胰岛素对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨胰岛素对子宫内膜癌细胞系Ishikawa3-H-12细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法 应用免疫细胞化学方法和RT-PCR技术检测Ishikawa3-H-12细胞胰岛素受体（INSR）蛋白和mRNA的表达。以不同浓度胰岛素作用Ishikawa3-H-12细胞不同时间,采用四甲基偶氮唑蓝比色法、流式细胞仪检测细胞增殖、凋亡和细胞周期。结果 （1）Ishikawa3-H-12细胞INSR蛋白呈棕黄色阳性表达,并可见INSR基因的表达。（2）胰岛素以浓度和时间依赖的方式促进子宫内膜癌细胞增殖,1×10^-4mol／L胰岛素作用48h时促增殖作用最显著,增殖率为（340．2±15．9）％,与对照细胞（以胰岛素浓度为0作为对照,为100％）比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。（3）胰岛素以浓度和时间依赖的方式使Ishikawa3-H-12细胞中G0／G1期细胞比例减少,S期细胞比例增加,1×10^-4mol／L胰岛素作用72h时最显著,G0／G1期细胞比例为（27．7±2．5）％,S期细胞为（55．2±1．4）％,分别与对照细胞[分别为（67．6±1．5）％、（15．7±1．0）％]比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）;胰岛素对G2／M期细胞无影响（P〉0．05）。（4）随着胰岛素浓度的增加,Ishikawa3-H-12细胞凋亡率逐渐下降。1×10^-4mol／L胰岛素作用最显著,作用24、48、72、96h时的细胞凋亡率分别为（1．76±0．16）％、（1．70±0．15）％、（1．56±0．20）％、（1．31±0．24）％,分别与对照细[分别为（9．81±0．61）％、（9．93±1．44）％、（9．10±0．66）％、（10．30±1．20）％]比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论 胰岛素对子宫内膜癌Ishikawa3-H-12细胞具有促进增殖、抑制凋亡的作用。     

信号通路抑制剂对PTEN基因不同表达状态子宫内膜癌细胞的作用

目的 比较相关信号通路抑制剂诱导PTEN基因不同表达状态子宫内膜癌细胞的增殖和凋亡情况.方法 以PTEN反义寡核昔酸及PTEN真核表达载体转染子宫内膜癌细胞(HEC-1A、Ishikawa)后,激光共聚焦显微镜观察PTEN蛋白的表达.表皮生长因子受体、丝裂原活化蛋白激酶及雷帕霉素靶蛋白信号通路抑制剂--RG-14620、SB203580(SB)及西罗莫司分别处理HEC-1A、HEC-1A-PTEN-null、Ishikawa、Ishikawa-PTEN细胞,荧光染色法、流式细胞仪、四甲基偶氮唑蓝比色法分别检测细胞凋亡时的形态学改变、细胞凋亡率、细胞周期分布、细胞存活率.结果 转染后,Ishikawa-PTEN细胞内PTEN蛋白表达增加,HEC-1A-FFEN-null细胞内PTEN蛋白表达受到抑制.RG-14620、SB及西罗莫司处理后,Ishikawa和HEC-1A-PTEN-null细胞荧光染色见核呈浓集周缩改变;细胞发生明显凋亡及G1期阻滞,尤以SB作用最为显著,Ishikawa+SB、HEC-1A-PTEN-null+SB的细胞凋亡率分别为(37.8±0.8)%、(31.6±0.8)%,G_1期细胞比例增加[分别为(87.5±1.9)%、(84.1±3.2)%];细胞增殖受到抑制,尤以SB处理后作用为显著,Ishikawa+SB、HEC-1A-PTEN-null+SB的细胞存活率仅为(49.0±1.7)%、(54.0±2.1)%.结论 PTEN基因缺失使相应信号通路抑制剂作用的子宫内膜癌细胞增殖明显受抑,细胞阻滞于G1期,细胞凋亡增加,对相关信号通路抑制剂的敏感性增加.     

子宫内膜增殖症与子宫内膜癌细胞凋亡的相关性研究

目的：探讨子宫内膜增殖症和子宫内膜癌细胞凋亡及其与凋亡相关基因产物表达的关系。方法：应用ＴＵＮＥＬ法检测正常增殖期、增殖症及癌变子宫内膜组织标本的凋亡细胞,应用组免法检测Ｂｃｌ ２、Ｐ５３、Ｆａｓ及Ｆａｓ Ｌ抗原。结果：（１）与正常增殖期相比,增殖症子宫内膜腺上皮细胞中凋亡细胞比率高,Ｂｃｌ ２ 蛋白含量高,Ｆａｓ、Ｆａｓ Ｌ蛋白含量低下;（２）内膜癌癌细胞中凋亡细胞比率高,Ｂｃｌ ２蛋白含量低,１／３标本中Ｆａｓ、Ｆａｓ Ｌ蛋白含量丰富;（３）Ｐ５３ 仅存在于１２％ 的内膜癌细胞核内。结论：增殖症内膜凋亡细胞增多显示了良性病变内膜中细胞凋亡对过度增生的抑制。内膜癌细胞凋亡增多则与Ｂｃｌ ２ 低表达,Ｆａｓ、Ｆａｓ Ｌ高表达及Ｐ５３部分表达相伴,表明癌变内膜中细胞凋亡调控受多种基因表达的影响。     

