卵巢子宫内膜异位症异位和在位内膜组织中孕激素受体亚型的表达及意义

目的 研究子宫内膜异位症组织中孕激素受体亚型的表达,探讨其在内膜异位症发生、发展和治疗中的意义.方法 选取2005-01-2005-05山东大学齐鲁医院妇产科22例卵巢子宫内膜异位囊肿的囊壁组织,6例同时行子宫切除术患者的在位内膜组织和13例正常内膜组织,采用RT-PCR技术对孕激素受体(PR-A+B)和孕激素受体B亚型(PR-B)的基因表达进行半定量研究.结果 巧克力囊肿组织中PR-A+B和PR-B mRNA表达显著低于正常内膜组织和子宫内膜异位症(EM)患者在位内膜组织(P＜0.01);巧克力囊肿组织中PR-B/PR-A+B mRNA的比值低于正常子宫内膜组织PR-B/PR-A+B mRNA的比值,差异有显著性(P＜0.01).结论 PR-A+B和PR-B/PR-A+B mRNA的比值降低可能与EM发生、发展及治疗中"孕激素耐受"相关.     

孕激素受体亚型在卵巢子宫内膜异位囊肿组织的表达

目的:探讨内异症治疗中“孕激素耐受”影响疗效的可能机制。方法:选取30例卵巢子宫内膜异位囊肿患者的巧克力囊肿组织,其中6例同时行子宫切除术患者的在位内膜组织和13例正常内膜组织,采用RT-PCR技术半定量检测子宫内膜异位症(EMs)组织中孕激素受体亚型hPR-A+B和hPR-B的基因表达。结果:巧克力囊肿组织中总PR和PR-BmRNA表达明显低于正常内膜组织和EMs患者在位内膜组织,差异有统计学意义;巧克力囊肿组织中PR-B/PR-A+BmRNA的比值低于正常子宫内膜组织,差异有统计学意义。结论:PR和PR-B/PR-A+BmRNA的比值降低可能与EM治疗中“孕激素耐受”相关。     

孕激素受体和线粒体porin蛋白在子宫肌瘤组织中的表达

目的：检测新型孕激素受体M（PR-M）、PR-A、PR-B和线粒体porin蛋白在子宫肌瘤组织及肌瘤旁正常子宫平滑肌组织中的表达,并探讨3种孕激素受体与porin表达的相关性。方法：采用RT-PCR、Western blot法检测PR.M、PR_A、PR.B和porin在20例子宫肌瘤组织和肌瘤旁正常子宫平滑肌组织中的表达。结果：子宫肌瘤组织中PR-M、PR-A、PR-B和porin的表达水平均显著高于正常子宫平滑肌组织（P〈0.001）。子宫肌瘤组织中PR-M与porin表达呈正相关（mRNA：r=0.562,P=0.010;蛋白：r=0.467,P=0.038）,PR-A、PR-B与porin表达无关（P〉0.05）。正常子宫平滑肌组织中PR.M、PR.A、PR-B与porin均无相关性（P〉0.05）。结论：子宫肌瘤的发生和发展可能与核外PR.M的作用有关,孕激素可能通过基因组和非基因组两种途径参与子宫肌瘤的形成和生长。     

醋酸甲羟孕酮和蛋白酶体抑制剂对卵巢癌细胞增殖凋亡的影响

目的:探讨醋酸甲羟孕酮(MPA)和蛋白酶体抑制剂(MG132)对不同孕激素受体(PR)表达卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响。方法:CCK-8法检测MPA、MG132单独作用后HO-8910和SKOV3细胞的增殖情况,筛选出合适的药物作用浓度和作用时间。将细胞分为对照组、MPA组、MG132组、MPA+MG132组,采用CCK-8法、流式细胞术检测细胞增殖、凋亡情况;倒置显微镜下观察形态学变化;免疫组化检测PR表达;Western blot检测PR-A、PR-B表达。结果:MPA对HO-8910细胞的增殖抑制作用明显强于SKOV3细胞,而MG132对两种细胞的作用相似。联合用药时,MG132可增强MPA对SKOV3细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用,并且伴随着明显的形态学改变,而在HO-8910细胞中不存在此作用。免疫组化及Western blot结果显示,与对照组相比,MG13、MG132+MPA组PR、PR-A和PR-B表达均提升(P<0.05)。结论:MG132可增强MPA对SKOV3细胞增殖抑制和诱导凋亡作用,这可能与PR、PR-A和PR-B表达增加有关。     

5-氮杂脱氧胞苷联合孕激素对子宫内膜癌细胞株HEC-1-B生长的影响

目的:研究5-氮杂脱氧胞苷(5-Aza-CdR,ADC)联合孕激素对孕激素受体B亚型(PR-B)缺失的子宫内膜癌细胞株HEC-1-B增殖、凋亡、细胞周期分布的影响及其机制。方法:5-Aza-CdR、醋酸甲羟孕酮(medroxyprogesterone acetate,MPA)单独及联合作用于HEC-1-B细胞后,运用MTT比色法及流式细胞仪分别检测各组细胞的生长、凋亡及细胞周期分布情况;采用RT-PCR技术、甲基化特异性PCR(MSP)分别检测HEC-1-B细胞中PR-B mRNA表达及PR-B基因启动子的甲基化状态。结果:(1)5-Aza-CdR对HEC-1-B细胞的生长抑制作用呈剂量和时间依赖性,联合用药组的抑制作用更为明显(P<0.01),且使细胞阻滞在G1期;(2)5-Aza-CdR以剂量依赖的方式上调PR-B mRNA的表达(P<0.01);(3)5-Aza-CdR可以抑制PR-B基因启动子的甲基化状态。结论:(1)5-Aza-CdR联合孕激素能明显抑制HEC-1-B细胞增殖,促进其凋亡,二者联用可加强MPA对细胞周期的阻滞作用;(2)5-Aza-CdR能逆转PR-B基因甲基化而使其恢复表达,从而增强孕激素的作用。     

