糖尿病大鼠视网膜神经细胞凋亡及氨基胍的作用

目的：观察糖尿病大鼠视网膜组织学变化、神经细胞凋亡现象以及氨基胍的治疗作用。 方法：实验于2003—09／2004—06在青岛大学医学院附属医院眼科病理室进行．①取健康成年Wistar大鼠60只单纯随机分为正常对照组和糖尿病组各30只。糖尿病组30只大鼠一次性左下腹腔内注射60mg／kg链脲佐菌素建立糖尿病模型，有24只大鼠模型建立成功并随机均分为糖尿病未治疗组和氨基胍治疗组（造模后氨基胍按1g/L加入大鼠饮水中，给药量150mg／（kg&;#183;d））。②于饲养1，3，6个月时，随机选取糖尿病未治疗组、氨基胍治疗组各4只和对照组大鼠10只处死，光镜下观察视网膜厚度和神经节细胞数目变化。以TUNEL法荧光显微镜下观察进行视网膜神经细胞凋亡的原位检测。 结果：54只大鼠进入结果分析，①视网膜厚度：饲养1个月时3组差异不显著（P〉0．05），饲养3，6个月时，糖尿病未治疗组和氨基胍治疗组视网膜变薄，但氨基胍治疗组好于糖尿病未治疗组（P〈0．001）。②神经节细胞数目：饲养1个月时3组差异不显著（P〉0．05），饲养3，6个月时，糖尿病未治疗组和氨基胍治疗组细胞数目少．但氨基胍治疗组好于糖尿病未治疗组[3个月：（273．88&;#177;1．28），（261．83&;#177;1．34）个／mm^2；6个月：（231．95&;#177;1.36），（207．40&;#177;1．57）个／mm^2，P〈0．001]。③TUNEL阳性细胞数：饲养1个月时3组未发现有凋亡细胞的阳性表达。饲养3，6个月时，糖尿病未治疗组和氨基胍治疗组阳性细胞数增加，但氨基胍治疗组少于糖尿病未治疗组[3个月：（60．13&;#177;0．40）．（67．95&;#177;0．50）个／mm^2；6个月：（105．15&;#177;0．43）．（125．08&;#177;0．27）个／mm^2；P〈0．001]。 结论：早期糖尿病大鼠视网膜出现光镜组织学改变，细胞凋亡是糖尿病大鼠视网膜病变神经细胞丧失的主要方式，氨基胍可抑制神经细胞的凋亡。     

还原型谷胱甘肽对糖尿病大鼠肾组织非酶糖基化影响的试验研究

目的探讨还原型谷胱甘肽对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其可能机制。方法以链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型，给予还原型谷胱甘肽、盐酸氨基胍单独或联合治疗8周，以荧光分光光度计测定肾皮质荧光值即糖基化终末产物（AGEs）含量，行肾组织PAS染色测定平均肾小球截面积（MGAl及体积（MGV），放免法测定尿白蛋白排泄率（UAER），同时检测糖化血红蛋白（HbAIc）、血清肌酐清除率（Cer）、肾重／体重比值、血糖水平等。结果8周时，各组糖尿病大鼠Ccr、UAER、MGA、MGV、肾重／体重比值、AGEs含量均较空白对照组明显增加（P〈0．05或P〈0．01）。还原型谷胱苷肽、盐酸氨基胍单独或联合治疗组Cor、UAER、MGA、MGV、肾重／体重比值、AGEs含量均较糖尿瘸对照组明显降低（P〈0．05或P〈0．01）。结论还原型谷胱苷肽及盐酸氨基胍均可减少肾组织糖基化终末产物生成，对糖尿病大鼠肾脏具保护作用。     

