小檗碱对早期糖尿病肾病大鼠肾组织TGF-β1/SnoN表达失衡及其Smad信号通路的调控作用

目的:研究小檗碱(BBR)对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织TGF-β1/SnoN表达失衡及其Smad信号通路的调控作用,探讨BBR对DN大鼠早期肾脏损伤的作用及其可能机制.方法:以链脲佐菌素(STZ)复制早期DN大鼠模型,动物分为正常对照组、模型组、BBR低、中、高剂量(50,100,200 mg·kg-1)治疗组及阳性对照(依那普利1 mg· kg-1)治疗组,灌胃给药,每日1次,5周后检测大鼠空腹血糖(FBG)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、24 h尿蛋白(24 h Upro)及24h尿微量白蛋白(24 hUmAlb);光镜观察肾组织形态学的改变;免疫组织化学检测肾组织TGF-β1,SnoN,Smad2/3与Smad7蛋白表达;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肾组织TGF-β1 mRNA表达.结果:与模型组比较,BBR各治疗组大鼠FBG,BUN,Scr,24 h Upro及24 hUmAlb水平显著降低;肾组织形态学异常改善;TGF-β1蛋白及mRNA和Smad2/3蛋白表达显著减少,SnoN和Smad7蛋白表达显著增加.结论:BBR可通过Smad信号通路来维持DN肾组织TGF-β1/SnoN表达的动态平衡,从而改善早期DN大鼠肾功能病变,延缓DN的发生与发展.     

基于TGF-β/Smads信号通路研究益肾降浊方对慢性肾衰竭大鼠肾纤维化的影响

目的通过观察益肾降浊方对慢性肾衰竭(CRF)大鼠TGF-β/Smads信号通路的影响,探究本方治疗CRF的疗效机理。方法将SD雄性大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、尿毒清组、益肾降浊方组。采用5/6肾切除方法制造CRF大鼠模型,假手术组12只行双肾被膜剥离。造模后4周开始给药干预,给药8周后取血清及残余肾组织,检测血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN);光镜观察残余肾组织病理改变;用免疫组化法检测肾组织中Smad3、Smad7、TGF-β1的表达。结果与正常组相比,假手术组TGF-β1、Smad3、Smad7的表达无明显差异(P0.05),模型组、尿毒清组、益肾降浊方组TGF-β1、Smad3的表达明显升高,Smad7的表达明显降低(P0.05);与模型组相比,尿毒清组、益肾降浊方组TGF-β1、Smad3的表达明显降低,Smad7的表达明显升高(P0.05);与尿毒清组相比,益肾降浊方组TGF-β1、Smad3的表达明显降低,Smad7的表达明显升高(P0.05);光镜示经益肾降浊方治疗后的肾组织纤维化明显减轻。结论益肾降浊方能够降低CRF大鼠血清Scr和BUN水平,延缓肾间质纤维化进展,其作用机制可能与抑制TGF-β1、Smad3的表达,提高Smad7的表达有关。     

