急性心肌梗死后血管内皮细胞生长因子及碱性成纤维细胞生长因子表达动态变化

目的　以急性心肌梗死大鼠为模型,观察血管内皮细胞生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在心肌中的表达,探讨急性缺血缺氧刺激下VEGF和bFGF表达变化与新生血管形成的关系及意义。方法　建立Wistar大鼠急性心肌梗死模型,分为对照组和急性心肌梗死组( 3d ,7d ,1 4d ,2 8d ,4 2d ,56d)。免疫组化检测心肌细胞和内皮细胞中VEGF和bFGF的表达,Ⅷ因子相关抗原标记内皮细胞,检测新生毛细血管密度。结果　实验组心肌梗死后VEGF和bFGF产生量迅速增加,梗死区VEGF和bFGF的表达在梗死后第7天达高峰,2 8天开始下降,4 2天和56天时表达明显下降,新生毛细血管密度与两者产生量成正相关,与对照组比较差异有统计学意义。结论　在心肌梗死急性缺血期心肌细胞和内皮细胞能通过自身分泌VEGF和bFGF协同刺激血管内皮细胞增殖,促进血管形成,从而改善缺血心肌的血液供应。二者的表达在梗死后第7天达到最高峰,第2 8天时开始下降,为选择在表达消退期应用外源性VEGF和bFGF进行基因治疗提供了实验依据。     

HIF-1对大鼠急性缺血心肌的保护作用

目的研究HIF-1对大鼠急性缺血心肌的保护作用及其作用机制。方法应用HIF-1活性诱导剂氯化钴预处理大鼠,观察预处理对大鼠急性心肌梗死面积和心肌VEGF、iNOS蛋白表达的影响。结果氯化钴预处理组大鼠较对照组和假手术组急性心肌梗死面积显著减少(P<0.01),VEGF、iNOS蛋白表达显著增高(P<0.01)。结论HIF-1可以减少大鼠急性心肌梗死面积,对大鼠急性缺血心肌具有保护作用,其机制可能与HIF-1促进VEGF、iNOS蛋白表达增加有关。     

祛风生脉颗粒对实验性心肌缺血大鼠心脏促血管生成作用的研究

目的探讨祛风生脉颗粒对心肌梗死模型大鼠心脏的促血管生成作用及其机制.方法选择结扎法制作心肌梗死模型大鼠,运用冠状动脉造影、免疫组化技术等,观察大鼠缺血心肌侧支血管的新生情况,检测内皮细胞数(EC)、毛细血管密度(CD)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的变化.结果祛风生脉颗粒高、低剂量组大鼠心脏造影剂聚集明显,结扎后的前降支显影度与模型组比较有统计学意义;祛风生脉颗粒治疗后Ⅷ因子免疫组化标记的毛细血管管腔增粗、密度增加,与重组bFGF蛋白心肌内注射诱导的血管新生数目相当;同时,祛风生脉颗粒高剂量组缺血心肌中VEGF表达上调,高于模型组和低剂量组(P<0.01).结论祛风生脉颗粒能够促进缺血心肌侧支循环的建立和毛细血管的新生,发挥"自身血管搭桥"的作用.其机制可能与缺血心肌中VEGF表达上调有关.     

激活Notch信号的骨髓间充质干细胞心肌移植促血管新生的研究

目的:探讨干预Notch信号的骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对心肌梗死（MI）大鼠心肌中治疗性血管新生的作用及其机制。方法: 60只 Wistar大鼠通过结扎冠状动脉前降支(LAD)建立MI模型。建模后2周,进行相应处理后,随机分为激活Noth信号的BMSCs移植实验组（D组）、BMSCs移植对照组（E组）、培养液移植对照组（C组）及MI模型对照组（B组）,每组15只大鼠。另选取10只大鼠为假手术对照组（A组）。4周后,观察细胞生长及增殖情况,运用ELISA法血浆中VEGF浓度,免疫组织化学法及Western blot法测定缺血心肌中血管内皮细胞生长因子（VEGF）蛋白的表达及缺血区心肌中毛细血管密度的改变。结果: BMSCs在梗死区中可增殖分化为内皮细胞,与B组、C组及A组相比,D组、E组缺血心肌中VEGF蛋白的表达增多及毛细血管密度均明显增加(P<0.01),D组较E组更明显(P<0.05)。结论: Notch信号可促进心肌梗死区BMSCs向内皮细胞分化, 并通过自分泌和旁分泌的方式增加缺血心肌中VEGF的表达,从而促进缺血心肌中毛细血管新生。     

