免疫细胞化学灶试验检测麻疹-流行性腮腺炎-风疹三价疫苗的效力

作者应用免疫细胞化学染色灶试验分别测定麻疹、流行性腮腺炎和风疹三价疫苗(MMR)中每个疫苗的效力。用该法测定MMR中一种疫苗的效力不受其他两种疫苗影响,其结果与常规的蚀斑法和终点稀释法一致。本法避免了常规方法中在试验前必须用高效价特异抗血清中和另两利病毒的程序。作者用Vero细胞株测定麻疹和流行性腮腺炎疫苗病毒效价;用RK13细胞测风疹病毒效价。按10倍或3.16倍连续稀释疫苗病毒,取0.1ml病毒接种到生长于孔经为3.5cm的6孔细胞培养板中的单层细胞内,吸附1小时后,复盖MEM琼脂培养基。Vero细     

使用C6/36细胞培养结合RT-PCR方法来提高IgM阳性血清样本中DEN-1病毒的检测效率

巴西圣保罗大学DePaula等用登革热感染恢复期血清样本接种C6/36细胞,比较了逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和间接免疫荧光(IFA)测定1型登革(DEN-1)病毒的效率。将1∶10稀释的血清样本200μl接种到成片的C6/36细胞单层,培养7天,分别用IFA或RT-PCR测定。模拟感染C6/36细胞作阴性对照并用PBS代替血样。进行时程试验时,用1×104感染单位/ml的DEN-1病毒(NauraIsland株)接种C6/36细胞。感染24h后用IFA检测细胞的登革热病毒感染,用PCR检测细胞上清的病毒基因组,然后逐日检测1周。结果表明,用1×104感染单位/ml病毒接种C6/36细胞后,在…     

成人志愿者接种Ⅱ型登革热病毒减毒活疫苗(16681-PDK53)后的临床、免疫学和生物学应答

作者对10名成人志愿者皮下接种1ml用原代狗肾细胞传代减毒的Ⅱ型登革热病毒(DEN-2)活疫苗(16681-PDK 53株)[每ml含1.9～2.7×10~4蚀斑形成单位(PFU)]以评价疫苗的安全性、感染性和免疫原性。第1组5人,均未接种过DEN和乙型脑炎(JE)疫苗;第2组5人,未接种过DEN疫苗,但接种过JE疫苗。所有志愿者接种后均未出现体温升     

高滴度呼肠孤病毒3型的制备及滴度检测

 目的   制备高滴度呼肠孤病毒3型（reovirus 3,Reo-3）病毒液,并检测Reo-3滴度。 方法   以幼仓鼠肾细胞（BHK-21）为病毒培养基质和滴度测定细胞。将Reo-3按10⁰至10^-5感染复数（MOI）接种BHK-21,再分别用细胞病变法和蚀斑形成法检测病毒,用Karber法计算病毒滴度。 结果   BHK-21感染Reo-3后能产生明显病变。以10^-4 MOI的Reo-3接种后48 h,收获液中病毒滴度最高,细胞病变法检测为9.625 lgTCID50/ml,蚀斑形成法检测为8.671 lgPFU/ml。 结论   制备了高滴度Reo-3,为开展该病毒去除灭活研究奠定了基础。     

