芦荟提取物C对小鼠移植性肿瘤及免疫功能的影响

目的 :研究芦荟提取物C(AloeExtractC ,AE C)对小鼠移植性肿瘤 (实体瘤 )的抑制作用和其对脾细胞IL 2分泌活性及NK细胞杀伤活性的影响。方法 :建立AE C的提取和主要成分含量测定法。用S180和MethA移植瘤动物模型为研究对象 ,经腹腔注射AE C后 ,观察肿瘤组织的病理学改变并检测其脾细胞IL 2分泌活性和NK细胞杀伤活性。结果 :AE C能促使肿瘤组织大面积出血坏死及炎细胞浸润 ,按瘤组织坏死和炎细胞胞浸润分级积分法记录 ,AE C治疗组明显高于对照组和 5 FU治疗组 (P <0 .0 1)。脾细胞IL 2分泌活性S180 移植瘤AE C治疗组与其对照组比较升高 4 2 .6 % ,MethA移植瘤AE C治疗组与其对照组比较升高 6 2 .6 %。NK细胞杀伤活性AE C治疗组较对照组有明显的升高 (P <0 .0 1)。 5 FU治疗组小鼠免疫功能明显受到抑制。结论 :AE C有抑制肿瘤和调节机体免疫功能的作用。     

IL—2基因转染的肿瘤细胞增强机体免疫功能的实验研究

目的：探讨小鼠接种腺病毒介导的IL－2基因转移的CT26小鼠结肠腺癌细胞后机体免疫功能的变化（包括CTL、LAK细胞、NK细胞、巨噬细胞的杀伤活性变化）。方法：体外将腺病毒介导的小鼠IL－2基因转染CT26细胞（CT26-mIL-2)，然后将CT26－mIL2细胞接种于小鼠皮下。采用4h乳酸脱氢酸释放法检测荷瘤小鼠CTL、LAK、NK细胞的杀伤活性，MTT法检测巨噬细胞的杀伤活性。结果：接种CT26－mIL－2后第14d，小鼠脾细胞NK活性和诱导后的LAK活性和CTL活性均显著高于对照组（P＜0．01）；小鼠腹腔巨噬细胞数量显著增加，杀伤活性显著增强（P＜0．01）。结论：IL－2基因转染的肿瘤细胞能诱导机体的特异性和非特异性免疫功能参与机体的抗肿瘤作用。     

OK-432增强CPT-11抗肿瘤活性的实验研究

目的：探讨OK－432增强CPT－11抗肿瘤活性的机制。方法：将荷B16黑色素瘤的C57BL／6小鼠随机分为对照组、CPT－11治疗组、联合治疗组,于接种后第3天腹腔分别注射生理盐水、CPT－11,CPT－11加OK－432。观察肿瘤生长体积;测定各组脾细胞分泌的IL－2,IL－4,IL－6,IL－10,IL－12,IFN－γ,并在体外观察了SN－38对OK－432刺激这些细胞因子分泌的影响。结果：OK－432显著增强CPT－11对B16黑色素瘤生长的抑制（P＜0．05）;CPT－11在体内显著抑制小鼠脾细胞IL－12和IFN－γ的分泌,与OK－432联合使用显著增加小鼠脾细胞IL－2,IL－6,IL－12和IFN－γ的分泌（P＜0．05）;在体外SN－38对OK－432刺激的IL－6,IL－12分泌无显著影响（P＞0．05）。结论：OK－432在体内可通过刺激IL－12和Th1细胞因子的分泌,增强CPT－11的抗肿瘤活性。     

