铜绿假单胞菌耐药机制研究进展

铜绿假单胞菌是临床常见的条件致病菌.随着抗生素广泛应用和不合理使用导致细菌抗生素耐药性增加,临床已分离到大量多重耐药菌株,给临床治疗带来极大的困难.铜绿假单胞菌耐药机制十分复杂,该文就外膜通透性障碍、作用靶位改变、产生灭活酶、形成生物膜和主动外排泵系统等耐药机制做一综述.     

铜绿假单胞菌耐药机制研究进展

铜绿假单胞菌的耐药机制极为复杂，主要包括产β-内酰胺酶、药物作用靶位的改变、酶的修饰钝化作用、外膜通透性降低、主动泵出作用等，而且它对不同抗生素有着不同的耐药机制，其中对β-内酰胺类、喹诺酮类、氨基糖甙类抗生素耐药是国内外研究的重点。本文就近几年来有关的研究进展进行简要综述。     

淮北地区耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药机制

目的探讨淮北地区铜绿假单胞菌（pseudomonas aeruginosa,Pa）对亚胺培南的耐药机制。方法采用K-B法和MIC法检测25株临床分离亚胺培南耐药铜绿假单胞菌对12种临床常用抗生素的敏感性;采用PCR法检测外膜蛋白OprD2和金属β-内酰胺酶（MBLs）耐药相关基因（IMP、VIM、SPM、GIM）。结果 25株亚胺培南耐药铜绿假单胞菌中15株外膜通道蛋白OprD2基因缺失,缺失率60%;5株产金属酶,检出率20%（4株产VIM-2,1株产IMP-1）;未检出SPM-2、GIM基因。结论淮北地区铜绿假单胞菌亚胺培南耐药,外膜通道蛋白OprD2缺失与产金属酶均起重要作用。     

头孢菌素敏感或中介的铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药机制的研究

目的探讨临床新检出的对碳青霉烯类药物耐药、头孢他啶(CAZ)和/或头孢吡肟(FEP)不耐药的铜绿假单胞菌耐药机制。方法琼脂稀释法测定5种抗菌药物对铜绿假单胞菌的MIC。改良三维试验检测细菌耐药酶的产生。SDS-PAGE观察对亚胺培南(IPM)耐药的铜绿假单胞菌分子量(Mr)46 000外膜蛋白OprD的改变。PCR扩增oprD基因并进行序列分析。结果 29株分离菌对IPM均为中、低度耐药,对CAZ为敏感或者中介(除46号菌外)。改良三维试验显示29株细菌均未产碳青霉烯酶。SDS-PAGE显示外膜蛋白缺失可分为3种类型:7株为外膜蛋白整体缺失或者减少,4株外膜蛋白无明显变化,其他均为Mr 46 000外膜蛋白缺失或者减少。按3种缺失类型选择了12株菌测序,发现:其中1株不同位置有多个点突变,导致出现终止密码子;7株出现碱基的少量缺失;3株有新碱基插入;1株为大片段的碱基置换。结论由编码外膜蛋白的oprD基因缺失、突变以及插入导致的外膜蛋白缺失或改变是引起该表型铜绿假单胞菌对碳青酶烯类药物耐药的主要原因。     