胞浆型磷脂酶A2在急性心肌梗死大鼠心肌组织中的表达

目的 观察急性心肌梗死早期心肌组织胞浆型磷脂酶A2(cPLA2)mRNA及蛋白表达,探讨cPLA2在心肌细胞损伤中的作用.方法 雄性SD大鼠随机分为假手术组,心肌梗死组(AMI组,按时间不同分5组,每组10只),建立大鼠急性心肌梗死模型,按照心肌梗死不同时间(0、1、2、3、6和12 h)处死动物.免疫组化检测心肌cPLA2蛋白表达情况.采用RT-PCR检测心肌cPLA2mRNA表达水平.通过透射电镜观察心肌细胞超微结构的改变.结果 ①与假手术组比较,AMI组心肌cPLA2mRNA水平均出现不同程度上调,以梗死后2 h达到峰值(0.655±0.035,P＜0.01).②假手术组与AMI组cPLA2蛋白都有阳性表达,AMI组cPLA2表达增加,且以梗死后2 h最为显著(0.207±0.018,P＜0.01).③假手术组心肌组织形态及超微结构改变不明显;AMI组心肌损伤较重,缺血心肌在急性心肌缺血后12 h内,其病理学变化未见显著改变.结论 心肌梗死后心肌组织cPLA2激活导致了心肌细胞及细胞器膜完整性破坏、能量代谢及收缩功能的障碍.     

缺氧预处理提高骨髓基质细胞促进血管新生能力

目的 研究缺氧对骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells，BMSCs)表达血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)及促进血管新生能力的影响。方法 将BMSCs置于缺氧环境下培养24h后，研究其VEGF表达的变化。将急性心肌梗死大鼠随机分为3组。未处理组在梗死后4w移植未经缺氧处理的BMSCs；缺氧组将经缺氧预处理的BMSCs注射到心肌梗死区；对照组仅注射无血清的培养液。在梗死后6w取各组标本观察梗死区及周围VEGF的表达和血管新生状况。结果 体外培养的BMSCs经缺氧预处理后VEGF的表达明显增加。缺氧组和未处理组梗死区及周围VEGF的表达和毛细血管密度较对照组明显增加。缺氧组VEGF的表达和毛细血管密度又较未处理组明显增加。结论 体外缺氧可诱导BMSCs高表达VEGF。BMSCs移植后促进梗死区及周围VEGF的表达，对血管新生有积极作用。移植前缺氧预处理使BMSCs促进缺血心肌组织表达更多的VEGF从而提高其促进血管新生作用。     

CD151基因转移对大鼠缺血心肌VEGF表达影响的实验研究

目的 通过将携带人CD151基因的重组腺病毒相关病毒(rAAV) 载体注入缺血心肌, 观察CD151对缺血心肌VEGF表达的影响.方法 制作大鼠急性心肌梗死模型,将rAAV-CD151注入缺血心肌.4 w后取注射部位心肌,用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测外源性CD151 mRNA的表达、Western印迹法检测CD151及VEGF的表达情况,了解高表达CD151对VEGF表达的影响.结果 术后4 w,CD151组心肌组织检测到外源性CD151 mRNA的表达,假手术组、对照组、GFP组未检测到外源性CD151 mRNA的表达,且CD151组心肌组织CD151蛋白表达水平高于假手术组、对照组、GFP组(均P＜0.05);CD151组VEGF表达无明显增加,与对照组、GFP组比较无明显增加(均P＞0.05).结论 rAAV-CD151可以有效转染大鼠心肌组织,促进缺血心肌的血管生成,改善左室功能,但对VEGF表达没有影响.     

犬急性缺血再灌注左室局部功能与心肌细胞凋亡

目的 应变率成像观察犬急性缺血再灌注后左心室局部功能,缺血局部心肌细胞凋亡及Caspase 3表达的变化.方法 健康杂种犬30只,分为对照组(10只),缺血组(10只),再灌注组(10只).缺血组于第1对角支1 cm以下套扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注组套扎30 min后再灌注120 min,对照组游离左冠状动脉前降支不结扎.超声心动图左室收缩期应变率测量左室局部收缩功能,TUNEL法检测缺血区心肌细胞凋亡指数,免疫组化法测缺血心肌细胞Caspase 3的表达.结果 结扎30 min后,缺血组左室前壁缺血节段(中间段)收缩期应变率明显降低(-0.54±0.23)(P＜0.01).并出现收缩后压缩(postsystolic compression,PSC),再灌注120 min后缺血节段的应变率有所恢复(-0.89±0.43),但仍低于对照组(P＜0.05).缺血组缺血区心肌TUNEL阳性细胞指数与对照组比较无显著性差异(2.9±1.3比对照组2.7±1.7)(P＞0.05);再灌注组缺血区心肌TUNEL阳性指数明显增加(25.1±3.3)(P＜0.01).缺血区心肌细胞Caspase 3表达升高,(20.0±3.1比对照组4.7±2.4)(P＜0.01),再灌注组Caspase 3表达进一步增强(P＜0.01).结论 急性心肌缺血再灌注促凋亡基因Capase 3激活,缺血心肌细胞凋亡可能为其早期改变,应变率成像可以评价早期心肌局部收缩功能.     

