葛根素抑制HCY所致血管内皮细胞凋亡及其相关机制的研究

目的:差异筛选葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein78,GRP78)基因,观察其在动脉粥样硬化(athemsclero-sis,AS)病灶中的表达水平,探讨葛根素抗AS的可能机制。方法:建立同型半胱氨酸(homocysteinemia,HCY)诱导的人主动脉血管内皮细胞损伤模型,与不同浓度葛根素(10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L)共同培养48h,Annexin V-FITC检测血管内皮细胞凋亡率,RT-PCR筛选差异表达的GRP78基因片段,制备地高辛标记探针,高脂饲料复制兔AS模型,主动脉组织原位杂交检测GRP78mRNA表达水平。结果:经葛根素处理48h后,各组血管内皮细胞凋亡率均低于HCY组(P0.05、P0.01),且随葛根素剂量增加而减少;筛选出全长648bp的基因片断与兔葡萄糖调节蛋白78基因高度同源,组织原位杂交显示该基因在AS病灶血管内皮细胞胞质中高表达。结论:GRP78基因参与AS病变形成;葛根素拮抗HCY诱导的血管内皮细胞凋亡,下调GRP78基因表达水平可能是其作用机制之一。     

葛根素对oxLDL诱导的血管内皮细胞凋亡的防护作用

目的:研究中药葛根素抑制氧化低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的血管内皮细胞凋亡及其介导机制。方法:应用大鼠模型,低密度脂蛋白(LDL)体内诱导血管内皮细胞凋亡,葛根素进行干预,观察其对LDL诱导血管内皮细胞凋亡的影响。原位末端标记技术(TUNEL)法检测凋亡细胞,比色法测半胱天冬蛋白酶3(Caspase-3)酶的活性。结果:LDL组与氯化钠对照组比较血管内皮细胞凋亡数显着增加,caspase-3酶活性显着增高,葛根素干预组与LDL组比较凋亡细胞数显着减少,caspase-3酶活性下降。结论:LDL可能通过激活caspase-3使大鼠血管内皮细胞凋亡;中药葛根素可通过抑制caspase-3酶活性抑制LDL诱导细胞凋亡。     

葛根素对兔血管内皮细胞凋亡及凋亡基因GRP78表达水平的影响

目的 观察葡萄糖调节蛋白(glueose regulated Protein,GRP)78在动脉粥样硬化(AS)组织中的表达,探讨葛根素防治动脉粥样硬化的可能机制.方法 葛根素诱导培养的兔血管内皮细胞凋亡,组织原位杂交观察凋亡基因GRP78在兔斑块组织中的表达水平.结果 兔斑块组织原位杂交显示该基因片段在动脉粥样硬化斑块组织中表达水平增高.结论 葡萄糖调节蛋白78在As细胞质中表达增高,可能是葛根素作用靶点之一,如上调该基因,则可促进内皮细胞凋亡,将对动脉粥样硬化治疗产生一定作用.     

葛根素对损伤内皮细胞白介素-8释放的影响

[目的]研究葛根素对动脉粥样硬化发病过程中血管内皮细胞分泌细胞因子的影响,探讨其抗动脉粥样硬化的机制。[方法]通过建立同型半胱氨酸(HCY)诱导的细胞损伤模型,运用放射免疫方法,检测不同浓度葛根素处理的人脐静脉内皮细胞系-304(ECV304)细胞培养液中白介素-8(IL-8)含量。[结果]HCY明显增加培养上清中趋化因子IL-8的含量;葛根素高剂量组则可减少因HCY诱导损伤内皮细胞趋化因子IL-8的分泌。[结论]葛根素高剂量组可通过抑制损伤的ECV304细胞分泌IL-8,从而保护损伤的血管内皮细胞,发挥抗动脉粥样硬化作用。     