诱导型一氧化氮合酶对大鼠心肌梗死后心室重构的影响

目的：应用诱导型一氧化氮合酶特异性阻滞剂氨基胍阻滞急性心肌梗死后大鼠诱导型一氧化氮合酶的表达，分析其诱发的大量一氧化氮在心肌梗死后心室重构中的作用。 方法：实验于2002-07／2003—05在郑州大学医学院药理实验室完成。选择Wistar大鼠60只，随机分为3组，即盐酸氨基胍组、急性心肌梗死模型组及空白对照组，每组20只。①盐酸氨基胍组，即急性心肌梗死模型大鼠（异丙肾上腺素剂量为80mg／kg，腹腔注射）应用氨基胍600mg／（kg&;#183;d）腹腔注射。②急性心肌梗死模型组，即急性心肌梗死模型大鼠用同等容量的生理盐水腹腔注射。③空白对照组，即正常大鼠腹腔注射同等容量（10mL／kg）生理盐水。各组给药时间均为4周。给药结束后，采用硝酸还原法测定血清一氧化氮、结构型一氧化氮合酶以及诱导型一氧化氮合酶的表达情况；记录左心室内压及左心室压力最大上升、下降速率等血液动力学指标；测定组织学指标包括左心室／体质量比及心肌细胞直径。 结果：60只大鼠全部进入结果分析，无脱失。①急性心肌梗死模型组大鼠诱导型一氧化氮合酶及一氧化氮表达水平显著高于盐酸氨基胍组和空白对照组（F=56．231，32．560，P〈0．01）。②急性心肌梗死模型组大鼠的左心室／体质量比值显著高于盐酸氨基弧组、空白对照组[（2．62&;#177;0．035，2．42&;#177;0．038，2．42&;#177;0．039）mg／g（F=47．842，P〈0．01）]。急性心肌梗死模型组大鼠的心肌细胞直径显著大于盐酸氨基胍组、空白对照组[（10．54&;#177;0．56，7．41&;#177;0.33，7．26&;#177;0．37）μm（F=31．140，P〈0．01）]。 结论：诱导型一氧化氮合酶在急性心肌梗死后高表达及诱发大量一氧化氮促进心室重构的发生。     

孤束核微量注射一氧化氮合酶抑制剂对应激性大鼠胃黏膜损伤的影响

目的：观察孤束核微量注射选择性诱导型一氧化氮合酶抑制剂氨基胍和非选择性一氧化氮合酶抑制剂N^G硝基-L-精氨酸甲酯对应激大鼠胃黏膜损伤的影响。方法：实验于2005—09／12在咸宁学院医学院生理教研室完成。①选用70只雄性SD大鼠，2-3月龄。按随机抽签法将大鼠分为5组：正常对照组、模型组、氨基胍组、精氨酸甲酯组、生理盐水组，每组14只。正常对照组正常饲养。模型组大鼠造成应激性溃疡模型：禁食24h，禁水2h后，乙醚轻度麻醉，四肢及头部束缚于木板上，待大鼠清醒后，将木板垂直浸入23℃水中，水面平胸骨剑突处，浸水6h。生理盐水组、氨基胍组、精氨酸甲酯组大鼠于浸水应激前30min通过脑立体定位仪分别进行孤束核微量注射生理盐水0．2μL，氨基胍2μg（0．2μL），N^G硝基-L-精氨酸甲酯2μg（0．2μL），2种药品均为Sigma公司产品。②大鼠浸水6h后，应用LDF-3型激光多普勒血流仪测量胃黏膜血流量，参照Guth标准计算胃溃疡指数（数值越大，损伤越严重）．以精密pH试纸和NaOH溶液滴定法分别测定胃液pH、胃液量及胃液酸度。⑧组间计量资料差异比较采用t检验。结果：大鼠70只均进入结果分析。①胃溃疡指数：氨基胍组明显低于生理盐水组和模型组[（21．1&;#177;4．2），（34．9&;#177;5．1），（35．2&;#177;4．7）分，P〈0．011；精氨酸甲酯组与生理盐水组和模型组比较，差异不明显（P〉0．05）。②胃黏膜血流量：模型组和生理盐水组明显低于正常对照组和氨基胍组[（158．2&;#177;39．4），（161．7&;#177;38．6），（312．6&;#177;34．5），（251．3&;#177;39．1）mV，P〈0．011；精氨酸甲酯组高于模型组和生理盐水组，但差异不明显（P〉0．05）。③胃液量和胃液酸度：模型组和生理盐水组明显多于或高于正常对照组和氨基胍组（P〈0．05-0．01），精氨酸甲酯组与模型组和生理盐水组相近（P〉0．05）。④pH值：模型组和生理盐水组明显低于正常对照组和氨基胍组（1．24&;#177;0．27，1．32&;#177;0．28，2．34&;#177;0．23，2．25&;#177;0．25,P〈0．05-0．01），精氨酸甲酯组与模型组和生理盐水组相近（P〉0．05）。结论：孤束核微量注射一氧化氮合酶抑制剂对应激大鼠胃黏膜损伤有保护作用，氨基胍的作用效果优于NL硝基-L-精氨酸甲酯。     