三七总皂甙通过Smads 信号通路减缓慢性肾衰竭大鼠肾间质纤维化进程的作用研究

目的探讨三七总皂甙（panax notoginseng saponins,PNS）通过Smads 信号通路减缓慢性肾衰竭（chronic renal failure,CRF）大鼠肾间质纤维化进程的作用。方法60 只大鼠随机留取10 只设为假手术组,其余50 只 采用5/6 肾切除术复制CRF 模型,将建模成功的44 只大鼠随机分为慢性肾衰竭组、尿毒清组、三七总皂甙低 剂量组（LPNS 组）、三七总皂甙高剂量组（HPNS 组）,每组11 只。尿毒清组灌胃2.2 g·kg-1 的尿毒清溶液,三 七总皂甙低剂量组和三七总皂甙高剂量组灌胃25、100 mg·kg-1 的三七总皂甙溶液,假手术组和慢性肾衰竭组 灌胃等量生理盐水溶液,连续4 周。干预结束后,检测各组肾功能指标：血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、24 h 尿蛋白,HE 和Masson 染色观察残余肾组织病理学改变及肾组织纤维化面积占比,RT-qPCR 和Western Blot 法检测残余肾组织中转化生长因子β1（TGF-β1）、Smad2/3、Smad6 mRNA 表达量及TGF-β1、Smad2/3、 p-Smad2/3、Smad6 蛋白表达量。结果与慢性肾衰竭组比较,尿毒清组、三七总皂甙低剂量组、三七总皂甙高剂 量组血肌酐、尿素氮、24 h 尿蛋白水平均降低,三七总皂甙高剂量组低于三七总皂甙低剂量组和尿毒清组（均 P＜0.05）。HE 染色显示,慢性肾衰竭组可见肾小球、肾小管明显病变,肾间质纤维化增生,大量炎性细胞浸 润;尿毒清组、三七总皂甙低剂量组、三七总皂甙高剂量组上述病变减轻,其中三七总皂甙高剂量组病变最 轻。与慢性肾衰竭组比较,尿毒清组、三七总皂甙低剂量组、三七总皂甙高剂量组肾组织纤维化面积占比、 TGF-β1 mRNA 相对表达量及TGF-β1、p-Smad2/3 蛋白相对表达量均降低,三七总皂甙高剂量组低于三七总 皂甙低剂量组和尿毒清组（均P＜0.05）。与慢性肾衰竭组比较,尿毒清组、三七总皂甙低剂量组、三七总皂甙 高剂量组Smad6 mRNA 和蛋白相对表达量升高,三七总皂甙高剂量组高于三七总皂甙低剂量组和尿毒清组（均 P＜0.05）。结论三七总皂甙可有效减缓慢性肾衰竭大鼠肾间质纤维化进程,可能通过抑制Smad2/3 磷酸化水 平,激活Smad6 发挥调控作用。     

蛇床子素改善慢性肾衰竭大鼠肾间质纤维化的机制研究

目的:研究蛇床子素(Osthole)对慢性肾功能衰竭(chronic renal failure,CRF)大鼠肾间质纤维化的抑制作用,并探讨其作用机制。方法:40只SPF级SD大鼠随机分为对照组、模型组和蛇床子素低、高剂量组,每组10只。利用腺嘌呤溶液连续灌胃21 d建立大鼠CRF模型,对照组给予等量的生理盐水。蛇床子素低、高剂量组分别腹腔注射给予10、20 mg/kg蛇床子素;连续治疗28 d。检测大鼠血清中肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)及尿酸(UA)的水平变化;HE染色检测肾组织病理变化;ELISA法检测大鼠血清中基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)、组织金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1、TIMP-2)水平;试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量;Western Blot法检测肾组织中TGF-β、Smad2/3、p-Smad2/3、Smad4及Smad7蛋白的表达。结果:蛇床子素低、高剂量组大鼠血清Scr、BUN及UA含量明显低于模型组(P0.05或P0.01),并能显著改善大鼠肾组织损伤;蛇床子素能够降低TIMP-1、TIMP-2水平,增加MMP-2、MMP-9的水平(P0.05或P0.01);并能够降低肾脏组织中MDA含量,增加SOD活力(P0.05或P0.01);蛇床子素能显著降低TGF-β、Smad2/3、p-Smad2/3及Smad4蛋白表达,增加Smad7蛋白表达(P0.05或P0.01)。结论:蛇床子素对慢性肾衰竭大鼠的肾脏保护作用可能与调控TGF-β/Smad信号通路,抑制肾间质纤维化有关。     

TGF-β1/Smad信号通路在腺嘌呤导致的肾纤维化大鼠肾脏组织中的作用与意义

目的:探讨肾组织中TGF-β1/Smad信号通路在腺嘌呤导致的肾纤维化模型损伤过程中的变化与意义。方法:将23只SD大鼠随机分为正常组10只和模型组13只,采用腺嘌呤制备肾纤维化大鼠模型;采用RT-PCR检测两组大鼠TGF-β1mRNA的表达,ELISA法检测Smad2、Smad3、Smad7蛋白表达,免疫组化法检测a-SMA蛋白表达。结果:模型组较正常组TGF-β1mRNA表达增强,Smad2、Smad3水平升高,Smad7水平下降,差异均具有统计学意义(P0.01)。结论:腺嘌呤导致的大鼠肾纤维化与TGF-β1/Smad信号通路密切相关,通过调节TGF-β1/Smad信号通路,对抑制肾纤维化的发生发展有重大意义。     