口服大剂量米非司酮对子宫内膜癌细胞凋亡和端粒酶活性的影响

目的：研究口服大剂量米非司酮对子宫内膜癌细胞凋亡和端粒酶活性的影响,并探讨其作用机制。方法：12例未治疗的子宫内膜癌患者口服大剂量米非司酮（100mg/d,共5天）。第六天手术,用免疫组织化学法（LSAB法）检测用药前后内膜癌组织Fas、FasL表达的变化。用半定量端粒重复序列扩增法（semiquantitative telomere repeat amplification protocol,TRAP)测定用药前后内膜癌组织端粒酶活性的改变。结果：口服大剂量米非司酮后子宫内膜Fas表达明显升高（P＜0.01),FasL表达及端粒酶活性无明显改变（P＞0.05)。结论：口服大剂量米非司酮可促进子宫内膜癌细胞凋亡,但对端粒酶活性无明显影响。     

子宫内膜细胞的凋亡

凋亡是一种选择性的细胞清除过程，有维持再生组织自身稳定性的作用。在月经周期的子宫内膜及胚泡着床后由其转化的蜕膜都有细胞凋亡，许多刺激因素可诱导细胞凋亡，基因的表达调节着细胞的敏感性。本文不子宫同膜细胞凋亡的分子生物学机制及其作用进行综述。     

细胞动力学在子宫内膜癌发病机制中的作用

探讨细胞动力学在子宫内膜癌发病机制中的作用。方法 :对13例子宫内膜癌、癌周内膜 ,15例简单型增生过长内膜 ,13例复杂型增生过长内膜石蜡组织切片 ,作HE染色及原位末端标记 (TUNEL) ,在光镜下 ,对切片中的有丝分裂细胞及凋亡细胞进行计数。结果 :复杂型增生过长内膜有丝分裂指数 (MI)及细胞凋亡指数 (AI)均较简单型增生过长内膜显著增高 (P均 <0 0 1) ,但MI/AI比值两者无显著差异 ;子宫内膜癌灶MI、AI、MI/AI比值均较癌周内膜及复杂型增生过长内膜显著增高 (P <0 0 1,P <0 0 5,P <0 0 5)。结论 :在子宫内膜癌变的早期 ,细胞动力学遵循既定细胞数调节机制 ,即加速的细胞增殖通过加快的细胞凋亡予以平衡。当过度增殖的细胞不能通过相应增强的凋亡途径加以清除时 ,会导致DNA损伤和变异的积累 ,最终引起子宫内膜癌。     

TRAIL联合化疗药物对子宫内膜癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合化疗药物对子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖及凋亡的影响。方法:MTT法检测TRAIL单独或联合应用阿霉素(DOX)、顺铂(c-DDP)对Ishikawa细胞增殖的作用;流式细胞仪分析TRAIL单独或联合应用DOX、c-DDP对Ishikawa细胞凋亡的影响。结果:单独应用TRAIL(50μg/L),DOX(5mg/L),c-DDP(50mg/L)对Ishikawa细胞增殖无明显抑制作用(P>0.05)。TRAIL(50μg/L)联合低浓度DOX(5mg/L)、c-DDP(50mg/L)处理Ishikawa细胞后,细胞增殖抑制率明显高于对照组及单独作用细胞(P<0.01);不同浓度的TRAIL、DOX、C-DDP均能诱导Ishikawa细胞凋亡,但DOX、C-DDP能显著增强TRAIL诱导Ishikawa细胞凋亡(P<0.01)。结论:TRAIL联合低浓度化疗药物DOX、c-DDP显著抑制了Ishikawa细胞增殖,诱导了Ishikawa细胞凋亡。     