重组人生长激素对急性心肌梗死大鼠心肌血管生成的影响

目的探讨肌肉注射重组人生长激素(rhGH)对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌血管生成及相关生长因子———血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的影响。方法50只Wistar大鼠经10%戊巴比妥钠麻醉后开胸,剪开心包腔,做左冠状动脉前降支结扎术致其发生AMI,术后24h存活者37只被随机分为rhGH治疗组(19只)和对照组(18只)。治疗组以rhGH0.25U(kg·d)×3周肌注,对照组予同等容积的生理盐水肌注,3周后处死大鼠,开胸经升主动脉向冠状动脉内灌注10%甲醛20～30min固定心脏,心脏标本经切片处理。分别测定血浆和心肌的VEGF、bFGF的量及左心室梗死区周围毛细血管密度。结果(1)治疗组与对照组在AMI后3周其血浆bFGF、VEGF浓度均较实验开始时明显增加。治疗组较对照组升高更加显著,分别为69±5vs36±4(P<0.05)和47±5vs32±6(P<0.05)。(2)大鼠心肌内bFGF及VEGF治疗组均较对照组高,分别为79±7vs31±3(P<0.01)和72±7vs39±7(P<0.01)。(3)血浆bFGF、VEGF的浓度与梗死区周围心肌内毛细血管密度呈正相关(r分别为0.91和0.86,P<0.001),其回归方程分别为:毛细血管数=1.85bFGF-18.526;毛细血管数=1.249VEGF 6.127。结论rhGH促进AMI大鼠心肌细胞生长因子bFGF和VEGF的表达和分泌,提高缺血心肌局部及血液中bFGF和VEGF的浓度,促进梗死区周围毛细血管的生成。     

法舒地尔对急性心肌梗死大鼠心肌的保护作用

目的:通过检测急性心肌梗死(AMI)大鼠左心室梗死面积及缺血区凋亡细胞来评价法舒地尔对大鼠AMI后心肌的保护作用.方法:雌性Wistar大鼠随机分为3组,AMI组:结扎左前降支(LAD);治疗组:术前1 h法舒地尔30 mg/kg腹腔注射,结扎LAD;假手术组:仅在LAD下穿线但不结扎.术后24 h,伊文蓝-红四氮唑双染色,确定缺血面积和梗死面积,TUNEL法检测缺血区凋亡细胞,免疫组织化学染色法检测缺血区bcl-2和bax的表达,逆转录一聚合酶链式反应测定Rho激酶mRNA的表达.结果:治疗组与AMI组比较,梗死面积显著减小(26.04±2.51)%:(32.27±3.07)%,P＜0.01,缺血面积差异无统计学意义.AMI组与假手术组比较,凋亡指数明显增加(31.94±3.03):(2.44±1.37),P＜0.01,bcl-2表达降低,bax表达增加,Rho激酶mRNA表达增加(均P＜0.01).而治疗组与AMI组比较,凋亡指数显著降低.bcl-2表达增加,bax表达降低,Rho激酶mRNA表达降低,均P＜0.01.结论:Rho激酶参与了AMI心肌细胞的凋亡,法舒地尔的心肌保护作用与其抗心肌细胞凋亡效应有关.     

妊娠时间与肺结核复发的相关性研究及诊治对策

目的 分析肺结核史患者妊娠时间和肺结核复发间相关性.方法 选取我院收治的有肺结核史的妊娠妇女576例作为研究对象,对其妊娠前肺结核治疗、治愈后妊娠时间、妊娠后复发肺结核等进行分析,总结有肺结核史育龄女性的妊娠时间和肺结核复发之间的关系.结果 肺结核治愈后不同时间段妊娠者的结核复发率比较,差异具有显著性（P＜0.05）,停药后间隔时间越久妊娠,肺结核复发的几率越小.结论 加强孕期痰菌检查,及早发现复发肺结核,提高母婴安全.     