升陷乌梅汤对激素干预哮喘大鼠TGF-β1/Smad信号通路及气道重塑的影响

目的观察升陷乌梅汤对激素干预哮喘大鼠TGF-β1/Smad信号通路和气道重塑的影响。方法将50只健康雄性SD大鼠随机分为正常组、哮喘组、激素组、布地奈德组、升陷乌梅汤组。除正常组外,其余各组采用卵蛋白致敏、雾化激发建立哮喘大鼠模型,并予各给药组大鼠腹腔注射糖皮质激素干预,在此基础上予升陷乌梅汤组大鼠灌胃、布地奈德组大鼠雾化吸入。观察各组大鼠肺功能及支气管病理改变,并采用Western blot及RT-qPCR法检测TGF-β1/Smad信号通路相关因子蛋白及mRNA表达的变化。结果①与正常组比较,哮喘组大鼠肺组织中胶原蛋白表达、WAi/Pbm、WAm/Pbm及WAe/Pbm升高(P0.05),信号通路因子TGF-β1、Smad2、Smad3的蛋白和mRNA表达及p-Smad2、p-Smad3的蛋白表达均升高(P0.05),而肺功能中FEV0.1、FEV0.1/FVC、FEF50%及FEF75%均降低(P0.05),肺组织中Ai/Pbm以及通路因子Smad6、Smad7的蛋白和mRNA表达均降低(P0.05)。②与哮喘组比较,各给药组均可减少肺组织中WAi/Pbm、WAm/Pbm和WAe/Pbm(P0.05),降低TGF-β1、Smad2、Smad3的mRNA表达及TGF-β1、Smad2、p-Smad2、p-Smad3的蛋白表达(P0.05),并升高FEV0.1、FEV0.1/FVC、FEF50%和FEF75%(P0.05),增加Smad6、Smad7的mRNA表达(P0.05);且升陷乌梅汤组较激素组可进一步减少WAi/Pbm、WAm/Pbm、WAe/Pbm,降低TGF-β1、Smad2、Smad3的蛋白和mRNA表达及p-Smad2、p-Smad3的蛋白表达(P0.05),并升高FEV0.1、FEV0.1/FVC、FEF75%,增加Smad6的蛋白和mRNA表达以及Smad7的mRNA表达(P0.05)。结论升陷乌梅汤可在激素干预基础上进一步阻止TGF-β1/Smad信号通路的异常激活,抑制气道重塑发展,延缓肺功能下降。     

半夏泻心汤人含药血清对HP感染GES-1细胞TGF-β/Smad信号通路的影响

目的:探讨半夏泻心汤人含药血清对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)感染人胃黏膜上皮GES-1细胞转化生长因子-β(TGF-β)/信号转导蛋白(Smad)信号通路的影响,以揭示该方治疗消化性溃疡可能的作用机制。方法:GES-1细胞分为空白组,HP感染模型组,健康人血清组,雷贝拉唑血清组,用药前血清组,10%半夏泻心汤血清组,20%半夏泻心汤血清组。除空白组外,其余各组均接种HP造成幽门螺杆菌感染模型,采用雷贝拉唑、半夏泻心汤含药血清及用药前、健康人血清进行干预,24 h后收集细胞及其上清液,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测Smad2/3,Smad7,TGF-β1及磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3),磷酸化Smad7(p-Smad7)蛋白的表达。结果:与空白组比较,HP可明显抑制GES-1细胞的增殖,降低GES-1细胞内Smad2/3,TGF-β1及p-Smad2/3蛋白表达,增加Smad7及p-Smad7蛋白表达(P0.05,P0.01);与HP感染模型组比较,雷贝拉唑血清组及10%,20%半夏泻心汤血清组可明显降低HP对GES-1细胞增殖的抑制,增加GES-1细胞内Smad2/3,TGF-β1,p-Smad2/3蛋白表达,并明显降低Smad7,p-Smad7蛋白表达(P0.05,P0.01);与用药前血清组比较,加入雷贝拉唑、半夏泻心汤含药血清后均可降低HP对GES-1细胞增殖的抑制,其中雷贝拉唑血清组及20%半夏泻心汤血清组可增加GES-1细胞内Smad2/3,TGF-β1,p-Smad2/3蛋白表达,降低Smad7,p-Smad7蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:半夏泻心汤能够减轻HP诱导GES-1细胞的损伤,促进GES-1细胞增殖,治疗HP相关性消化性溃疡,提高溃疡愈合质量,其机制可能与其调控TGF-β/Smad信号通路有关。     

