橙皮苷对人翼状胬肉成纤维细胞增生的抑制作用

目的　评价橙皮苷对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞（human pterygium fibroblasts,HPF）增生的抑制作用,对照观察丝裂霉素C（mitomycin C,MMC）对HPF的影响,寻找治疗及预防翼状胬肉复发的中医中药方法。方法　将人翼状胬肉新鲜组织剪碎后进行体外贴壁细胞常规培养及传代,并采用波形蛋白（Vimentin）免疫细胞化学染色及DAPI染色对HPF进行鉴定。用24 μmol·L^-1、48 μmol·L^-1、64 μmol·L^-1、72 μmol·L^-1、96 μmol·L^-1、120 μmol·L^-1橙皮苷及1.5 μmol·L^-1、7.5 μmol·L^-1、30.0 μmol·L^-1 MMC作用于第3代HPF,24 h、48 h、72 h后采用MTT法检测细胞的增生抑制率,并筛选合适的浓度梯度及时间进行细胞凋亡检测,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果　根据MTT法检测细胞增生抑制率的结果,选用72 μmol·L^-1及48 μmol·L^-1 的橙皮苷作为实验组,将7.5 μmol·L^-1 MMC作为MMC标准对照组,无处理细胞作为空白对照组,培养48 h后流式细胞仪检测HPF的凋亡率。结果显示,72 μmol·L^-1橙皮苷组、48 μmol·L^-1橙皮苷组、7.5 μmol·L^-1 MMC标准对照组及空白对照组的细胞凋亡率分别为（41.10±1.04）%、（24.97±3.70）%、（48.60±6.94）%及（9.20±4.67）%,各组间HPF凋亡率整体存在差异（F=43.581,P<0.001）,两两比较结果显示,除72 μmol·L^-1橙皮苷组与MMC标准对照组间差异无统计学意义（P>0.05）外,其余组间两两相比差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　72 μmol·L^-1橙皮苷在抑制HPF生长方面有着与MMC等同的效果,主要是通过促进HPF凋亡进而抑制HPF的增生。     

姜黄素抑制翼状胬肉成纤维细胞增生的研究

目的观察姜黄素对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(HPF)增生和凋亡的影响,寻找辅助治疗和预防翼状胬肉复发的新方法。方法用0～160μmol/L姜黄素作用体外培养的HPF,24～96h后观察不同浓度姜黄素对HPF的影响。MTT法及免疫组织化学染色增生细胞核抗原(PCNA)检测细胞生长活性,流式细胞仪测定细胞周期时相变化。结果在20～160μmol/L浓度作用24～72h范围内,姜黄素可剂量和时间依赖性的抑制HPF增生(P<0.05)。20,40,80,160μmol/L姜黄素作用24h后,流式细胞仪检测结果发现,姜黄素作用组均出现典型的亚二倍体凋亡峰,G0/G1期细胞百分比上升(P<0.05),S期细胞百分比下降(P<0.05),说明细胞阻滞于G0/G1期。当姜黄素的浓度在20～160μmol/L范围内能浓度依赖性地抑制细胞表达PCNA(P<0.05)。结论姜黄素可显著抑制翼状胬肉成纤维细胞增生,使细胞周期停滞于G0/G1期,并诱导其凋亡,作用呈时间和剂量依赖性。     

β-catenin在翼状胬肉成纤维细胞中的表达

目的:β-catenin在正常的细胞粘附和wnt信号通路中发挥重要功能,本文探讨其在翼状胬肉组织及成纤维细胞中的表达及TGF-β1对其的影响。方法:通过组织块培养获取正常球结膜和翼状胬肉成纤维细胞并传至第4代,用10μg/LTGF-β1作用于细胞。抗β-catenin抗体对体内取出组织和培养的细胞行免疫组化染色;免疫印迹法检测培养成纤维细胞中β-catenin的表达情况。结果:免疫组化显示翼状胬肉成纤维细胞中β-catenin阳性着色强于正常结膜成纤维细胞。β-catenin在胬肉组织中较多,且多分布于上皮下纤维血管组织,上皮染色较少。体外培养见翼状胬肉成纤维细胞的生长较正常结膜成纤维细胞快、增殖能力强。免疫印迹法显示在翼状胬肉成纤维细胞蛋白中β-catenin的特异性阳性条带灰度值高于正常球结膜成纤维细胞蛋白。TGF-β1能促进翼状胬肉成纤维细胞中的β-catenin蛋白表达。结论:β-catenin在翼状胬肉组织及其成纤维细胞中的表达增高,提示β-catenin与翼状胬肉的发病有关。     

