p38δ在宫颈癌细胞中的表达及其对缺氧HeLa细胞凋亡的影响

目的探讨p38δ在宫颈癌组织细胞和HeLa细胞系中蛋白表达水平及p38δ对缺氧诱导HeLa细胞凋亡的影响。方法采用蛋白印迹法检测组织及细胞蛋白表达水平。采用慢病毒转染及细胞耐药性筛选构建稳定表达p38δ HeLa细胞株。采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染色法检测细胞凋亡水平。结果宫颈癌细胞系HeLa 细胞中p38δ蛋白表达水平低于非癌性细胞系人胚肾293 细胞及小鼠胚胎纤维细胞，差异有统计学意义（P <0.05）；宫颈癌组织细胞中p38δ蛋白表达水平低于正常宫颈组织细胞，差异有统计学意义（P <0.05）；p38δ 过表达提高缺氧条件下HeLa细胞凋亡水平，差异有统计学意义（P <0.05）；p38δ 过表达促进缺氧条件下HeLa 细胞中凋亡相关因子Bcl-2 蛋白表达水平下调及Bax、p53 蛋白表达水平上调，差异有统计学意义（P <0.05）。结论在宫颈癌组织细胞和宫颈癌HeLa 细胞中，p38δ的蛋白表达水平降低。HeLa细胞中高表达p38δ 促进缺氧细胞凋亡。     

二氢青蒿素对膀胱癌T24细胞株的抑制作用及其机制研究

目的探讨二氢青蒿素体外抗膀胱癌T24细胞株活性及相关机制。方法采用体外培养的T24细胞株为研究对象,流式细胞仪检测二氢青蒿素作用后T24细胞凋亡率,Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3活性,免疫印迹法检测细胞凋亡关键蛋白p53、Bax、Caspase-3、Bcl-2的表达变化。结果二氢青蒿素能够诱导T24肿瘤细胞凋亡（P〈0.01）,且呈剂量-效应关系;二氢青蒿素还可引发T24肿瘤细胞Caspase-3活性水平升高（P〈0.05或P〈0.01）,促凋亡蛋白Caspase-3、Bax高表达（P〈0.01）,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低（P〈0.01）,且均呈现时间-效应关系。p53表达水平无显著改变（P〉0.05）。结论二氢青蒿素具有明确的抑制膀胱癌T24细胞株的效应,其机制可能是激活非依赖于p53的Bcl-2家族介导的细胞色素C途径,进而引发T24细胞凋亡。     

重组质粒hTERT-siRNA对胰腺癌细胞移植瘤hTERT相关基因及蛋白表达的影响

目的探讨重组质粒pSilencer4.1CMV neo-hTERT-siRNA对胰腺癌细胞BxPC-3裸鼠皮下移植瘤hTERT相关基因及蛋白表达的影响.方法建立人原发性胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分为4组：（1）肿瘤对照组,未作任何处理;（2）空载组,即pSilencer4.1-CMV neo空质粒组;（3）T1组,即重组质粒pSilencer4.1-CMV neo-hTERT1-siRNA组;（4）T2组,即重组质粒pSilencer4.1-CMV neo-hTERT2-siRNA组）.荷瘤裸鼠分组处理30d后,RT-PCR检测各组瘤体中hTERT、Bcl-2、Bax mRNA的表达,免疫组织化学检测各组瘤体中Bcl-2、Bax、p53、VEGF、端粒酶蛋白表达,Western blot检测各组瘤体中端粒酶蛋白表达情况.结果 T1组和T2组hTERT和Bcl-2 mRNA表达较肿瘤对照组和空载组明显降低,BaxmRNA表达明显升高（P〈0.01）.与肿瘤对照组和空载组比较,T1组和T2组Bcl-2 Telomerase、p53和VEGF蛋白表达明显降低,Bax蛋白表达明显升高（P〈0.01）.结论 （1）重组质粒T1和T2能够下调裸鼠移植瘤体内抗凋亡基因hTERT mRNA、Bcl-2 mRNA和蛋白、p53和端粒酶蛋白表达水平,上调促凋亡基因Bax mRNA和蛋白表达水平,其抗胰腺癌作用可能与促进胰腺癌细胞凋亡有关.（2）重组质粒T1和T2能够显著下调裸鼠移植瘤体内VEGF蛋白表达水平,可能具有抑制肿瘤血管生成的作用。     

