保元排毒丸对顺铂引起的LLC-PK1细胞凋亡干预作用研究

目的:观察保元排毒丸对顺铂(DDP)所致猪肾小管上皮细胞(LLC-PK1)凋亡的影响。方法:LLC-PK1细胞分三组培养,空白血清组采用不含药血清进行培养,模型组分别以10和6μg/mL不同浓度的DDP进行培养,模型+含药血清组是在不同浓度的DDP基础上予以10%保元排毒丸含药血清进行培养。培养24h后分别以荧光显微镜、电镜、流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:与空白血清组比较,荧光显微镜下模型组凋亡细胞增多,而模型+含药血清组凋亡细胞数明显减少;电镜下模型组细胞受损明显,而模型+含药血清组细胞形态基本正常。流式细胞仪检测细胞凋亡率,空白对照组为2·45%;各DDP组明显增加,10μg/mL组和6μg/mL组分别为31·80%和30·98%,与空白对照组比较差异有统计学意义,P<0·001;各含药血清组明显减少,DDP10μg/mL+含药血清组和DDP6μg/mL+含药血清组分别为15·21%和14·27%,与相应模型组比较差异有统计学意义,P<0·001。模型组bcl-2基因及突变型p53基因的表达均明显降低,相应含药血清组的表达均有所上调。结论:保元排毒丸能减轻顺铂所致LLC-PK1细胞的凋亡,上调凋亡抑制基因bcl-2和突变型p53,可预防或降低顺铂引起的肾毒性。     

磁性纳米Fe3O4对卵巢癌细胞耐药性的逆转作用及其与凋亡相关基因的关系

背景与目的：目前认为多药耐药（muhi-drug resistance,MDR）是卵巢癌化疗失败和复发的主要原因。本研究探讨磁性纳米Fe3O4颗粒对卵巢癌细胞（SKOV3／DDP）耐药性的逆转作用及其与凋亡相关基因的关系。方法：将卵巢癌细胞的耐药株SKOV3／DDP分为对照组、顺铂组（DDP组）、磁性纳米Fe3O4颗粒组（Fe3O4-MNPs组）、DDP＋磁性纳米Fe3O4颗粒组（DDP＋Fe3O4-MNPs组）4个组,用MTT比色法检测对细胞增殖的抑制作用,流式细胞术测定细胞凋亡,电感耦合等离子体原子发射光谱法测细胞内顺铂的含量,RT-PCR检测凋亡相关基因Bcl-2和SurvivinmRNA在SKOV3／DDP中的表达。结果：Fe3O4-MNPs组细胞耐药性的逆转倍数为2．259。DDP＋Fe3O4-MNPs组细胞凋亡率[（42．1±5．6）％VS．（26．9±4．1）％]及细胞内铂含量[（0．074＋_0．006）μmol／Lvs．（0．057±0．003）μmol／L]均高于DDP组（P〈0．05）,其差异有统计学意义（P〈0．05）。DDP＋Fe3O4-MNPs组细胞bcl-2、survivin mRNA表达均低于DDP组,其差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：磁性纳米Fe3O4颗粒可逆转卵巢癌细胞对顺铂的耐受性,作用机制可能与其降低抗凋亡基因bcl-2和survivin mRNA表达有关。     

TSA增强人卵巢癌顺铂耐药株C13对顺铂敏感性的体外研究

目的：本研究探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂triChoStatin A（TSA）联合化疗药物顺铂（DDP）处理人卵巢癌顺铂耐药株C13＊的协同效应。方法：MTT法观察TSA、DDP、TSA＋DDP对C13＊细胞增殖的影响；克隆形成实验分别检测DDP、TSA＋DDP处理C13＊的克隆形成率；流式细胞仪检测凋亡和分析细胞周期；Hochest33258观察凋亡细胞形态。结果：40nmol／L TSA处理C13＊12h，细胞的凋亡率为2．99％，MTT显示生长未受明显影响；TSA＋DDP组较DDP组C13＊对DDP的作用更为敏感，在DDP为20～30μmol／L时差异显著（P〈0．05）。结论：一定浓度的TSA和DDP联合应用可以增强人卵巢癌顺铂耐药株C13＊对顺铂的敏感性。     

