氢氧化钠水解地榆总皂苷制备地榆皂苷化合物Ⅳ的工艺优选

目的:优化地榆总皂苷的碱水解工艺,提高水解产物地榆皂苷化合物Ⅳ的含量。方法:采用正交试验设计,考察水解时间、氢氧化钠体积分数、料液比、水解温度对地榆总皂苷水解过程的影响。结果:影响水解的主次因素依次是料液比>氢氧化钠体积分数>水解温度>水解时间,优选的最佳工艺为料液比1∶80;氢氧化钠体积分数20%,水解时间3.5 h,水解温度82℃。结论:采用优化后的水解条件能够得到含量较高的地榆皂苷化合物Ⅳ,适合工业化生产。     

三步碱沉法制备地榆总皂苷的工艺优选

目的:通过正交试验与三步沉淀法优选地榆总皂苷的提取与纯化工艺条件。方法:采用HPLC-ELSD测定地榆皂苷-Ⅰ的含量,流动相[甲醇-乙腈(1∶1)]-水梯度洗脱,蒸发光散射检测器的漂移温度100℃,气体流速3.0 L·min-1。以地榆皂苷-Ⅰ转移率为指标,通过正交试验优选地榆总皂苷的提取工艺;采用三步碱沉法,以鞣质清除率与地榆皂苷-Ⅰ含量为评价指标,通过单因素试验优选纯化工艺。结果:地榆总皂苷最佳工艺条件为加8倍量70%乙醇回流提取2次,每次1.5 h,提取液加10%氢氧化钠溶液调p H 12~14,静置12 h,离心去沉淀,上清液用10%氢氧化钠溶液调p H 12~13,静置24 h,离心,沉淀于70℃减压干燥至干,用30倍量无水乙醇回流30 min,减压回收乙醇至有固形物析出,固形物减压干燥12 h。地榆总皂苷纯度91.32%。结论:优选的地榆总皂苷提取纯化工艺路线简单、稳定,制备的地榆总皂苷得率、纯度高,适合工业化生产。     

地榆药材中总皂苷及地榆皂苷- I的含量测定

目的 建立地榆药材总皂苷及地榆皂苷-I含量的测定方法,并对不同批次地榆药材中总皂苷和地榆皂苷-I的含量进行测定。方法 采用优化条件的紫外-可见分光光度法建立了地榆药材中总皂苷的含量测定方法,采用HPLC-ELSD法测定地榆药材中地榆皂苷-I的含量。结果 优选出总皂苷含量测定的显色体系为香草醛-冰醋酸-高氯酸,反应条件为15 %香草醛,1.0 mL高氯酸,80 ℃反应15 min,经测定,地榆药材中总皂苷含量为7.25 %~8.41 %;HPLC-ELSD法测得地榆药材中地榆皂苷-I的含量为5.21 %~6.18 %。结论 香草醛-冰醋酸-高氯酸法以及HPLC-ELSD法快速、简便、准确、重现性良好,分别适用于测定地榆药材中总皂苷和地榆皂苷-I的含量。     

应用Box-Behnken设计优化地榆皂苷的闪式提取工艺研究

目的采用Box-Behnken设计进行工艺优化,研究地榆皂苷的闪式提取工艺。方法采用闪式提取法,以溶媒用量、乙醇体积分数、提取时间3个因素为主要影响因素,以总皂苷转移率、地榆皂苷I转移率、总评归一值(OD)为评价指标进行Box-Behnken设计试验,考察最佳工艺。结果最佳工艺为溶媒用量9倍、乙醇体积分数75%、提取时间2 min,对最佳工艺进行验证,结果实测平均值为总皂苷转移率82.20%、地榆皂苷I转移率88.73%,RSD分别为1.59%、2.72%,与模型预测值非常接近,说明该模型比较可靠。结论本方法科学、合理、可行,为进一步地榆制剂研究奠定基础。     