“调肝肾,祛痰瘀”复方血压峰值前给药对自发性高血压大鼠心肾组织TGF-β1-Smads信号通路的影响

目的:探讨"调肝肾,祛痰瘀"复方血压峰值前给药对自发性高血压大鼠(SHR)心肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)-Smads信号通路的影响。方法:将30只12周龄的自发性高血压大鼠,随机分为复方组(4 g·kg-1),氯沙坦组(30 mg·kg-1)和模型组,另设SD大鼠10只为正常组,12周后,采用RT-q PCR检测心肾组织Smad2,Smad3和Smad7 m RNA表达,免疫组化法检测肾组织Smad2,Smad3和Smad7蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组肾脏Smad2,Smad3和心脏TGF-β1,Smad2,Smad3的m RNA表达明显升高,心脏和肾脏Smad7的m RNA表达明显降低(P0.01),肾组织Smad2和Smad3的蛋白表达均明显升高,Smad7蛋白表达明显降低(P0.01);与模型组比较,复方组能够下调肾脏Smad2,Smad3和心脏TGF-β1,Smad3的m RNA表达,上调肾脏和心脏Smad7的m RNA表达;复方组转化生长因子β1(TGF-β1)m RNA表达的下调程度比氯沙坦组明显(P0.05);同时复方组的Smad2和Smad3的蛋白表达均明显下调(P0.01),Smad7蛋白表达均明显上调(P0.01),其中,复方组的Smad7蛋白表达与正常组无统计学差异。结论:调肝肾祛痰复方血压峰值前给药能够明显减少ECM聚积而减少高血压心肾纤维化。其作用机制应是在中医阴阳升降机制协同下,通过下调心肾的Smad2,Smad3和上调Smad7的表达以阻断TGF-β1-Smads信号转导通路所致。     

基于TGF-β1/Smad 通路探讨红花黄色素对腺嘌呤致肾间质纤维化大鼠的保护作用

目的观察红花黄色素对腺嘌呤致肾间质纤维化大鼠的保护作用及其对转化生长因子β1（TGF-β1）/ Smad 信号通路的影响。方法采用腺嘌呤（250 mg·kg-1）灌胃建立肾纤维化大鼠模型。将SD 大鼠随机分为对照 组、模型组、氯沙坦组（9 mg·kg-1）及红花黄色素低、高剂量组（9、18 mg·kg-1）,每组10 只,灌胃给药,每天 1 次,连续30 d。检测大鼠血清肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）含量;采用HE 和Masson 染色法观察大鼠肾脏组织病 理学变化;采用RT-qPCR 法检测大鼠肾组织中TGF-β1、Smad4 及Smad7 mRNA 表达情况;采用免疫组化法 及Western Blot 法检测大鼠肾组织中TGF-β1、Smad4 及Smad7 蛋白表达情况。结果与对照组比较,模型组 大鼠血清Cr、BUN 含量显著升高（P＜0.01）;大鼠肾脏组织中TGF-β1 mRNA 及蛋白表达水平明显升高（P＜ 0.05）,Smad7 mRNA 及蛋白表达水平明显下降（P＜0.05）。与模型组比较,各给药组大鼠血清Cr、BUN 水平明 显降低（P＜0.05,P＜0.01）;各给药组大鼠肾脏组织中TGF-β1 mRNA 及蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）, Smad7 mRNA 及蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）。各组大鼠肾脏组织中Smad4 mRNA 及蛋白表达水平无明显 变化（P > 0.05）。结论红花黄色素对腺嘌呤致肾间质纤维化大鼠具有保护作用,其机制可能与抑制TGF-β1/ Smad 信号通路有关。     

