miR-124抑制结肠癌细胞增殖和侵袭与TET蛋白家族的关系

目的:探讨miR-124是否通过靶向调节TET蛋白家族的表达而抑制结肠癌细胞增殖与侵袭。方法:用双荧光素酶报告基因检测系统分别检测miR-124对TET家族(TET1、TET2、TET3)的3'UTR-荧光素酶活性的影响;用q RT-PCR与Western blot检测miR-124模拟物转染结肠癌HT29细胞后TET家族的m RNA与蛋白表达水平的变化;用MTS和Transwell实验观察HT29细胞转染miR-124模拟物及TET si RNA后增殖和侵袭能力的变化。结果:双荧光素酶报告基因检测结果显示,各TET m RNA的3'UTR均被miR-124特异性结合,其荧光素酶活性被明显抑制(均P0.05);转染miR-124模拟物后的HT29细胞TET的m RNA与蛋白表达水平明显减低(均P0.05);HT29细胞转染miR-124模拟物或TET si RNA后,增殖和侵袭能力均明显降低(均P0.05)。结论:miR-124可能通过直接靶向调控TET基因的表达,而抑制结肠癌细胞增殖和侵袭。     

miR-200a靶向β-catenin对膀胱癌的上皮-间质转换影响的研究

目的:探讨miR-200a靶向β-catenin对膀胱癌细胞上皮-间质转换(EMT)的影响。方法:TOP/FOP闪光荧光素酶法鉴定miR-200a对β-catenin信号依赖性;使用荧光素酶法测定miR-200a对β-catenin编码基因CTNNB1的3'非翻译区(3'-UTR)的靶向作用;划痕试验和Transwell检测miR-200a对膀胱癌细胞5637的细胞活力、转移和侵袭影响。Western blotting确定miR-200a对Wnt/β-catenin信号下游分子的效应。结果:miR-200a可直接与β-catenin编码基因CTNNB1的3'UTR相互作用,并抑制β-catenin的表达。miR-200a抑制了5637细胞的活力、转移和侵袭。结论:miR-200a通过靶向β-catenin抑制了膀胱癌细胞5637的生物学功能。     

miR-519d在胰腺癌细胞中的表达及其作用

目的:探讨miR-519d在胰腺癌细胞中的表达及作用。方法:用qRT-PCR检测miR-519d在胰腺癌细胞系AsPC-1、BxPC-3、Capan-2、Panc-1及正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6-C7中的表达。将Panc-1细胞分别转染miR-519d过表达质粒(miR-519d组)与阴性对照质粒(阴性对照组),以无处理的Panc-1细胞为空白对照组,用MTT法、Transwell实验、Western blot分别检测转染后细胞的增殖和侵袭能力、凋亡情况以及X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的表达。结果:各胰腺癌细胞系中miR-519d相对表达量均明显低于正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6-C7(均P0.05);与空白对照组比较,miR-519d组细胞增殖能力降低(培养72 h后明显降低)、凋亡率明显升高、侵袭能力明显减弱、XIAP蛋白表达量明显降低(均P0.05);阴性对照组各项指标与空白对照组差异均无统计学意义(均P0.05)。结论:miR-519d在胰腺癌细胞中表达下调,miR-519d表达下调有增强胰腺癌细胞增殖和侵袭能力、降低凋亡的作用,该作用可能与其调节XIAP蛋白的表达有关。     

微小核糖核酸miR-613通过下调E2F5的表达抑制前列腺癌细胞增殖

目的研究微小核糖核酸miR-613在前列腺癌组织及细胞系中的表达及其对前列腺癌细胞增殖的影响。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测前列腺癌组织及细胞系中miR-613的表达情况,并检测各组细胞中E2F5mRNA的表达情况;蛋白质印迹法检测E2F5蛋白的表达;通过细胞增殖实验检测过表达miR-613后细胞的增殖能力;集落形成实验检测单个细胞克隆增殖情况;双荧光素酶报告实验验证miR-613和E2F5是否靶向结合。结果 qPCR结果显示,miR-613在前列腺癌组织和细胞系均显示低表达。与Control组相比,转染miR-613组PC3和LnCap细胞中E2F5蛋白表达水平降低,细胞增殖明显受抑制。而在过表达E2F5后,PC3和LnCap细胞增殖又明显回升,可逆转miR-613的调节作用。双荧光素酶报告实验结果表明,miR-613能够直接靶向E2F5 3′-UTR。结论 miR-613能够通过下调E2F5转录因子的表达而抑制前列腺癌细胞增殖。     

