德氮吡格对人肝癌细胞株QGY-7701基因表达的影响

目的研究德氮吡格(TNBG)对人肝癌细胞株QGY-7701基因表达的影响,探讨其抗肿瘤作用的分子机制.方法采用基因芯片检测德氮吡格处理人肝癌细胞株QGY-7701前后mRNA的改变情况.结果基因芯片筛选出差异表达基因共1 200条,尤以脂代谢相关基因变化最显著:脂肪合成有关的10条基因表达上调,脂肪分解有关的3条基因和脂肪转移有关的1条基因表达下调.结论德氮吡格的抗肿瘤效应可能是通过干扰细胞的脂代谢来实现的.     

印迹基因SGCE在原发性肝细胞癌中的表达及其意义

目的 探讨印迹基因SGCE在原发性肝细胞癌中的表达及其意义.方法 构建肝癌组织的基因表达谱文库,并对肝癌和正常肝脏组织基因表达谱的数据进行比较分析,寻找差异表达基因.收集临床组织样本,应用荧光定量PCR方法,检测肝癌和相应癌旁组织中SGCE和PEG10基因的表达水平.结果 基因表达谱数据提示,印迹基因SGCE的表达水平...     

以基因芯片技术研究Kkay小鼠2型糖尿病相关基因

目的以基因芯片技术研究Kkay2型糖尿病小鼠的差异表达基因。方法以包含8192条小鼠的cDNA基因表达谱芯片研究Kkay2型糖尿病小鼠肝脏的基因表达谱。结果共筛选出差异表达基因154条,包括全长基因68条,表达序列标识(EST)86条;其中40条基因表达增加,114条表达降低。结论多数已知功能基因的表达异常与以往的研究结论是一致的;cDNA基因芯片技术能够高通量分析糖尿病相关基因。     

人脐静脉内皮细胞脂多糖刺激后上调基因表达谱的分析

目的 对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)受脂多糖(LPS)刺激后上调基因表达谱进行筛选及分析。方法 以受LPS刺激HUVEC为实验方，末刺激别HUVEC为驱使方，进行抑制消减杂交(SSH)建立消减cDNA文库，经菌落原位斑点杂交筛选文库后将阳性克隆测序和同源性分析，并用RT-PCR验证新的cDNA序列。结果 共获得25条上调表达的基因，分别与炎症反应、细胞骨架重构、细胞生长和凋亡、胞内信号转导相关，并克隆到3条新基因表达序列标签(EST)，RT-PCR验证了这些新EST序列只在LPS刺激的内皮细胞中表达。结论 抑制消减杂交有效地克隆了人脐静脉内皮细胞LPS刺激后上调表达基因，有助于阐明LPS直接激活血管内皮细胞的分子机制。     

人类肺癌转移相关基因的筛选

目的:应用基因芯片研究人高、低转移肺巨细胞癌细胞株95-D和95-C的基因表达谱的差异,并筛选肺癌转移相关基因。方法:分别提取并纯化两细胞株的mRNA,运用基因芯片技术得到95-D和95-C细胞的差异表达基因谱。用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对部分有差异表达的基因进行分析验证。结果:在95-D和95-C细胞中有表达差异2倍以上的基因共389条,其中表达上调的121条,表达下调的268条。RT-PCR的验证结果与芯片的筛查结果基本相符。结论:人高、低转移肺巨细胞癌细胞株95-D和95-C在基因表达谱上存在显著差异,这种差异表达的意义有待进一步研究。     

表达谱基因芯片筛选大隐静脉曲张致病相关基因的初步研究

目的:运用基因芯片技术研究曲张大隐静脉基因表达谱的变化.方法:选取原发性大隐静脉曲张病人隐-股交界瓣膜区静脉6条,取6条正常静脉作对照.提取血管组织总RNA,纯化mRNA后逆转录制备目标序列,应用含有4096种人类基因cDNA的表达谱芯片进行差异表达谱分析.结果:在原发性大隐静脉曲张的基因表达谱中差异表达基因共有168条,上调基因96条,下调基因72条,共存性差异表达基因39条,其中上调基因28条,下调基因11条.差异表达基因中有细胞凋亡相关基因、原癌基因和抑癌基因、细胞信号和传递蛋白基因等多种基因.这些基因可能与原发性大隐静脉曲张的发病机制有关.结论:采用基因芯片技术筛选大隐静脉曲张的致病相关基因,可能为其病因和发病机制的研究提供新思路.     