Wnt／β-catenin信号转导通路与肺腺癌顺铂耐药作用机制研究

目的：探讨Wnt／β-catenin信号转导通路在肺腺癌顺铂耐药中的分子作用机制。方法：体外常规培养人肺腺癌A549细胞和其顺铂耐药A549／DDP细胞,取对数生长期的细胞用于实验。采用MTT法检测A549和A549／DDP细胞对顺铂的IC50;采用AnnexinV／PI法和Hoechst33342染色法检测顺铂处理后2种细胞的凋亡率;采用蛋白质印迹法检测2种细胞中β-catenin和Survivin的表达;采用siRNA干扰沉默pcatenin的表达,检测A549／DDP细胞的Ic5。值、细胞凋亡率及β-catenin和Survivin的表达。结果：顺铂对A549／DDP细胞的IC50值为（28．984±1．404）μmol／L高于A549细胞的（5．888±0．338）umol／L,t=27．696,P〈0．001;20umol／L顺铂诱导A549／DDP细胞凋亡率为（21．75±0．96）％,显著低于A549细胞的（39．38±0．88）％,t=23．474,P〈0．001。A549／DDP细胞中β-catenin蛋白的表达为1．890±0．060,显著高于A549细胞的1．063±0．035,t=20．595,P〈0．001;在A549／DDP细胞中Survivin蛋白表达量为1．107士0．061,明显高于A549细胞的0．503±0．025,t=15．814,P〈0．001。RNAi技术沉默β-catenin蛋白耐药性（14．615±0．939）gmol／L,显著低于未沉默β-cateninA549／DDP细胞的（28．984±1．404）μmol／L,t=14．732,P〈0．001;RNAi技术沉默pcatenin蛋白细胞凋亡率为（37．57±0．64）％,显著高于未沉默β-cateninA549／DDP细胞的（21．75±0．96）％,t=23．699,P〈0．001;RNAi技术沉默伊catenin蛋白下游靶基因Survivin蛋白的表达为0．527±0．065,显著低于A549／DDP组的1．027±0．025和瞬时转染阴性对照siRNA组的1．033±0．040,F=116．944,P〈0．001。结论：抑制Wnt／β-catenin信号转导通路的活性可以降低A549／DDP细胞对顺铂的耐药性。     

拓扑替康诱导卵巢癌COC1/ DDP 细胞凋亡的分子机制初步探讨

  目的 探讨拓扑替康(TPT)对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1／DDP的杀伤和诱导凋亡活性及其作用机制。方法 MTT比色法与软琼脂克隆形成测定TPT对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1／DDP的杀伤效应；TUNEL法和流式细胞仪研究TPT对靶细胞的凋亡诱导作用；Western blot检测TPT对COC1／DDP细胞内bcl-2、bax和caspase-3基因表达的影响以及caspase-3活性的改变。结果 TPT对COC1／DDP细胞有明显细胞毒性作用，不仅有剂量依赖性，也存在明显的时间依赖性；COC1／DDP细胞在TPT作用后出现特征性凋亡形态特征，且凋亡率由8．54％上升为23．16％(P<0．05)。TPT不影响COC1／DDP细胞内bcl-2蛋白表达，却明显增加19ax蛋白和caspase-3蛋白表达，并提高caspase-3活性。结论 TPT对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1／DDP有明显的杀伤和促凋亡作用，其机制可能依赖于细胞内bax蛋白表达增高和caspase-3的活化。     

GOLPH3沉默对顺铂诱导的人上皮性卵巢癌 A2780／DDP 细胞凋亡的影响

目的：探究 GOLPH3对顺铂诱导的人上皮性卵巢癌 A2780／DDP 细胞凋亡的影响。方法：不同浓度顺铂处理 A2780和 A2780／DDP 细胞72h,MTT 检测半数抑制浓度 IC50,Western blot 检测 GOLPH3的表达。将培养细胞分为4组：A2780组及 A2780／DDP 组（对照组、Scrambled siRNA 组、GOLPH3 siRNA 组）。40μmol／L顺铂处理48h 后,MTT 检测对细胞活性的影响,流式细胞术检测对细胞凋亡的影响,Western blot 检测对Caspase －3、p －Akt 和 p －mTOR 蛋白表达的影响。Western blot 检测 mTOR 抑制剂雷帕霉素（Rapamycin）和PI3K／Akt 抑制剂（LY294002）对 Caspase －3蛋白表达的影响。结果：顺铂处理72h 时,A2780和 A2780／DDP细胞的 IC50分别为9．8μmol／L 和60．14μmol／L。与 A2780组相比,A2780／DDP 组 GOLPH3蛋白表达明显增加（P ＜0．05）。GOLPH3 siRNA 转染可显著下调 A2780／DDP 细胞中 GOLPH3蛋白的表达（P ＜0．05）。顺铂处理后,与 A2780／DDP 对照组相比,A2780组和 A2780／DDP 细胞 GOLPH3 siRNA 转染组细胞活性显著降低,顺铂敏感性增加,细胞凋亡率和 Caspase －3蛋白表达上调,p －Akt 和 p －mTOR 蛋白表达下调;LY294002和 Ra-pamycin 处理均显著增加 Caspase －3蛋白表达（P ＜0．05）。结论：GOLPH3沉默可通过抑制 Akt／mTOR 激活促进顺铂诱导的 A2780／DDP 细胞凋亡。     