联合过继免疫细胞输注小鼠后DC、NK分布的研究

目的：观察自然杀伤（NK）细胞／树突状细胞（DC）联合过继免疫治疗小鼠皮下黑色素瘤时效应细胞在荷瘤小鼠体内的分布。方法：建立C57BL/6小鼠皮下黑色素瘤模型。体外培养增殖小鼠NK细胞、DC并标记，以不同比例混合两种细胞，分别以静脉注射和瘤内注射的方式回输荷瘤小鼠体内．于注射后不同时间点取肿瘤、肝、脾、肺组织进行切片，观察各组织中效应细胞的数量及分布。结果：静脉注射组NK细胞、DC主要分布在肿瘤微循环及实质组织中，各时间点NK细胞、DC的浸润数量有显著差异（P〈0．01），注射后4h浸润的效应细胞最多．12h最少，在脾脏中见少量NK细胞的分布，在肝脏及肺组织中偶见。瘤内注射组NK细胞、DC主要分布在肿瘤实质组织中，各观察时间点NK细胞、DC的浸润数量有显著差异（P〈0，01）．注射后1h浸润的效应细胞最多，12h最少，在肝、脾、肺组织中未见NK细胞、DC分布。两种注射方式下按不同比例混合进行NK细胞、DC的过继治疗，各组间差异具有显著性（P〈0.01），混合注射组效应细胞在肿瘤组织内的浸润多于单独注射组。结论：NK细胞、DC免疫过继后能够“靶向性”聚集在肿瘤周围及肿瘤内部，对肿瘤具有治疗作用．NK细胞、DC联合过继免疫治疗效果优于单独注射，提示NK细胞、DC联合输注可能成为肿瘤生物治疗的新模式。     

捕获肿瘤抗原的树突状细胞治疗小鼠膀胱肿瘤

目的：研究捕获肿瘤抗原的树突状细胞（dendritic cells,DC)治疗膀胱肿瘤的可行性。方法：分离小鼠脏树突状细胞,外体经粒－巨细胞集落刺激因子（GM－CSF）活化和放射线来活的肿瘤细胞刺激后（D组）,治疗膀胱肿瘤移植模型,并设立空白对照组（A）,单纯GM－CSF活化的树突状细胞组（B）及灭活肿瘤细胞组（C）。结果：D组特异性T淋巴细胞活性、IL－4及IFN－γ水平明显高于其它组（P＜0．01）;所有小鼠长期无瘤存活（＞100天）而其它组小鼠存活期小于30天（P＜0．001）。结论：捕获肿瘤抗原的树突状细胞治疗膀胱肿瘤具有一定的临床应用前景。     

裸小鼠高致瘤性K562-n细胞系的生物学特性研究

目的：探讨高致瘤性K562－n细胞系在胸腺缺陷裸小鼠体内致瘤的细胞生物学机理。方法：通过极限稀释法建立K562－n细胞系致瘤率不同的克隆株，并以K562细胞为对照，对各克隆株进行裸小鼠体内外生物学特性的比较研究，结果：高致瘤性的T562－B、K562－C、K562－E克隆株（致瘤率≥5／6），其软琼脂培养集落形成率，特别是大集落形成率，较对照K562细胞显著增高，（P＜0．01），而无致瘤性或低致瘤性的K562－A、K562－D克隆株（致瘤率≤2／6），其集落形成率与对照无显著差别（P＞0．05）；超微结构观察提示高致瘤性克隆株，常染色质成分增多，异染色质少见，胞浆内微丝增多且排列紊乱；流式细胞仪细胞周期分布分析显示高致瘤性的克隆株S期细胞比例增加。实验结果还表明裸小鼠NK细胞对高致瘤性克隆株的杀伤活性显著低于对照的K562细胞（P＜0．01），而低致瘤性克隆株与对照无显著差别（P＞0．05）；组织病理观察显示低瘤性的克隆株及对照K562细胞，所成裸小鼠肿瘤组织内有大量的炎性细胞浸润，大量肿细胞被杀伤，血供丰富区尤甚，而高致瘤性克隆株所致肿瘤组织内炎性细胞浸润少见，肿瘤组织增殖旺盛，结论：K562－n细胞系的裸小鼠高致瘤机理在于：1．软琼脂集落形成率增高，2．细胞增殖和DNA合成活跃，涉及细胞周期调节因素和细胞骨架成分的改变，3．对裸小鼠NK细胞杀伤的耐受性增强，所接种宿主的免疫力受到抑制，形成肿瘤组织内炎性细胞浸润减少。     