HPLC测定不同炮制程度地榆炭中地榆皂苷元Z的含量

地榆是蔷薇科植物地榆(Sanguisorba offcinalis L.)或长叶地榆[Sanguisorba offcinlis L.var.longifolia(Bert.)Yu etLi]的干燥根,味苦、酸、涩,性微寒,归肝、大肠经,功能凉血止血,解毒敛疮,用于便血、痔血、血痢、崩漏、水火烫伤、痈肿疮毒[1],是历代用于各种出血症之要药;地榆炭为地榆经过炒炭后的炮制品。     

地榆总皂苷促造血细胞增殖效应研究

目的 观察地榆总皂苷对3种造血细胞Baf3/Mp1、UT-7和NSF-60的促增殖效应.方法 分别培养依赖血小板生成素(TPO)、红细胞生成素(EPO)和粒细胞集落生长因子(G-CSF)生长的Baf3/Mp1、UT-7和NSF-60细胞,在加或不加细胞因子条件下,用不同质量浓度地榆总皂苷处理细胞72 h后,采用MTT法检测3种细胞的增殖;采用RT-PCR法检测3种细胞因子受体表达水平的变化.结果 地榆总皂苷单独处理细胞72 h,明显促进Baf3/Mp1细胞和NSF-60细胞增殖,但不影响UT-7细胞生长;在TPO和G-CSF存在条件下,地榆总皂苷能分别增强两种细胞因子的促细胞增殖作用.此外,地榆总皂苷能明显增强Baf3/Mp1细胞TPO受体表达,对NSF-60细胞G-CSF受体表达没有影响.结论 地榆总皂苷具有单独或协同细胞因子的促造血细胞增殖作用,其促增殖作用与上调TPO受体的表达有关.     

地榆总皂苷体内抗小鼠肿瘤组织微血管生成的实验研究

目的:探讨地榆总皂苷体内抗肿瘤血管生成作用。方法:构建小鼠移植性S180皮下瘤模型,观察地榆总皂苷对荷瘤小鼠肿瘤生长抑制作用;同时解剖瘤组织,采用免疫组化法(IHC)检测地榆总皂苷对小鼠肿瘤组织微血管VEGF表达水平,染色结果采用半定量分析。结果:地榆总皂苷灌胃给药剂量4g/kg、2g/kg、1g/kg对荷S180肉瘤小鼠肿瘤生长抑制率分别为38.65%、30.81%、24.72%,显微镜下观察,地榆总皂苷作用后各组小鼠肿瘤组织微血管数较阴性对照组明显减少,阴性对照组、地榆总皂苷高、中、低剂量组VEGF蛋白IHC染色综合评分分别为11.72±2.34、1.04±0.02、6.83±0.51、9.82±0.43,经统计分析,地榆总皂苷各剂量组IHC染色综合评分较阴性对照组低,差异均有显著性(P0.05)。结论:地榆总皂苷具有一定的体内抗肿瘤血管生成作用,其作用与抑制肿瘤组织VEGF表达水平有关。     

应用酸水解法制备牛蒡苷元的工艺研究

目的：筛选一种简单制备牛蒡苷元的方法。方法：采用正交试验方法,以HPLC法测定牛蒡苷水解百分比为指标,确定牛蒡子药材的酸水解工艺。结果：以0．5％的盐酸,9倍溶媒量,水解2h,牛蒡苷元的转化率可达到80％以上。结论：此水解工艺合理可行,为牛蒡子的进一步研究提供参考。     

正交试验优选酸枣仁总皂苷提取工艺

目的:优选酸枣仁总皂苷的提取工艺,为该成分的工业化生产提供参考。方法:采用HPLC-UV检测酸枣仁皂苷A和B的含量,流动相乙腈-水(34∶66),检测波长204 nm。在单因素试验基础上,通过正交试验考察乙醇体积分数、乙醇用量、提取时间及提取次数对酸枣仁总皂苷提取工艺的影响。结果:酸枣仁皂苷A,B的线性范围分别为0.24~2.40,0.12~1.20μg,平均加样回收率分别为100.39%,99.40%。酸枣仁总皂苷最佳提取工艺为加12倍量70%乙醇回流提取2次,每次1.5 h;酸枣仁皂苷A,B的平均质量分数分别为0.606,0.228 mg·g-1。结论:建立的HPLC检测酸枣仁皂苷A,B含量方法准确可靠,优选的酸枣仁总皂苷提取工艺稳定可行,具有节约成本、省时等特点,适用于工业化生产。     