单独接种狂犬病疫苗后何时使用狂犬病免疫球蛋白

狂犬病病毒接触病人接种疫苗后7天内产生的中和抗体不高于0.5IU/ml,而该浓度的抗体可阻止病毒侵袭外周神经细胞从而提供保护作用.为了解疫苗接种后3～5天内注射狂犬病免疫球蛋白(RIG)对人体中和抗体应答影响,作者采用泰国红十字会推荐的暴露后皮内接种的方案(TRC-ID)进行研究,即于感染后0、3、7天分别于两个部位皮内接种0.1ml疫苗,并于28、90天分别于1个部位皮内接种0.1ml疫苗.作者将48名受试者分为3组.A组18名严重暴露者(WHO分类为Ⅲ型暴露者)在接种疫苗的同时于伤口部位注射40IU/kg的RIG.B组16名WHO分类为Ⅱ型暴露者于接种疫苗后3天肌肉注射40IU/kg的RIG.C组14名未接触病毒的志愿者于接种疫苗后5天肌肉注射40IU/kg的RIG.用快速免疫荧光灶抑制试验测定中种抗体.结果所有受试者在14～28天时中和抗体滴度均>0.5IU/ml.三组的抗体几何平均滴度(GMT)无明显差异,但第7天B组抗体GMT明显低于A组.A组受试者6个月后抗体滴度均>0.5IU/ml.但B组14人中分别有4人和1人在第90、180天时抗体滴度<0.5IU/ml.     

用蚀斑试验和免疫过氧化物酶技术测定SV_(40)病毒

文章叙述了用七天内形成蚀斑的方法测定猴病毒40(SV_(40))感染力,和用敏感而经济的间接免疫过氧化物酶技术作T抗原测定的程序。两法所用病毒为SV_(40)的小蚀斑变异株的纯化材料VA_(45-54),所用细胞WT_2是非洲绿猴肾CV_(-1)细胞系的TC7的次代克隆。过氧化物酶技术如下:在微量板上长成单层的     

绵羊、兔和豚鼠对梭状芽胞杆菌多联菌苗的免疫应答比较

作者用D型产气荚膜杆菌、B型诺维氏梭菌、破伤风梭菌的纯化类毒素加氢氧化铝制成多联菌苗.每批菌苗接种10只豚鼠和/或10只新西兰白兔及5只绵羊.每只动物皮下接种2ml菌苗,4周后接种第2次,羊在接种前及所有动物在第2次接种后两周采血,分离血清,置4℃保存.所有试验血清用小鼠中和试验测定抗毒素水平.作者研究了梭状芽胞杆菌多联菌苗各个不同抗原成分的免疫原性.B型诺维氏梭菌:接种16批菌苗,绵羊产生的免疫应答均比兔高;绵羊对5批菌苗产生的免疫应答比豚鼠     

表达HIV包膜糖蛋白的重组牛痘病毒疫苗的安全性和诱生的免疫应答

作者将表达人类免疫缺陷症病毒gp160包膜基因的重组牛痘病毒(HIVAC-1e)接种志愿者,观察其安全性和免疫原性。35名健康男性,血清HIV抗体阴性。其中31人曾接种牛痘病毒(vac-p),4人无种痘史(vac-n)。vac-p组于0天接种HIVAC-1e(16人)或牛痘病毒NY株(15)人,浓度为10~7、10~8或10~9蚀斑形成单位(PFU)/ml,56天以10~8或10~9PFU/ml加强。vac-n组,0天和56天分别接种10~6和10~7PFU/ml HIVAC-1e或牛痘病毒(各2人)。所有疫苗均在上臂三角肌区作标准皮内划痕接种。初次接种后,病毒从接种部位排     

脑脊髓炎疫苗:Vero细胞培养取代原代鸭胚细胞培养

原代鸭胚(PDE)细胞培养是当前东方马脑脊髓炎(EEE)和西方马脑脊髓炎(WEE)疫苗的血清学效力评价和EEE/WEE血清学诊断的优选系统。许多脊椎动物和无脊椎动物细胞支持EEE和WEE病毒生长,但PDE细胞单层对EEE/WEE感染异常敏感,证实感染后有肉眼可见的蚀斑。Tamoglia等曾将一种标准的蚀斑减少血清中和试验     