子宫内膜异位症大鼠模型妊娠期孕激素受体及BKCa α表达

目的:探讨子宫内膜异位症(EM)大鼠妊娠模型子宫平滑肌子宫收缩相关因子的表达。方法:皮下种植法建立大鼠EM模型,雌雄合笼观察其受孕情况。留取妊娠期子宫平滑肌组织,qRT-PCR法检测BKCaα(大电导钙依赖的钾通道)、PR(孕激素受体)和PR-B(孕激素受体B亚型)表达情况。结果:造模成功率为16/20(80.00%),EM实验组和对照组的妊娠率分别为12/16(75.00%)和9/10(90.00%),两组比较差异无统计学意义(P=0.63)。内异症孕鼠模型中BKCaα、PR和PR-B mRNA表达分别为3.56±0.62、4.31±2.21和3.41±1.75,对照组分别为3.13±1.47、1.32±0.28和1.54±0.39,两组比较差异均无统计学意义。内异症孕鼠组的PR-B/PR比值显著高于对照组[(32.07±8.13)%vs (14.46±2.87)%,P0.05]。结论:内异症大鼠妊娠期孕激素受体亚型的异常分布可能与子宫异常收缩相关。     

基因变异与子宫内膜异位症的发生

基因的变异在子宫内膜异位症(EMs)的发生和发展中有很重要的作用.研究发现EMs的发生有家族遗传倾向,一级亲属的患病率高于一般人群.某些卵巢癌的候选基因在EMs中也能检测到.孕激素受体(PR)的基因在异位内膜中有变异,无PR-B表达.氧化应激反应也可能诱发EMs发生,使用抗氧化剂能阻止诱发兔EMs.环境毒素二噁英(dioxin)可能会激活体内的某些化学酶系而诱发EMs.     

基因变异与子宫内膜异位症的发生

基因的变异在子宫内膜异位症(EMs)的发生和发展中有很重要的作用。研究发现EMs的发生有家族遗传倾向，一级亲属的患病率高于一般人群。某些卵巢癌的候选基因在EMs中也能检测到。孕激素受体(PR)的基因在异位内膜中有变异，无PR-B表达。氧化应激反应也可能诱发EMs发生，使用抗氧化剂能阻止诱发兔EMs。环境毒素二噁英(dioxin)可能会激活体内的某些化学酶系而诱发EMs。     

子宫腺肌病中孕激素受体B表达及甲基化的研究

目的:探讨子宫腺肌病中孕激素受体B(progesterone receptor B,PR-B)表达及其甲基化在疾病发生中的作用。方法:用免疫组化法测定PR-B的表达,甲基化特异性基因扩增(methylation-specific PCR,MSP)方法检测50例子宫腺肌病患者在位与异位内膜和18例输卵管不孕或良性卵巢囊肿患者子宫内膜中PR-B的甲基化状态,并分析甲基化与PR-B表达的相关性。结果:子宫腺肌病患者在位和异位内膜PR-B表达明显低于对照内膜(P0.01);子宫腺肌病异位内膜中PR-B甲基化比率显著高于对照内膜(P0.05);且子宫腺肌病在位和异位内膜中PR-B甲基化状态与PR-B表达相关(P0.05)。结论:PR-B低表达及其甲基化可能与子宫腺肌病的发生有关。     

EGFR过表达降低人子宫内膜癌细胞孕激素敏感性的研究

目的:检测表皮生长因子受体(EGFR)基因在子宫内膜癌孕激素敏感细胞株Ishikawa及孕激素不敏感细胞株KLE的表达,探讨EGFR基因过表达对人子宫内膜癌细胞孕激素敏感性的影响。方法:实时定量PCR法和蛋白印迹法检测Ishikawa和KLE细胞中EGFR及PR-BmRNA和蛋白的表达。将EGFR全长cDNA真核表达质粒在脂质体介导下转染至Ishikawa细胞,同时以转染空载体和未转染的Ishikawa细胞为对照,分别应用实时定量PCR检测各组细胞EGFR、PR-BmRNA表达的变化,应用蛋白印迹法检测各组细胞EGFR、PR-B蛋白表达的变化;CCK-8法观察转染EGFR基因后Ishikawa细胞对孕激素敏感性的变化。结果:(1)Ishikawa细胞中,EGFRmRNA和蛋白的表达明显低于KLE细胞(P<0.001),而PR-BmRNA和蛋白的表达则显著高于KLE细胞(P<0.001);(2)稳定转染EGFR基因后,Ishikawa细胞中EGFRmRNA和蛋白的表达水平明显高于转染空载体和未转染的Ishikawa细胞(P<0.001),而PR-BmRNA和蛋白的表达水平则显著降低;(3)10-8、10-7、10-6、10-5mol/L的MPA对未转染和转染空载体的Ishikawa细胞的抑制作用显著(P<0.05),但对稳定过表达EGFR的Ishikawa细胞无明显抑制作用(P>0.05)。结论:转染EGFR基因能有效提高Ishikawa细胞内EGFR基因的表达,但可下调PR-B基因的表达使Ishikawa细胞对MPA不敏感。