辛伐他汀通过氧化应激诱导K562细胞凋亡

目的:观察辛伐他汀对K562细胞凋亡的影响,探讨辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的分子机制.方法:不同浓度辛伐他汀处理K562细胞,Annexin V-FITC/PI双染法检测辛伐他汀对K562细胞凋亡的影响.辛伐他汀处理K562细胞48 h,流式细胞仪检测活性氧(Reactive oxygen species,ROS)浓度,免疫组织化学法测定突变P53蛋白表达.RT-PCR测定c-junmRNA表达.结果:Annexin V-FITC/PI双染法检测结果显示,5、10、20μmol/L辛伐他汀作用K562细胞48-72h能诱导其凋亡.辛伐他汀作用K562细胞后,与对照组比较,处理组细胞内ROS明显升高.辛伐他汀处理K562细胞后突变P53蛋白表达明显下调,c-jun mRNA 表达上调.结论:辛伐他汀改变K562细胞内氧化还原状态,细胞氧化应激,下调突变P53蛋白表达,上调c-jun 表达诱导K562细胞凋亡.     

辛伐他汀裸鼠体内诱导K562细胞凋亡的分子机制

目的:探讨不同剂量的辛伐他汀处理裸鼠体内K562细胞的信号通路的分子变化,以说明辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的分子机制.方法:体外培养K562细胞并经皮下接种Balb/c-nu/nu裸小鼠K562细胞,构建裸小鼠的K562细胞动物模型.采用缺口末端标记技术TUNEL法检测辛伐他汀诱导K562细胞早期凋亡的变化.采用RT-PCR检测K562细胞中Ras分子和PI3K-AKT信号通路的n-ras,pi3k,akt1,nf-κb1 mRNA的差异表达.结果:不同剂量的辛伐他汀能够诱导裸鼠体内K562细胞凋亡,并随剂量的增加凋亡率逐渐增高(P＜0.01);不同剂量的辛伐他汀能够引起n-ras,pi3k,akt1,nf-κb1 mRNA的表达差异(P＜0.01).结论:辛伐他汀能够引起参与K562细胞凋亡的Ras 分子和PI3K-AKT信号通路的基因变化,从一定的角度说明辛伐他汀在体内能够诱导K562细胞凋亡.     

Bcl-2/Bax基因在辛伐他汀诱导K562细胞凋亡时的表达变化

目的观察辛伐他汀诱导K562细胞凋亡时Bcl-2/Bax变化,探讨Bcl-2/Bax与细胞凋亡之间关系。方法 20μmol/L辛伐他汀处理K562细胞24、48和72h;流式细胞技术检测细胞凋亡率;免疫组织化学法检测细胞色素C,RT-PCR技术检测Bcl-2/Bax基因。结果 20μmol/L辛伐他汀作用K562细胞24、48和72h,细胞凋亡率变化分别是（6.1±0.4）%,（14.2±0.4）%,（30.7±0.6）%;胞浆内细胞色素C显著高于对照组（P〈0.05）;抑凋亡基因Bcl-2显著降低,促凋亡基因Bax显著升高（P〈0.05）。结论辛伐他汀能诱导K562细胞凋亡,Bcl-2/Bax比值降低可能是辛伐他汀诱导K562细胞凋亡机制之一。     

一氧化氮信号在辛伐他汀诱导K562细胞凋亡过程的作用

目的:观察一氧化氮(Nitric oxide,NO)信号在辛伐他汀(Simvastain)诱导K562细胞凋亡过程中变化,推测一氧化氮信号与K562细胞凋亡之间关系.方法:20μmol/L辛伐他汀处理K562细胞24、48和72 h;流式细胞技术检测细胞凋亡率;比色法测定K562细胞内总一氧化氮浓度;RT-PCR检测诱导型一氧化氮合成酶(Inducible nitric oxide synthase,iNOS)基因;一氧化氮抑制剂和20μmol/L辛伐他汀共同培养,观察不同时间细胞凋亡率.结果:与对照组比较,24、48 h和72h处理组细胞凋亡率增加6.1%±0.4%,14.2%±0.4%,30.7%±0.6%,差异具有显著性;不同时间处理诱导性一氧化氮基因均显著上调;处理组细胞内总一氧化氮浓度增加为(0.3±0.1)mg/ml,(2.8±0.2)mg/ml.(3.8±0.4)mg/ml,与对照组比较显著升高;一氧化氮抑制剂能显著降低处理组细胞凋亡率.结论:辛伐他汀能诱导K562细胞凋亡,细胞内升高的一氧化氮浓度可能是辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的信号机制之一.     