米非司酮对子宫内膜异位症细胞PTEN基因表达与凋亡的影响

目的:探讨米非司酮对子宫内膜异位症细胞PTEN基因表达及凋亡的影响。方法:体外原代培养人异位子宫内膜细胞,应用四甲基偶氮噻唑兰(MTT)法测定子宫内膜异位症细胞体外增殖活性;应用流式细胞仪(FCM)检测在不同浓度米非司酮作用24h后,子宫内膜异位症细胞PTEN蛋白表达率、增殖率和凋亡率;应用吖啶橙荧光染色法和透射电镜技术研究子宫内膜异位症细胞的形态学变化。结果:米非司酮能够抑制子宫内膜异位症细胞的增殖且呈明显的剂量依赖性;AO荧光染色及透射电镜观察表明,经米非司酮培养的子宫内膜异位症细胞出现了典型的细胞凋亡的特征性变化;米非司酮能够使子宫内膜异位症细胞出现细胞周期阻滞,使其停滞于G1 期,降低S期细胞比例;PTEN蛋白的表达率明显增加,与对照组相比差异显著。结论:米非司酮能够明显抑制人异位子宫内膜细胞的体外增殖并促进其凋亡,其促凋亡作用与上调PTEN基因的表达有关。     

5-氮杂脱氧胞苷对子宫内膜癌细胞的生长及RASSF1A基因表达的影响

目的 探讨DNA甲基转移酶抑制剂--5-氮杂脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对子宫内膜癌细胞的生长及RASSF1A基因表达的影响.方法 5-Aza-CdR作用后,采用锥虫蓝染色法、流式细胞仪分别检测子宫内膜癌细胞株HEC-1B细胞的生长及凋亡情况,采用RT-PCR技术、甲基化特异性PCR(MSP)技术分别检测HEC-1B细胞中RASSF1A mRNA的表达和RASSF1A基因启动子的甲基化状态.结果 (1)HEC-1B细胞的生长及凋亡情况:5-Aza-CdR对HEC-1B细胞生长的抑制作用呈明显的剂量和时间依赖性(P＜0.01);且HEC-1B细胞的凋亡率也呈明显的剂量依赖性(P＜0.01).(2)HEC-1B细胞中BASSF1A mRNA的表达:未经5-Aza-CdR作用的HEC-1B细胞中BASSF1A mRNA表达缺失;不同浓度5-Aza-CdR(分别为0.05、0.1、1、5、10 nmol/ml)作用后,HEC-1B细胞中RASSF1AmRNA表达不同程度地上升,其相对表达水平分别为0.074±0.004、0.105±0.004、0.167±0.006、0.334±0.005、0.484±0.007,分别与未经5-Aza-CdR作用的细胞(为0)比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).(3)HEC-1B细胞中RASSF1A基因启动子的甲基化状态:未经5-Aza-CdR作用的HEC-1B细胞中RASSF1A基因启动子呈高甲基化状态;加入低浓度(即0.05、0.1、1、5 nmol/ml)的5-Aza-CdR后,HEC-1B细胞中RASSF1A基因启动子的甲基化水平下降,呈半甲基化状态(即同时出现甲基化和非甲基化条带);当5-Aza-CdR浓度为10 nmol/ml时,HEC-1B细胞中RASSF1A基因启动子呈非甲基化状态.结论 (1)5-Aza-CdR可抑制HEC-1B细胞增殖、促进HEC-1B细胞凋亡.(2)5-Aza-CdR能使HEC-1B细胞重新表达RASSF1A mRNA,能逆转RASSF1A基因启动子的高甲基化状态.     

PPARs在子宫内膜腺癌细胞中的表达及其激动剂对子宫内膜癌细胞生长抑制的影响

目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptors,PPARs)在子宫内膜癌细胞中的表达及PPARγ激动剂罗格列酮(Rosiglitazone)对体外培养人子宫内膜癌细胞系HHUA、KLE生长抑制和凋亡的影响。方法:RT-PCR检测PPARs在子宫内膜癌细胞中的表达;用MTT比色法分别检测罗格列酮作用于子宫内膜癌细胞HHUA、KLE不同时间后的细胞生长抑制率;流式细胞仪分析细胞周期分布; TUNEL检测细胞凋亡。结果:RT-PCR结果显示,两种子宫内膜癌细胞中均有PPARαPPARγmRNA表达,未见到PPARβmRNA表达;罗格列酮对人子宫内膜癌细胞的生长有抑制作用,呈时间剂量依赖性;流式细胞仪(FCM)检测结果显示盐酸罗格列酮作用于人子宫内膜癌细胞24h后,细胞周期被阻滞于G_1期;荧光显微镜,TUNEL检测显示, 200μmol/L罗格列酮作用子宫内膜癌细胞24h后出现典型的凋亡现象,细胞凋亡率为(18．3±1．9)%,与对照组(2．66±0．49)%相比差异有统计学意义(P＜0．05)。结论:罗格列酮对人子宫内膜癌细胞系的生长具有明显的抑制作用,促进细胞凋亡,其抗肿瘤作用机制可能是通过活化PPARγ途径诱导了细胞凋亡。     