2型糖尿病视网膜病患者血清C反应蛋白与肿瘤坏死因子α的检测及其意义

目的：探讨血清炎症因子C反应蛋白（CRP）与肿瘤坏死因子α（TNFα）在2型糖尿病视网膜病变（DR）中的变化。方法：2型糖尿病（DM）患者98例，其中2型DM无视网膜病变38例（DM组），背景型视网膜病变32例（DR1组），增殖型糖尿病视网膜病变（DR2）组28例，健康对照（NC）组30例，用酶联免疫吸附法测定血清CRP与TNFα水平。结果：DM组血清CRP（54．9±29．8）mg／L，TNFα（159．0±76．0）mg／L，均较健康对照组升高（P〈0．05），DR1、DR2两组的血清CRP、TNFα均较NC组及DM组升高（P〈0．01），DR2组的血清CRP均较DR1组升高（P〈0．05）。结论：CRP及TNFα在2型DM及DR的发生、发展中起重要作用。     

核因子-κB对糖尿病大鼠肾组织单核细胞趋化蛋白-1与细胞间黏附分子-1表达的影响

目的：探讨核因子-κB（NF．κB）对糖尿病大鼠肾组织单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）表达的影响，以及抑制其表达对肾脏的保护作用。方法：30只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组（NC组）、糖尿病模型组（DM组）、NF-κB抑制剂吡咯烷二硫基甲酸酯干预组（DP组），用链脲佐茵素诱导糖尿病大鼠模型。于8周末检测血糖、糖化血红蛋白、肾重指数及尿白蛋白排泄率。应用免疫组织化学染色技术检测肾组织NF-κB、MCP-1以及ICAM-1的表达。结果：（1）与NC组相比，DM组大鼠肾重指数、尿白蛋白排泄率显著增高。DP组也有增高但显著低于DM组（均P〈0.01）；（2）DM组大鼠肾组织NF-κB、MCP-1以及ICAM-1的表达显著高于NC组，DP组的表达显著低于DM组而高于NC组（均P〈0．01）；（3）NF．κB的表达与MCP-1、ICAM-1、尿白蛋白排泄率、肾重指数呈明显正相关（r=0．885，P〈0，01；r=0．861，P〈0．01；r=0．796。P〈0．01；r=0．457。P〈0．01）。结论：糖尿病大鼠肾组织中NF-κB表达明显增加，抑制其活性可减少MCP-1、ICAM-1的表达，减轻单核／巨噬细胞的浸润。延缓糖尿病肾病的发展。     