原发性肝癌组织中陷井受体3基因表达与扩增的临床意义

目的　观察原发性肝癌组织中陷井受体 3(DcR3)基因的表达和扩增 ,探讨该基因在肝癌组织中过度表达的原因 ,分析临床病理学因素在肝癌DcR3基因表达和扩增中的作用。方法　对4 8例病理学证实的原发性肝癌患者的组织 ,利用RT -PCR检测癌组织及癌旁组织DcR3基因mRNA表达 ,荧光定量PCR检测该基因的扩增倍数 ,统计分析肝癌组织中DcR3基因表达与扩增的相关性 ,比较不同临床病理学类型肝癌中该基因表达及扩增的差异。结果　 4 8例肝癌组织中DcR3基因mRNA阳性表达 2 9例 ,阳性率为 6 0 4 % ;癌旁组织无阳性表达。mRNA表达与肿瘤大小、临床分期及肿瘤的浸润和转移有关 (P <0 0 5 )。mRNA阳性表达组的基因扩增倍数为 1 5 3± 0 82 ,阴性组为 0 75± 0 33,其差异有显著意义 (P <0 0 1)。 4 8例患者的DcR3基因扩增倍数为 0 18～ 3 86 ,平均值为 1 2 2± 0 77,扩增倍数超过 2的患者共 7例 ,占 14 6 %。不同扩增倍数肝癌患者该基因mRNA的表达差异有显著意义 (P <0 0 1) ;不同临床病理学特征肝癌间DcR3基因的扩增倍数差异无显著意义 (P >0 0 5 )。序列分析发现其mRNA序列与源序列有 3个碱基改变。结论　 (1)原发性肝癌组织中存在DcR3基因的高表达 ,对应的癌旁组织中未见表达 ;(2 )原发性肝癌组织中存在DcR3基     

hHGF调控肝纤维化信号转导途径研究

目的应用寡聚核苷酸基因表达谱芯片研究人肝细胞生长因子(hHGF)转染肝癌细胞系后基因表达谱的差异,分析hHGF抗肝纤维化的信号转导途径。方法应用包含20000条人类全长基因的寡聚核苷酸芯片ImaGene3.0检测hHGF转染的肝癌细胞系基因表达谱差异,并选择其中参与肝纤维化过程的存在表达上调基因[信号转导和转录激活因子1(STAT1)和丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)]用RT-PCR方法进行验证分析。结果基因芯片筛选出存在差异表达的基因,其中包括转录因子、细胞周期素、细胞因子相关蛋白、糖脂类物质代谢相关酶及细胞信号转导相关因子等,RT-PCR验证参与肝纤维化过程中的几种存在表达差异的基因,其中STAT1和MAPK1表达明显上调,与基因芯片分析结果一致。结论hHGF转染肝癌细胞系存在基因表达差异,可能影响细胞周期的调控、物质代谢相关过程及细胞信号转导系统,hHGF可能通过激活JAK/STAT通路和MAPK通路发挥其抗肝纤维化作用。     

多罗清泰颗粒对人肝癌细胞株信号转导基因表达的影响

目的观察多罗清泰颗粒对人肝癌细胞株SMMC-7721信号转导基因表达的影响。方法体内抑瘤实验研究多罗清泰颗粒对小鼠肝癌移植瘤生长的影响;采用中药血清药理学方法和基因芯片技术,分析多罗清泰含药血清对人肝癌细胞株SMMC-7721信号转导基因表达的影响。结果多罗清泰颗粒能显著抑制小鼠肝癌移植瘤生长,抑制率为63%~67.8%。多罗清泰颗粒对所检测的99条信号转导基因中的68条基因表达具有显著影响,占所测基因的69%。其中,上调的基因为42条,下调的基因为36条。在多罗清泰颗粒小剂量处理组和大剂量处理组之间,SMMC-7721细胞信号转导基因表达则存在相当大的差异。结论多罗清泰颗粒能显著抑制肝癌细胞的生长,显著影响肝癌细胞信号转导基因的表达。     