紫杉醇对体外人翼状胬肉成纤维细胞的抑制作用

目的:观察紫杉醇(PA)对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(HPF)增生,凋亡的影响。方法:用0～1000nmol/LPA作用于体外培养HPF的24～96h后观察不同浓度的PA对HPF的影响。MTT法检测细胞的增殖情况,流式细胞仪测定细胞的周期时相。结果:在1～1000nmol/LPA对HPF的抑制作用呈时间和剂量依赖性(P<0.05)。1,10,1000,10000nmol/L的PA作用HPF24h后,流式检测发现低浓度药物组(1～10nmol/L)主要阻止细胞在G0～G1,高浓度组(100～1000nmol/L)主要阻止细胞在G2～M期,并可见细胞凋亡。结论:PA可显著抑制HPF的增殖,使细胞周期停止在G2～M期和细胞的凋亡。     

粉防己碱对翼状胬肉成纤维细胞增生作用的研究

目的:观察粉防己碱(tetrandrine,Tet)对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(human pterygium fibroblast,HPF)增殖的影响,研究粉防己碱对翼状胬肉成纤维细胞增殖的作用,寻找辅助治疗翼状胬肉的新方法。方法:用不同浓度(0 ～160μmol/L)Tet作用体外培养的HPF,观察24 ～96h Tet对HPF的影响。MTT法检测细胞生长抑制率,免疫细胞化学法检测Tet干预前后HPF增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况。结果:在Tet20, 40, 80, 160μmol/L浓度作用24 ～72h范围内,可剂量和时间依赖性的抑制HPF增生(P<0.05)。Tet干预后PCNA蛋白表达下降,当Tet的浓度在20 ～160μmol/L范围内能浓度依赖性地抑制细胞表达PCNA(P<0.05)结论:Tet可显著抑制翼状胬肉成纤维细胞增生,在一定浓度和时间范围内抑制作用呈剂量与时间依赖性。但在高浓度时( >160μmol/L)可能存在细胞毒性作用。     

β-NGF对人翼状胬肉成纤维细胞增生的影响

目的观察神经生长因子β（β-NGF）对体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞（HPF）增生的影响,探讨翼状胬肉的发病机制。方法对翼状胬肉组织标本行组织块培养。待细胞生长汇合至80%后以0.25%胰蛋白酶＋0.02%EDTA1∶1混合消化细胞,取3～5代细胞用于实验。通过细胞中波形蛋白、角蛋白及α平滑肌肌动蛋白的表达鉴定培养的细胞,免疫荧光法检测HPF中β-NGF受体trkA、p75的表达,MTT法检测不同质量浓度β-NGF对HPF的作用,Westernblot及RT-PCR法半定量检测细胞核抗原（PCNA）来评估HPF的增生。结果波形蛋白、α平滑肌肌动蛋白、trkA和p75在HPF中呈阳性表达;MTT结果显示,在β-NGF作用12、24、48、72和96h后,48h为β-NGF促增生的高峰期;在不同质量浓度β-NGF（5～50ng/mL）作用下,HPF中PCNA蛋白及mRNA的表达与0和1ng/mLβ-NGF作用组之间比较差异均有统计学意义（Fprotein=24.980,P=0.000;FmRNA=64.490,P=0.000）。结论NGF可能通过结合两受体trkA、p75促进了HPF的增生。     

正常球结膜与翼状胬肉成纤维细胞生长增殖状况的对比观察

目的对比观察相同的培养条件下翼状胬肉与正常结膜成纤维细胞的生长增殖状况,对两种成纤维细胞的生长增殖特性作出评价。方法用10%胎生牛血清的RPMI1640培养液,在相同的培养条件下分别培养正常球结膜与初发翼状胬肉组织成纤维细胞;倒置相差显微镜下观察培养的两种成纤维细胞的特点及生长增殖状况。对传第3代的两种成纤维细胞,分别于接种后2、5、8d行噻唑蓝[3-（4,5-dimethyl -2thiazol）-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromid,MTT]比色试验,检测细胞增殖活力（细胞数）。结果翼状胬肉成纤维细胞较正常结膜成纤维细胞生长快,增殖旺盛;MTT检测结果显示：5d翼状胬肉成纤维细胞的细胞总数多于正常结膜成纤维细胞（P〈0.05）,8d更明显（P〈0.01）。结论体外翼状胬肉成纤维细胞的生长、增殖特性明显强于正常结膜成纤维细胞。提示治疗翼状胬肉药物的筛选和疗效评价的实验研究应直接应用翼状胬肉成纤维细胞为研究对象,才能作出较为符合客观实际的评价。     