辛伐他汀通过Caspase-12活化途径诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的 探讨Caspase-12在辛伐他汀诱导K562细胞凋亡中的作用.方法 在K562细胞培养液中分别加入毒胡萝卜素(阳性对照组)和辛伐他汀10、20、30μmol/L(辛伐他汀组)培养72 h,采用荧光显微镜观察凋亡细胞的形态变化,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率.激光扫描共聚焦显微镜检测细胞内Ca2 抖浓度,RT-PCR检测GRP78、Calpain基因mRNA表达水平,Western blot检测GRP78、Caspase-3,-6,-7,-9,-12蛋白水平.结果 10、20、30μmol/L辛伐他汀作用K562细胞72 h后,细胞出现典型的凋亡形态,凋亡率分别为12.41%士0.32%、19.08士0.26%、23.41士0.36%;细胞内Ca2 浓度增加,荧光强度分别为43士2.9、54士2.7、64士2.6:GRP78、Calpain基因mRNA表达上调;Western blot检测显示:Caspase-3,-6,-7,-9,-12剪切活化,GRP78表达增强.结论 Caspase-12作为细胞凋亡的重要途径参与了辛伐他汀诱导K562细胞的凋亡.     

活性氧诱导细胞凋亡的研究进展

活性氧(ROS)作为细胞调控中的一种信号分子，诱导细胞凋亡，目前已经为广大生命科学的学者所接受。ROS在细胞凋亡过程中扮演两种角色，作为外界诱因，ROS诱导细胞凋亡；然而当其他诱因在体内激发细胞凋亡时，ROS是这一过程中的产物，然后作为信号分子，具有调节细胞凋亡的作用，其机制可发生在凋亡过程的各环节。对ROS与细胞凋亡关系的研究进展进行综述。     

辛伐他汀诱导裸鼠体内K562细胞凋亡过程中NF-κB通路的分子变化

目的:探讨辛伐他汀在裸鼠体内引起的K562细胞NF-κB信号通路的分子变化,以说明辛伐他汀是否依赖NF-κB信号通路参与K562细胞凋亡发生.方法:体外培养慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞,接种于18只BALB/c-nu/nu裸小鼠皮下,构建移植瘤模型.随机分为3组,每组6只.对照组腹腔注射生理盐水0.2 ml,两个处理组分别注射0.2 g/L的辛伐他汀0.25 ml(0.05 mg)和0.4 ml(0.08 mg).均隔日注射,连续6次.采用TUNEL法检测K562细胞早期凋亡的变化,RT-PCR检测K562细胞中NF-κB信号通路IKK-β、IκB-α、NF-κB1 mRNA的差异表达.结果:不同剂量的辛伐他汀能够诱导裸鼠体内K562细胞发生明显的凋亡,且高剂量组凋亡率高于低剂量组(P＜0.01);不同剂量的辛伐他汀能够引起 IKK-β、IκB-α、NF-κB1 mRNA的表达下调(P＜0.01).结论:辛伐他汀可诱导K562细胞凋亡,可能与NF-κB通路基因的表达下调有关.     

辛伐他汀诱导裸鼠体内K562细胞凋亡过程中NF κB通路的分子变化

目的：探讨辛伐他汀在裸鼠体内引起的K562细胞NFκB信号通路的分子变化，以说明辛伐他汀是否依赖NFκB信号通路参与K562细胞凋亡发生。方法:体外培养慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞，接种于18只BALB/cnu/nu裸小鼠皮下，构建移植瘤模型。随机分为3组，每组6只。对照组腹腔注射生理盐水0.2 ml，两个处理组分别注射0.2 g/L的辛伐他汀0.25 ml（0.05 mg）和0.4 ml（0.08 mg）。均隔日注射，连续6次。采用TUNEL法检测K562细胞早期凋亡的变化，RTPCR检测K562细胞中NFκB信号通路IKKβ、IκBα、NFκB1 mRNA的差异表达。结果:不同剂量的辛伐他汀能够诱导裸鼠体内K562细胞发生明显的凋亡，且高剂量组凋亡率高于低剂量组（P<0.01）;不同剂量的辛伐他汀能够引起 IKKβ、IκBα、NFκB1 mRNA的表达下调（P<0.01）。结论:辛伐他汀可诱导K562细胞凋亡，可能与NFκB通路基因的表达下调有关。     