子宫内膜癌和卵巢上皮性癌PTEN基因突变及其蛋白表达的意义

目的　探讨子宫内膜癌和卵巢上皮性癌组织中抑癌基因PTEN的突变及其蛋白表达与肿瘤发生、发展的关系。方法　应用聚合酶链反应 单链构象多态性分析 (PCR SSCP)和DNA序列分析法 ,检测子宫内膜癌 (5 2例 )、卵巢上皮性癌 (6 0例 )中PTEN基因第 5和第 8外显子的突变 ,免疫组织化学法检测PTEN蛋白的表达。结果　子宫内膜癌组织 :(1)PTEN基因突变率为 2 5 % ,高于正常子宫内膜 (0 ,P <0 0 5 ) ;PTEN基因突变率与子宫内膜癌的病理分级、组织类型、肌层浸润深度密切相关(P <0 0 5 )。(2 )PTEN蛋白缺失率为 6 0 % ,高于正常子宫内膜组织 (0 ,P <0 0 5 ) ;子宫内膜癌组织中PTEN蛋白表达率与病理分级和组织类型密切相关 (P <0 0 5 ) ,而与手术病理分期和肌层浸润深度无关 (P >0 0 5 )。卵巢上皮性癌组织 :(1)PTEN基因的突变率为 5 % ,与正常卵巢组织 (0 )和良性卵巢肿瘤 (0 )相比 ,差异无显著性 (P >0 0 5 )。 (2 )PTEN蛋白缺失率为 2 3% ,显著高于良性卵巢肿瘤和正常卵巢组织 (均为 0 ,P <0 0 5 ) ;卵巢上皮性癌组织中的PTEN蛋白缺失率与其组织类型及患者的年龄、绝经与否无明显相关性 (P >0 0 5 ) ,与临床分期和病理分级有关 (P <0 0 5 )。结论　PTEN基因的突变和蛋白表达缺失均参与子宫内膜癌的发生发     

脂联素对子宫内膜癌细胞增殖凋亡的影响

目的:研究脂联素对子宫内膜癌细胞增殖凋亡的影响及其信号的传导。方法:免疫细胞化学方法及RT-PCR法检测子宫内膜癌Ishikawa3-H-12细胞AdipoR1/R2蛋白及mRNA的表达,不同浓度脂联素(2.5,5,10,20μg/ml)作用子宫内膜癌细胞30min,Western blot检测AMPK磷酸化程度,不同浓度脂联素作用细胞48h及AMPK抑制剂(复合物C)预处理后脂联素再作用48h后,MTT试验及流式细胞仪检测不同处理组细胞的增殖及凋亡。结果:子宫内膜癌Ishikawa3-H-12细胞AdipoR1/R2蛋白呈棕黄色颗粒状表达,并可见AdipoR1/R2基因表达。除2.5μg/ml浓度外,其余浓度组脂联素均显著诱导AMPK磷酸化,不同浓度组AMPK活化差异有统计学意义(F=27.985,P0.01),脂联素以浓度依赖模式诱导子宫内膜癌细胞AMPK活化。脂联素以浓度依赖模式显著抑制子宫内膜癌细胞增殖(F=13.322,P0.01),诱导子宫内膜癌细胞凋亡(F=46.826,P0.01),复合物C可以阻断脂联素诱导的细胞增殖抑制及凋亡。结论:脂联素可能通过影响AMPK信号通路抑制子宫内膜癌细胞增殖,促进凋亡。     

p27、cdk4在子宫内膜癌中的表达

目的 :探讨子宫内膜癌中p2 7、cdk4蛋白的表达及临床意义。方法 :采用免疫组化S P法检测 42例子宫内膜癌子宫内膜中p2 7及cdk4蛋白的表达。结果 :(1 )子宫内膜癌p2 7蛋白核表达率为 1 6 .7% ,明显低于对照组 (正常子宫内膜及增生子宫内膜为51 .4% ) ,cdk4的核表达率为 76.2 % ,明显高于对照组的 2 9.7% ;(2 )p2 7或cdk4蛋白核表达均与子宫内膜癌的组织学分级有关 ,分化差的细胞p2 7核表达率低 ,cdk4核表达率则高 ;(3)p2 7核阴性表达合并cdk4核阳性表达与组织学分级及手术病理分期相关 ,分化差及手术病理分期晚的病例p2 7核阴性表达合并cdk4核阳性表达的出现率明显增高 ;(4)p2 7与cdk4蛋白表达之间无相关性 ;(5)内膜癌中p2 7蛋白胞浆表达率明显增高 ,cdk4蛋白胞浆表达则有降低趋势。结论 :p2 7蛋白核表达缺失及cdk4蛋白核表达增高与内膜癌的发生发展相关 ,联合检测p2 7、cdk4蛋白有助于估计预后、指导治疗