生存素反义寡核苷酸促进顺铂诱导骨肉瘤细胞凋亡

目的：探讨生存素（survivin）反义寡核苷酸（antisense oligonucleotide，ASODN）对顺铂（diamminedichloroplatinum，DDP）诱导骨肉瘤细胞凋亡的促进作用。方法：通过合成靶向survivin的ASODN转染骨肉瘤OS-732细胞并与DDP联合作用，同时设空白对照组、正义（SODN）组及DDP组进行比较。采用RT—PCR、免疫细胞化学法检测各组细胞survivin mRNA和蛋白表达状态，流式细胞仪（flow cytometry，FCM）、吖啶橙／溴化乙锭（acridine orange／ethidium bromide，AO／EB）染色法检测各组细胞凋亡水平和形态，MTT法检测细胞生长抑制情况。结果：与空白对照组、SODN组及DDP组相比，ASODN转染组细胞survivin mRNA及蛋白表达明显减弱，细胞凋亡水平较空白对照组、SODN组相应提高，细胞萎缩、染色质浓缩呈典型凋亡改变，细胞生长相对受抑；上述指标在ASODN＋DDP组变化更为明显。其细胞凋亡指数（apoptotic index，AI）和细胞生长抑制率（inhibition ratio，IR，61．36％）明显高于各单“药”组（SODN组6．81％、ASODN组31．82％和DDP组41．35％）及SODN＋DDP组（45．45％），P〈0．05。结论：As0DN能够特异性封闭骨肉瘤OS-732细胞中survivin基因表达，使其功能相应爱抑，增加细胞对DDP敏感性，进而增进DDP诱导骨肉瘤细胞凋亡效应。     

姜黄素逆转卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP耐药性及机制的研究

目的:探讨姜黄素对耐药卵巢癌细胞增殖、凋亡及对顺铂敏感性的影响并探讨其机制。方法:采用MTT法检测顺铂、姜黄素、顺铂与姜黄素合用对COC1/DDP细胞的生长抑制作用;用流式细胞仪检测2.5μg/ml顺铂、20μmol/L姜黄素、2.5μg/ml顺铂与20μmol/L姜黄素合用作用于COC1/DDP细胞48h后的细胞凋亡率;RT-PCR法检测上述各组细胞凋亡相关基因Bcl-2、Caspase-3、Survivin的表达。结果:姜黄素浓度在(15~35)μmol/L以内时对COC1/DDP有明显的增殖抑制作用,且呈一定的剂量-效应关系。顺铂的浓度在(1.25~5)μg/ml时加入姜黄素20μmol/L后耐药细胞生存率下降明显(P<0.05),尤以顺铂2.5μg/ml和姜黄素20μmol/L联合作用时,耐药细胞生存率下降最明显;COC1/DDP中顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂相比,凋亡率明显增加(P<0.05);顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂相比Bcl-2、Sur-vivin mRNA的表达明显降低(P<0.05),Caspase-3 mRNA的表达明显增高(P<0.05)。结论:姜黄素能够显著抑制COC1/DDP增殖,并能增强该细胞系对顺铂的敏感性,其机制可能与降低Bcl-2、Survivin基因的表达,增加Caspase-3基因的表达有关。     

TRAIL蛋白与顺铂协同诱导横纹肌肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的探讨肿瘤坏死因子（INF）相关凋亡诱导配体（TRAIL）蛋白和顺铂联合应用对人横纹肌肉瘤细胞生长抑制和诱导凋亡作用。方法将不同浓度的TRAIL作用于培养的人RD横纹肌肉瘤细胞，通过MTT比色法、流式细胞仪检测细胞凋亡和Fas蛋白表达的方法，观察其对横纹肌肉瘤细胞的作用，及其与顺铂协同作用的效果和机制。结果TRAIL浓度为1．0、10．0、100．0ng／ml时，细胞毒性指数分别为18．9％、20．8％和43．5％；顺铂浓度为1．0、5．0、10．0μg／ml时，细胞毒性指数分别为9．8％、23．4％和37．1％。而浓度为100ng／ml的TRAIL与浓度为5μg／ml的顺铂联合作用时，细胞毒性指数明显增加达66．4％，结合FCM分析显示联合应用提高了Fas蛋白的表达，与细胞凋亡率增加相一致。结论TRAIL和顺铂均能有效诱导横纹肌肉瘤细胞凋亡，联合应用具有明显的协同效果。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。     