乙型肝炎病毒相关肝癌血清差异表达蛋白的筛选、鉴定及其诊断价值

目的:筛选、鉴定乙型肝炎病毒(HBV)相关肝癌的血清差异表达蛋白,探讨其可能的早期诊断价值.方法:采用蛋白芯片及表面增强激光解析电离飞行时间质谱(surface-enhanced laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术对正常人、HBV相关肝炎、肝硬化患者及原发性肝癌患者术前血清分别进行检测,筛选肝癌血清差异表达蛋白;通过离子交换柱分离纯化其中表达差异最明显的蛋白,并进行质谱鉴定.根据筛选结果,建立肝癌诊断决策树模型,评价其诊断肝癌的准确性和敏感度.结果:与正常组相比,肝癌组有44个差异蛋白质波峰(P＜0.05),其中21个上调,23个下调;与肝硬化组相比,肝癌组有51个差异蛋白质波峰(P＜0.05),其中47个上调,4个下调.质荷比为5 805的蛋白质表达在正常人群＜慢性肝炎组＜肝硬化组＜肝癌组,在肝癌组中表达最高,差异具有统计学意义(P＜0.01);对其酶解消化产物进行肽指纹谱(PMF)鉴定发现其中有2条肽段序列与硫酸软骨素合酶Ⅱ部分序列相匹配.根据筛选的差异表达蛋白成功建立肝癌诊断决策树模型,其判断肝癌的准确率为94.82%[(23 32)/58]、敏感性88.46%(23/26)、特异性100%(32/32).结论:成功筛选HBV相关肝癌血清差异表达蛋白,其中差异最显著蛋白(质荷比为5 805)酶解产物中有2条肽段与硫酸软骨素合酶Ⅱ部分序列相匹配;根据筛选结果建立的肝癌诊断决策树模型有助于早期诊断HBV相关肝癌.     

A cDNA located on chromosome 7q32 shows loss of expression in epithelial cell line of nasopharyngeal carcinoma

ｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅｇｅｎｏｔｙｐｅｓｏｆｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅｍａｒｋｅｒｓｏｎ 7ｑ32ｉｎＤＮＡｆｒｏｍ 2 4ｂｉｏｐｓｉｅｓｏｆｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａａｎｄｍａｔｃｈｅｄｎｏｒｍａｌｂｌｏｏｄｃｅｌｌｓｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆ 2 0ｅｘｐｒｅｓｓｅｄｓｅｑｕｅｎｃｅｔａｇｓ (ＥＳＴｓ)ｏｎ 7ｑ32ｂｅｔｗｅｅｎｈｕｍａｎｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ 1(ＨＮＥ1)ａｎ…     

纺锤体检查点蛋白BubR1在肝癌组织和肝癌细胞株HepG2中的表达

目的观察纺锤体检查点蛋白BubR1在人类肝癌组织、正常肝组织以及肝癌细胞系（HepG2）、正常肝细胞系（LO2）有丝分裂期表达水平的差异,以探讨BubR1蛋白在肝癌发生中的作用。方法用荧光定量PCR和Westernblot检测BubRl基因在肝癌组织、正常肝组织,以及在2种细胞中用Nocodazole处理前后的mRNA和蛋白的表达水平。结果BubR1基因在正常组织中的表达高于肝癌组织,在Nocodazole处理前2种细胞中表达无显著差异,在处理后2种细胞中表达均增高,但在L02细胞中上调水平大于HepG2细胞。结论BubR1基因低表达可能在肝癌的发生过程中起重要作用。     