锗132对体外培养翼状胬肉成纤维细胞的增殖抑制作用观察

观察锗１３２对体外培养翼状胬肉成纤维细胞的抗增殖作用,寻找辅助治疗翼状胬肉和预防翼状胬肉复发的新方法。方法将翼状胬肉成纤维细胞行体外原代和传代培养;观察不同浓度锗１３２及丝裂霉素Ｃ对成纤维细胞生长曲线的影响及培养的翼状胬肉成纤维细胞增殖抑制作用和毒性作用;采用免疫组织化学方法检测增殖细胞核抗原（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇ ｃｅｌｌ ｎｕｃｌｅａｒ ａｎｔｉｇｅｎ,ＰＣＮＡ）的表达,结果锗１３２可抑     

过氧化物酶体增生物激活受体激动剂对翼状胬肉成纤维细胞增生的抑制作用

背景翼状胬肉复发是翼状胬肉手术切除的常见并发症,其发生机制与细胞增生、炎症过程和新生血管形成有关,用抗增生药物控制翼状胬肉复发是目前研究的热点和方向。研究证实罗格列酮具有显著的抗炎、抗肿瘤、抑制新生血管作用,但其对翼状胬肉复发的作用研究较少。目的观察过氧化物酶体增生物激活受体（PPARγ）激动剂罗格列酮对体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞（HPFs）增生和凋亡的影响,寻求预防和辅助治疗翼状胬肉术后复发的新药物。方法对手术切除的原发性进展期翼状胬肉组织采用组织块培养法进行原代和传代培养,用酶消化法对培养的HPFs进行人工纯化。HPFs培养板中加入终浓度为5、10、25、50、75、100、150、200、400txmol／L的PPARγ激动剂罗格列酮,同时设未加药物干预的对照组和只加培养液的空白对照组。观察不同浓度罗格列酮作用12～72h后对HPFs生长的影响,MTT比色法检测细胞的生长抑制率,流式细胞仪检测细胞周期时相和凋亡的变化,实时定量聚合酶链反应（real—timePCR）检测增生细胞核抗原（PCNA）的表达变化。结果培养的HPFs呈长梭形,体积较大,呈铺路石样排列,对波形蛋白呈阳性反应,角蛋白反应阴性。罗格列酮作用后,培养的HPFs形态变圆,色变淡,核固缩或碎裂,局部细胞膜不完整。25～125p,mol／L罗格列酮作用12～72h可抑制HPFs的增生,其作用呈剂量和时间依赖性（剂量：F=158．312,P=0．006;时间：F=1．924,P=0．135）。流式细胞仪检测结果显示,25、75、125μmol／L罗格列酮作用于HPFs24h,随着浓度的增加G0／G1期细胞百分比逐渐上升,S期细胞百分比逐渐下降（P〈0．05）,表明细胞阻滞于G0／G1期。罗格列酮组HPFs凋亡率明显高于对照组（P〈0．05）,且随罗格列酮浓度的升高、作用时间的延长、HPFs凋亡率上升,差异有统计学意义（P〈O．05）。随着罗格列酮浓度的增加,PCNAmRNA在HPFs中的表达明显降低,差异有统计学意义（F=3244．329,P〈0．05）。结论PPAR3,激动剂以剂量和时间依赖的方式抑制HPFs的增生,并诱导其凋亡。大剂量的PPARγ激动剂可抑制细胞PCNA的合成和表达。     