丹皮酚对缺糖缺氧再灌诱导的心肌细胞凋亡及相关基因Bcl-2 Bax蛋白表达的影响

目的：探讨丹皮酚（Paeonol Pae）对培养乳鼠心肌细胞缺糖缺氧再灌时心肌细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法：建立原代培养的新生大鼠心肌细胞缺糖缺氧再灌损伤模型,随机分组：对照组;模型组;丹皮酚组;用AnnexinⅤ-FITC/PI双标记法测定细胞凋亡率;以免疫组织化学方法检测心肌细胞Bcl-2、Bax蛋白表达变化。结果：缺糖缺氧再灌后,细胞凋亡率明显高于对照组（P〈0.01）,心肌细胞Bcl-2蛋白阳性表达指数（positive expression index PEI）显著低于对照组（P〈0.01）,Bax蛋白PEI明显的高于对照组（P〈0.01）,Bcl-2/Bax比值明显的低于对照组（P〈0.01）。与缺糖缺氧再灌组比较,Pae干预组细胞凋亡率显著降低（P〈0.01）,Bcl-2蛋白PEI显著升高（P〈0.01）,Bax蛋白PEI显著降低（P〈0.05,P〈0.01）,Bcl-2/Bax比值明显高于缺糖缺氧再灌组（P〈0.01）。结论：Pae可抑制缺糖缺氧再灌损伤心肌细胞凋亡,其作用可能是通过上调Bcl-2蛋白表达,抑制Bax蛋白表达,增加Bcl-2/Bax比值实现的。     

透骨草提取物对人肝癌SMMC-7721细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的观察透骨草提取物对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响,探讨透骨草提取物诱导SMMC-7721细胞凋亡的分子机制。方法荧光显微镜观察透骨草提取物对SMMC-7721细胞形态的影响;免疫组化法检测透骨草提取物对SMMC-7721细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。结果荧光显微镜可见,40.91μg/mL透骨草提取物处理的SMMC-7721细胞,细胞皱缩,细胞核固缩,呈新月状且边集,呈现凋亡现象。免疫组化结果显示40.91μg/mL透骨草提取物处理的SMMC-7721细胞Bcl-2蛋白表达明显低于对照组（P〈0.05）,而Bax蛋白表达明显高于对照组（P〈0.05）。结论透骨草提取物可能通过下调Bcl-2蛋白表达、上调Bax蛋白表达诱导SMMC-7721细胞凋亡。     

参附注射液对大鼠肺缺血再灌注损伤时肺细胞凋亡的影响

目的探讨参附注射液对大鼠肺缺血再灌注损伤时肺细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的影响。方法30只雄性SD大鼠随机分为3组，即假手术（Sham，n=10）组、缺血再灌注（IR，n=10）组、参附治疗（SF，n=10）组。制作大鼠单肺原位热缺血再灌注模型，进行肺损伤组织学定量评价指标（IQA）检测；采用末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）法检测肺组织细胞凋亡，并计算凋亡指数（apoptosis index，AI）；免疫组化法检测肺组织细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的变化。结果Sham组几乎未见凋亡细胞，IR组、SF组的IQA、AI值均较Sham组明显升高（P〈0．01或P〈0．05）；SF组的IQA、AI值明显低于IR组（P均〈0．01）；与Sham组相比，IR组Bcl-2、Bax蛋白表达明显上调（P均〈0．01），而Bcl-2／13ax比值下降护〈0．01）；与IR组比较，SF组Bax蛋白水平显著下降护〈0．05），而Bcl-2蛋白、Bcl-2／Bax比值显著升高（P〈0．01或P〈0．05）。IQA与AI呈显著正相关（r=0．912，P〈0．01），而AI与Bcl-2／Bax比值呈显著负相关（r=0．847，P〈0．01）。结论参附注射液可能通过抑制Bax的表达、上调Bcl-2的表达，使Bcl-2／Bax比值增加，从而减少细胞凋亡，减轻肺缺血再灌注损伤。     