淮北地区多重耐药铜绿假单胞菌氨基糖苷类、β-内酰胺类抗生素耐药相关基因研究

目的 调查淮北地区临床分离多重耐药铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa PA)的氨基糖昔类、β-内酰胺类耐药相关基因流行状况.方法 采用K-B法和MIC法检测36株多重耐药铜绿假单胞菌对14种临床常用抗生素的耐药性:聚合酶链反应(PCR)检测氨基糖苷类修饰酶基因、β-内酰胺酶编码基因和外膜通道蛋白OprD2基因.结果 36株铜绿假单胞菌对14种抗菌药物的耐药率为38.9%～100.0%;氨基糖苷类修饰酶基因ant(3")-Ⅰ、aac(6')-Ⅱ、aac(6')-I、aac(3)-Ⅱ、ant(2")-Ⅰ检出率分别为63.9%、58.3%、50.0%、38.9%和36.1%,未检出aac(3)-Ⅰ基因;β-内酰胺酶编码基因TEM、DHA、CTX-Ge和CARB的检出率分别为77.8%、69.2%、27.8%和25.0%,OXA-1、OXA-10的检出率均为16.7%,VIM-2的检出率为13.9%,IMP-1的检出率为2.8%.未检出VEB、SHV、GES、PER、GIM和SPM-2基冈,有58.3%的菌株存在外膜通道蛋白OprD2基因缺失.结论 淮北地区多重耐药铜绿假单胞菌对氨基糖苷类抗生素的耐药主要与氨基糖苷类修饰酶基因ant(3")-Ⅰ、aac(6')-Ⅱ、龃c(6')-Ⅰ有关;对β-内酰胺类抗生素耐药主要与TEM、DHA、CTX-Ge、CARB及外膜通道蛋白OprD2基因缺失有关.     

多重耐药铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因的检测及分析

目的 探讨多重耐药铜绿假单胞菌的氨基糖苷类药物的耐药机制.方法 分离出50株多重耐药铜绿假单胞菌,PCR法检测4种氨基糖苷类修饰酶(AMEs)基因,即aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ的表达情况.并用MLVA基因分型的方法对菌株进行聚类分析.结果 50株铜绿假单胞菌中,4种AMEs基因的总检出率为70%.aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ的检出率分别为60%、40%、24%、32%.MLVA基因分析聚类结果显示,没有多重耐药铜绿假单胞菌的暴发流行.结论 多重耐药铜绿假单胞菌的AMEs基因携带率较高,没有发现其爆发流行.     

呼吸内科多重耐药铜绿假单胞菌相关耐药基因检测分析

目的 了解该院呼吸内科分离多重耐药铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因和β-内酰胺酶基因携带情况.方法 用聚合酶链反应技术检测14株多重耐药铜绿假单胞菌耐药相关基因.结果 除GIM、SPM、VIM-1、VIM-2、CTX-M、aac(3′)-Ⅰ、aac(3′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ基因全部为阴性外,其余耐药基因有不同程度的阳性.结论 携带多种耐药基因是呼吸内科多重耐药铜绿假单胞菌对氨基糖苷类和β-内酰胺类抗菌剂耐药的重要机制.     

纸片药敏试验对铜绿假单胞菌β-内酰胺类耐药表型的分析

目的用纸片药敏试验分析仁济医院临床分离的铜绿假单胞菌对8-内酰胺类抗菌药物的耐药表型。方法根据Vedel建立的方法,采用8种药敏纸片的药敏试验结果对147株铜绿假单胞菌的B-内酰胺类抗菌药物耐药表型进行分析。结果147株铜绿假单胞菌有13种不同B-内酰胺类抗菌药物的耐药表型,仁济医院西部外科、风湿和肾脏等病区有3种以上的不同耐药表型存在。结论铜绿假单胞菌耐药机制复杂,Vedel所建立的表型分析方法可方便有效的分析铜绿假单胞菌临床分离株的B-内酰胺类抗菌药物耐药表型。     

50株铜绿假单胞菌的耐药性及耐药基因分析

目的分析铜绿假单胞菌的耐药性及其耐药基因类型,指导临床合理应用抗生素。方法收集广州中医药大学第一附属医院临床送检标本中分离的50株铜绿假单胞菌,用K-B纸片扩散法进行抗生素敏感性试验;筛选出20株多重耐药铜绿假单胞菌,采用聚合酶链反应检测β-内酰胺酶基因类型。结果铜绿假单胞菌对临床常用抗生素存在不同程度的耐药现象,其中最常用的亚胺培南耐药率达96%,20株多重耐药铜绿假单胞菌中检出TEM(40%)、OXA-2群(5%)、OXA-10群(5%)、CARB(30%)4种β-内酰胺酶基因,未检出质粒型AmpC酶和金属β-内酰胺酶基因。膜孔蛋白编码基因oprD2均为缺失型。结论铜绿假单胞菌的耐药现象严重,其原因可能与铜绿假单胞菌多耐药基因表达有关。     