纯化的融合蛋白疫苗在RSV流行季节保护囊性纤维变性患儿抵抗下呼吸道疾病的效果

本文作者评价了经离子交换层析法纯化的呼吸道合胞病毒(RSV)融合蛋白(PFP-2)疫苗在RSV血清阳性的囊性纤维变性(CF)患儿中的免疫原性和安全性,并评价了PFP-2免疫接种对RSV流行季节发生RSV感染和疾病的影响.流行开始时对34名1.6～8岁的RSV血清阳性CF患儿童接随机双百法分别肌肉接种1剂0.5ml PFP-2疫苗或生理盐水,每组各17人,平均年龄分别为4.5岁和5.8岁.每天记录接种后局部和全身反应,共7天.每周调查儿童急性呼吸道疾病并取患儿鼻咽洗液/咽拭子标本作RSV分离和快速抗原检测.取接种前、接种后1个月和RSV流行结束时的血清.测定RSV/A和RSV/B微量中和抗体效价.用ELISA测定血清抗F蛋     

一项冷重组乙型流感活疫苗对健康志愿者的反应原性和免疫原性的对照研究

作者用乙型流感病毒减毒株B/安阿伯/I /66与Tecumseh/10/77SC克隆,制成重组病毒RB77,在鸡胚中制备出冷重组乙型流感活疫苗。在120名健康志愿者中进行了随机双盲安慰剂对照剂量-反应试验,以研究RB77的安全性、耐受性和免疫原性。志愿者年龄为19～35岁。随机分为4组,每组30人。以双盲法鼻腔接种疫苗,每人每个鼻腔接种0.25ml。第1组接种的病毒量为10~(5.7)半数卵感染剂量(EID_(50))/ml;第2组为10~(7.25)EID_(50)/ml;第3组为10~(7.9)EID_(50)/ml。安慰剂组接受含0.1%白蛋白的PBS完全培     

哺乳动物细胞培养的新型流感疫苗的安全性和免疫原性[英]

试验用疫苗为双价流感A/B裂解病毒颗粒疫苗,由在MDCK细胞克隆的细胞系传代的病毒制备而成,含A/得克萨斯/36/91(类HINI)和B/哈尔滨/7/94病毒株。对照疫苗为在鸡胚传代的裂解病毒颗粒,其病毒株与试验疫苗相同。接种对象为18～50岁健康成人志愿者。按随机、双育法进行试验。将接种对象分为两组,分别接种细胞培养和鸡胚传代的流感疫苗,在三角肌肌注流感疫苗0.5ml。在接种前后分别检测血凝抑制抗体。在接种后观察不良反应。     

水痘疫苗

作者从1971年着手研制水痘活疫苗。用人胚肺细胞分离水痘病毒,经低温(34℃)传代后,在豚鼠胚胎细胞传代减毒。制成活疫苗经安全试验后,对健康儿童进行接种,无副作用,用约2000个蚀斑形成单位(PFU)剂量的疫苗病毒接种,抗体反应良好。随后对采用类固醇治疗的肾病患儿23人行疫苗     

CHO细胞无血清培养研究

用含血清的常规培养基和无血清培养基(CHO-S-SFMⅡ)11(V/V)悬浮细胞,接种量为3×105/T/ml,在37℃,8%CO2培养箱中培养,使细胞密度达5×105个/ml,然后用等体积的CHOSFMⅡ将细胞稀释到3×105个/ml,继续培养,重复上述操作,直到血清浓度降为0.1%后,用完全无血清培养基培养至3×106个/ml,再以3×105个/ml接种,传50代,细胞增生活跃,状态良好,用MTT比色法测定重组人促红细胞生成素(rHuEPO)表达水平与常规含血清培养基相比,表达量未见明显差异.     

接种狂犬病疫苗后狗体内的抗体效价

作者用犬肾细胞系培养的Flury高鸡胚传代狂犬病病毒株制成的疫苗,对59只于1～2年前接种过狂犬病疫苗的狗进行加强接种,在接种疫苗前和接种后3周采集血样.30只3～4月龄的幼犬于同一时间接受初次疫苗接种,并按上法于接种前后采集血样.分离血清后贮藏于-20℃,于试验前在56℃加热灭活30分钟.每只狗的血清样品用改良的微量快速荧光灶抑制试验(RFFIT)测定狂犬病病毒中和抗体.所用病毒是从曾用蚀斑纯化的狂犬病病毒ERA株诱导的ERA-H_(pp)株.     