小肠缺血再灌注后肺Bax,Bcl-2,p53的表达和组织超微结构改变

目的研究大鼠小肠缺血再灌注后肺组织超微结构的变化及肺组织中Bax,Bcl-2,p53表达的改变,探讨小肠缺血再灌注损伤对肺组织所致的次级损伤.方法建立小肠缺血再灌注模型,分对照组,再灌注后0、30min,1、2h,1、3、7d共8组,于各时点切取肺组织块以40g/L戊二醛,0.1mmolL/L磷酸缓冲液(PH7.4)固定,透射电镜观察肺组织细胞超微结构变化;并取肺组织置于4%多聚甲醛磷酸缓冲液固定,用免疫组织化学SP法观察肺组织中Bax,Bcl-2,p53的表达情况.结果透射电镜显示肺组织细胞超微结构损伤改变;Bax,Bcl-2免疫阳性细胞主要位于肺组织中细胞胞浆呈棕黄色颗粒或匀质状,p53免疫阳性细胞主要位于组织中细胞核,呈深染棕黄色颗粒,胞浆中也有部分表达.再灌注0min,肺组织中Bax,Bcl-2,p53阳性细胞率增高,再灌注30 min时,Bax,Bcl-2,p53阳性细胞率升高更为明显,但Bcl-2表达高于Bax,两者差别显著(P＜0.01).再灌注2 h时三种基因均有所降低,其后又开始升高,再灌注7 d时阳性细胞率达高峰,Bax表达明显高于Bcl-2,两者差别显著(P＜0.01).结论肺组织中超微结构的改变说明小肠缺血再灌注后可引起肺组织细胞凋亡和损伤,而大鼠小肠缺血再灌注后Bax,Bcl-2,p53阳性细胞在肺组织中的表达均有明显改变并可能引起细胞调亡和损伤.     

非小细胞肺癌Bcl-2及Bax蛋白的表达及其与细胞凋亡和增殖的关系

①目的探讨非小细胞肺癌Bcl-2、Bax蛋白的表达及其与细胞凋亡和增殖的关系。②方法采用SABC免疫组化法检测43例非小细胞肺癌及20例癌旁正常肺组织Bcl-2、Bax蛋白及增殖细胞核抗原（PCNA）表达水平;用TUNEL法检测细胞凋亡情况。③结果肺癌组织Bcl-2蛋白的表达显著高于癌旁肺组织（x^2=4．74,P〈0．05）;肺癌组织Bax蛋白的表达显著低于癌旁肺组织（x^2=5．65,P〈0．05）;肺癌组织中细胞凋亡指数（AI）和增殖指数（MI）均明显高于癌旁正常肺组织（t=8．28、9．62,P〈0．01）;Bcl-2蛋白表达阳性的肺癌组织AI明显低于表达阴性组（t=2．41,P〈0．05）;Bax蛋白表达阳性的肺癌组织AI明显高于表达阴性组（t=2．62,P〈0．05）;Bcl-2、Bax蛋白的表达均与MI无关（t=0．70、0．22,P〉0．05）。④结论Bcl-2蛋白具有抑制肺癌细胞凋亡作用,而Bax蛋白具有促进肺癌细胞凋亡作用,因肺癌组织存在Bcl-2蛋白表达上调,Bax蛋白表达下调,导致细胞增殖和凋亡失衡,在肺癌发生、发展过程中可能具有重要作用。     