铜绿假单胞菌碳青霉烯耐药的机制研究

目的分析159株临床分离的非重复碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌对抗菌药物的耐药性,探究体外联合药敏试验对碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌表现不同作用的机制。方法收集来自不同患者的铜绿假单胞菌159株,亚胺培南及美罗培南耐药。采用三维水解试验检测β-内酰胺酶、聚合酶链式反应(PCR)等方法检测多重耐药菌可能存在的耐药机制。结果 159株临床分离的非重复碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌,通过三维实验检测,其中15株产MBL、13株产AmpC酶。体外联合药物敏感试验,加入MC-207,110后约38%的菌株对碳青霉烯类抗生素的MIC下降4个梯度。检测试验菌株,21株携带IMP基因,18株携带ampC基因;检测OprD2通道蛋白,159株中约有48%的菌株OprD2丢失。结论北京友谊医院碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因不是IMP、AmpC水解酶;碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药的重要原因可能是外排泵及外膜孔道蛋白。     

铜绿假单胞菌质粒介导的AmpC β-内酰胺酶耐药性检测

目的 研究铜绿假单胞菌质粒介导的AmpC β-内酰胺酶的耐药性，检测产AmpC酶株的耐药表型，为临床抗生素的合理使用提供实验室依据。方法 收集108株临床分离鉴定的铜绿假单胞菌，采用Kirby-Bauer药敏纸片法和头孢西丁三维试验（cefoxitin three dimensional test）方法检测出产AmpC酶阳性菌株，检测AmpC酶阳性菌株对12种抗生素的耐药表型。结果 在所收集临床分离的108株铜绿假单胞菌中，产AmpC酶铜绿假单胞菌28株，产AmpC酶菌株对多种抗生素耐药。结论 铜绿假单胞菌对多种抗生素耐药，产AmpC酶是铜绿假单胞菌对多种抗生素产生耐药的重要机制。     

铜绿假单胞菌对氨基糖甙类抗生素耐药状况及相关耐药基因检测

目的了解铜绿假单胞菌对氨基糖甙类抗生素的耐药状况,探讨其耐药机制。方法采用微量稀释法和纸片扩散法进行抗生素敏感试验,聚合酶链反应(PCR)检测5种氨基糖甙类修饰酶耐药基因。结果临床分离的264株铜绿假单胞菌对庆大霉素、妥布霉素和阿米卡星的耐药率分别为8.6%、7.5%和2.9%。被检耐药基因的20株铜绿假单胞菌中有6株检出氨基糖甙类修饰酶耐药基因,分别是aac(3)-Ⅱ(2/20)、aac(6′)-Ⅰ、(1/20)、ant(3")-Ⅰ(1/20)和ant(2")-Ⅱ(2/20)。结论该院铜绿假单胞菌对常用氨基糖甙类抗生素的敏感性高,此类抗生素仍是临床治疗铜绿假单胞菌感染的优先选择。产生氨基糖甙类修饰酶是该院临床感染铜绿假单胞菌对氨基糖甙类抗生素的耐药机制之一。     

铜绿假单胞菌致病、耐药机理研究进展

铜绿假单胞菌是重要的条件致病菌，其致病机制复杂而多样。本文综述了国外近几年研究铜绿假单胞菌的胞外产物、外膜屏障及主动转运系统的致病、耐药机理。了解铜绿假单胞菌的致病机理对预防及治疗其引起的感染具有指导意义。     