慢性应激大鼠结肠黏膜形态学变化及氨基胍的保护作用

目的：分析慢性应激对大鼠结肠黏膜组织学、超微结构及杯状细胞黏蛋白MUC2表达的影响。方法：实验于2004-04／2005-04在武汉大学人民医院和宜昌市中心人民医院完成。选择健康成年Wistar大鼠36只，随机分为应激组、对照组和氨基胍组，每组12只。应激组和氨基胍组每天置于束缚笼内2h，氨基胍组同时给予氨基胍150mg／（kg&;#183;d）腹腔注射进行干预，对照组自由活动。持续14d后处死动物，病理组织切片分别观察各组结肠黏膜组织学及上皮细胞超微结构的变化，用免疫组化方法观察结肠杯状细胞内黏蛋白MUC2的蛋白表达情况，并用硝酸还原酶法测定结肠黏膜组织一氧化氮、分泌型一氧化氮合酶的含量。结果：36只大鼠在实验中无死亡，全部进入结果分析。①慢性应激大鼠结肠黏膜炎性细胞数目增加，应激组中性粒细胞、单核细胞明显多于对照组[（71.33&;#177;9．84），（30．58&;#177;3．82）／mm^2，P〈0．01]；[（49．58&;#177;6．21），（26．33&;#177;4．56）／mm^2，P〈0．01]；使用氨基胍组结肠黏膜中性粒细胞和单核细胞明显低于应激组，差异具有显著性[（32.92&;#177;4：48），（71．33&;#177;9．84）／mm^2，P〈0．01]；[（28．50&;#177;4．66），（49．58&;#177;6．21）／mm^2，P〈0．01]。②应激组杯状上皮细胞见较多黏液分泌后残留的囊泡，胞浆黏蛋白MUC2表达的平均吸光度值低于对照组[（0．22&;#177;0．03），（0．26&;#177;0．12），P〈0．01]，也低于氨基胍组[（0．22&;#177;0．03），（0．25&;#177;0．02），P〈0．01]，而氨基胍组杯状细胞内黏蛋白丰富。③应激组结肠组织一氧化氮含量明显高于对照组[（41．72&;#177;4．70），（31．76&;#177;4．58）μmol／g，P〈0．01]；也高于氨基胍组[（41．72&;#177;4．70），（32．20&;#177;6．86）μmol／g，P〈0．01]；氨基胍组与对照组比较差异无显著性（P〉0.05）。分泌型一氧化氮合酶的活性应激组也明显高于对照组[（6.47&;#177;0．95），（3．81&;#177;0．64）nkat／g,P〈0．01]，也高于氨基胍组[（6.47&;#177;0．95），（3．50&;#177;0．54）nkat／g，P〈0．01]；氨基胍组与对照组比较差异无显著性。④应激组大鼠结肠上皮细胞线粒体肿胀、嵴减少、消失，线粒体空泡变性，部分区域溶酶体增多；细胞间连接松弛，紧密连接间隙增大，上皮细胞表面微绒毛减少、稀疏、脱落。对照组大鼠结肠上皮细胞内细胞器完整，细胞间连接正常．细胞表面微绒毛完整。氨基胍组仅见轻微的细胞间连接的变化。结论：慢性应激损伤肠黏膜屏障，引起结肠黏膜炎性细胞浸润和上皮细胞超微结构的变化，并影响黏液分泌细胞的功能。这种形态学的变化与慢性应激所导致的结肠组织分泌型一氧化氮合酶活化、一氧化氮含量增加有关。氨基胍对慢性应激诱导的结肠黏膜损伤起保护作用。     

银杏叶提取物对大鼠局灶性脑缺血后梗死体积和Bcl-2,Caspase-3表达的影响

目的：探讨银杏叶提取物（ginkgo biloba extract，GBE）对脑缺血后梗死体积及神经元凋亡相关蛋白Bel-2，Caspase-3表达的影响。方法：将SD大鼠随机分为缺血对照组、小剂量GBE治疗组（小剂量组）、大剂量GBE治疗组（大剂量组）。采用大鼠大脑中动脉栓塞模型，应用光镜、TIC染色、免疫组织化学染色及TUNEL染色检测方法，在不同时间点观察各组大鼠脑梗死体积的变化以及Bcl-2，Caspase-3阳性细胞表达的不同和神经细胞凋亡的情况。结果：在不同时间点各给药组大鼠的脑梗死体积小于缺血对照组，差异有显著性（P〈0．01）；大剂量组脑梗死体积与小剂量组脑梗死体积相比差异亦有统计学意义（P〈0．05）。各给药组大鼠Bel-2阳性细胞表达数目均高于缺血对照组，而Caspase-3阳性细胞表达数目则低于缺血对照组（P〈0．01）；大剂量组阳性细胞表达数目与小剂量组阳性细胞表达数目相比差异亦有显著性（P〈0．05）。结论：银杏叶提取物可减少脑梗死体积，在脑缺血损伤急性期可增加Bcl-2的表达而减少Caspase-3的表达。     