川芎嗪对颈总动脉损伤大鼠血管蛋白激酶C信号通路的干预作用

目的 观察蛋白激酶C(PKC)-细胞外信号调节激酶(ERK1/2)信号通路在血管再狭窄中的表达及川芎嗪对其的影响.方法 制备大鼠血管再狭窄模型,采用川芎嗪干预,观察颈总动脉形态学变化,免疫组化法检测血管PKCζ与ERK1/2表达.结果 假手术组动脉结构正常、清晰,无明显VSMC增殖,颈总动脉损伤大鼠血管内腔面粗糙,中层VSMC大量增殖,内膜增厚,川芎嗪处理后VSMC增殖程度降低;与假手术组比较,手术组血管壁PKCζ与ERK1/2表达显著增高(P<0.01);与手术组比较,川芎嗪中、高剂量组PKCζ与ERK1/2表达显著降低(分别P<0.01,P<0.05),川芎嗪中、高剂量组PKCζ与ERK1/2表达较川芎嗪低剂量组相比亦有显著降低.结论 PKCζ-ERK1/2信号通路参与血管再狭窄的形成,川芎嗪可通过抑制该通路实现抗血管再狭窄的作用.     

葛根素对高压力培养血管内皮细胞分泌NO和ACE活性的影响

采用不同压力条件体外培养人脐静脉血管内皮细胞（ＨＵＶＥＣｓ）,观察中药葛根素（Ｐｕｅｒａｒｉｎ）对内皮细胞产生一氧化氮（ＮＯ）和血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）活性的影响。结果：与大鼠压对照组相比,中压力对照组的ＮＯ和ＡＣＥ均增加（Ｐ＜０．０５）,而高压力对照组中ＮＯ含量显著减少,ＡＣＥ活性则明显增加（Ｐ＜０．０１）;加葛根素干扰后,中压力组中葛根素Ⅱ与对照组相比,ＮＯ的量明显增加,ＡＣＥ活性明显下降,     

活血及活血解毒配伍中药含药血清对肿瘤坏死因子-α诱导人内皮细胞与中性粒细胞黏附及相关通路蛋白表达的影响

目的探讨活血及活血解毒配伍中药含药血清对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)与外周血中性粒细胞(PMN)黏附、炎症反应及相关通路蛋白的影响。方法采用随机数字表法将32只大鼠分为空白对照组、芎芍胶囊组、黄连胶囊组及芎芍胶囊加黄连胶囊组,每组8只,各给药组按临床等效剂量灌胃,采血制备含药血清。空白对照组予等体积蒸馏水作对照。常规方法培养HUVECs,以TNF-α(100 ng/m L)为刺激物,制备HUVECs细胞损伤模型。细胞分为5组:空白对照组、模型组、活血组、解毒组及活血解毒组。空白对照组及模型组给予正常大鼠血清,其他3组以10%含药血清干预24 h后收集细胞,应用孟加拉玫瑰红染色法观察HUVECs与PMN发生病理性黏附情况;酶联免疫法检测细胞上清液相关炎症因子E选择素(E-selectin)、细胞黏附分子-1(ICAM-1)及白细胞介素-1β(IL-1β)含量;Western blot法检测丝裂素活化蛋白激酶p38(p38MAPK)及细胞外信号调节激酶1/2(ERK 1/2)蛋白磷酸化水平。结果与空白对照组比较,模型组细胞出现明显的氧化损伤,PMN黏附数量明显增加,IL-1β、E-selectin及ICAM-1水平升高,且HUVEC上清p-p38MAPK、p-ERK 1/2蛋白表达增加(均P0.01)。与模型组比较,活血组、解毒组及活血解毒组HUVECs与PMN黏附数量减少(P0.05),细胞培养上清液IL-1β、E-selectin及ICAM-1水平降低(P0.05,P0.01),且内皮细胞p-p38MAPK、p-ERK 1/2蛋白表达降低(P0.01)。结论活血及活血解毒含药血清能减轻TNF-α诱导的HUVECs损伤,抑制HUVECs-PMN黏附和黏附因子释放。其机制可能与调节内皮细胞MAPK通路p38MAPK、ERK 1/2蛋白磷酸化水平有关。     