MMR三联疫苗效价试验方法的改进

麻疹-腮腺炎-风疹三联疫苗(MMR)的效价测定采用免疫细胞化学灶试验。其中麻疹与腮腺炎的病毒滴定是在Vero细胞上进行,风疹病毒滴定使用RK13细胞。由于RK13细胞中腮腺炎病毒能抑制风疹病毒病变灶形成。其原因是腮腺炎病毒诱导了干扰素的作用,如果在接种物中加入适量抗腮腺炎病毒血清则可消除这种干扰。在直径为3.5cm的6孔细胞培养板上分别制备Vero和RK13单层细胞,MMR三联疫苗以含2%小牛血清的Eagle液连续5倍稀释,测定麻疹与腮腺炎时接种Vero细胞,每孔加0.1ml。置二氧化碳孵箱37℃培养7天。在RK13细胞上滴定风疹病毒时首     

两性霉素B在5%葡萄糖注射液中的稳定性

本文从化学和直观方面分析了两性霉素B的5%葡萄糖注射液在冷藏条件下的稳定性。在无菌条件下,配制含两性霉素B0.1mg/ml和0.25mg/ml的5%葡萄糖注射液各3份,以聚氯乙烯(PVC)袋装。配完后,立即从每一注射液中取5ml至收集管中,共取6份。每一注射液的3份样品迅速冷藏供以后HPLC法测定稳定性用,剩余3份立即测定     

免疫荧光法和酶联免疫吸附试验对汉坦病毒感染的血清学测定的比较

作者用3种酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接免疫荧光法(IFA)检测102份人血清样品中的汉坦病毒(HV)抗体,并用蛋白印迹法对各种结果进行确证.细胞ELISA:将γ射线照射的HV感染或未感染的VeroE6细胞悬液(10~6细胞/ml)加入微滴板中,用含5%醋酸的乙醇固定,待用.使用时,加入50μl人血清样品,置37℃     

水痘活疫苗免疫护士

作者对34名18～21岁实习护士上臂皮下接种0.5ml OKA-RIT株水痘减毒活疫苗.分别于免疫前及免疫后1～2月、5～8月、11～14月和32～40月采血样.用补体结合试验(CFT)、ELISA和免疫荧光试验(IFT)测定抗体.以体外对水痘带状疱疹病毒(VZV)的淋巴细胞转化试验测定细胞免疫(CMI).并将咽拭液与人胎肺纤维细胞共同培养作病毒分离.接种后有5人出现轻微副反应.2人发生水痘,但无带状疱疹病例,病毒分离均阴性.IFT测定结果,接种后1～2月血清IgG阳转率为88%:5～8月为94%:11～14月仍为94%:32～40月下降为64%.接种后1～2月     

日本麻疹疫苗效力测定中的蚀斑形成试验参数

本文作者用蚀斑形成试验对麻疹疫苗效力进行了研究,发现病毒接种量和不同病毒株对培养温度的敏感程度是影响病毒滴度的关键.作者分别用不同来源的Vero细胞和四种麻疹疫苗(AIK-C、Schwarz FF8、CAM70和TD97)及日本“内部”标准疫苗T-1988.8进行蚀斑试验.此外,分别用不同孔径的培养板进行比较.将疫苗病毒作10倍倍比稀释,室温下吸附60分钟,加含琼脂的培养基覆盖,分别在33℃、35℃和37℃于5%CO_2条件下,倒置培育5～7天后加含中性红的琼脂培养基覆盖并计数,观察到第13天,每天计算蚀斑形成单位(PFU)/ml.