恶性肿瘤肝转移假性肝硬化发生机制及诊疗的研究进展

随着对恶性肿瘤的深入研究,越来越多的肿瘤患者接受到更规范更多线的治疗.更多线的化疗及靶向治疗,使一部分恶性肿瘤肝转移患者的肝脏发生类似肝硬化的形态学及临床改变,称之为假性肝硬化.由于假性肝硬化罕见,对于它的认识多来自于个案报道.因此,本文通过综述国内外关于假性肝硬化的个案报道及相关研究,对其发生机制、影像学及临床表现和...     

Management of intracranial metastases of differentiated carcinoma of thyroid

Summary Brain metastases in differentiated carinoma of the thyroid is a rare occurrence. We treated five documented cases of carcinoma of thyroid with brain metastases out of 400 cases of thyroid cancer treated between 1972 to 1993. 4 were females out of which one was pregnant during the appearance of brain metastases. All cases were treated with thyroidectomy, and radioiodine as primary therapy. Brain metastases developed 6 months to 11 years following treatment of the primary and were treated with radiotherapy and suppressive levothyroxine. We observed the beneficial effect of suppressive thyroxine and the poor prognosis associated with pregnancy and withdrawl of thyroid replacement therapy. 3 of the 5 patients are alive 12–23 months after treatment for brain metastases, while 2 patients died at 4 months and 7 years post brain metastases due to pulmonary and hepatic failure, respectively.     

Clinico-Pathological Study of 50 Cases of Tumours of Larynx

Otoacoustic emissions have been advocated in the management of otitis media with effusion. However, otoacoustic emissions cannot differentiate different types of hearing loss. This study was conducted to find factor that can differentiate otitis media with effusion from other common causes of hearing loss in children. Children were enrolled in the study and divided in four groups consisting of 25 ears each after pure tone and impedance audiometry: (1) Otitis media with effusion group, (2) Normal ear group, (3) Sensory-neural hearing loss group, (4) Chronic suppurative otitis media group. Otoacoustic emissions were recorded and results were analyzed statistically. The normal hearing group had significant difference from other groups but total band reproducibility of transient evoked otoacoustic emissions did not show any statistical difference in the cases groups. In distortion product otoacoustic emissions, group 1 showed significant difference from group 3 and group 1 had significant difference from all other groups at 4 kHz. The study did not find any factor that differentiates otitis media with effusion from other diseases. Although, distortion product otoacoustic emissions can indicate otitis media with effusion but impedance audiometry should be the main tool in the management of otitis media with effusion.     

Predictors of malignant potential of cystic lesions of the pancreas

Background

Cystic lesions of the pancreas (CLP) are a diagnostic dilemma, the correct characterisation of which determines surgical management.

Methods

From 1995 to 2005, radiology and pathology records were reviewed for the presence of CLP. CLP were divided into three groups; Group 1: Benign, Group 2: Pre-malignant, and Group 3: Malignant.

Results

Seventy-nine of 121 patients were included [Group 1: n = 46, Group 2: n = 10, Group 3: n = 23], with a median age at diagnosis of 68 (31–92) years. The median follow-up period was 24 (14–84) months. On univariate analysis, female gender (p = 0.04), jaundice (p < 0.01), raised serum ALT concentration (p = 0.03), cyst size (≥2.5 cm) (p < 0.01), and biliary duct dilatation (p < 0.01) were associated with malignant potential. Benign cysts were more likely to present incidentally (p < 0.01). On multi-variate analysis, cyst size (≥2.5 cm) was an independent predictor of malignant potential. Sub-group analysis revealed that cysts < 2.5 cm in the head of the pancreas with evidence of biliary obstruction (either abnormal liver function; raised ALT [p = 0.01], ALP [p = 0.01], total bilirubin [p = 0.02], and/or biliary duct dilatation [p < 0.01]) were associated with malignant potential.

Conclusion

Cyst size ≥2.5 cm on computer tomography imaging was an independent predictor of pre-malignant and malignant pancreatic cysts. Cyst size and the presence of biliary obstruction predict potentially malignant cysts of the head of the pancreas, which require surgical management.