三叶青乙酸乙酯提取物对小鼠Lewis肺癌的抑制作用

目的探讨三叶青乙酸乙酯提取物对小鼠Lewis肺癌移植瘤的抑瘤效应及其作用机制。方法采用动物移植性肿瘤实验法腋下接种Lewis肺癌细胞制备小鼠荷瘤模型。观察三叶青乙酸乙酯提取物对瘤重、抑瘤率的影响;并用TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡,免疫组化法和real time RT-PCR法检测瘤组织中Bcl-2、Bax、caspase-3的表达。结果三叶青各剂量组抑瘤率和肿瘤细胞凋亡率均高于模型对照组(P<0.05或P<0.01),其效应呈浓度依赖性;各剂量组Bcl-2的蛋白和mRNA表达下降(P<0.05或P<0.01)、Bax的蛋白和mRNA表达上升(P<0.05或P<0.01)、高剂量组caspase-3的蛋白表达上升(P<0.05)。结论中药三叶青乙酸乙酯提取物能抑制小鼠Lewis肺癌细胞的生长,可能与其促进肿瘤细胞坏死及下调Bcl-2、上调Bax和caspase-3从而促进肿瘤细胞凋亡有关。     

TRAIL诱导结肠癌SW480细胞的凋亡

目的探讨TRAIL对结肠癌SW480细胞凋亡的影响。方法实验分rmhTRAIL处理组和阴性对照组。MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western Blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达变化。结果 TRAIL能明显呈浓度依赖性地抑制结肠癌SW480细胞增殖（P〈0.05）,SW480细胞经rmhTRAIL处理后,流式细胞术分析显示其凋亡率明显上升（P〈0.01）,Western Blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达情况,显示Bcl-2蛋白表达明显下降,而Bax蛋白的表达明显升高（P〈0.05）。结论 TRAIL可以诱导结肠癌细胞的凋亡,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达、上调Bax蛋白表达有关。     

竹节香附素A抗肿瘤研究进展

[目的]综述竹节香附素A近10年抗肿瘤方面研究进展。[方法]收集近10年来竹节香附素A抗肿瘤研究文献,从诱导肿瘤细胞凋亡,诱导细胞周期阻滞,阻断STATs细胞信号传导通路及抑制肿瘤血管形成等方面阐述其抗肿瘤研究机制。[结果]竹节香附素A具有抗肿瘤活性构效关系,可以诱导非小细胞肺癌H460细胞凋亡、阻滞LoVo细胞周期、阻断LoVo细胞STATs细胞信号传导通路、抑制HepG-2细胞血管生成。[结论]竹节香附素A抗肿瘤研究机制可能为诱导肿瘤细胞凋亡、诱导细胞周期阻滞、阻断STATs细胞信号传导通路及抑制肿瘤血管形成等。其是否具有抑制肿瘤的侵袭、转移的特性及其相关的机制、如何启动细胞凋亡、如何抑制血管生成以及信号转导通路的特异性等一系列问题尚有待于广大肿瘤研究者进一步的研究探索,为其成为一个潜在的临床抗肿瘤制剂提供完备的理论实验依据。     

磷酸肌酸钠对小鼠移植性S180肉瘤生长的影响

目的:观察不同剂量磷酸肌酸钠(CP)对移植性小鼠S180肉瘤增殖及凋亡的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法:皮下注射S180肉瘤细胞建立动物实体瘤模型,将小鼠随机分为生理盐水对照组和CP4mg/d、8mg/d、16mg/d给药组,连续腹腔用药7d,取出瘤组织后应用流式细胞分析技术(FCM)检测S180肉瘤组织凋亡率及PCNA蛋白表达水平,并应用免疫组织化学法检测S180肉瘤组织中Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果:给药组平均瘤重较对照组减轻,凋亡率无明显变化。各干预组PCNA蛋白的表达均低于对照组,其中CP16mg/d组与对照组有显著差异,Bcl-2/Bax的比值在对照组最高,各组间的差别无统计学意义。结论:治疗量的磷酸肌酸钠[CP(4～8)mg/d]应用于移植性小鼠S180肉瘤不影响肿瘤的增殖及凋亡;当高剂量(16mg/d)应用时可抑制肿瘤的生长。     