三七总皂苷注射剂的超滤工艺研究

摘要：目的：优化三七总皂苷的超滤工艺;方法：采用HPLC测定人参皂苷Rg1、Rb1及三七皂苷R1的含量,单因素考察不同分子量超滤膜、浓度、温度、洗液体积对人参皂苷Rg1、Rb1及三七皂苷R1含量的影响;结果：100 mg?mL-1三七总皂苷水溶液,用10kDa的超滤膜,温度70℃,洗涤体积1200mL,人参皂苷Rg1、Rb1及三七皂苷R1各个组分透过率可达到90%以上;结论：该工艺用于三七总皂苷类注射剂是可行的。     

三七总皂苷联合淫羊藿总黄酮改善D-gal致H9c2大鼠心肌细胞衰老的保护作用

研究三七总皂苷(total saponins of Panax notoginseng,TPNS)联合淫羊藿总黄酮(total flavonoids of epimedium,TFE)改善D-半乳糖(D-galactose,D-gal)致H9c2大鼠心肌细胞衰老的保护作用及可能机制。采用50 mol·L~(-1)D-gal处理H9c2大鼠心肌细胞,以不同浓度TPNS单药、TFE单药、TPNS联合TFE预处理细胞4 h,D-gal刺激H9c2心肌细胞24 h,MTT检测细胞活率进而确定协同效果最佳的联合方案;β-半乳糖苷酶染色法鉴定细胞衰老程度;DCFH-DA探针检测细胞内活性氧(reactive oxgen species,ROS)水平;线粒体膜电位法(JC-1)检测线粒体膜电位变化情况;Western blot检测沉默信息调节因子2相关酶类1(silentmating type information regulation 2 Homolog~(-1),SIRT1),过氧化物酶体激活物受体γ辅激活因子1α(peroxisomal proliferator-activated receptor-coactivator 1α,PGC-1α),沉默信息调节因子2相关酶类3(silentmating type information regulation 2 homolog-3,SIRT3)蛋白表达情况。研究表明TPNS(5 mg·L~(-1))联合TFE(5 mg·L~(-1))对H9c2心肌细胞增殖具有显著的协同作用(Q=1.154),因此确定其为协同作用最佳的联合方案;TPNS(5 mg·L~(-1))联合TFE(5 mg·L~(-1))显著降低β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数目和ROS荧光强度,显著提高线粒体膜电位和SIRT1,PGC-1α,SIRT3蛋白的表达量。TPNS(5 mg·L~(-1))联合TFE(5 mg·L~(-1))可产生改善D-gal致H9c2大鼠心肌细胞衰老的保护作用,机制可能与调节SIRT1/PGC-1α和SIRT3信号通路,进而调控线粒体的功能和减少氧化应激损伤有关。     

合欢皮总皂苷抗肿瘤作用靶点鉴定与分子机制解析

合欢皮作为常用中药,临床常用于治疗失眠、焦虑、肿瘤等。现代药理中针对合欢皮总皂苷(TSAJ)抗肿瘤活性多有报道,但由于单体成分分离困难,药理机制难以开展。该研究采用MTT法和Hoechst 33258染色法,确认了TSAJ对肝癌细胞的生长抑制作用,构建了表面修饰有TSAJ的固相亲合微球,利用该固相微球特异性地从人肝癌细胞裂解液中富集靶点蛋白,再利用高分辨质谱对富集到的靶点蛋白进行鉴定。采用Matabo Analyst 3.0处理数据,筛选并确定了Exportin-2,Beta-actin-like protein 2,Myosin-9,Protein transport protein Sec61 subunit beta,Cytochrome c oxidase copper chaperone等5个靶点蛋白。这些蛋白分别具有调控细胞凋亡及细胞生长、分化、运动等功能,提示TSAJ的抗肿瘤机制可能与诱导细胞凋亡及抑制肿瘤血管生成有关。综上所述,该研究利用TSAJ修饰的固相亲和微球,特异性富集并鉴定了TSAJ的靶点蛋白,从靶点源头上解释了TSAJ抗肿瘤作用机制,同时也为中药复杂体系的分子药理机制研究提供了一种全新的思路。     