肝癌内高表达新基因的部分cDNA克隆

目的寻找人肝癌相关的基因。方法应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交技术，对表达序列标记（ＥｘｐｒｅｓｓｅｄＳｅ－ｑｕｅｎｃｅｔａｇｓ，ＥＳＴ）基因克隆进行筛选，以得到的基因片段为探针，筛选人胎肝ｃＤＮＡ文库。结果得到一个在肝癌内高表达的ＥＳＴ基因片段。进一步筛选人胎肝ｃＤＮＡ文库，得到一命名为ＦＬ６的ｃＤ－ＮＡ克隆，核苷酸序列测定表明，ＦＬ６长度为１４６４个碱基，检索最新版本ＧｅｎｅＤａｔａｂａｓｅｓ（ＥＭＢＬ９６．６），未发现同源基因。实验结果还显示该基因在胎儿各组织内有不同的表达特性。结论该基因可能与细胞的增殖、癌变过程相关。     

喉癌基因的差异表达

目的从分子水平上探讨喉癌的发病机制.方法用微阵列(Microarray)技术分析了11 431个基因在喉癌组织和其临近的正常黏膜组织表达差异,用RT-PCR技术分析所得喉癌差异表达基因中一个基因在不同类型喉癌中的表达情况.结果喉癌组织和其临近的正常黏膜组织基因表达相差3倍以上者为35个,其中上调基因8个,下调基因27个;相差5倍以上者7个,皆为下调基因;上皮膜蛋白基因-1 (The epithelial membrane 1, EMP-1)是下调基因中一个基因,EMP-1在不同类型配对喉癌中皆呈低表达,明显低于相应的正常喉黏膜组织(P<0.05).结论喉癌的发生涉及多个基因参与,微阵列技术分析喉癌差异表达基因是可靠的方法.     

与肺癌呈负相关表达的cDNA序列鉴定

目的 :通过进一步鉴定mRNA差异显示获得肺癌差异表达的cDNA序列 ,为克隆肺癌相关基因打下基础。方法 :采用逆转录酶聚合酶链反应 (RT PCR)、Northern印迹杂交和Southern印迹杂交方法检测表达序列标签 (EST)LXDD1在肺癌组织和肺癌细胞系中的表达及缺失。　结果 :RT PCR、Northern印迹杂交证实LXDD1序列在肺癌及正常肺支气管粘膜组织中表达存在差异 ,Southern 印迹杂交结果显示其在肺癌组织中未见缺失。　结论 :LXDD1在肺癌组织中表达下调 ,提示其缺失可能与肺癌的发生、发展密切相关     

肝癌细胞株HepG2与正常肝细胞株7702差异微小RNA筛选

目的：初步探讨肝癌细胞株 HepG2与正常肝细胞株7702微小 RNA（miRNA）分子表达谱的差异。方法选取肝癌细胞株 HepG2与正常肝细胞株7702样本分别作为实验组和对照组,采用高通量的 miRNA微阵列芯片技术筛选两者间差异表达的 miRNA,并运用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）验证芯片结果的可靠性（样品间变化标准以上调或者下调2倍作为判定的阈值范围）。结果在肝癌细胞株 HepG2中,上调2倍的差异表达 miRNA分子有32个,其中上调超过8倍差异表达 miRNA有12个;下调2倍的差异表达miRNA有26个,其中下调超过8倍的miRNA分子有4个（P＜0．05）,miRNA上调与下调表达率差异有统计学意义。结论肝癌细胞株 HepG2与正常肝细胞株7702的差异表达 miRNA分子可能与肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）的发生、转移以及侵袭能力相关,为进一步研究与肿瘤相关的 miRNA在肝细胞癌发病机制中的作用奠定基础。     

miR-145在肝癌中的表达和功能研究

目的 探讨miR-145在肝癌组织、HepG2细胞株和肝脏正常组织中的表达情况及其对肝癌细胞株HepG2 增殖和侵袭能力的影响.方法 运用荧光定量PCR技术检测肝癌、HepG2细胞株及肝组织中miR-145的表达量.应用MTT法检测miR-145对HepG2细胞增殖的影响,通过侵袭实验观察miR-145对细胞侵袭能力的影响.结果 肝癌组织中miR-145表达明显低于正常组织(P＜0.05).浓度为100 nmol/L的miR-145作用时间72 h时,对HepG2细胞的增殖抑制最强,侵袭实验显示100 nmol/L的miR-145 mimics处理组穿膜细胞数目明显减少,并与对照组有显著差异.结论 miR-145在癌组织中的表达明显低于正常组织;miR-145抑制肝癌细胞株HepG2的增殖和侵袭能力,其在肿瘤发生发展过程中可能担任抑癌基因的角色.     