丹参酮对大鼠血管平滑肌细胞增殖及pp-ERK1/2表达的影响

 目的　探讨丹参的脂溶性有效成分(总丹参酮)对血管平滑肌细胞增殖的影响及其可能的细胞内信号传导机制。方法　分离大鼠胸主动脉,贴壁法培养平滑肌细胞,无血清培养基培养静止后,以5%FBS刺激VSMC增殖,分别加入不同浓度的总丹参酮,以MTT及细胞总蛋白测定法观察药物对VSMC增殖的影响;用Westernblot方法检测pp-Erk1/2蛋白表达量。结果　丹参酮对VSMC增殖具有抑制作用,并具有浓度依赖性;2,10,50μg·mL^-1丹参酮可浓度依赖性抑制pp-Erk1/2表达,抑制率分别为(17.7±3.6)%,(26.2±4.1)%,(72. 7±3.8)%,与对照组相比P<0.05。结论　丹参的脂溶性有效成分丹参酮可能通过抑制ERK途径抑制血管平滑肌细胞增殖。     

川芎嗪对血管平滑肌细胞增殖及蛋白激酶C通路的影响

目的 观察川芎嗪对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中蛋白激酶C(PKCζ)-细胞外信号调节激酶(ERK1/2)通路的影响.方法 建立AngII诱导的VSMC增殖模型,测定细胞增殖活度,免疫细胞化学法检测PKCζ与ERK1/2表达.结果 与对照组比较,AngⅡ组细胞增殖活度显著增高,PKCζ与ERK1/2表达显著高于对照组(均P<0.01).中、高剂量川芎嗪组的细胞增殖活度明显降低(P<0.05或P<0.01),PKCζ与ERK1/2表达亦明显低于AngⅡ组(P<0.01),与低剂量川芎嗪组相比亦有显著差异,说明川芎嗪的抑制作用具有量-效关系.结论 川芎嗪对AngⅡ诱导的VSMC增殖有显著抑制作用,其机制与抑制PKCζ-ERK1/2通路有关.     

血管紧张素Ⅱ对肾小球血管内皮细胞损伤机制的研究

整理和分析血管紧张素Ⅱ对肾小球血管内皮细胞损伤机制的相关文献。以血管紧张素Ⅱ,肾小球血管内皮细胞、内皮细胞损伤等为主题词检索近10年来国内外有关肾小球内皮细胞损伤机制的研究文献,并进行分析。结果发现血管紧张素Ⅱ通过激活炎症反应、氧化应激、诱导细胞凋亡、损伤肾小球血管内皮结构、内分泌功能以及改变肾脏血流动力等途径损伤肾小球血管内皮细胞。本研究对于进一步明确血管紧张素Ⅱ损伤肾小球血管内皮细胞的机制,寻找有效的防治方法具有重要意义。     

芪附汤调节ERK1/2信号通路改善UUO阳虚证模型肾间质纤维化的作用和机制

目的:探讨芪附汤改善阳虚证模型鼠肾间质纤维化(RIF)的作用和机制。方法:将大鼠随机分为假手术组(A组)、模型组(B组)、芪附汤组(C组)、依那普利组(D组)。通过腺嘌呤灌胃联合单侧输尿管接扎术(UUO)的方法而建立RIF模型。造模成功后,C,D组大鼠分别经灌胃给予芪附汤水煎液或依那普利悬浊液;其余2组大鼠经灌胃给予蒸馏水,共干预3周。各在药物和蒸馏水干预前和干预后第1,2,3周末,分别称量大鼠体重,并检测24 h尿蛋白排泄量(Upro)、尿β2-微球蛋白(Uβ2-MG)、尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(NAG)酶。药物干预第3周末,处死全部大鼠,抽取血液,摘除左肾,称重,并留取相应标本,观察肾脏外观和肾小管/间质形态;检测血清环磷酸腺苷(c AMP)、环磷酸鸟苷(c GMP)、肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)和尿酸(UA);检测肾组织中上皮型黏钙蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)、细胞外调节激酶(ERK1/2)和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白相对表达量。结果:芪附汤可以改善模型鼠血清中降低的c AMP和c AMP/c GMP;减少模型鼠升高的Uβ2-MG、尿NAG酶,改善肾间质细胞外基质及其胶原沉积,上调肾组织E-cadherin蛋白表达,下调肾组织α-SMA,TGF-β1,CTGF,p-ERK1/2蛋白表达;但是,对Scr,BUN,UA没有影响。芪附汤改善RIF的作用优于依那普利。结论:芪附汤可以改善模型鼠阳虚证指标以及尿β2-MG、尿NAG酶排泄,它可能是通过上调肾组织E-cadherin蛋白表达,下调肾组织α-SMA,TGF-β1,CTGF以及ERK1/2信号通路中关键信号分子——p-ERK1/2蛋白表达,改善肾小管EMT,从而减轻RIF。     