我国骨关节结核诊治的回顾与展望

骨关节结核是危害人们健康的严重感染性疾病,近95％由他处结核病继发而来.罹患骨关节结核疾病后几乎均将致残,严重影响人们的健康、工作和生活.建国以来在党和国家的关心和支持下,骨关节结核的诊治水平取得了长足进步.时至今日,由于多种原因,学科发展和被重视程度受到一定的制约,同整个医疗行业的发展不相适应.回顾过去,展望未来,我们需要重新审视骨关节结核的诊治方法,努力推进骨关节结核诊疗技术的科学发展.     

Effect of phosphorylation of MAPK and Stat3 and expression of c-fos and c-jun proteins on hepatocarcinogenesis and their clinical significance

AIM To study the effect of phosphorylation ofMAPK and Stat3 and the expression of c-fos andc-jun proteins on hepatocellular carcinogenesisand their clinical significance.METHODS SP immunohistochemistry was usedto detect the expression of p42/44~(MAPK), p-Stat3,c-fos and c-jun proteins in 55 hepatocellularcarcinomas (HCC) and their surrounding livertissues.RESULTS The positive rates and expressionlevels of p42/44~(MAPK), p-Stat3, c-fos and c-junproteins in HCCs were significantly higher thanthose in pericarcinomatous liver tissues (PCLT).A positive correlation was observed between theexpression of p42/44~(MAPK) and c-fos proteins, andbetween p-Stat3 and c-jun, but there was nosignificant correlation between P42/44~(MAPK) and p-Stat3 in HCCs and their surrounding livertissues.CONCLUSION The abnormalities of Ras/Raf/MAPK and JAKs/ Stat3 cascade reaction maycontribute to malignant transformation ofhepatocytes. Hepatocytes which are positive forp42/ 44~(MAPK), c-fos or c-jun proteins may bepotential malignant pre-cancerous cells.Activation of MAPK and Stat3 proteins may be anearly event in hepatocellular carcinogenesis.     

Replication and Inhibitors of Enteroviruses and Parechoviruses

The Enterovirus (EV) and Parechovirus genera of the picornavirus family include many important human pathogens, including poliovirus, rhinovirus, EV-A71, EV-D68, and human parechoviruses (HPeV). They cause a wide variety of diseases, ranging from a simple common cold to life-threatening diseases such as encephalitis and myocarditis. At the moment, no antiviral therapy is available against these viruses and it is not feasible to develop vaccines against all EVs and HPeVs due to the great number of serotypes. Therefore, a lot of effort is being invested in the development of antiviral drugs. Both viral proteins and host proteins essential for virus replication can be used as targets for virus inhibitors. As such, a good understanding of the complex process of virus replication is pivotal in the design of antiviral strategies goes hand in hand with a good understanding of the complex process of virus replication. In this review, we will give an overview of the current state of knowledge of EV and HPeV replication and how this can be inhibited by small-molecule inhibitors.     

Effect of phosphorylation of MAPK and Stat3 and expression of c-fas and c-jun proteins on hepatocarcinogenesis and their clinical significance

AIM To study the effect of phosphorylation ofMAPK and Stat3 and the expression of c-fos andc-jun proteins on hepatocellular carcinogenesisand their clinical significance.METHODS SP immunohistochemistry was usedto detect the expression of p42/44MAPK, p-Stat3,c-fos and c-jun proteins in 55 hepatocellularcarcinomas (HCC) and their surrounding livertissues.RESULTS The positive rates and expressionlevels of p42/44MAPK, p-Stat3, c-fos and c-junproteins in HCCs were significantly higher thanthose in pericarcinomatous liver tissues (PCLT).A positive correlation was observed between theexpression of p42/44MAPK and c-fos proteins, andbetween p-Stat3 and c-jun, but there was nosignificant correlation between p42/44MAPK and p-Stat3 in HCCs and their surrounding livertissues.CONCLUSION The abnormalities of Ras/Rat/MAPK and JAKs/ Stat3 cascade reaction maycontribute to malignant transformation ofhepatocytes. Hepatocytes which are positive forp42/ 44MAPK, c-fos or c-jun proteins may bepotential malignant pre-cancerous cells.Activation of MAPK and Stat3 proteins may be anearly event in hepatocellular carcinogenesis.     