circ_0001658靶向miR-1231对肝癌Huh-7细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨circ_0001658是否靶向miR-1231影响肝癌Huh-7细胞的增殖和凋亡。方法:肝癌组织中circ_0001658和miR-1231表达采用qRT-PCR进行测定。利用CCK-8法检测si-circ_0001658组、miR-1231组、si-circ_0001658+anti-miR-1231组、si-NC组、miR-NC组、si-circ_0001658+anti-miR-NC组细胞活性,克隆形成、流式细胞术检测细胞克隆形成、凋亡,Western blotting检测cleaved-caspase 3和cleaved-caspase9表达。双荧光素酶报告实验检测circ_0001658和miR-1231的靶向结合。结果:与癌旁组织相比,肝癌组织中circ_0001658表达量升高,miR-1231表达量降低。干扰circ_0001658或过表达miR-1231降低Huh-7细胞活性、克隆形成数,增加凋亡率、cleaved-caspase3和cleaved-caspase9蛋白表达量。circ_0001658靶向调控miR-1231的表达,下调miR-1231表达逆转了干扰circ_0001658表达对肝癌Huh-7细胞增殖和凋亡的作用。结论:干扰circ_0001658表达通过靶向负调控肝癌Huh-7细胞的miR-1231,抑制细胞增殖和诱导凋亡。     

microRNA-449a靶向Notch1抑制膀胱癌细胞J82的迁移

【摘要】〓目的〓研究microRNA-449a(miR-449a)对膀胱癌细胞J82迁移能力的影响以及对靶基因Notch1表达的影响。方法〓通过mimics转染膀胱癌细胞株J82使其过表达miR-449a,利用Transwell实验、细胞划痕实验观察细胞迁移能力的变化;采用实时定量PCR和蛋白印迹检测细胞Notch1表达水平的变化,并通过荧光素酶实验验证miR-449a与Notch1基因的直接调控关系。结果〓与对照组相比,转染miR-449a组的J82细胞的迁移能力减弱。过表达miR-449a后,J82细胞Notch1的mRNA表达无明显变化(P=0.5739),但Notch1蛋白表达下调(P=0.0135)。荧光素酶报告基因实验显示,miR-449a能明显抑制Notch1-3’UTR的荧光素酶活性(P=0.0016)。结论〓过表达miR-449a可能通过靶向降低Notch1基因的蛋白表达,抑制膀胱癌细胞的迁移。     

MiR-197靶向JAK2调节人皮肤鳞状细胞癌细胞增殖侵袭能力的研究

目的:探讨miR-197通过调控JAK2对人皮肤鳞状细胞癌细胞A431增殖和侵袭的影响。方法:收集2018年7月-2019年5月于笔者医院经手术切除且被证实为皮肤鳞状细胞癌的组织标本以及对应的癌旁组织标本各40例,RT-qPCR检测miR-197在皮肤鳞状细胞癌组织、癌旁组织、人正常皮肤细胞系HaCaT、人皮肤鳞状细胞癌细胞株A431、A431-miR-197-siRNA和A431-miR-197-siRNA-NC中的表达情况;Western-Blot检测JAK2在各细胞株中的表达;生物信息学预测及双荧光素酶报告基因实验验证miR-197和JAK2的靶向关系;MTS法检测miR-197对A431增殖能力的影响;Transwell检测miR-197对皮肤鳞状细胞癌细胞侵袭能力的影响;IFA检测miR-197对上皮间质转化(EMT)相关分子N-cadherin表达的影响。结果:miR-197在皮肤鳞状细胞癌组织和皮肤鳞状细胞癌细胞株A431中的表达水平分别高于癌旁组织和人正常皮肤细胞系HaCaT,差异均具有统计学意义(P<0.05);与A431和A431-miR-197-siRNA-NC相比,稳定下调细胞系A431-miR-197-siRNA中miR-197、JAK2的表达水平均显著下降(P<0.05)。经Target Scan数据库分析发miR-197和JAK2有互补结合位点。下调miR-197能显著降低皮肤鳞状细胞癌细胞的增殖和侵袭能力,同时抑制N-cadherin的表达水平。结论:下调miR-197能够靶向抑制皮肤鳞状细胞癌中JAK2的表达和降低EMT相关分子N-cadherin的表达,进而抑制皮肤鳞状细胞癌细胞的EMT进程以及增殖侵袭能力。     