医院感染铜绿假单胞菌耐消毒剂基因研究

目的:了解医院感染多重耐药铜绿假单胞菌的消毒剂与磺胺类抗生素耐药相关基因存在状况,探讨铜绿假单胞菌对医院常用消毒剂的耐药机制.方法;琼脂稀释法测定50株多重耐药铜绿假单胞菌及标准菌株对医院常用消毒剂的最低抑菌浓度,并用PCR法检测消毒剂耐药基因qacE△1-sul1.结果:50株多重耐药铜绿假单胞菌对医院常用消毒剂苯扎溴铵的最低抑菌浓度为8～32 pg/mL,高于标准菌株最低抑菌浓度(P<0.01);消毒剂耐药基因qacE△1-sul1阳性率100%.结论:铜绿假单胞菌对医院常用消毒剂苯扎溴铵耐药;消毒剂与磺胺类等抗生素耐药相关基因qacE△1-sul1携带率较高,细菌携带qacE△1-sul1基因是消毒剂耐药主要因素.     

75株碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌的检出及药敏分析

目的 探讨碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌的耐药性及分布状况.方法 对本院2009年1～8月送检标本中共分离到的946株病原菌,进行细菌培养和药敏试验结果分析.结果 946株病原菌中铜绿假单胞菌有171株,占18.1％,其中碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌75株,其对碳青霉烯类抗生素的耐药率为43.9％.痰标本中检出碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌43株,占57.3％.75株碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌的病区分布以重症监护病房为主,占33.3％.结论 铜绿假单胞菌感染的标本以呼吸道痰液为主,病区分布主要集中在重症监护病房和神经外科等病室.     

淮北地区多重耐药铜绿假单胞菌氨基糖苷类、β-内酰胺类抗生素耐药相关基因研究

目的调查淮北地区临床分离多重耐药铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa PA）的氨基糖苷类、β-内酰胺类耐药相关基因流行状况。方法采用K—B法和MIC法检测36株多重耐药铜绿假单胞菌对14种临床常用抗生素的耐药性：聚合酶链反应（PCR）检测氨基糖苷类修饰酶基因、β-内酰胺酶编码基因和外膜通道蛋白OprD2基因。结果36株铜绿假单胞菌对14种抗菌药物的耐药率为38．9％-100．0％;氨基糖苷类修饰酶基因ant（3″）-Ⅰ、aac（6′）Ⅱ、aac（6′）-Ⅰ、aac（3）-Ⅱ、antf（2″）-Ⅰ检出率分别为63．9％、58．3％、50．0％、38．9％和36．1％,未检出aac（3）-Ⅰ基因;β-内酰胺酶编码基因’rEM、DHA、CTX-Ge和CARB的检出率分别为77．8％、69．2％、27．8％和25．0％,OXA-1、OXA-10的检出率均为16．7％,VIM-2的检出率为13．9％。IMP—1的检出率为2．8％,未检出VEB、SHV、GES、PER、GIM和SPM-2基因．有58.3％的菌株存在外膜通道蛋白OprD2基因缺失。结论淮北地区多重耐药铜绿假单胞菌对氨基糖苷类抗生索的耐药主要与氨基糖苷类修饰酶基因ant（3″）-Ⅰ、aac（6′）Ⅱ、aac（6′）-Ⅰ有关：对β-内酰胺类抗生索耐药主要与TEM、DHA、CTX-Ge、CARB及外膜通道蛋白OprD2基因缺失有关。     