芸香苷诱导K562细胞凋亡机制

目的研究芸香苷诱导白血病K 562细胞凋亡过程中caspase-3基因及细胞色素C的表达。方法体外培养白血病K 562细胞,M TT法观察细胞毒作用,测定IC50,Hoechst 33342/P I双荧光染色后,荧光显微镜下观察细胞核形态,流式细胞仪检测细胞周期,TR IZOL试剂提取K 562细胞RNA,核酸定量仪检测纯度,RT-PCR扩增,紫外透射检测扩增产物,扩增产物测序,观察caspase-3的表达,4×1-0 5m o l/L药物处理细胞后,分离细胞线粒体和胞浆,经SDS-PAGE电泳分离蛋白,W estern b lotting检测线粒体、细胞浆细胞色素C表达。结果芸香苷浓度为2×1-0 5、4×10-5、8×10-5m o l/L时,细胞生长受到显著抑制,并呈剂量依赖性;不同浓度芸香苷处理K 562细胞44h后,应用M TT比色法计算IC50为4×1-0 5m o l/L;4×10-5m o l/L芸香苷处理细胞24 h后,Hoechest 33342/P I双荧光染色可观察到明显核固缩、凝集等细胞凋亡表现;流式细胞仪检测芸香苷处理后G2期细胞显著增多(64.7%),DNA合成受抑,凋亡率增加;PCR产物经过琼脂糖凝胶电泳,紫外透射仪下明显观察到500 bp条带,产物经过序列测定证实芸香苷处理细胞诱导caspase-3基因的表达;W estern B lotting检测线粒体细胞色素C表达水平下调,细胞浆出现明显细胞色素C蛋白条带。结论芸香苷诱导K 562细胞caspase-3基因表达,细胞色素C通过线粒体膜进入胞浆,导致细胞线粒体功能异常,细胞发生凋亡,线粒体途径诱导白血病细胞凋亡是其作用机制之一。     

芸香诱导K562细胞凋亡时细胞色素C表达变化

【目的】研究芸香诱导白血病K562细胞凋亡过程中细胞色素C的表达。【方法】体外培养K562细胞,Hoechst33342/PI双荧光染色后,荧光显微镜下观察细胞核形态,分离细胞线粒体和胞浆,经SDS-PAGE电泳分离蛋白,Western Bloting检测线粒体、细胞浆细胞色素C表达。【结果】芸香浓度为2×10-5、4×10-5、8×10-5mol/L时,细胞生长受到显著抑制,并呈剂量依赖性;Hoechest33342/PI双荧光染色可观察到明显核固缩、凝集等细胞凋亡表现,Western Bloting检测4×10-5mol/L药物处理细胞后线粒体细胞色素C表达水平下调,细胞浆出现明显细胞色素C蛋白条带。【结论】芸香诱导白血病细胞发生凋亡,可能与线粒体途径有关。     

芒果苷诱导白血病K562细胞凋亡机制的研究

目的研究芒果苷诱导慢粒白血病细胞系K562细胞凋亡的机制。方法采用RT-PCR检测芒果苷(25~200μmol/L)处理(24、48、72、96h)后K562细胞中bcl-2 mRNA、bax mRNA、survivin mRNA基因表达变化;采用Western blotting方法检测K562细胞BCR/ABL融合蛋白质P210水平。结果芒果苷作用K562细胞后,P210蛋白质水平下调,并呈时间及剂量依赖性,bax基因表达显著上调,bcl-2基因表达轻度下调,survivin mRNA基因表达下调。结论芒果苷诱导K562细胞凋亡的机制可能是通过下调BCR/ABL融合蛋白质P210、bcl-2和sur-vivin mRNA基因表达及上调bax基因表达来实现的。     

基因芯片研究苦参碱诱导K562细胞基因表达谱变化

0 引言苦参碱可影响白血病K562细胞增殖周期达到抑制肿瘤细胞增殖的作用[1],但具体机制不详. 我们拟用cDNA表达点阵研究苦参碱作用下的K562细胞周期基因表达变化情况,明确苦参碱导致K562细胞增殖周期变化的内部机制.     

cDNA表达点阵研究苦参碱诱导K562细胞凋亡基因表达的改变

1　材料和方法1.1　材料　 Atlas Human Apotosis Array kit (Clontech产品 )由美国加州希望城国家医学中心 Dr. L i惠赠 ,[α- 32 P]d ATP购自北京亚辉公司 ,苦参碱购自陕西天奇植物化学有限公司 ,K5 6 2细胞购自本校免疫学教研室 .1.2　方法　将生长状态良好细胞分为实验组和对照组 ,实验组用 0 .2 g· L- 1 苦参碱溶液处理 ,对照组细胞不做任何处理 ,3d换液 1次 .分别收集对照组及苦参碱作用 7d实验组细胞 ,提取总 RNA,紫外分光光度仪检测纯度、RNA甲醛变性凝胶电泳检测完整性后 ,冻存于 - 70℃备用 .按说明书富集两组总 RNA中…     