microRNA-126靶向PIK3R2调控肝癌细胞SMMC-7721的增殖和凋亡

【摘要】 目的 研究microRNA-126(miR-126)对肝癌细胞SMMC-7721迁移能力的影响以及对靶基因PIK3R2表达的影响。方法 通过慢病毒转染肝癌细胞株SMMC-7721使其过表达miR-126,利用CCK-8法检测细胞增殖能力。流式细胞术检测细胞凋亡;采用实时定量PCR和蛋白印迹检测细胞PIK3R2表达水平的变化,并通过荧光素酶实验验证miR-126与PIK3R2基因的直接调控关系。结果 与对照组相比,转染miR-126组的SMMC-7721细胞的增殖能力减弱,凋亡增加。过表达miR-126后,SMMC-7721细胞PIK3R2的蛋白表达下调(P=0.0135)。荧光素酶报告基因实验显示,miR-126能明显抑制PIK3R2-3’UTR的荧光素酶活性(P=0.0016)。结论〓过表达miR-126可能通过靶向降低PIK3R2基因的蛋白表达,抑制肝癌细胞的迁移。     

miR-135通过打靶PRKD3对黑色素瘤细胞增殖和迁移的作用

目的探讨miR-135通过打靶PRKD3对黑色素瘤细胞增殖和迁移的作用。方法通过MTT实验检测miR-135对黑色素瘤细胞增殖的作用,Transwell实验检测miR-135对黑色素瘤细胞迁移能力的作用。采用miRDB软件对miR-135的靶向蛋白进行预测分析,通过荧光素酶报告基因实验验证黑色素瘤细胞中miR-135对PRKD3的靶向作用。通过Western Blot检测miR-135对黑色素瘤细胞中PRKD3、CDK4/6和MMP2表达水平的影响。结果 miR-135能够抑制黑色素瘤细胞的增殖,当miR-135过表达后,黑色素瘤细胞的迁移能力受到抑制。miRDB软件预测分析发现,miR-135可以与PRKD3靶向作用;荧光素酶的基因实验证实,miR-135能够直接作用于PRKD3。Western Blot实验结果显示,miR-135过表达后黑色素瘤细胞中PRKD3、CDK4/6和MMP2的表达受到抑制。结论 miR-135能够通过打靶PRKD3来抑制黑色素瘤细胞的增殖和迁移能力。     

miR-124通过靶向调控PKM2基因的表达抑制前列腺癌PC3细胞的增殖

目的:探讨miR-124抑制前列腺癌PC3细胞增殖活性的机制。方法:利用荧光素酶报告基因验证miR-124能否靶向作用于丙酮酸激酶M2型(PKM2)3'端非编码区(UTR)。将miR-124 mimic转染至PC3细胞后,采用实时荧光定量PCR和Western印迹检测前列腺癌PC3细胞PKM2 mRNA和蛋白的表达水平,MTT法检测miR-124 mimic与PKM2 siRNA对PC3细胞生长活性的影响。结果:与人前列腺上皮细胞RWPE-1比较,PC3细胞中PKM2 mRNA和蛋白水平表达分别上调(5.12±0.35)倍和(4.05±0.20)倍(P0.05)。荧光素酶报告基因结果证实,PKM2是miR-124调控的靶基因,miR-124可特异性地结合于PKM2 mRNA的3'-UTR。转染miR-124 mimic 24 h后,PKM2蛋白水平下调至阴性对照组(0.16±0.04)倍(P0.05),但对PKM2 mRNA表达无显著影响(P0.05)。MTT结果显示,转染miR-124 mimic和PKM2 siRNA都能显著抑制PC3细胞的增殖,但miR-124 mimic对PC3细胞生长活性的抑制能力较PKM2 siRNA强。转染miR-124 mimic和PKM2 siRNA 24 h和48 h后,PC3细胞的增殖率分别为(66.20±5.10)%和(82.10±6.35)%(P0.05)、(49.34±2.37)%和(70.10±5.80)%(P0.05)。结论:miR-124可通过靶向调控PKM2基因的表达而抑制前列腺癌PC3细胞的增殖。     