雪胆总皂苷抗家兔动脉粥样硬化作用的实验研究

目的探讨雪胆总皂苷对新西兰兔动脉粥样硬化模型(AS)的影响及其作用机制。方法将36只雄性新西兰兔随机分为6组,即对照组,模型组,雪胆总皂苷高、中、低剂量(200、100、50 mg/kg)组及阳性药辛伐他汀(200 mg/kg)组。除对照组饲以普通饲料外,其余各组饲以配方高脂饲料(79.5%基础饲料+15%蛋黄粉+5%猪油+0.5%胆固醇)3周,再去除配方高脂饲料中胆固醇继续饲养3周。从造模开始ig给药,每日1次,连续给药6周。给药3周后检测血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C);第6周末次给药后检测血清TG、TC、HDL-C、LDL-C、载脂蛋白AI(Apo AI)、载脂蛋白B(Apo B)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮(NO)、内皮素(ET)、血栓素B_2(TXB_2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)和6酮前列腺素F_(1α)(6-keto-PGF_(1α))的量及血液流变学相关指标;计算主动脉脂质面积百分比,并在光镜下观察血管内膜形态学病理改变。结果与模型组比较,雪胆总皂苷高、中剂量组在给药3周后能明显降低AS兔的血清TC和TG值,其中高剂量组能明显升高血清HDL-C值;雪胆总皂苷高剂量组6周后能明显升高HDL-C、Apo AI、SOD、GSH-Px、NO、6-keto-PGF_(1α)和降低TC、TG和LDL-C、Apo B、ET、TXB_2、TNF-α、CRP、IL-6和IL-8的量,中、低剂量组以上指标也有不同程度的升高或降低;雪胆总皂苷高、中剂量组能明显降低AS兔的全血黏度(高切和低切)、红细胞聚集指数和主动脉脂质面积百分比,明显改善血管内膜管壁脂质沉积、管壁增厚及管腔狭窄程度。结论雪胆总皂苷能干预兔AS的发生、发展,其作用环节与调节血脂水平、抗炎作用、保护血管内皮细胞功能和改善血液流变学指标密切相关。     

生脉散制剂中总皂苷含量的测定

目的:测定生脉散制剂中的总皂苷含量.方法:比较3种显色方法的优劣,选用高氯酸法作为总皂苷的含量测定方法.结果:以人参皂苷Re为标准品,高氯酸为显色剂,测得生脉散制剂-心得康颗粒剂中的总皂苷含量为6.14%.结论:用高氯酸法测定复方中的总皂苷,方法简便、准确,重复性好,可作为生脉散制剂中总皂苷的质量控制方法.     