槐耳清膏对荷瘤小鼠瘤细胞Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨槐耳清膏治疗肿瘤的作用机制。方法将雄性昆明小鼠分为对照组、5-Fu组、槐耳清膏组和槐耳清膏＋5-Fu组。用H22细胞给小鼠皮下注射,复制皮下瘤模型。观察各组移植瘤质量和抑瘤率,采用免疫组织化学法检测各组瘤组织Bcl-2、Bax蛋白表达。结果3个用药组小鼠的移植瘤质量和瘤组织Bcl-2阳性率显著低于对照组（P〈0．05）;与5-Fu组和槐耳清膏组比较,槐耳清膏＋5-Fu组小鼠瘤质量和瘤组织Bcl-2阳性率显著降低,Bax阳性率显著升高（P〈0．05）。结论槐耳清膏有明显的抑制肿瘤生长的作用,其机制可能是通过下调Bcl-2蛋白表达和上调Bax蛋白表达,促进肿瘤细胞凋亡。     

腺病毒介导的p27mt基因转染对肝癌细胞及裸鼠移植瘤的生长抑制作用

目的:研究携带突变型p27的重组腺病毒(Ad-p27mt)基因转染对肝癌的体内、外抑制作用,并探讨其抑癌机制。方法:⑴将Ad-p27mt转染人肝癌细胞SMMC-7721,Western blotting检测P27、Bcl-2、Bax的表达;流式细胞仪(FCM)观察Ad-p27mt对肝癌细胞生长抑制作用。⑵Ad-p27mt直接注射入人肝癌裸鼠移植瘤中,绘制肿瘤生长曲线,计算肿瘤生长抑制率。结果:Ad-p27mt转染肝癌细胞后,细胞增殖明显受抑制,G0/G1期细胞比例增加,P27表达增强,Bax/Bcl-2比例增高,采用Ad-p27mt基因治疗肝癌裸鼠移植瘤生长受抑制,肿瘤生长抑制率达57.09%。结论:Ad-p27mt基因转染对肝癌具有较显著的体内、外抑制作用和诱导凋亡作用,其机制是通过增强P27表达,使细胞产生周期阻滞,诱导凋亡的机理可能是上调Bax/Bcl-2比例所引起。     

中药组方抑制lewis肺癌细胞转移及机理研究

目的：探讨以黄芪、补骨脂、云芝等组成的中药组方在稳定肺癌病灶、减少转移和提高生存质量等方面的意义及其分子机制。方法：复制小鼠lewis肺癌模型,检测中药组方、替加氟和生理盐水对各组肿瘤细胞PCNA表达的影响,并记数小鼠肺组织内肿瘤转移结节数量等数据,比较组间差异。结果：PNCA阳性表达率在生理盐水组显高于替加氟组和消积饮组（P＜0．01）,而后两则差异无显性（P＞0．05）;中药组和替加氟组转移瘤结节数量少于生理盐水组,差异有显性（P＜0．01）;中药组结节数量多于替加氟组,差异无显性（P＞0．05）。结论：该中药组方能有效降低小鼠lewis肺癌细胞PCNA的表达,抑制肿瘤细胞肺内转移灶的形成,表现为临床抑癌、抗癌的效果。     

丹参酮ⅡA磺酸钠注射液对小鼠Lewis肺癌生长及PCNA表达的影响

目的：观察丹参酮ⅡA磺酸钠注射液对小鼠Lewis肺癌的生长抑制及PCNA表达的影响,进而对丹参酮ⅡA的抗癌机制进行探讨。方法：建立Lewis肺癌小鼠模型,将动物随机分为生理盐水对照组、丹参酮ⅡA组、丹参酮ⅡA＋环磷酰胺（CTX）组和环磷酰胺治疗有效组共四组。腹腔连续注射给药。10d后计算各组Lewis肺癌小鼠的瘤重、抑瘤率。用免疫组化方法测定PCNA表达水平。结果：与盐水组相比丹参酮ⅡA组及丹参酮ⅡA联合环磷酰胺组的瘤重明显减低、抑瘤率升高,对小鼠Lewis肺癌的生长有抑制作用,PCNA指数明显降低。结论：丹参酮ⅡA可抑制小鼠Lewis肺癌PCNA的异常表达并抑制小鼠Lewis肺癌生长。     