OK-432对荷瘤小鼠脾细胞IL-12及Th1细胞因子分泌的诱导作用

目的：探讨溶血链球菌冻干制剂OK－432的抗肿瘤机理。方法：B16黑色素瘤细胞接种于C57BL／6小鼠皮下,3d后腹腔注射1KU的OK－432,每周1次,连续3周。观察肿瘤生长体积及荷瘤小鼠的生存期,并测定了OK－432在体内、体外对荷瘤脾细胞IL－2、IL－4,IL－6,IL－10,IL－12,IFN-γ分泌的结果。结果：OK－432能显著抑制B16黑色素瘤的生长,延长荷瘤小鼠的生存期（P＜0．05）;在体外OK－432可刺激荷瘤小鼠脾细胞IL－6,IL－10,IL－12,IFN-γ的分泌（P＜0．01）;腹腔注射OK－432后荷瘤小鼠脾细胞IL－2,IL－12,IFN-γ的分泌显著增加,而IL－10显著减少（P＜0．05）。提示OK－432治疗后荷瘤小鼠脾细胞Th1增加,Th2相对减少。结论：OK－432在体内可通过诱导荷瘤小鼠脾细胞IL－12的分泌,促进Th0向Th1分化,使宿主的免疫功能处于Th1优势状态,从而增强宿主的抗肿瘤作用。     

自然杀伤细胞对小鼠HepS肝癌移植瘤的抑制作用研究

目的 研究自然杀伤(NK)细胞对原发性肝癌Heps移植瘤小鼠的治疗作用和机理。方法 建立小鼠移植性肝癌(Heps)实体瘤模型,随机分为生理盐水(NS)组、治疗1组(输注的NK细胞数为1×10⁴/只)、治疗2组(输注的NK细胞数为1×10⁵/只)和治疗3组(输注的NK细胞数为1×10⁶/只),每组15只。接种肝癌细胞当天,分别于尾静脉注射不同数量的NK细胞,对照组注射NS。观测小鼠移植瘤体积及各组小鼠平均生存时间。各组于输注NK细胞后第15天分别处死2只小鼠,对移植瘤组织切片进行HE染色,用流式细胞术(FCM)检测脾细胞NK的含量;乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测脾细胞杀伤活性。结果 接种移植瘤后第8天,治疗3组移植瘤的生长速度较其他组小鼠显著减慢(P＜0.05)。第20天时治疗1组移植瘤体积明显小于对照组(P＜0.05),治疗2组和3组移植瘤体积非常显著小于对照组(P＜0.01)。治疗1组小鼠平均生存期明显长于对照组和治疗2、3组(P＜0.01)。治疗1-3组脾细胞杀伤活性以及NK细胞的含量高于对照组(P＜0.01)。结论 适量输注NK细胞可以有效抑制HepS肝癌移植瘤的生长,延长小鼠的生存期,为临床应用NK细胞治疗时数量的选择提供了实验依据。     

NK细胞对人鼻咽癌细胞CNE2裸鼠皮下移植瘤的抑制作用

 目的 研究同种异体NK细胞对人鼻咽癌细胞（CNE2）裸鼠皮下移植瘤的抑制作用。方法PCR-SSP法检测CNE2细胞HLA-A、B、Cw表型、NK细胞KIR表型（选择3例健康者为试验对象）,磁珠分离法分离NK细胞并进行体外培养扩增,LDH释放法测定NK细胞对CNE2细胞的体外杀伤活性。12只BALB/c裸鼠分为两组,每组6只,对照组裸鼠每只皮下接种1×106CNE2细胞,治疗组裸鼠每只皮下接种1×106CNE2细胞,同时每只经尾静脉注入3×107NK细胞,观察两组裸鼠成瘤时间、成瘤率、肿瘤体积变化、计算抑瘤率。结果 CNE2细胞表面HLA-A、B、Cw表型为A2,24;B18,35;Cw4,7,3例健康者均表达KIR2DL1、KIR2DL3、KIR3DL1、KIR3DL2。效靶比5∶1、10∶1、20∶1、30∶1时,NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性分别为（9.37±2.14）%、（27.14±1.82）%、（36.40±4.28）%and（54.67±2.80）%。对照组和NK细胞治疗组肿瘤出现时间分别为（10.00±2.68）d、（18.80±1.64）d,（P〈0.01）,成瘤率分别为100%（6/6）、83.33%（5/6）,对照组和NK细胞治疗组裸鼠的瘤重分别为（2.22±0.09）g、（1.42±0.09）g,（P〈0.01）,NK治疗组的抑瘤率为36.04%。肿瘤组织石蜡切片病理学鉴定为低分化鳞状上皮细胞癌,NK细胞治疗组可见角化肿瘤细胞,较多的淋巴细胞浸润和大量细胞坏死区。结论 NK细胞对鼻咽癌裸鼠皮下移植瘤有明显的抑制作用,有希望成为治疗鼻咽癌的新方法。     