蝉花对糖尿病大鼠肾小球沉默信息调节因子1表达的影响

目的探讨蝉花对糖尿病大鼠肾小球沉默信息调节因子1（silent information regulation 2homolog 1,SIRT1）表达的影响及其对肾脏的保护作用。方法 40只SD大鼠,随机分为对照组10只、蝉花组10只、DM模型组10只、DM＋蝉花组10只,DM模型组与DM＋蝉花组以单次腹腔注射含链脲佐菌素柠檬酸盐缓冲液60mg/kg建立糖尿病大鼠模型,对照组与蝉花组单次腹腔注射等量柠檬酸盐缓冲液。蝉花组和DM＋蝉花组给予蝉花菌丝提取液1.8g/（kg·d）灌胃治疗,对照组和DM模型组给予饮用水灌胃。治疗期间观察各组大鼠一般情况,于24周后检测各组大鼠肾功能,取肾皮质行组织病理学检查,采用RT-PCR及Western blot法检测大鼠肾小球SIRT1基因及蛋白表达情况。结果 DM模型组和DM＋蝉花组大鼠体质量、血浆胰岛素水平较对照组和蝉花组明显降低（P〈0.01）,食物摄取量、空腹血糖、糖化血红蛋白较对照组和蝉花组明显增高（P〈0.01）;DM＋蝉花组尿素氮、24h尿白蛋白、24h尿蛋白、尿白蛋白肌酐比和肾脏指数（（17.80±2.46）mmol/L、（789.00±103.20）μg/d、（18.20±3.05）mg/d、（64.50±8.34）μg/mg、8.00±1.36）较DM模型组（（22.90±3.29）mmol/L、（1 495.00±251.30）μg/d、（25.00±3.88）mg/d、（82.20±13.32）μg/mg、8.53±1.57）明显降低,大鼠肾组织系膜面积比、肾小球硬化指数及肾小球基底膜厚度（（17.80±4.87）%、56.20±17.10、（229.40±40.87）nm）较DM模型组（（26.20±6.11）%、81.00±19.48、（320.70±54.09）nm）明显减少（P〈0.05）,肾小球SIRT1mRNA和蛋白表达水平（（77.80±13.84）%、（70.60±15.17）%）较DM模型组（（36.80±12.03）%、（27.00±15.38）%）明显增高（P〈0.05）。结论蝉花可上调糖尿病大鼠肾小球SIRT1表达,可能是其延缓糖尿病肾病进展的主要机制之一。     

银杏叶提取物减轻糖基化终末产物对大鼠肾脏TGF-β及CTGF表达的影响

目的观察银杏叶提取物对糖基化终末产物（AGEs）引起的大鼠肾脏TGF-β及CTGF过表达的影响。方法每日给正常大鼠尾静脉注射AGE-修饰大鼠血清蛋白（AGEs组）,部分大鼠同时灌胃给予银杏叶提取物（GBE组）,注射天然大鼠血清蛋白（RSP组）和不施加处理的正常大鼠（空白对照组）作为对照。Elisa法检测肾皮质TGF-β及CTGF蛋白的表达,RT-PCR检测TGF-β及CTGF mRNA的表达。结果与RSP组及空白对照组比较,AGEs组大鼠尿蛋白含量明显增加（P〈0.05）,TGF-β及CTGF蛋白、mRNA的表达均增高（P〈0.01）,给予GBE后尿蛋白含量明显降低（P〈0.01）,TGF-β及CTGF蛋白含量及mRNA表达均明显降低（P〈0.05,P〈0.01）。结论 GBE改善AGEs引起的肾功能变化,减轻AGEs诱导的大鼠肾皮质TGF-β及CTGF过表达。提示GBE可通过抑制AGEs引起的TGF-β及CTGF过表达而在糖尿病中起到肾脏保护作用。     

晚期糖基化终产物与冠心病发病机制的研究进展

晚期糖基化终产物(AGEs)密切参与了血管平滑肌细胞(VSMCs)分化与增殖以及冠心病等心血管疾病的病理生理过程。AGEs能通过单核细胞趋化蛋白(ERK)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路来诱导VSMCs的自噬作用,可依赖骨髓基质细胞衍生因子-1(SDF-1)/趋化因子受体CXCR4轴信号通路促进心肌微血管内皮细胞(CMECs)的增生。AGEs-2和AGEs-3上调了单核细胞AGEs受体(RAGE)的表达。AGEs能抑制内皮祖细胞(EPCs)的增殖、迁移和黏附功能并诱导EPCs凋亡;能增加平滑肌细胞结缔组织因子(CTGF)mRNA和蛋白质的表达,刺激心肌成纤维细胞增殖并分泌转化生长因子-β1(TGF-β1),同时诱导Smad2及Smad4的表达。羧甲基赖氨酸(CML)/RAGE轴通过主动脉平滑肌成骨细胞的分化,诱导巨噬细胞凋亡,从而使AGEs在糖尿病动脉粥样硬化中发挥重要作用。可溶性RAGE(sRAGE)可作为RAGE配体的诱饵来防止动脉粥样硬化,其灵敏度和阴性预测值在判定冠状动脉介入治疗(PCI)术后再狭窄方面均高于AGEs/sRAGE比值。ALT-711是一种AGEs的裂解剂,能明显抑制AGEs介导的活性氧(ROS)产生、细胞外信号调节激酶磷酸化及环氧合酶-2的表达;色素上皮衍生因子(PEDF)能抑制AGEs诱导的血小板CD40配体(CD40L)表达,从而有可能成为预防冠心病的一个治疗靶点。他汀类药物亦能抑制AGEs诱导主动脉平滑肌细胞的增殖及ROS的产生。通过以上诸多因素的研究,可揭示冠心病的某些发病机制,为相应干预药物的研究及调整临床治疗策略提供依据和方向。     