RNA干扰下调p53抑制因子iASPP表达对膀胱癌细胞的影响

目的 探讨RNA干扰使p53抑制因子iASPP表达下调对膀胱癌细胞的影响.方法 iASPP siRNA慢病毒感染入膀胱癌细胞株5637和T24,实时定量PCR和蛋白质印迹法检测iASPP的表达;噻唑盐法测定细胞生长;集落形成测定法检测集落形成比率;荧光激活细胞分选术检测细胞周期.结果 iASPP siRNA慢病毒感染后细胞iASPP mRNA为0.60±0.02,低于阴性对照慢病毒组(1.00±0.03,P＜0.05).膀胱癌细胞iASPP蛋白表达降低.iASPP下调能抑制入膀胱癌细胞5637和T24的生长和增殖(P＜0.05),每个集落中细胞数显著减少(P＜0.05),集落数目也低于阴性对照组(P＜0.05).iASPP siRNA慢病毒5637细胞培养中的G1期细胞比率明显高于阴性对照慢病毒组,分别为(51.94±0.98)%和(46.00±0.77)%;T24细胞结果与之类似,分别为(60.04±0.45)%和(53.62±0.69)%;组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 RNA干扰能够使膀胱癌细胞iASPP表达下调,从而抑制膀胱癌细胞的生长和增殖.

Abstract：

Objective To discuss the effects of silencing of iASPP gene on human bladder cancer cells. Methods RNAi silencing of iASPP gene in bladder cancer cell 5637 and T24 cells were used by lentiviral mediated interfering short hairpin RNAs. Cell proliferation was tested by MTT assay, and rate of colony was tested by colony formation assay. Cell cycles were tested by using fluorescence-activated cell sorting. Results Down-regulation of iASPP could inhibit the growth and proliferation of human bladder cancer cells (P＜0.05). iASPP know-down could decrease the colony formation of 5637 and T24 cells (P＜0, 05). Knocking down of iASPP in 5637 and T24 cells showed cell arrested at G1. Conclusions Silencing of iASPP gene could inhibit proliferation and colony formation of bladder cancer, iASPP might be an important target for gene therapy of bladder cancer.     

LncRNA DANCR regulates lymphatic metastasis of bladder cancer via the miR-335/VEGF-C axis

BackgroundSubstantial evidence indicate that long non-coding RNA (lncRNA) and microRNA (miRNA) act as key role in bladder cancer. Differentiation antagonistic ncRNA (DANCR) could be used as a biomarker in the occurrence and development of cancer. This study aims to explore the mechanism of DANCR/miR-335/VEGF-C axis affecting lymphatic metastasis of bladder cancer.MethodsqRT-PCR detects the expression of DANCR in bladder cancer cell lines (SW780, 5637, T24, UM-UC-3) and normal bladder cell lines (SV-HUC-1), and selects T24 cell lines for subsequent experiments. The expression levels of DANCR, miR-335 and VEGF were measured by qRT-PCR, and the dual luciferase reporter gene verified the targeted regulation of DANCR on miR-335 and miR-335 on VEGF. CCK-8, Transwell and Wound healing assay detect the proliferation, invasion and migration ability of bladder cancer cells, Endothelial cell adhesion assay and Western blot further prove the lymphatic metastasis of bladder cancer.ResultsIn this study, DANCR was highly expressed in bladder cancer cell lines. Transfection of si-DANCR significantly inhibits the proliferation, migration, invasion and lymphatic metastasis of bladder cancer cells. Dual luciferase assay confirmed that DANCR targets miR-335/VEGF-C. Transfection of miR-335 mimic promotes the proliferation, migration, invasion and lymphatic metastasis of bladder cancer cells, overexpression of DANCR eliminates the promotion of miR-335 mimic on bladder cancer cells. Further experiments proved that inhibition of miR-335 and overexpression of VEGF-C can reverse the inhibitory effect of silencing DANCR on bladder cancer cells.ConclusionsIn bladder cancer, DARCR plays an important role, which regulates the proliferation, migration, invasion and lymphatic metastasis of bladder cancer cells through the miR-335/VEGF-C molecular axis.     