核心蛋白多糖抑制翼状胬肉成纤维细胞增生的实验研究

目的　观察核心蛋白多糖对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞（ｈｕｍａｎｐｔｅｒｙｇｉｕｍｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ,ＨＰＦ）增生和凋亡的影响,寻找辅助治疗和预防翼状胬肉切除术后复发的新方法。方法　采用组织块法体外培养ＨＰＦ,将处于对数生长期的细胞用于实验。将０．１ｍｇ?Ｌ－１、１．０ｍｇ?Ｌ－１、１０．０ｍｇ?Ｌ－１的Ｄｅｃｏｒｉｎ分别加入细胞培养基中培养２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ。ＭＴＴ比色法分别测定不同浓度的Ｄｅｃｏｒｉｎ作用于ＨＰＦ不同时间后的细胞生长抑制率,流式细胞仪测定细胞周期时相变化,免疫组织化学法染色ＰＣ-ＮＡ检测细胞生长活性。结果　ＭＴＴ结果显示不同浓度组Ｄｅｃｏｒｉｎ作用ＨＰＦ２４ｈ细胞生长抑制率分别为（７．８１±１２６）％、（１９５２±２．１４）％、（４２．６９±１．６２）％,作用４８ｈ分别为（１０．１９±２．７４）％、（２２．２８±０．９７）％、（４５．７３±０．８２）％,作用７２ｈ分别为（２０．４９±１．３９）％、（２９．５０±２．４７）％、（５９．４１±１．７１）％。随着药物浓度的逐渐增高和作用时间的延长,细胞生长抑制率逐渐增加,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。流式细胞仪检测各浓度Ｄｅｃｏｒｉｎ组ＨＰＦ中Ｇ０／Ｇ１期细胞比率均较空白对照组高,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。当Ｄｅｃｏｒｉｎ浓度在０．１～１０．０ｍｇ?Ｌ－１范围内作用ＨＰＦ７２ｈ,均能够明显抑制细胞表达ＰＣＮＡ（均为Ｐ＜０．０５）。结论　Ｄｅｃｏｒｉｎ可以抑制ＨＰＦ的增生,诱导其凋亡,且呈明显的剂量和时间依赖性,有望成为防治翼状胬肉的药物之一。     

兔角膜Fas和Fas配体mRNA的表达和意义

目的了解Ｆａｓ和Ｆａｓ配体（ＦａｓＬ）ｍＲＮＡ在兔角膜中的表达情况,探讨其在角膜移植中的作用。方法人工合成特异性寡核苷酸探针,应用原位分子杂交方法检测６只新西兰白兔双眼角膜上皮、角膜基质和角膜内皮层Ｆａｓ和ＦａｓＬ ｍＲＮＡ的表达。结果正常兔角膜上皮和内皮细胞层有 Ｆａｓ　ｍＲＮＡ表达,基质中无表达;角膜上皮和内皮细胞层有强 ＦａｓＬ ｍＲＮＡ表达,且基质中亦有表达。兔角膜 ＦａｓＬ ｍＲＮＡ表达强于 Ｆａｓ ｍＲＮＡ的表达。结论角膜表达 Ｆａｓ和ＦａｓＬ可能与角膜移植存活有关。     

Effect of human corneal fibroblasts on lymphocyte proliferation in vitro

Cocultivation of human corneal fibroblasts (CFB) with allogeneic peripheral blood mononuclear cells (PBL) induced a minimal lymphocyte proliferative response, even when the fibroblasts had been pre-treated with interferon-gamma (IFN-gamma) and were HLA-DR positive. IFN-gamma-treated CFB did not express detectable HLA-DQ alloantigens. Cocultivation of CFB with PBL in the presence of Concanavalin A (Con A) or Phytohemagglutinin inhibited mitogen-induced lymphocyte proliferation by 40-90% relative to PBL cultured without CFB. Induction of HLA-DR expression on the CFB did not alter their inhibitory properties. Addition of indomethacin to cultures reversed the effect of CFB on Con A responses. However, no difference between proliferative responses to HLA-DR positive or negative CFB was seen in the presence of indomethacin. This weak response to induced Class II alloantigens on CFB suggests that induction of Class II alloantigens on corneal stroma alone may be insufficient to sensitize a recipient for Class II alloantigen-driven corneal graft rejection.     