心电图、心电向量图与冠状动脉造影结果对比分析

目的:通过分析心电图(Electrocardiogram,ECG)和心电向量图(Vectorcardiogram,VCG)的改变与冠脉造影（CAG）结果进行对比,探讨ECG、VCG在冠状动脉病变中的诊断价值。方法: 选择2008年1月~2009年12月临床拟诊断为冠心病患者108例,行常规ECG、VCG检查,并于1周内进行CAG,对检查结果依据各自的诊断标准进行判定,以CAG为标准诊断法,利用四格表法,计算相关评价真实性的指标并进行比较。结果: ①VCG检测的灵敏度、特异度、准确度显著高于ECG(P<0.05,P<0．01)。②ECG、VCG阳性率与冠脉病变支数组间比较:在单支病变、双支病变中,VCG阳性率明显高于ECG(P<0.05),左主干或三支病变无统计学意义;组内比较:ECG组左主干或三支病变组较单支病变、双支病变阳性率高(P<0.05,P<0.01);VCG组左主干或三支病变组较单支病变阳性率高(P<0.05);与双支病变阳性率比较无统计学意义;③ECG、VCG阳性率与冠脉病变程度组间比较:冠脉病变狭窄50%～69%的VCG阳性率明显高于ECG (P<0.05),其他两组阳性率比较无统计学意义;组内比较:ECG组冠脉病变狭窄≥90%较50%～69%、70%～89%的阳性率高(P<0.05,P<0.01); VCG组狭窄≥90%较50%～69%阳性率高（P<0.01),其他无统计学意义。结论: VCG对冠心病检测价值显著高于ECG。     

Detection and characterization of the product of hydroethidine and intracellular superoxide by HPLC and limitations of fluorescence

Here we report the structural characterization of the product formed from the reaction between hydroethidine (HE) and superoxide (O(2)(.-)). By using mass spectral and NMR techniques, the chemical structure of this product was determined as 2-hydroxyethidium (2-OH-E(+)). By using an authentic standard, we developed an HPLC approach to detect and quantitate the reaction product of HE and O(2)(.-) formed in bovine aortic endothelial cells after treatment with menadione or antimycin A to induce intracellular reactive oxygen species. Concomitantly, we used a spin trap, 5-tert-butoxycarbonyl-5-methyl-1-pyrroline N-oxide (BMPO), to detect and identify the structure of reactive oxygen species formed. BMPO trapped the O(2)(.-) that formed extracellularly and was detected as the BMPO-OH adduct during use of the EPR technique. BMPO, being cell-permeable, inhibited the intracellular formation of 2-OH-E(+). However, the intracellular BMPO spin adduct was not detected. The definitive characterization of the reaction product of O(2)(.-) with HE described here forms the basis of an unambiguous assay for intracellular detection and quantitation of O(2)(.-). Analysis of the fluorescence characteristics of ethidium (E(+)) and 2-OH-E(+) strongly suggests that the currently available fluorescence methodology is not suitable for quantitating intracellular O(2)(.-). We conclude that the HPLC/fluorescence assay using HE as a probe is more suitable [corrected] for detecting intracellular O(2)(.-).     

大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养和外源基因的导入

目的探讨绿色荧光蛋白基因转染骨髓间质干细胞的可行性。方法采用F icoll-PaqueTMP lus淋巴细胞分离液,根据细胞密度梯度原理,分离大鼠骨髓间充质干细胞(rM SC s)并进行体外原代培养和传代扩增,倒置相差显微镜观察细胞生长情况,免疫细胞化学法对其初步鉴定。流式细胞仪分析转染效率。结果原代和传代培养的细胞呈现梭形外观,具有较强的生长增殖能力;细胞均一表达CD44、CD54、CD106、CD29抗原。电穿孔法转染rM SC s转染率为32.8%±3%。结论采用比重为1.077 g/L的F icoll-PaqueTMP lus能分离获得大鼠骨髓间充质干细胞,经原代培养和传代培养能够迅速扩增。电穿孔法具有较高的介导外源基因表达于rM SC s的效率。     

Overweight and Obesity and Progression of ADPKD

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医源性消化道出血常见病因及其防治

目的分析医源性消化道出血的常见病因,并探讨防治措施。方法就临床所见的69例医源性消化道出血进行分析。结果医源性消化道出血分布于临床各科室,病因各不相同,但以外科手术、外伤、脑血管意外、。肾功能衰竭、呼吸功能衰竭、激素治疗、阿司匹林治疗等为主,临床上多以黑便为主要症状;对于已发生的医源性消化道出血,及时予制酸剂和胃黏膜保护剂治疗,能及时止血,大出血时经积极止血及抗休克治疗,甚至内镜治疗效果良好。结论医源性消化道出血各个临床科室均常见,病因各异,经积极、合理的治疗多预后良好。