加味六君子汤对腹膜纤维化大鼠TGF-β/Smad信号通路的影响

目的:探讨加味六君子汤对腹膜纤维化大鼠TGF-β/Smad信号通路的影响。方法:用5/6肾切除联合腹腔注射4.25%腹透液+脂多糖(LPS)建立腹膜纤维化大鼠模型,实验分空白组(A组)、模型组(B组)、西药组(C组)、中药高剂量组(D组)、中药低剂量组(E组),Western印迹法检测TGF-β1、p-Smad2/3、Smad7和α-SMA、E-cadherin蛋白的表达:RT-PCR法测定TGF-β1、α-SMA、E-cadherin m RNA水平。结果:与A组相比,B组、C组、D组、E组TGF-β1、p-Smad2/3、α-SMA蛋白和α-SMAm RNA表达水平升高,有显著性差异(P0.05);与B组相比,C组、D组、E组TGF-β1、p-Smad2/3、α-SMA蛋白和α-SMAm RNA表达水平降低,Smad7和E-cadherin蛋白和E-cadherin m RNA表达水平增高,有显著性差异(P0.05)。结论:加味六君子汤可能通过TGF-β/Smad信号通路,抑制腹膜间皮细胞EMT进程,进而起到一定拮抗腹膜纤维化作用。     

川芎嗪对肾间质纤维化模型大鼠Smad7和SnoN蛋白表达的影响

目的:探讨川芎嗪(tetramothylpyrazine,TMP)对单侧输尿管梗阻(unilatcral ureteral obstruction,UUO)所致大鼠肾间质纤维化的作用及机制.方法:雄性SD大鼠18只,随机分为3组:假手术组、模型组以及TMP组,每组6只.采用单侧输尿管结扎建立大鼠肾间质纤维化模型.川芎嗪(40mg·kg~(-1)·d~(-1))治疗3周后取梗阻侧肾组织,分别进行HE和Masson染色,观察肾组织病理改变和胶原沉积的变化;采用放射免疫分析法检测Ⅲ型前胶原含量;应用酶联免疫吸附(ELIsA)法检测肾组织中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)水平;采用Western blotting检测肾组织中Smad7和Smad转录共抑制因子SnoN蛋白表达水平的变化.结果:与假手术组比较,镜下可见模型组大鼠肾小管萎缩,管腔扩张,肾间质中大量胶原纤维沉积,肾间质明显增宽;Ⅲ型前胶原、TGF-β1含量显著增加;Smad7,SnoN蛋白表达水平显著下调.TMP组与模型组比较,肾组织病理改变明显改善,Ⅲ型前胶原、TGF-β1含量明显降低,Smad7,SnoN蛋白表达水平明显上调.结论:川芎嗪具有显著抗肾间质纤维化的作用,其机制与降低肾组织中促纤维化细胞因子TGF-β1含量,同时恢复Smad逆向调控因子Smad7和SnoN蛋白表达水平有关.     

复方丹参片通过调控TGF-β1/Smad 通路及基质金属蛋白酶水平对肾纤维化大鼠的作用机制研究

目的基于TGF-β1/Smad 通路和基质金属蛋白酶水平探讨复方丹参片对肾纤维化大鼠的保护作用及相 关机制。方法采用灌胃腺嘌呤（250 mg·kg-1）的方式制备肾纤维化大鼠模型。将大鼠随机分为正常组、模型 组、氯沙坦组（0.09 g·kg-1）及复方丹参低（0.3 g·kg-1）、高（0.6 g·kg-1）剂量组。各组大鼠给予相应剂量灌胃给 药,每日1 次,连续干预4 周。检测大鼠血清Cr、BUN 水平;采用HE 及Masson 染色法观察肾脏组织病理形 态及纤维化程度;采用免疫组织化学法检测肾脏组织中TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7 蛋白表达水平;采用 Western Blot 法检测肾脏组织中MMP-2、MMP-9、TIMP-1 蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组大 鼠血清Cr、BUN 水平明显升高（P＜0.05）;肾脏出现明显纤维化病变;肾脏组织中TGF-β1、Smad2、Smad3、 TIMP-1 蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）,Smad7、MMP-2、MMP-9 蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）。与模 型组比较,低、高剂量复方丹参片均能明显降低大鼠血清Cr、BUN 水平（P＜0.05）;明显改善肾脏纤维化病 变;降低肾脏组织中TGF-β1、Smad2、Smad3、TIMP-1 蛋白表达水平（P＜0.05）,升高Smad7、MMP-2、 MMP-9 蛋白表达水平（P＜0.05）。结论复方丹参片可能通过抑制TGF-β1/Smad 通路及提高基质金属蛋白酶 水平来实现对肾纤维化大鼠的保护作用。     