2型糖尿病大鼠骨折愈合障碍与体内晚期糖基化终末产物的变化

背景：近年来,晚期糖基化终末产物在骨组织领域的作用日益受到重视,而糖代谢紊乱是引起晚期糖基化终末产物增加的主要原因之一。 目的：观察2型糖尿病大鼠体内晚期糖基化终末产物表达的变化,并探讨其与糖尿病骨折愈合障碍的关系。方法：30只SD大鼠随机均分为2组,实验组制备2型糖尿病模型,对照组正常饲养。糖尿病模型制备成功后,所有大鼠建立左胫骨骨折牵引成骨模型,胫骨延长0.3 mm/d,持续14 d。 结果与结论：牵引结束后,X 射线摄片显示实验组糖尿病模型大鼠骨折断端之间牵引骨痂形成较对照组明显减少;骨痂组织学检查表现为微骨柱排列紊乱,初始基质前沿浅染。ELISA 法检测实验组血清和双侧骨痂组织中晚期糖基化终末产物水平较对照组明显升高（P 〈0.01）,骨钙素明显降低（P 〈0.01）。提示2型糖尿病大鼠骨折牵引骨痂生成障碍,而骨组织中晚期糖基化终末产物水平增高可能是导致2型糖尿病骨折愈合障碍的原因。     

Receptor-mediated endothelial cell dysfunction in diabetic vasculopathy. Soluble receptor for advanced glycation end products blocks hyperpermeability in diabetic rats.

Dysfunctional endothelium is associated with and, likely, predates clinical complications of diabetes mellitus, by promoting increased vascular permeability and thrombogenicity. Irreversible advanced glycation end products (AGEs), resulting from nonenzymatic glycation and oxidation of proteins or lipids, are found in plasma, vessel wall, and tissues and have been linked to the development of diabetic complications. The principal means through which AGEs exert their cellular effects is via specific cellular receptors, one of which, receptor for AGE (RAGE), is expressed by endothelium. We report that blockade of RAGE inhibits AGE-induced impairment of endothelial barrier function, and reverse, in large part, the early vascular hyperpermeability observed in diabetic rats. Inhibition of AGE- and diabetes-mediated hyperpermeability by antioxidants, both in vitro and in vivo, suggested the central role of AGE-RAGE-induced oxidant stress in the development of hyperpermeability. Taken together, these data support the concept that ligation of AGEs by endothelial RAGE induces cellular dysfunction, at least in part by an oxidant-sensitive mechanism, contributing to vascular hyperpermeability in diabetes, and that RAGE is central to this pathologic process.     

Vascular hypertrophy in experimental diabetes. Role of advanced glycation end products.

The accelerated formation of advanced glycation end products (AGEs) and the overexpression of transforming growth factor beta (TGF-beta) have both been implicated in the pathogenesis of diabetic microvascular and macrovascular complications. Previous studies in our laboratory have demonstrated that the vascular changes in diabetes include hypertrophy of the mesenteric vasculature. To examine the role of AGEs in this process, streptozotocin-induced diabetic rats and control animals were randomized to receive aminoguanidine, an inhibitor of AGE formation, or no treatment. Animals were studied at 7 d, 3 wk, and 8 mo after induction of diabetes. When compared with control animals, diabetes was associated with an increase in mesenteric vascular weight and an increase in media wall/lumen area. By Northern analysis, TGF-beta1 gene expression was increased 100-150% (P < 0.01) and alpha1 (IV) collagen gene expression was similarly elevated to 30-110% compared to controls (P < 0.05). AGEs and extracellular matrix were present in abundance in diabetic but not in control vessels. Treatment of diabetic rats with aminoguanidine resulted in significant amelioration of the described pathological changes including overexpression of TGF-beta1 and alpha1 (IV) collagen. These data implicate the formation of AGEs in TGF-beta overexpression and tissue changes which accompany the diabetic state.     