白细胞介素1受体拮抗剂对急性排斥期大鼠角膜移植物Fas/FasL表达的影响

目的 研究白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1 ra)对急性排斥反应期角膜移植物Fas／FasL蛋白表达的影响。方法 建立大鼠同种异体穿透角膜移植模型，设生理盐水组和IL-1 ra治疗组。急性排斥期随机取角膜植片，用免疫组织化学(SABC)法检测植片Fas／FasL蛋白表达。并以正常大鼠角膜作对照。结果 在正常角膜，Fas和FasL蛋白主要表达于上皮层及内皮层；基质层中仅有少量Fas蛋白表达，未见FasL蛋白表达。急性排斥期角膜植片全层Fas和FasL蛋白表达增高，且植片周边(距伤口边缘0．5mm范围内)增高显著；IL-1 ra治疗组Fas和FasL蛋白表达均低于生理盐水组。结论 IL-1 ra可通过调节Fas／FasL蛋白的表达抑制角膜移植免疫排斥反应的发生。     

5-氟尿嘧啶治疗人羊膜移植后翼状胬肉复发的临床研究

目的观察5-氟尿嘧啶用于人羊膜移植后复发性翼状胬肉治疗的临床疗效。方法362例379眼翼状胬肉患者行翼状胬肉切除术联合羊膜移植术,其中初发性翼状胬肉例346眼,复发性翼状胬肉33眼。术后36例复发,复发率9%。对复发病例采用5-氟尿嘧啶结膜下注射,定期随访观察。结果36例复发病例5-氟尿嘧啶注射后,随访6～24月,痊愈加显效24例(有效率67%),9例有效(25%),3例无效。2例发生穹窿缩短,1例接受自体角膜干细胞移植加羊膜移植治愈。7例5-氟尿嘧啶注射后多发性角膜上皮点状脱落,停药后6例24～48小时愈合,1例点用表皮生长因子1周后痊愈。结论5-氟尿嘧啶结膜下注射是治疗羊膜移植后复发性翼状胬肉一种安全、简便、有效的方法。     

Fas系统在视网膜母细胞瘤的表达

目的 观察视网膜母细胞瘤（ＲＢ）中Ｆａｓ和Ｆａｓ配体（ＦａｓＬ）的表达特征。方法 应用免疫组化法检测３２例ＲＢ标本中Ｆａｓ和ＦａｓＬ的表达。结果 Ｆａｓ和ＦａｓＬ在ＲＢ中的阳性表达率分别为７０．６％和６５．８％,二者呈正相关（Ｐ〈０．００１）。分化程度低的和经过放疗的表达率明显增高（Ｐ〈０．０５或０．０１）。其表达率与视神经受浸润与否、眼内期或青光眼期无关（Ｐ〉０．０５）。结论 ＲＢ中Ｆａｓ及ＦａｓＬ高表达,分化程度越低表达越强。Ｆａｓ和ＦａｓＬ的表达可作为临床判断ＲＢ恶性程度的指标之一。     

胎儿角膜深低温保存对FAS/FASL蛋白表达的影响

目的:研究细胞凋亡信号分子Fas和细胞凋亡因子FasL在新鲜及深低温保存后胎儿角膜的表达情况。方法:应用免疫组织化学SABC法对33例不同胎龄(5mo至足月)胎儿角膜石蜡标本切片后,分别进行了Fas和FasL蛋白染色。结果:胎儿角膜细胞Fas蛋白及FasL蛋白全为胞质和/或胞膜着色。33/33例角膜上皮细胞、基质细胞及内皮细胞Fas蛋白阳性表达,经统计学分析,未发现不同月龄间有差异。33/33角膜上皮细胞及内皮细胞FasL蛋白阳性表达,经统计学分析,未发现不同月龄间有差异,角膜基质细胞FasL蛋白的表达为0/33。新鲜角膜和冷冻保存后角膜的Fas,FasL蛋白阳性表达量经统计学分析无差别。结论:新鲜和深低温保存后的5mo至足月龄胎儿角膜均可见Fas,FasL蛋白的表达。其中Fas在角膜上皮、基质和内皮细胞均表达,FasL在角膜上皮、内皮细胞表达,而基质细胞不表达。深低温保存对胎儿角膜Fas/FasL蛋白表达无影响。     