nalC、mexZ调控基因及oprD基因突变导致头孢菌素敏感型铜绿假单胞菌对碳青霉烯类中低度耐药

目的探讨本地区出现的头孢菌素敏感型铜绿假单胞菌对碳青霉烯类药物中低度耐药的原因。方法收集对头孢他啶和头孢吡肟敏感、对碳青霉烯类药物中低度耐药的铜绿假单胞菌临床分离株,十二烷基磺酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)观察铜绿假单胞菌相对分子量(Mr)为46 000的外膜蛋白Opr D的改变。实时荧光定量RT-PCR分析细菌外排系统基因mex A、mex C、mex E和mex X表达情况。PCR扩增opr D基因和外排系统表达调控基因(mex Z、mexR、nal C、nal D和nfx B)并进行测序分析。结果 30株分离菌有26株细菌外膜蛋白在Mr 46 000处有缺失或者减少;根据外膜蛋白表型选择30株细菌中的10株进行基因测序,发现碱基缺失和插入导致移码突变以及碱基的置换导致蛋白质合成的改变。外排系统基因以mex A和mex X过度表达为主,同时伴有少量mex C基因的过度表达。mex A的调控基因主要发生nal C Tyr23→His(TAC→CAC)和mexR Val 26→Glu(GTG→GAG),mex X的调控基因mex Z发生Pro136→Ala(CCA→GCA)的突变。结论该表型铜绿假单胞菌存在由opr D基因置换、缺失以及插入导致的外膜蛋白减少或缺失,nal C、mex Z调控基因突变引起外排系统mex AB-Opr M和mex XYOpr M表达增加,可能是共同引起头孢菌素敏感型铜绿假单胞菌对碳青酶烯类药物中低度耐药的重要原因。     

耐碳青霉烯铜绿假单胞菌耐药表型及基因型分析

目的 了解深圳福田人民医院铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制,为临床合理使用抗生素提供参考依据.方法 用E-test试剂条检测铜绿假单胞菌对哌拉西林、头孢他啶、亚胺培南、美罗培南、庆大霉素、妥布霉素、环丙沙星7种抗生素的最小抑菌浓度,用三维实验对产AmpC、KPC酶菌株的耐药表型进行确认,金属酶的表型确证实验则采用EDTA双纸片扩散法.用PCR方法检测AmpC、VIM-1、VIM-2、IMP-1、SPM、KPC及OprD 7个基因型,并分析表型和基因型之间的关系,质粒接合实验用来证实耐药基因的传播性.结果 29例铜绿假单胞菌均为多重耐药菌株,且对亚胺培南、美罗培南及庆大霉素耐药率最高,3种药物最小抑菌浓度分别为32、32、256 μg/mL.26株携带有AmpC基因的铜绿假单胞菌仅有5株为持续高表达菌株,18株金属酶阳性菌中有15株与VIM-2基因型检测一致,其余3株VIM-2基因型阴性,并有1株为VIM-2基因型阳性但金属酶阴性.29株中检测出8株携带OprD基因,外膜蛋白缺失率为72%(21/29),其余基因型均阴性.结论 该院铜绿假单胞菌耐碳青霉烯类抗生素的耐药机制主要为产金属酶及外膜蛋白缺失,碳青霉烯类抗生素的不合理使用将加剧该类药物的耐药性.     

铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药机制分析

目的铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药机制分析研究。方法采用K-B法检测100株耐亚胺培南铜绿假单胞菌(IRPA),并用聚合酶链式反应(PCR)法检测分析耐亚胺培南铜绿假单胞菌相关金属酶IMP、VIM基因以及外膜通道蛋白OprD2基因。结果 70株耐亚胺培南铜绿假单胞菌为多重耐药菌,对阿米卡星、头孢哌酮/舒巴坦的敏感性较高。金属酶IMP基因阳性率为24.29%(17/70),vIM型金属酶基因阳性率为7.14%(5/70),外膜蛋白通道OprD2基因阳性率为68.57%(48/70),其中外膜蛋白通道OprD2基因缺失率为58.33%。结论 IRPA耐药情况严重。外膜蛋白通道OprD2基因缺失突变是本组铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的重要机制之一。     

铜绿假单胞菌耐药机制研究进展

铜绿假单胞菌的耐药机制极为复杂 ,主要包括产β 内酰胺酶、药物作用靶位的改变、酶的修饰钝化作用、外膜通透性降低、主动泵出作用等 ,而且它对不同抗生素有着不同的耐药机制 ,其中对β 内酰胺类、喹诺酮类、氨基糖甙类抗生素耐药是国内外研究的重点。本文就近几年来有关的研究进展进行简要综述