miR-204对TFAM的靶向调控作用及其对乳腺癌细胞生长与增殖的影响

目的:探讨乳腺癌细胞中miR-204对线粒体转录因子A(TFAM)的靶向调控作用及其与细胞生长、增殖的关系。方法:将人乳腺癌MDA-MB-231细胞分别转染mi R-204模拟物或miR-204抑制物,用real-time PCR和Western blot分别检测mi R-204与TFAM蛋白的表达;构建荧光酶报告基因质粒(mut-TFAM/wt-TFAM),将其与mi R-204模拟物或miR-204抑制物共转染MDA-MB-231细胞后检测荧光酶活性变化;构建pc DNA3.1/TFAM质粒,将其单独或与mi R-204模拟物共转染MDA-MB-231细胞后检测TFAM蛋白表达,并用MTT法和Brd U法检测细胞生长与增殖情况。结果:MDA-MB-231细胞转染mi R-204模拟物后mi R-204的表达明显升高,而TFAM蛋白表达明显降低,转染miR-204抑制物后则呈反向变化(均P0.05)。wt-TFAM与mi R-204模拟物共转染时荧光酶活性明显下降,与mi R-204抑制物共转染时荧光酶活性明显升高(均P0.05)。转染pc DNA3.1/TFAM后,MDA-MB-231细胞的TFAM m RNA及蛋白表达量明显上调,细胞生长与增殖能力明显升高(均P0.05);mi R-204模拟物后,MDA-MB-231细胞在TFAM表达降低的同时,细胞生长与增殖能力明显降低,而与pc DNA3.1/TFAM共转染后其上述作用均被部分抵消(均P0.05)。结论:mi R-204能靶向抑制乳腺癌细胞TFAM的表达,从而抑制乳腺癌细胞的生长与增殖。     

siRNA抑制CDH13表达对膀胱癌5637细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨通过siRNA 抑制CDH13表达对膀胱癌5637细胞增殖和侵袭的影响。方法 以膀胱癌5637细胞为研究对象,用siRNA抑制CDH13表达,用western blot检测干扰后CDH13的表达水平,用MTT法检测细胞增殖,Transwell 法检测细胞侵袭能力。结果 westernblot 检测结果显示干扰组CDH13表达显著减少;干扰组5637细胞增殖明显加快,与空白对照组和阴性对照组相比差异有统计学意义（P﹤0.05）;siRNA抑制CDH13表达后细胞的侵袭能力明显增强,与空白对照组和阴性对照组相比差异有统计学意义（P﹤0.05）。结论 siRNA能够特异性地抑制CDH13在膀胱癌5637细胞中的表达,CDH13表达减少后细胞增殖加快、侵袭能力增强; CDH13表达减少是膀胱癌发生发展的一个重要促进因素。     

MALAT1对膀胱癌UMUC3细胞功能的影响及下游基因的筛选

【摘要】目的 研究MALAT1对膀胱癌UMUC3细胞系增殖、迁移、侵袭、克隆形成能力的影响,探讨MALAT1在膀胱癌中的作用机制。方法 化学合成针对MALAT1的siRNA,脂质体法转染UMUC3细胞。反转录实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)测定转染效率,MTS法检测增殖变化,Transwell法检测迁移、侵袭改变,克隆形成实验观察克隆形成能力变化,5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EDU)法检测增殖及周期改变,基因芯片筛选潜在作用通路。结果 干扰MALAT1表达后,膀胱癌UMUC3细胞株增殖、侵袭、迁移、克隆形成能力下降,基因芯片结果发现肿瘤通路相关基因MMP9等明显改变。 结论 MALAT1促进UMUC3膀胱癌细胞的增殖、侵袭、迁移、克隆形成能力,提示可能与其引起肿瘤通路相关基因的激活和失活相关。     