肾康注射液调控ERK1/2/MMPs信号通路促进肾衰竭模型鼠细胞外基质降解的作用和机制

探讨肾康注射液(Shenkang injection,SKI)在体内调控细胞外信号调节激酶(extracellular-signal regulated protein kinase,ERK)1/2/基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)信号通路而改善肾衰竭模型鼠细胞外基质(extracellular matrix,ECM)降解的作用和机制。将20只大鼠随机分为假手术组、模型组、SKI组、马来酸依那普利(enalapril maleate,EM)组。采用腺嘌呤灌胃联合单侧输尿管结扎术(unilateral ureteral obstruction,UUO)建立肾衰竭模型。造模后,SKI组和EM组大鼠分别经腹腔注射或灌胃给予SKI或EM悬浊液,其余2组大鼠经灌胃给予蒸馏水,共3周;其间,检测各组大鼠24 h尿蛋白排泄量(urinary protein excretion,Upro)和尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(urinary N-acety1-β-D-glucosaminidase,UNAG);给药3周后,处死全部大鼠,抽取血液,摘除双肾,观察肾组织形态特征,检测血清生化指标和肾组织IV型胶原(collagen type IV,CIV),MMP-2,MMP-9,金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitors of metalloproteinase,TIMP)-1,ERK1/2以及磷酸化ERK1/2(phosphorylated-ERK1/2,p-ERK1/2)蛋白表达量。结果表明,经SKI干预后,模型鼠血清肌酐(serum creatinine,Scr),血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN),尿酸(uric acid,UA),白蛋白(albumin,Alb),Upro,UNAG以及肾脏组织形态均得到不同程度的改善,这些作用与EM相仿;SKI还可以调节模型鼠肾组织MMP-2,MMP-9,TIMP-1蛋白表达,下调p-ERK1/2蛋白表达,这些作用不同于EM。总之,SKI在体内可能是通过调控肾组织ERK1/2信号通路活性,干预MMPs/TIMP-1表达,促进ECM降解,延缓肾衰竭进展。     

丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶信号通路在穿心莲内酯治疗心肌缺血/再灌注损伤大鼠中的分子机制

目的:从丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(MAPK/ERK1/2)信号通路研究穿心莲内酯(AG)对心肌缺血/再灌注损伤(MI/RI)大鼠的分子机制,为AG能够安全地用于MI/RI的预防提供参考.方法:雄性SPF级SD大鼠60只,购入后先全部予适应性喂养2周,后将其随机分为假手术组、模型组、银杏内酯B干预组,AG治...     

Pretreatment with rosavin attenuates PM2.5-induced lung injury in rats through antiferroptosis via PI3K/Akt/Nrf2 signaling pathway