人参茎叶总皂苷酸水解产物化学成分研究

目的 研究人参Panax ginseng茎叶总皂苷酸水解产物的化学成分。方法 采用硅胶柱色谱及半制备高效液相色谱等方法进行分离、纯化,通过NMR、MS等进行结构鉴定。结果 从人参茎叶总皂苷的酸水解产物中分离鉴定了34个化合物,分别为3β-乙酰氧基-12β-羟基-20(R),25-环氧达玛烷(1)、3β,6α-二乙酰氧基-12β-羟基-20(R),25-环氧达玛烷(2)、3β-乙酰氧基-6α,12β-二羟基-20(R),25-环氧达玛烷(3)、20(R)-人参二醇(4)、异去氢原人参三醇(5)、3-酮基-6α,12β-二羟基-20(R),25-环氧达玛烷(6)、达玛-(E)-20(22)-烯-3β,12β,25-三醇(7)、6α-乙酰氧基-3β,12β-二羟基-20(R),25-环氧达玛烷(8)、20(S)-原人参二醇(9)、20(R)-原人参二醇(10)、20(S)-25-乙氧基-达玛烷-3β,12β,20-三醇(11)、20(R)-人参三醇(12)、达玛-(E)-20(22),24-二烯-3β,6α,12β-三醇(13)、27-去甲基-(E,E)-20(22),23-二烯-3β,12β-二羟基达玛-25-酮(14)、3β,12β-二羟基-22,23,24,25,26,27-六去甲达玛烷-20-酮(15)、3β-乙酰氧基-6α,12β,25-三羟基-(20S,24R)-环氧达玛烷(16)、20(S)-25-乙氧基-达玛烷-3β,6α,12β,20-四醇(17)、达玛-(E)-20(22)-烯-3β,6α,12β,25-四醇(18)、达玛-(Z)-20(22)-烯-3β,6α,12β,25-四醇(19)、20(S)-达玛烷-3β,12β,20,25-四醇(20)、20(R)-达玛烷-3β,12β,20,25-四醇(21)、20(S)-原人参三醇(22)、20(R)-原人参三醇(23)、(20S,24S)-达玛烷-20,24-环氧-3β,6α,12β,25-四醇(24)、(20S,24R)-达玛烷-20,24-环氧-3β,6α,12β,25-四醇(25)、(20R,24R)-达玛烷-20,24-环氧-3β,6α,12β,25-四醇(26)、3β,6α,12β-三羟基-22,23.24,25,26,27-六去甲达玛烷-20-酮(27)、12β-羟基-20(R),25-环氧达玛烷-3β-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(28)、20(S)-达玛烷-3β,6α,12β,20,25-五醇(29)、20(R)-达玛烷-3β,6α,12β,20,25-五醇(30)、20(R)-达玛烷-3β,6α,12β-三羟基-20,25-环氧-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(31)、拟人参皂苷Rh₂(32)、20(S)-人参皂苷Rh₁(33)、20(R)-人参皂苷Rh₁(34)。结论 化合物1～3、6、8、11、17、24～26和32为首次从人参茎叶总皂苷酸水解产物中分离得到的人参三萜类化合物;首次报道化合物1、16和19的碳谱数据;32是人癌细胞增殖的抑制剂。     

三七总皂苷对全脑缺血成年大鼠侧脑室室管膜区神经再生的影响

目的探讨三七总皂苷(TSPN)对全脑缺血后成年大鼠侧脑室室管膜区(SVZ)神经再生的影响。方法采用四血管阻断法制作全脑缺血模型。大鼠分成假手术组、模型组和TSPN组。TSPN组大鼠全脑缺血后30 min ip给予剂量为75mg/kg的TSPN,每天1次,模型组给予等体积的生理盐水,连续14 d。分别于再灌注1、3、7、14 d处死大鼠,免疫组织化学染色观察SVZ区Brd U和微管相关蛋白Doublecortin(DCX)的表达,免疫荧光双标观察SVZ区Brd U/DCX、DCX/Ki67、GFAP/DCX的共表达情况。结果 TSPN组SVZ区7、14 d的Brd U+细胞数目均显著高于模型组对应的时间点(P0.01、0.001);TSPN组和模型组SVZ区DCX+细胞的平均光密度值在7、14 d有统计学差异(P0.01、0.001);TSPN组SVZ区14 d的Brd U/DCX细胞,均显著多于模型组(P0.01);TSPN组SVZ区Ki67/DCX细胞在7、14 d的表达多于模型组,差异显著(P0.01、0.001);两组SVZ区GFAP/DCX细胞与DCX的比值在3、7、14 d差异显著(P0.05、0.001)。结论 TSPN促进全脑缺血后大鼠SVZ区神经再生,加速全脑缺血后大鼠SVZ区神经祖细胞增殖和分化,促进全脑缺血后大鼠SVZ区星形胶质细胞转化新生未成熟神经元。     

