为模型 ,以不同浓度的DA来诱导细胞凋亡的发生 ,用流式细胞仪检测PC12细胞的亚二倍体峰 ,按Griess法测定NO代谢产物NO2 ·的浓度 ,并观察人参皂甙Rg1(10 μmol/L)预防性给药对其影响。 结果 :0、0 15、0 30、0 45和 0 6 0mmol/LDA处理组的凋亡率分别为 1 6 1±0 18、40 6 0± 1 74、46 6 7± 1 45、5 4 49± 1 6 1和 6 4 39± 1 6 0 % ,与Rg1预防组 0 73± 0 11、1 16± 0 0 9、1 35± 0 0 7、1 5 3± 0 10和 1 6 1± 0 12 %比较均有显著性差异 (P <0 .0 1) ;DA处理组的NO2 ·浓度分别为 1 82± 0 0 5、3 5 7± 0 0 2、8 82± 0 0 4、18 0 0± 0 0 7和 2 7 34± 0 0 9μmol/L ,与Rg1预防组的 1 0 0± 0 0 7、1 36± 0 0 7、1 2 5± 0 0 4、3 39± 0 11和 3 82± 0 11μmol/L比较亦都有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 :NO生成增多可能是DA诱导PC12细胞凋亡的重要信号分子 ,人参皂甙Rg1可抑制NO生成 ,防止DA诱导PC12细胞凋亡     

芍药甘草汤含药血清的制备及对高胆固醇血症兔Oddi括约肌细胞内Ca2＋浓度的影响

目的：建立芍药甘草汤含药血清制备方法,并观察不同浓度芍药甘草汤含药血清对高胆固醇血症兔Oddi括约肌细胞内Ca2＋浓度的影响。方法：利用高效液相色谱法（HPLC）测定芍药甘草汤灌胃后不同时间点兔血清中芍药苷、甘草酸血药浓度,以确定最佳采血时间。同时通过共聚焦显微镜观察不同浓度芍药甘草汤含药血清对高胆固醇血症兔Oddi括约肌细胞内Ca2＋浓度变化的结果。结果：兔口服芍药甘草汤后芍药苷血药浓度在90min达到高峰,甘草酸血药浓度在60min达到高峰。高胆固醇血症组细胞内Ca2＋浓度较正常组明显升高（P〈0.01）,而芍药甘草汤含药血清可以明显降低细胞内的Ca2＋浓度,随浓度增加而作用增强（P〈0.05）。结论：芍药甘草汤通过降低细胞内的Ca2＋浓度起到对ODDI括约肌功能紊乱的治疗作用。     

无毒棉籽水提物对皮质酮诱导的PC12细胞损伤的对抗作用

目的 :探讨无毒棉籽水提物 (CTN-W)抗抑郁、抗焦虑作用的可能机理。方法与结果 :提取大鼠大脑皮层突触膜并与CTN-W 0.01,0.03,0.10,0.30mg·mL^-1直接孵育 ,放免法测定腺苷酸环化酶 (AC)活性的改变 ,发现CTN-W可剂量依赖地激活AC ;MTT比色法研究表明 ,CTN-W 0.08,0 .40,2.00mg·mL^-1与皮质酮 2×10-4mol·L^-1共孵PC12细胞 48h后可防止皮质酮所致的PC12神经细胞损伤。结论 :CTN-W的作用可能与信号转导系统AC cAMP通路的激活 ,从而对损伤神经元产生保护作用有关 ,此二者共同组成了CTN-W的部分作用机制。     

用血清药理学方法观察芎芍胶囊对兔胸主动脉平滑肌细胞增殖凋亡的影响

目的 :采用血清药理学方法观察芎芍胶囊对内皮素 (ET)致兔胸主动脉平滑肌细胞 (SMC)增殖凋亡的影响。方法 :分离正常兔胸主动脉SMC ,并传代培养 ,用ET造成胸主动脉SMC增殖模型。给正常兔灌胃芎芍胶囊混悬液 10天 ,制备含药血清 ,采用噻唑蓝 (MTT)比色法、流式细胞术及琼脂糖凝胶电泳法观察其对SMC增殖凋亡的影响。结果 :ET能明显促进SMC增殖 ,芎芍胶囊含药血清可减少S +G2 期SMC所占比例 ,对ET所致SMC增殖有明显抑制作用 ,并呈剂量依赖性 ,大剂量时尚可诱导SMC凋亡。结论 :芎芍胶囊可明显抑制ET所致SMC增殖 ,并有一定的诱导SMC凋亡的作用。这可能是其临床用于预防冠状动脉介入治疗后再狭窄的作用机制之