晚期糖基化终末产物对术后下肢深静脉血栓的影响

目的探讨晚期糖基化终末产物(AGEs)含量变化与下肢深静脉血栓后遗症(PTS)严重程度相关性。方法选取PTS患者44例作为PTS组(共58条静脉梗阻),应用彩色多普勒超声检测患者患处的病变情况及血流动力学情况;选取下肢深静脉栓塞经过治疗疗后未患PTS的患者30例作为非PTS组;另选择正常体检者作为30例作为对照组,检测所有对象血清中AGEs含量,观察其变化特征。结果 PTS组血清AGEs含量明显高于非PTS组及对照组(P0.05);非PTS组血清AGEs含量明显高于对照组(P0.05)。全肢型血清AGEs含量明显高于局段发作的栓塞患者(P0.05);在全肢型中,I型患者血清AGEs含量明显高于II A及II B型(P0.05),ⅡA型与ⅡB型差异无统计学意义(P0.05)。血流动力学严重障碍患者血清AGEs含量明显高于中度及轻度障碍患者(P0.05);血流动力学中度障碍患者血清AGEs含量明显高于轻度障碍患者(P0.05)。结论 AGEs与PTS发生、发展及病情严重性息息相关。     

Advanced glycation end products cause epithelial-myofibroblast transdifferentiation via the receptor for advanced glycation end products (RAGE)

Tubulointerstitial disease, a prominent phenomenon in diabetic nephropathy, correlates with decline in renal function. The underlying pathogenic link between chronic hyperglycemia and the development of tubulointerstitial injury has not been fully elucidated, but myofibroblast formation represents a key step in the development of tubulointerstitial fibrosis. RAGE, the receptor for advanced glycation end products (AGEs), induces the expression of TGF-beta and other cytokines that are proposed to mediate the transdifferentiation of epithelial cells to form myofibroblasts. Here we report specific binding of (125)I-AGE-BSA to cell membranes prepared from a rat proximal tubule cell line and show that the binding site was RAGE. AGE exposure induced dose-dependent epithelial-myofibroblast transdifferentiation determined by morphological changes, de novo alpha smooth-muscle actin expression, and loss of epithelial E-cadherin staining. These effects could be blocked with neutralizing Ab's to RAGE or to TGF-beta. Transdifferentiation was also apparent in the proximal tubules of diabetic rats and in a renal biopsy from a patient with type 1 diabetes. The AGE cross-link breaker, phenyl-4,5-dimethylthiazolium bromide (ALT 711) reduced transdifferentiation in diabetic rats in association with reduced tubular AGE and TGF-beta expression. This study provides a novel mechanism to explain the development of tubulointerstitial disease in diabetic nephropathy and provides a new treatment target.     

单宁酸对糖尿病大鼠抗氧化能力及体外蛋白质非酶糖基化作用的影响

目的观察单宁酸（tannic acid,TA）对糖尿病（DM）大鼠抗氧化能力及体外蛋白质非酶糖基化作用的影响。方法 70只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、氨基胍（AG）组和TA低高剂量组,给药10周后处死大鼠。化学比色法检测各组大鼠血清及肾皮质MDA含量及GSH-Px、SOD、CAT活性。将单宁酸加入到体外建立的非酶糖基化体系,孵育2个月,荧光法进行AGEs测定并计算蛋白质糖基化抑制率。结果单宁酸可降低DM大鼠血清及肾皮质MDA含量,提高GSH-Px、SOD、CAT活性并呈浓度依赖性抑制体外蛋白质非酶糖基化反应。结论单宁酸可提升糖尿病大鼠的抗氧化能力,并具有抑制体外蛋白质非酶糖基化的作用。     