地榆皂苷自乳化药物传递系统的制备及质量评价

目的建立地榆皂苷自乳化药物传递系统的制备方法并对其进行质量评价。方法通过溶解度试验、辅料配伍、三元相图中形成乳剂区域面积的大小和D-最优混料实验设计来筛选地榆皂苷自乳化药物传递系统的处方组成和比例,以载药量、粒径和多分散系数为评价指标,对油相、表面活性剂和助表面活性剂的用量进行考察。最后以成乳的外观形态、粒径、多分散系数、Zeta电位和体外溶出度为评价指标,评价其质量。结果得到地榆皂苷自乳化药物传递系统最优处方为Obleique CC497-聚山梨酯20-Transcutol P(0.25∶0.45∶0.30),载药量23.93 mg/g,平均粒径为(207.92±2.13)nm,Zeta电位为(38.84±0.18)m V。体外释放结果表明,地榆皂苷自乳化药物传递系统的释药速率极显著地高于地榆皂苷原料药。结论首次建立了地榆皂苷自乳化药物传递系统,工艺合理可行,质量稳定。     

六月青总皂苷对鸭HBV病毒复制的抑制作用

采用鸭乙型肝炎动物模型观察六月青总皂苷抗鸭乙型肝炎病毒与保护肝细胞的作用,实验结果表明,六月青总皂苷(1.0,2.0 g·kg-1.d-1)和3TC(50 mg·kg-1.d-1)能明显抑制DHBV-DNA复制,抑制ALT,AST和DHBsAg水平,改善肝组织病理学损伤。不同于3TC的是六月青总皂苷在停药后仍能显示有抑制病毒的作用,没有出现反跳现象,提示,六月青总皂苷抗病毒的作用机制有别于3TC。实验结果表明六月青总皂苷具有有效抑制DHBV-DNA和保护肝细胞的作用。     

三七药材、总皂苷及其制剂HPLC指纹图谱的研究

[目的]采用高效液相色谱(HPLC)法对三七药材、三七总皂苷及血塞通氯化钠注射液进行指纹图谱研究,并分别对其相似度进行考察,为科学评价与有效控制血塞通氯化钠注射液提供方法。[方法]色谱条件:LunaC18柱(250mm×4.6mm,Ф5μm),乙腈-水二元梯度洗脱,检测波长203nm,流速1.0mL/min,柱温30℃,进样量20μL;并采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版对其相似度进行分析。[结果]建立了三七药材、三七总皂苷及血塞通氯化钠注射液HPLC指纹图谱,且相似度较好。[结论]此方法能够作为三七药材、三七总皂苷及血塞通氯化钠注射液指纹图谱的检测标准,为全面控制血塞通氯化钠注射液质量提供了依据。     

盾叶薯蓣药材甾体总皂苷成分HPLC-ELSD指纹图谱的研究

建立不同产地盾叶薯蓣药材中甾体总皂苷成分HPLC-ELSD指纹图谱的方法.采用Welchrom C₁₈(4.6 mm ×250 mm,5 μm)色谱柱,乙腈(A)-水(B) 作为流动相,梯度洗脱;柱温室温;体积流速1.0 mL·min^-1;蒸发光散射检测器条件:漂移管温度90.0℃,载气(N₂)流速2.8 L·min^-1;进样体积10 μL.通过检测10个批次盾叶薯蓣药材,首次建立了盾叶薯蓣甾体总皂苷成分HPLC-ELSD指纹图谱的共有模式,确定了25共有峰,并利用对照品对照法对其中的10个共有峰进行了成分指认.以共有模式对10批药材进行相似度评价,其相似度全部大于0.80.该方法准确、可靠、重复性好,为全面评价和控制盾叶薯蓣药材的质量提供了科学依据.