丹参酮ⅡA磺酸钠注射液对小鼠Lewis肺癌生长及PCNA表达的影响

目的：观察丹参酮ⅡA磺酸钠注射液对小鼠Lewis肺癌的生长抑制及PCNA表达的影响,进而对丹参酮ⅡA的抗癌机制进行探讨。方法：建立Lewis肺癌小鼠模型,将动物随机分为生理盐水对照组、丹参酮ⅡA组、丹参酮ⅡA＋环磷酰胺（CTX）组和环磷酰胺治疗有效组共四组。腹腔连续注射给药。10d后计算各组Lewis肺癌小鼠的瘤重、抑瘤率。用免疫组化方法测定PCNA表达水平。结果：与盐水组相比丹参酮ⅡA组及丹参酮ⅡA联合环磷酰胺组的瘤重明显减低、抑瘤率升高,对小鼠Lewis肺癌的生长有抑制作用,PCNA指数明显降低。结论：丹参酮ⅡA可抑制小鼠Lewis肺癌PCNA的异常表达并抑制小鼠Lewis肺癌生长。     

姜黄素对A549细胞亚群SP和NON-SP的NF-κB、VEGF及Notch通路的影响

[目的] 通过动物实验了解姜黄提取物-姜黄素抗肿瘤血管生成的具体作用机制。[方法] 将40只BALB/C雄性裸小鼠分为4组,每组10只。分别为A组(SP亚群细胞姜黄素组)、B组(SP亚群细胞荷瘤对照组)、C组(NON-SP亚群细胞姜黄素组)、D组(NON-SP亚群细胞荷瘤对照组).A、B两组于实验前建立肺腺癌A549 SP细胞亚群荷瘤模型,C、D两组建立肺腺癌A549 NON-SP细胞亚群荷瘤模型,建立模型后观察16 d,于A组、C组小鼠腹腔注射姜黄素,隔天1次,B、D两组注射生理盐水。16 d后将小鼠称重后处死,剥离瘤块组织,比较各组瘤质量;免疫组化法检测肿瘤组织中血管生长因子(VEGF)、核因子-κB(NF-κB)的表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Notch1 mRNA含量。[结果] 肺腺癌A549 SP细胞亚群荷瘤模型组小鼠瘤体与NON-SP细胞亚群荷瘤模型组小鼠相比体积较大;SP亚群细胞姜黄素组抑瘤作用及抗肿瘤血管生成优于NON-SP亚群细胞姜黄素组,两组相比差异具有统计学意义。[结论] 姜黄素可以抑制肿瘤生长,考虑可能与其抑制NF-kB的表达,下调Notch1 mRNA含量,阻断Notch信号通路,抑制肿瘤组织中VEGF的表达有关。     

SN50对裸鼠人胃癌移植瘤生长的影响

目的探讨核转录因子（NF）-κB p65的阻断剂SN50对裸鼠人胃癌移植瘤生长的影响。方法建立裸鼠胃癌移植瘤模型后将20只裸鼠随机分成对照组（n=5）和SN50实验组（n=15）,用生理盐水处理对照组、SN50处理实验组,于第5 d、10 d、15 d分别取5只裸鼠测量肿瘤体积,计算抑瘤率。采用免疫组织化学染色观察凋亡指标Bcl-2、Bax和p53表达的变化。结果使用SN50处理肿瘤后5 d、10 d、15 d肿瘤生长抑制率逐渐增高;与对照组相比,凋亡指标Bcl-2的表达下调,p53和Bax的表达上调（均P〈0.05）。结论 NF-κB p65的阻断剂SN50可能通过下调Bcl-2的表达和上调p53、Bax的表达导致细胞凋亡,从而最终抑制移植瘤的生长。