冠心病合并糖尿病患者晚期糖基化终产物测定分析

目的 探讨血清晚期糖基化终产物(AGEs)水平在冠心病(CAD)合并糖尿病(DM)患者中的意义.方法 诊断明确的CAD合并DM患者82例,根据冠状动脉造影结果分为单支病变组、双支病变组及3支病变组,分别测定血清AGEs,空腹血糖(FPG)、血脂,计算体质量指数(BMI),对3组间AGEs、FPG、血脂、BMI进行比较.结果 AGEs水平随冠状动脉病变支数增加而增高,单支病变组(35.86±11.28)ng/L,双支病变组(43.52±17.29)ng/L,3支病变组(62.09±14.23)ng/L,差异有统计学意义(P<0.05);Spearman相关分析显示,AGEs与总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、FPG均呈正相关(P<0.05);多元逐步线性回归分析显示,LDL-C、FPG与AGEs独立相关.结论 AGEs促进DM患者冠状动脉粥样硬化的发展,控制FPG及LDL-C可能延缓此作用.     

The human and rat recombinant receptors for advanced glycation end products have a high degree of homology but different pharmacokinetic properties in rats.

The accelerated formation of advanced glycation end products (AGEs) is implicated in diabetic microvascular and macrovascular complications. The binding of AGEs to their cellular surface receptor (RAGE) induces vascular dysfunction and in particular an increase in vascular permeability. We previously demonstrated that rat recombinant RAGE (rR-RAGE) produced in insect cells corrected the hyperpermeability due to RAGE-AGE interaction and that pharmacokinetic properties of rR-RAGE after i.v. administration in rats were compatible with a potential therapeutic use. In the present study, we showed that recombinant human RAGE (rH-RAGE) had a similar efficacy in inhibiting AGE-induced endothelial alteration and in reducing the hyperpermeability observed in streptozotocin-induced diabetic rats. (125)I-rH-RAGE elimination half-life after i.v. administration was similar in diabetic and normal rats (53.7 +/- 7.6 and 45.3 +/- 4.0 h, respectively). The presence of AGEs is responsible for a higher distribution volume in diabetic rats compared with normal rats (15.3 +/- 2.7 and 7.7 +/- 0. 7 l/kg, respectively). Immunoreactive (125)I-rH-RAGE decreased more rapidly than did immunoreactive (125)I-rR-RAGE. The differences between (125)I-rH-RAGE and (125)I-rR-RAGE pharmacokinetics in rat may be related to differences in potential O-glycosylation and protease cleavage sites between the two RAGE molecules.     

Regulation of human mononuclear phagocyte migration by cell surface-binding proteins for advanced glycation end products.

Nonenzymatic glycation of proteins occurs at an accelerated rate in diabetes and can lead to the formation of advanced glycation end products of proteins (AGEs), which bind to mononuclear phagocytes (MPs) and induce chemotaxis. We have isolated two cell surface-associated binding proteins that mediate the interaction of AGEs with bovine endothelial cells. One of these proteins is a new member of the immunoglobulin superfamily of receptors (termed receptor for AGEs or RAGE); and the second is a lactoferrin-like polypeptide (LF-L). Using monospecific antibodies to these two AGE-binding proteins, we detected immunoreactive material on Western blots of detergent extracts from human MPs. Radioligand-binding studies demonstrated that antibody to the binding proteins blocked 125I-AGE-albumin binding and endocytosis by MPs. Chemotaxis of human MPs induced by soluble AGE-albumin was prevented in a dose-dependent manner by intact antibodies raised to the AGE-binding proteins, F(ab')2 fragments of these antibodies and by soluble RAGE. When MP migration in response to N-formyl-Met-Leu-Phe was studied in a chemotaxis chamber with AGE-albumin adsorbed to the upper surface of the chamber membrane, movement of MPs to the lower compartment was decreased because of interaction of the glycated proteins with RAGE and LF-L on the cell surface. The capacity of AGEs to attract and retain MPs was shown by implanting polytetrafluoroethylene (PTFE) mesh impregnated with AGE-albumin into rats: within 4 d a florid mononuclear cell infiltrate was evident in contrast to the lack of a significant cellular response to PTFE with adsorbed native albumin. These data indicate that RAGE and LF-L have a central role in the interaction of AGEs with human mononuclear cells and that AGEs can serve as a nidus to attract MPs in vivo.