Inflammation and oxidative stress caused by fine particulate matter (PM2.5) increase the incidence and mortality rates of respiratory disorders. Rosavin is the main chemical component of Rhodiola plants, which exerts anti-oxidative and antiinflammatory effects. In this research, the potential therapeutic effect of rosavin was investigated by the PM2.5-induced lung injury rat model. Rats were instilled with PM2.5 (7.5 mg/kg) suspension intratracheally, while rosavin (50 mg/kg, 100 mg/kg) was delivered by intraperitoneal injection before the PM2.5 injection. It was observed that rosavin could prevent lung injury caused by PM2.5. PM2.5 showed obvious ferroptosis-related ultrastructural alterations, which were significantly corrected by rosavin. The pretreatment with rosavin downregulated the levels of tissue iron, malondialdehyde, and 4-hydroxynonenal, and increased the levels of glutathione. The expression of nuclear factor E2-related factor 2 (Nrf2) was upregulated by rosavin, together with other ferroptosis-related proteins. RSL3, a specific ferroptosis agonist, reversed the beneficial impact of rosavin. The network pharmacology approach predicted the activation of rosavin on the phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/protein kinase B (Akt) signaling pathway. LY294002, a potent PI3K inhibitor, decreased the upregulation of Nrf2 induced by rosavin. In conclusion, rosavin prevented lung injury induced by PM2.5 stimulation and suppressed ferroptosis via upregulating PI3K/Akt/Nrf2 signaling pathway.     

四君子汤加减对脑缺血/再灌注损伤大鼠脑组织ERK1/2，Akt，Bax表达的影响

目的:观察四君子汤加减对脑缺血/再灌注损伤大鼠细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2),蛋白激酶B(Akt),细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)的影响,探讨其保护神经细胞可能作用机制。方法:将55只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、依达拉奉组、四君子汤加减低、中、高剂量组(3.69,7.38,14.76 g·kg-1)。采用线栓法制备大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,治疗7 d后处死,取大鼠缺血侧脑组织,运用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2),磷酸化Akt(p-Akt),Bax蛋白含量。应用实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)测定脑缺血再灌注后脑组织内ERK1/2,Akt,Bax mRNA的表达变化。结果:与假手术组比较,模型组p-ERK1/2,p-Akt蛋白及mRNA表达显著下调(P0.01);Bax蛋白及mRNA表达显著上调(P0.01);与模型组比较,四君子汤加减低、中、高剂量组p-ERK1/2,p-Akt蛋白及mRNA表达明显上调,Bax蛋白及mRNA表达明显下调,差异具有统计学意义(P0.01)。结论:四君子汤加减可能通过上调p-ERK1/2,p-Akt,下调Bax蛋白表达发挥脑保护作用。     

莱菔硫烷抑制HepG-2细胞MMP-9的活性以及ERK1/2磷酸化

目的:探讨莱菔硫烷(su lforaphane,SFN)对肝癌细胞系HepG-2细胞基质金属蛋白酶(m atrix m etallo-prote inase,MMP)-9的活性及对细胞外信号调节激酶(extracelluar signal-regu lated k inase,ERK)1/2磷酸化的影响。方法:体外培养HepG-2细胞,用SFN预处理后,四氮唑盐酶还原法检测细胞的增殖情况,以及LDH的漏出率;明胶酶谱实验和实时荧光定量PCR检测MMP-9的酶活性和mRNA表达水平;W estern b lot检测ERK1/2的磷酸化情况;最后采用定量实时PCR法检测SFN对HepG-2细胞表达Raf激酶抑制蛋白(Raf k inase inh ib itorprote in,RK IP),Spred-1和Spred-2 mRNA的影响。结果:0,20,40,50μM SFN处理24~72h后,均能抑制HepG-2的生长,LHD漏出率实验显示SFN对细胞无明显的毒性;SFN能明显抑制MMP-9的活性和mRNA的表达水平,同时能抑制ERK1/2的磷酸化。另外,SFN能明显提高RK IP、Spred-1和Spred-2 mRNA的表达水平。结论:SFN对HepG-2细胞生长以及MMP-9的活性具有抑制作用,它可能通过抑制ERK1/2磷酸化,诱导RK IP,Spred-1和Spred-2表达而发挥抗肿瘤的作用。     

基于NADPH/ROS/ERK信号通路探讨肾康降酸颗粒对高尿酸血症大鼠肾小管上皮细胞损伤的作用机制

目的 观察肾康降酸颗粒对高尿酸血症大鼠肾小管上皮细胞损伤及NADPH/ROS/ERK信号通路的影响.方法 将40只雄性SD大鼠随机分成空白组、模型组、别嘌呤醇组及肾康降酸颗粒组,每组10只.除空白组外,其余组均给予腺嘌呤联合酵母粉连续灌胃14 d制备高尿酸血症模型.造模结束后第2天起,别嘌呤醇组给予27 mg/(kg·...     