排毒保肾丸对肾纤维化大鼠肾组织TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的观察排毒保肾丸对5/6肾切除大鼠肾纤维化的影响并探讨其可能作用机制。方法将50只SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、排毒保肾丸组、尿毒清颗粒组,每组10只。除正常组、假手术组外,其余各组大鼠均采用5/6肾切除方法建立肾纤维化模型。排毒保肾丸组和尿毒清颗粒组分别予排毒保肾丸1.0 g/(kg·d)和尿毒清颗粒3.33 g/(kg·d)灌胃,正常组、假手术组、模型组予2 ml生理盐水灌胃,每日1次。各组均灌胃4周后处死大鼠,取残肾组织行HE、PAS、PASM、Masson染色病理观察,检测肾组织转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad2、Smad7蛋白及其mRNA的表达水平。结果病理结果显示,模型组大鼠局灶节段性肾小球缺血性皱缩,较多炎性细胞浸润伴轻至中度纤维化;与模型组比较,排毒保肾丸组残肾组织病变程度减轻。与正常组、假手术组比较,模型组大鼠TGF-β1蛋白及其mRNA、Smad2蛋白及其mRNA表达水平均显著升高,Smad7蛋白及其mRNA表达水平均显著下降(P0.01);与模型组比较,排毒保肾丸组和尿毒清颗粒组TGF-β1蛋白及其mRNA、Smad2蛋白及其mRNA表达水平均显著降低,而Smad7蛋白及其mRNA表达水平均显著升高(P0.01)。结论排毒保肾丸有抗肾纤维化的作用,下调肾组织TGF-β1、Smad2的表达和上调Smad7的表达可能是其作用机制之一。     

柴胡疏肝散对肝纤维化大鼠TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的:探讨柴胡疏肝散对肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)的作用机制。方法:60只Wistar大鼠被随机均分为6组:正常组、模型组、柴胡疏肝散高、中、低剂量组、柴胡疏肝散预防组。除正常组外,其余各组均采用猪血清ip诱发HF,0.5 m L/只,2次/周,连续10周,5周后即可形成HF。预防组于造模同时给药(以柴胡疏肝散6.3 g·kg-1),柴胡疏肝散高、中、低剂量组[(12.6,6.3,3.15)g·kg-1]于造模第6周给药,连续10周。采用RT-PCR法检测各组肝组织转化生长因子-β1(TGF-β1),Smad2,Smad3,Smad4和Smad7的mRNA表达,免疫组化法分别检测肝组织TGF-β1,磷酸化Smad 2/3(p-Smad 2/3)和Smad7蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组TGF-β1,Smad2,Smad3的mRNA和TGF-β1,p-Smad 2/3蛋白表达均显著增加(均P0.01),Smad7基因表达显著降低(均P0.01);与模型组比较,柴胡疏肝散中剂量组TGF-β1和Smad3 mRNA表达均显著降低,p-Smad 2/3和TGF-β1蛋白表达显著减弱(P0.05,P0.01),Smad7基因表达显著增加(P0.01)。结论:柴胡疏肝散有明显的抗HF作用,其机制可能与抑制TGF-β1/Smad信号通路有关。     

黄芪皂苷调节TGF-β1/Smad通路对尿毒症腹膜透析大鼠钙磷代谢的影响

目的:探讨黄芪皂苷对尿毒症腹膜透析大鼠钙磷代谢及对转化生长因子-β1(TGF-β1)/Sma和Mad相关蛋白(Smad)信号通路的影响。方法:建立尿毒症腹膜透析大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、黄芪皂苷50、100、200 mg/kg组、碳酸钙0. 0042mg/kg组,各组灌胃相应药物或生理盐水,每日1次,连续6周。酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测血清中肌酐、尿素氮、钙、磷、甲状旁腺激素含量;苏木素-伊红(HE)染色观察肾组织病理学变化;蛋白免疫印迹(WB)检测肾脏组织中TGF-β1、Smad3、pSmad3蛋白表达水平。结果:建模前,各组大鼠体重差异不明显。建模6周后,与假手术组相比,模型组血清中钙含量下降,血清中肌酐、尿素氮、甲状旁腺激素、磷含量升高、肾组织中TGF-β1、p-smad3蛋白表达上调。与模型组相比,黄芪皂苷剂量依赖地使大鼠体重、血清中钙含量增加,血清中肌酐、磷、甲状旁腺激素、尿素氮含量降低,肾组织中TGF-β1、p-smad3蛋白表达下调;其中黄芪皂苷200 mg/kg改善各项指标最显著。与假手术组和碳酸钙组相比,尿毒症腹膜透析模型大鼠出现肾小球细胞严重增殖、肾小管毛细血管衰减等病理变化,经黄芪皂苷50、100、200 mg/kg组剂量作用后,肾组织病变情况明显改善。结论:黄芪皂苷可能通过抑制TGF-β1/Smad通路激活,改善肾功能,调节尿毒症腹膜透析大鼠钙磷代谢平衡。     