银杏叶提取物对体外培养翼状胬肉成纤维细胞增殖的抑制作用

目的：研究不同浓度的银杏叶提取物（ginkgo biloba extract,GBE）对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(human pterygium fibroblasts,HPFs)增殖和凋亡的影响。 方法：用噻唑蓝比色法(MTT)检测不同浓度(12.5,25.0,50.0,100.0mg/L) GBE在不同作用时间(24,48,72h)对体外培养的HPFs增殖的影响。用流式细胞仪检测HPFs的细胞周期及凋亡率。 结果：MTT结果显示,GBE浓度为12.5mg/L组作用24h后对HPFs的增殖无明显抑制作用（P>0.05）,其余各时间段各组均可见明显抑制HPFs的增殖,且各组间比较差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测发现GBE作用48h后G₀/G₁期细胞比例增加,S期细胞比例下降,计算不同浓度GBE作用下凋亡率分别为4.37%,8.14%,11.09%,15.18%,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。 结论：GBE对HPFs的增殖有明显抑制作用,并与用药剂量和持续时间有关。     

Fas和FasL在鼻息肉组织中的表达

目的探讨Fas和FasL在鼻息肉组织中的表达情况以及这二种凋亡相关蛋白在鼻息肉发病中的关系.方法应用S-P免疫组化法检测35例鼻息肉组织及15例下鼻甲组织中Fas和FasL的表达情况.结果(1)Fas在鼻息肉上皮及腺上皮的表达弱于对照组(P＜0.05),在嗜酸性粒细胞中表达广泛.(2)FasL在鼻息肉上皮及腺上皮的表达强于对照组(P＜O.05),未见FasL在嗜酸性粒细胞中表达.(3)鼻息肉上皮细胞中Fas和FasL蛋白的表达无相关性(P＞0.05).结论(1)Fas和FasL在鼻息肉发生发展中起一定的作用.(2)Fas、FasL在鼻息肉上皮细胞的凋亡过程中各自独立起作用.     

Quantitative analysis of lacrimal gland function,apoptotic figures,Fas and Fas ligand expression of lacrimal glands in dry eye patients

The purpose of our study was to examine the correlation between the lacrimal gland function and apoptotic figure, Fas and Fas ligand (FasL) expression in the lacrimal gland. A total of 15 dry eye patients (nine Sj?gren's syndrome and six non-Sj?gren's syndrome-type dry eye) were recruited for the study. Lacrimal function was evaluated by Schirmer tests 1 and 2. Lacrimal gland biopsies were performed and sections were analyzed by immunohistochemistry using APO2.7, an antibody to Fas and FasL. Quantitative analysis of fluorescein staining was performed by a scanning laser microscopy. Schirmer test 2 results were lower in Sj?gren's syndrome-type dry eye and were associated with positive staining of acinar cells with APO2.7 and of infiltrating lymphocytes with FasL. There was a good correlation between the results of Schirmer test 2 and APO2.7 and FasL staining. Lacrimal gland dysfunction is related to the apoptotic figure of acinar cells possibly induced by FasL on the infiltrating lymphocytes.     

橙皮苷对翼状胬肉成纤维细胞增殖及cyclin D表达的影响

目的：评价橙皮苷对体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞(HPF)增殖的抑制作用及对周期蛋白D(cyclin D)表达的影响。

方法：将人翼状胬肉新鲜组织进行体外贴壁细胞常规培养,并采用免疫荧光染色法进行鉴定。通过MTT法检测不同浓度丝裂霉素C(MMC)(1.5、7.5、30.0μmol/L)和橙皮苷(24、48、64、72、96、120μmol/L)作用不同时间(24、48、72h)对细胞增殖的抑制,筛选适宜的作用浓度和时间。采用Western blot法检测cyclin D在HPF细胞中的相对表达量。

结果：分别采用48、72μmol/L橙皮苷和7.5μmol/L MMC作用于HPF细胞48h,Western blot检测结果显示,空白对照组(正常培养)、MMC组、48μmol/L橙皮苷组、72μmol/L橙皮苷组细胞cyclin D蛋白相对表达量分别为1.20±0.02、0.60±0.03、0.54±0.02、0.45±0.07(F=73.025,P=0.001),MMC组和橙皮苷组细胞cyclin D蛋白相对表达量均低于空白对照组(P<0.05),但MMC组和橙皮苷组(48、72μmol/L)细胞cyclin D蛋白相对表达量均无差异(P>0.05)。

结论：橙皮苷能抑制翼状胬肉HPF细胞增殖,该过程与其降低cyclin D的表达有关。