微小RNA-618通过靶向羧基末端结合蛋白2抑制胰腺癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的:探讨微小RNA(miR)-618及羧基末端结合蛋白2(CtBP2)对胰腺癌增殖、侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法:采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测胰腺癌细胞中miR-618的表达;分别转染miR-618 inhibitor和mimics后,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、克隆集落形成及Tr...     

微小核糖核酸miR-370-5p对前列腺癌细胞增殖影响的研究

目的 探讨微小核糖核酸miR-370-5p对前列腺癌细胞系PC3和DU145细胞增殖的影响.方法 将前列腺癌细胞系PC3和DU145分为2组:阴性对照组-转染随机序列(dsCon-trol);实验组-转染miR-370-5p或miR-370-5p+siP21.实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测各组细胞中p21 mRNA的表达及前列腺癌细胞系中miR-370-5p的基础表达情况;蛋白质印迹法检测p21蛋白的表达;集落形成实验检测各组单个细胞克隆增殖情况;细胞增殖实验检测转染后各组细胞的增殖能力.结果 与正常前列腺上皮细胞(RWPE-1)比较,前列腺癌细胞系PC3和DU145中miR-370-5p表达下降;与阴性对照组相比,实验组PC3和DU145细胞中p21 mRNA的相对表达量分别提高了(2.457±0.392)倍和(1.844±0.295)倍.实验组PC3和DU145细胞中p21蛋白的相对表达分别为(0.52±0.09)和(0.63±0.14),阴性对照组为(0.18±0.06)和(0.24±0.05),两组比较,差异有统计学意义(P<0.05).阴性对照组和实验组中PC3和DU145细胞的集落形成数目分别为(0.281±0.024)、(0.084±0.016)、(0.293±0.017)和(0.310±0.041)、(0.088±0.019)、(0.300±0.032),实验组在转染miR-370-5p后,细胞集落形成数目均较阴性对照组少;而在miR-370-5p+siP21共转染后,与转染miR-370-5p组相比较,PC3和DU145细胞集落形成数目均显著恢复,差异均有统计学意义(P<0.05).细胞增殖实验结果显示,实验组转染miR-370-5p后,PC3和DU145细胞在48、72、96 h的存活情况(用吸光度OD值表示)分别为(0.395±0.040)、(0.691±0.042)、(0.874±0.045)和(0.437±0.044)、(0.700±0.051)、(0.875±0.052),与阴性对照组相比,实验组细胞增殖能力明显下降(P<0.05);miR-370-5p+siP21共转染后48、72、96 h,PC3和DU145细胞的OD值分别为(0.675±0.041)、(1.072±0.124)、(1.323±0.136)和(0.633±0.106)、(1.072±0.167)、(1.337±0.102),与转染miR-370-5p比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 miR-370-5p能够通过上调p21蛋白的表达抑制前列腺癌细胞的增殖.     

microRNA-224在结肠癌细胞中的表达及意义

目的：探讨microRNA-224（miR-224）对结肠癌细胞中的表达及意义。 方法：用real-time PCR检测4种结肠癌细胞株（Caco-2、HCT116、HT-29、LoVo）和正常结肠黏膜组织中miR-224的表达水平;将HCT116细胞分别转染miR-224模拟物和阴性对照组序列,以未处理的HCT116细胞作为空白对照,用real-time PCR法检测各组细胞miR-224的表达水平,用MTT法和平板克隆实验法检测各组细胞的增殖情况,用流式细胞仪检测各组细胞周期情况。 结果：4种结肠癌细胞株miR-224的表达均明显高于正常结肠黏膜组织（均P<0.05）;与空白对照组HCT116细胞比较,miR-224模拟物转染组HCT116细胞miR-224的表达水平明显升高,增殖活力明显增强,细胞克隆数量明显增高（均P<0.05）;细胞周期G1到S期转换的趋势增强（P=0.074）;阴性对照组序列转染组HCT116细胞的各项指标差异均无统计学意义（均P>0.05）。 结论：miR-224在结肠癌细胞中表达上调,miR-224可能通过促进细胞增殖与细胞周期的演进,而在结肠癌发生发展的过程中发挥促癌基因的作用。     