苦碟子注射液对输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的:研究苦碟子注射液(简称苦碟子)对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的作用及机制。方法:采用单侧输尿管结扎法制备大鼠肾间质纤维化模型,随机分为正常组、假手术组、模型组、缬沙坦(0.01 g·kg-1)组、苦碟子低、高剂量(0.15,0.30 g·kg-1)组。各组大鼠在给药后第7,14天分批次处死,采集血液,肾组织,测定血清肌酐(serum creatinine,SCr),尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)含量;肾组织匀浆检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;肾脏苏木素-伊红(HE),马松(Masson)染色观察肾脏病理变化;免疫组化法检测各组大鼠肾组织转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1),磷酸化-Smad2/3(phosphorylated Smad2/3,p-Smad2/3),骨形成蛋白-7(bone morphogenetic protein-7,BMP-7)的表达,并行半定量分析;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肾组织TGF-β1,Smad2,Smad3,BMP-7及I型胶原(ColⅠ)mRNA表达。结果:苦碟子能降低肾间质纤维化大鼠血肌酐水平,能减轻肾间质小管损伤,减少肾间质胶原相对面积,MDA含量,下调TGF-β1,p-Smad2/3,ColⅠ的表达;增加SOD的活性以及BMP-7表达水平,与苦碟子低剂量组比较,以苦碟子高剂量(0.30 g·kg-1)组效果最为显著(P0.05)。结论:苦碟子对大鼠肾间质纤维化的保护作用,可能与其降低大鼠肾组织氧化应激水平、抑制TGF-β1/Smad/BMP-7信号通路传导,从而抑制细胞外基质增生有关。     

抗纤灵方对肾纤维化大鼠TGF-β1/Smad信号通路表达的影响

目的:研究抗纤灵方对5/6肾切除所致肾纤维化大鼠的治疗效果,并探讨其分子作用机制。方法:将50只SD大鼠随机分为正常组(n=10),假手术组(n=10),5/6肾切除肾纤维化造模组(n=30)。将造模成功的大鼠随机分为模型组、抗纤灵组、氯沙坦钾组。氯沙坦钾组、抗纤灵方组每日分别给予氯沙坦钾(33. 3 g·kg-1)及抗纤灵方(21 g·kg-1)灌胃治疗,其余组都用等体积的生理盐水。持续8周灌胃后处死,检测各组大鼠血肌酐(SCr),尿素氮(BUN),24 h尿蛋白(24 h-Pro);苏木素-伊红(HE)染色观察肾脏组织病理学改变;马松(Masson)染色观察肾脏纤维化程度;蛋白免疫印迹法(Western blot)及实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分别检测肾脏转化生长因子-β_1(TGF-β_1),Smad2,Smad3,Smad7蛋白和mRNA在肾脏组织中的表达。结果:与正常组和假手术组比较,模型组大鼠的SCr,BUN,24 h-Pro上升,纤维化面积和肾脏损伤评分增加,TGF-β_1,Smad2,Smad3 mRNA与蛋白表达升高,Smad7 mRNA与蛋白表达显著下降(P 0. 01)。与模型组相比,氯沙坦钾组、抗纤灵方组可减少纤维化面积,降低肾脏损伤评分,SCr,BUN,24 h-Pro,TGF-β_1,Smad2,Smad3 mRNA与蛋白的表达水平,Smad7mRNA与蛋白表达显著上调(P 0. 01),但低于正常组与假手术组的水平。结论:中药抗纤灵方可通过抑制TGF-β_1/Smad通路来延缓肾纤维化。     