The effects of BuYang HuanWu Decoction and its effective components on proliferation-related factors and ERK1/2 signal transduction pathway in cultured vascular smooth muscle cells

Buyang Huanwu Decoction (BYHWD) was a commonly used traditional Chinese medicine for the treatment and prevention of ischemic cardiovascular and cerebral disease. Previous studies had shown that BYHWD alkaloids and glycosides could inhibit intimal hyperplasia and vascular smooth muscle cell (VSMC) proliferation after injury caused by balloon catheter. The present study aims to explore the mechanisms by which cell cycle was affected by BYHWD and its components. Primary rat VSMC was treated with platelet-derived growth factor (PDGF) and cell cycle phase and extracellular-signal regulated protein kinase (ERK) transduction pathway factors were measured. PDGF-treated cells were associated with a significant increase in the number of cells in the G₂/M phase and S phase, and in the expression of P-ERK1/2, proliferating cell nuclear antigen (PCNA), c-fos, cyclinD₁ and cyclin-dependent kinase-4, as well as a decrease in the number of cells in the G₀/G₁ phase, and in the expression of cyclin-dependent kinase inhibitor P21 protein and mitogen-activated protein kinase phosphatase-1 (MKP-1). Treatment with plasma of rats fed seven doses of BYHWD crude extract (22.2 g/kg), BYHWD alkaloids (1.66 g/kg), BYHWD glycosides (14.2 g/kg) or the negative control atorvastatin (20 mg/kg) inhibited these changes. All drug-containing plasma had similar activity to the mitogen activated protein kinase (MAPK)/ERK antagonist PD098059 which inhibited PDGF-induced expression of P-ERK1/2 and enhanced MKP-1. These suggest that BYHWD and its components may prevent VSMC proliferation by interfering with the ERK transduction pathway.     

雷公藤内酯醇在血管内皮细胞增殖移行中对u-PA、PAI-1蛋白表达的影响

目的研究雷公藤内酯醇对人脐静脉血管内皮细胞体外培养增殖过程中纤溶酶原激活物系统蛋白表达的抑制作用。方法体外培养传三代人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HU-VECs),在细胞增殖的同时分别加入不同浓度的雷公藤内酯醇,以免疫组织化学方法检测内皮细胞u-PA、PAI-1蛋白表达量。结果免疫组织化学染色表明雷公藤内酯醇明显抑制内皮细胞分泌U-PA、PAI-1的作用,治疗组均明显低于对照组(P<0.01);并呈剂量依赖性,随其浓度增加抑制作用加强。结论雷公藤内酯醇可明显抑制血管内皮细胞u-PA、PAI-1蛋白表达,从而有效抑制血管内皮细胞的增殖移行。     

鸢尾苷元对氧化损伤血管内皮细胞MCP-1和ICAM-1表达的影响

目的:观察鸢尾苷元对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)致氧化损伤血管内皮细胞(VEC)的保护作用及对MCP-1和ICAM-1mRNA表达的影响,探讨其抗动脉粥样硬化的作用机制。方法:采用体外培养大鼠VEC,加入ox-LDL建立VEC氧化损伤模型,加入不同剂量的鸢尾苷元,通过MTT比色法观察细胞活力,并采用RT-PCR方法检测VECMCP-1和ICAM-1mRNA的表达情况。结果:鸢尾苷元对ox-LDL所致的VEC损伤具有明显的保护作用,并显著抑制ox-LDL诱导VECMCP-1和ICAM-1mRNA的过度表达。结论:鸢尾苷元抗VEC氧化损伤和抑制MCP-1,ICAM-1的过度表达是其抗动脉粥样硬化的重要作用机制。