长链非编码RNA LINC00313与miR-342-3p/膜联蛋白A2轴在肝细胞癌细胞中的作用与机制

背景与目的 肝细胞癌（HCC）是造成癌症相关性死亡的常见原因之一，研究表明长链非编码RNA（lncRNA）调控微小RNA（miRNA）的表达，进而通过抑制靶mRNA翻译或促进mRNA降解来参与肿瘤发生及进展过程。LINC00313作为一种具有致癌活性的lncRNA参与肿瘤发生及进展过程；膜联蛋白A2（ANXA2）在包括HCC的多种恶性肿瘤中表达上调，促进恶性表型的发生，并可能受上游miR-342-3p的调控。因此，本研究探讨LINC00313、miR-342-3p、ANXA2在HCC细胞中的表达及其相互关系。方法 用qRT-PCR与Western blot检测人肝实质细胞及HCC细胞系（Li-7、HuH-7、Hep3B2.1-7）中LINC00313、miR-342-3p及ANXA2表达。将体外培养的Li-7细胞分为空白对照组（无处理）、LINC00313 siRNA组（转染LINC00313 siRNA）、miR-342-3p模拟物组（转染miR-342-3p模拟物）、共转染阴性对照组（转染阴性siRNA序列与阴性miRNA序列）、共转染组（转染LINC00313 siRNA及miR-342-3p抑制物），用qRT-PCR与Western blot检测各组细胞LINC00313、miR-342-3p及ANXA2表达；MTT实验及平板集落形成实验检测各组细胞增殖；进行TUNEL染色检测各组细胞凋亡；Transwell侵袭及Western blot分别检测各组细胞侵袭数目及上皮-间充质转化（EMT）相关蛋白波形蛋白（vimentin）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达；免疫荧光染色检测各组细胞Bcl-2关联X蛋白（Bax）/B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）；双荧光素酶报告实验分析Li-7细胞中LINC00313对miR-342-3p、miR-342-3p对ANXA2的靶向调控。建立皮下裸鼠异种移植瘤模型，验证LINC00313沉默对Li-7细胞体内生长的影响。结果 与人肝实质细胞比较，Li-7、HuH-7、Hep3B2.1-7细胞的LINC00313、ANXA2 mRNA及蛋白表达均明显升高，而miR-342-3p表达均明显降低（均P<0.05）。与对照组比较，LINC00313 siRNA组、miR-342-3p模拟物组细胞ANXA2 mRNA及蛋白表达、增殖率、集落生成率、侵袭细胞数目、vimentin蛋白表达均明显降低（P<0.05），miR-342-3p表达、凋亡率、E-cadherin蛋白表达、Bax/Bcl-2比值均明显升高（均P<0.05）；与LINC00313 siRNA组比较，共转染组细胞ANXA2 mRNA及蛋白表达、增殖率、集落生成率、侵袭细胞数目、vimentin蛋白表达均明显升高，而miR-342-3p表达、凋亡率、E-cadherin蛋白表达、Bax/Bcl-2比值均明显降低（均P<0.05）。Li-7细胞中，LINC00313可靶向下调miR-342-3p表达，miR-342-3p可靶向下调其ANXA2表达（均P<0.05）。体内实验结果显示，与无处理的Li-7细胞移植瘤比较，LINC00313敲低的Li-7细胞移植瘤的体积与质量均明显降低，肿瘤组织中LINC00313、ANXA2 mRNA及蛋白表达均明显降低，而miR-342-3p表达明显升高（均P<0.05）。结论 LINC00313在HCC细胞中的表达上调，LINC00313可能通过抑制miR-342-3p而增加后者靶基因ANXA2的表达，进而促进HCC细胞的恶性表型。