Molecular cloning and characterization of NAG-7: a novel gene downregulated i n human nasopharyngeal carcinoma

目的　分离位于染色体 3p2 4 2 6区域中鼻咽癌新的抑瘤基因。方法　在染色体 3p2 4 2 6鼻咽癌杂合性丢失 (lossofheterogosity ,LOH)高频区 ,用RT PCR及Northern杂交检测了2 0个表达序列标记 (expressedsequencetag ,EST)在鼻咽癌细胞株HNE 1和原代培养的正常鼻咽上皮细胞中的表达水平 ,并对其中一个在鼻咽癌细胞株HNE 1中表达下调的EST在 19例鼻咽癌活检组织中的表达进行了检测。用cDNA文库筛选方法获得其全长cDNA序列 ,对该序列进行了初步分析。结果　获得一个位于染色体 3p2 5 3的新基因 ,命名为NAG 7基因。该基因在 2 6 3% (5 19)的鼻咽癌活检组织中表达下调。它全长 16 6 7bp ,其开放阅读框 (openreadingframe ,ORF)编码一个含 94个氨基酸的碱性蛋白质 ,分子量为 110 2 3 87道尔顿 ,预测为一跨膜蛋白质。它含有一蛋白激酶C磷酸化位点和肉豆蔻基位点。迄今为止 ,NAG 7基因序列在基因库中未见任何同源性基因。结论　NAG 7基因是一个在鼻咽癌中表达下调的新基因 ,它的改变可能参与了鼻咽癌的发生发展     

[EN] 利用GenMAPP筛查多发性肌炎候选分子标志物

目的:筛查、鉴定多发性肌炎候选分子标志物.方法:构建多发性肌炎的差异基因表达谱.利用GenMAPP软件对多发性肌炎和正常肌肉组织基因微阵列表达谱结果进行分析,筛查其候选的分子靶标,随后运用real-time quantitative RT-PCR和蛋白印迹方法进行验证.结果:在17 000个基因中,与正常肌肉组织相比、在多发性肌炎中发生3倍以上差异表达的基因共有119个,其中8个为EST.表达差异的已知基因共111个,64个表达上调、47个表达下调.这些基因分别与细胞增殖、信号转导、细胞周期调节、基因转录及DNA损伤修复等相关.经real-time quantitative RT-PCR和蛋白印迹验证发现NF-κB,TNF-α以及IL-1α等基因在多发性肌炎中表达明显上调.结论:多发性肌炎的发生发展存在多基因表达调控的改变,其中NF-κB,TNF-α以及IL-1α等是其候选的分子标志物.     

E2F-1过表达对胃癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨E2F-1对胃癌细胞生物学行为影响的分子机制.方法 分别抽取转染E2F-1的胃癌MGC-803细胞和未转染E2F-1的胃癌MGC-803细胞的总RNA.纯化mRNA,逆转录合成cDNA标记后,与22K人类基因表达谱芯片进行杂交,扫描后筛选出表达差异的基因.随机选取3个差异表达基因,分别设计引物,用半定量RT-PCR检测验证.结果 在21 522条基因中,两组细胞间的差异表达基因有740条,其中上调基因405条,下调基因335条.差异基因中有73条功能信息不明.随机选取的3个差异表达基因的RT-PCR结果与基因芯片扫描结果相似,具有相同的方向性.结论 胃癌的发生发展是多基因相互作用、多种信号通路相互调节的结果.生物信息学分析显示,E2F-1基因可以通过TP53信号传导途径影响胃癌MGC-803细胞生物学行为的改变,还与众多基因的差异性表达密切相关.