建中理劳汤含药血清对TGF-β1诱导大鼠系膜细胞HBZY-1纤维化的作用机制的研究

目的通过体外细胞实验探讨建中理劳汤含药血清对TGF-β1诱导大鼠系膜细胞HBZY-1纤维化过程中TGF-β/Smad信号通路的调控作用。方法采用PCR、Western Blot方法观察建中理劳汤含药血清对TGF-β1诱导大鼠系膜细胞HBZY-1纤维化过程中Smad-2、Smad-3、Smad-7 mRNA及蛋白表达的影响;通过Western Blot方法检测5.5μg/L的TGF-β1诱导HBZY-1细胞不同时间p-Smad2、p-Smad3蛋白的表达影响;Western Blot检测建中理劳汤大鼠含药血清对TGF-β1诱导30min后的HBZY-1细胞p-Smad2、p-Smad3蛋白的表达影响。结果与正常组相比,TGF-β1组中p-Smad2、p-Smad3蛋白表达显著升高,Smad-7表达明显降低(P0.05);而与TGF-β1组相比,加入建中理劳汤含药血清后,p-Smad2、p-Smad3蛋白表达显著降低,Smad-7表达明显升高(P0.05)。结论建中理劳汤含药血清对TGF-β1诱导大鼠系膜细胞HBZY-1纤维化过程中TGF-β/Smad信号通路起调控作用,可能是其抗纤维化形成的机制之一。     

基于TGF-β1/Smad3信号通路探讨血竭含药血清对皮肤成纤维细胞的影响

目的:探讨血竭含药血清对皮肤成纤维细胞TGF-β1/Smad3信号通路的影响。方法:将大鼠随机分为血竭高、中、低剂量含药血清组和正常对照组,每组6只。用药组分别以0.2、0.1、0.05 g·kg-1·d-1的血竭灌胃,正常对照组给予生理盐水,7 d后取血制备含药血清。组织块法培养大鼠成纤维细胞,检测血竭含药血清对成纤维细胞增殖活性、TGF-β1分泌水平以及TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、Smad3和p-Smad3蛋白表达的影响。结果:与正常对照组比较,血竭各剂量含药血清能显著提高成纤维细胞的增殖活性和TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ及p-Smad3蛋白的表达(P<0.05或P<0.01);中、高剂量含药血清组TGF-β1水平、Smad3、和Smad3蛋白磷酸化水平明显上升(P<0.05或P<0.01)。结论:血竭对创伤的修复作用可能与其调节TGF-β1/Smad3信号转导通路有关。     

淫羊藿-女贞子配伍对糖皮质激素性骨质疏松大鼠TGF-β1/Smads通路的影响

目的:观察淫羊藿-女贞子煎剂及其有效成分提取物配伍对糖皮质激素性骨质疏松(GIOP)大鼠转化生长因子-β_1(TGF-β_1)/Smads通路相关蛋白的影响,并探讨其相关的作用机制。方法:雄性SPF级SD大鼠49只,随机分为正常组,模型组,淫羊藿-女贞子提取物高、低剂量组(200,100 mg·kg~(-1)),淫羊藿-女贞子水煎剂高、低剂量组(7,3.5 g·kg~(-1))和钙尔奇组(0.277 3 g·kg~(-1))。除正常组外,大鼠两大腿内侧交替肌肉注射地塞米松(1 mg·kg~(-1))造模,每周2次。8周后,观察大鼠体重变化,取大鼠股骨,称量其湿重、干重以及煅烧后的灰重,计算股骨湿重、干重、灰重和体积的比值,采用免疫荧光法检测大鼠股骨TGF-β_1,磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3),Smad4,Smad7蛋白的表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠体重和骨量均降低(P0.01),骨组织TGF-β_1,p-Smad2/3及Smad4蛋白表达显著降低(P0.01),Smad7蛋白表达显著升高(P0.01);与模型组比较,各给药组体重和骨量均显著增加,各淫羊藿-女贞子煎剂及提取物组大鼠股骨TGF-β_1,p-Smad2/3及Smad4蛋白表达明显升高(P0.05,P0.01),Smad7蛋白表达显著降低(P0.01)。结论:淫羊藿-女贞子通过上调TGF-β_1/Smads通路中TGF-β_1,p-Smad2/3及Smad4蛋白表达,下调Smad7蛋白表达,增强成骨细胞功能,减少GIOP大鼠骨量丢失。