新型免疫抑制剂FTY720诱导K562细胞凋亡及其机制

目的：探讨新型免疫抑制剂FTY720诱导K562细胞凋亡的效应及其机制,为临床白血病的疗提供实验依据。方法：体外培养人白血病K562细胞,分为空白对照组和FTY720处理组,FTY720处理组细胞分别采用6 μmol•L^-1 FTY720诱导3、6和12 h,或采用2、4、6和8 μmol•L^-1 FTY720处理24 h。采用流式细胞术分析细胞凋亡百分率、活性氧（ROS）水平、线粒体膜电位（MMP）和细胞周期。采用WST-1 还原法检测FTY720作用下K562细胞增殖抑制率。结果：流式细胞术检测,与空白对照组比较,6 μmol?L-1 FTY720诱导细胞3、6和12 h后,细胞凋亡率随时间延长而升高（P<0.01）;与空白对照组比较,2、4、6和8 μmol•L^-1 FTY720诱导细胞24 h 后,细胞凋亡率随药物浓度增加而升高（P<0.01）。与空白对照组比较,随FTY720浓度增加,K562细胞内ROS水平增加（P<0.01）,同时其MMP下降（P<0.01）。细胞周期分析,与空白对照组比较,随FTY720浓度增加,G0/G1期细胞百分率增加（P<0.05）,而S期和G2/M期细胞百分率减少（P<0.05）。WST-1 还原法分析,与空白对照组比较,FTY720处理72 h后,2、4、6和8 μmol?L-1FTY720处理组K562细胞增殖抑制率［（24.0±4.1）%、(46.4±3.9)%、(67.0±4.8)%和（88.2±5.6）%］明显升高（P<0.01）,FTY720对K562细胞的半数抑制浓度（IC50）为5.5　μmol•L^-1。结论：FTY720可通过导致细胞周期阻滞和激发ROS而诱导细胞凋亡来发挥抗肿瘤作用。     

辛伐他汀诱导K562细胞凋亡过程中细胞内钙离子浓度、Calbindin-D28K和calpain基因的变化

目的:观察辛伐他汀诱导K562细胞凋亡时细胞内Ca2+浓度、Ca2+调节蛋白(Calbindin-D28K,D28K)和Ca2+激活蛋白(calpain)基因变化,以探讨K562细胞凋亡机制.方法:常规培养细胞24h,20 μmol/L辛伐他汀处理K562细胞48 h;流式细胞技术检测细胞凋亡率和Ca2+浓度,PCR技...     

金属硫蛋白对活性氧诱导的平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的：研究金属硫蛋白对活性氧诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响。方法：用过氧化氢和甲萘醌分别作为内源性和外源性活性氧刺激平滑肌细胞增殖,应用细胞总蛋白定量,３ＨＴｄＲ 参入,细胞周期时相测定等方法测定细胞增殖。结果：过氧化氢（２５ μｍｏｌ·Ｌ－ １）和甲萘醌（０ ．５ μｍｏｌ·Ｌ－ １） 可诱导培养的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖,使其蛋白总量增加,Ｓ期细胞比例增高,ＤＮＡ合成率增加。金属硫蛋白可以抑制过氧化氢和甲萘醌诱导的血管平滑肌细胞增殖。结论：金属硫蛋白对预防由活性氧诱导的血管平滑肌细胞增殖所引起的疾病可能具有重要作用。     

细胞松弛素B对K562细胞脱核作用的观察

目的观察细胞松弛素B(cytochalasin B, CB)对K562细胞形态和增殖能力的影响。方法以人红白血病K562细胞为细胞模型,经不同浓度的CB作用不同时间(4~48 h),通过相差显微镜和Giemsa染色观察细胞形态学改变。细胞计数法绘制细胞不同条件下的生长曲线。结果细胞形态发生显著变化,处理组细胞出现不同程度的脱核,细胞生长受到显著抑制。结论CB对K562细胞的脱核作用与其浓度呈正相关,随作用时间延长而增强;秋水仙素有显著提高CB诱发细胞脱核的作用;CB对细胞的增殖能力有显著抑制作用。     

苦参碱对K562细胞骨架的作用观察

目的：从细胞骨架方面进一步探索苦参碱对人白血病K562细胞株的作用机制。方法：采用微管吮吸技术和基因芯片技术分析苦参碱处理前后K562细胞粘弹系数和细胞骨架蛋白基因表达的改变。结果：0.1mg/ml苦参碱作用K562细胞24h后粘弹系数下降，细胞骨架类基因prefoldin 与ezrin 的mRNA表达增强。结论：苦参碱能够导致K562细胞的细胞骨架发生变化。