DC 荷载α－GalCer 联合肿瘤特异性 CTL 对小鼠 Heps 肝癌移植瘤生长的影响

目的：探讨树突状细胞（DC）荷载α－半乳糖神经酰胺（α－GalCer）联合肿瘤特异性细胞毒 T 淋巴细胞（CTL）对小鼠 Heps 肝癌移植瘤生长的抑制作用。方法：诱导扩增小鼠骨髓来源的 DC 细胞和 T 淋巴细胞,培养成为具有肿瘤特异性的 CTL,DC 细胞体外荷载α－GalCer。建立 Heps 肝癌移植瘤模型,将36只模型鼠随机分为4组（n ＝9）,分别尾静脉给予生理盐水（对照组）、CTL（CTL 组）、DC 荷载α－GalCer（DC 荷载α－GalCer 组）、DC 细胞荷载α－GalCer ＋CTL（联合治疗组）输注。每隔两天测量移植瘤体积,观察体积变化。于治疗后第14d,处死小鼠,取眼球血及瘤体组织。流式细胞术（FCM）检测外周血 CD4＋、CD8＋ T 细胞比例。免疫组织化学染色观察肿瘤组织中 Bcl －2／Bax 凋亡蛋白的表达。结果：与对照组相比,各治疗组均可抑制肿瘤的生长,差异具有统计学意义（P ＜0．01）;联合治疗组较 DC 荷载α－GalCer 组及 CTL 组肿瘤体积明显减小（P ＜0．05）。联合治疗组小鼠外周血 CD4＋、CD8＋ T 细胞数量较另外三组显著升高（P ＜0．05）;对照组、CTL组、DC 荷载α－GalCer 组小鼠外周血中 CD4＋、CD8＋ T 细胞含量无明显差异（P ＞0．05）。与对照组相比,各治疗组移植瘤内 Bax 阳性细胞数量明显增加（P ＜0．05）,Bcl －2阳性细胞数量明显减少（P ＜0．05）;与 CTL组和α－GalCer 组相比,联合治疗组移植瘤内 Bax 阳性细胞明显增加（P ＜0．05）,Bcl －2阳性细胞明显下降（P ＜0．05）。结论：DC 荷载α－GalCer 与肿瘤特异性 CTL 联合应用能够对小鼠 Heps 肝癌移植瘤具有协同杀伤作用。     

IL-2基因修饰的细胞毒 T淋巴细胞抗肿瘤效应的研究

目的：了解IL－2基因修饰的细胞毒T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocytes,CTL)的增殖和杀伤活性,探索细胞因子基因疗法及被动免疫治疗脑胶质瘤的新途径。方法：用昆明种小鼠的脾细胞体外诱导CTL,用腺病毒载体转染IL－2基因,观察其体外增殖活性和样伤活性,再用G422小鼠胶质母细胞瘤细胞建立肺转移瘤模型,36h后经过继回输,2周后计数肺的肿瘤结节,观察IL－2基因转染的CTL对实验性肺转移瘤的治疗作用。结果：重组腺病毒载体在MOI（multipliciy of infection)为100时,转染率达96．8％,IL－2基因修饰CTL增殖活性、IL－2的分泌（248u)和体外杀伤活性（36．4％）明显增强,对实验性肺转移瘤的治疗作用都显著增强,肺转移结节数（28）显著减少（P＜0．01）。结论：IL－2基因转染的CTL过继回输,可直接杀伤和诱导激活机体抗肿瘤免疫反应,使体内抗肿瘤效果显著增强,有效抑制实验性肺转移瘤的生长,为胶质瘤的过继免疫治疗提供了新的思路和实验依据。     

NK与淋巴因子激活的NK细胞的抗肿瘤作用与杀伤机制研究

淋巴因子激活的杀伤（LAK）细胞因其对肿瘤的广谱杀伤作用而受到广泛重视。临床用于晚期肿瘤继承性免疫治疗获得一定疗效。为提高该疗法的疗效，本项目研究了在用淋巴因子血细胞介素2（IL－2）激活前、后，淋巴细胞中具有抗肿瘤活性的主要效应细胞。为证明采用较纯的效应细胞可提高肿瘤继承性免疫的疗效，提供了实验依据。1．“自然杀伤（NK）细胞抗大鼠实验性肿瘤肺转移疗效的观察”研究课题内容：用不连续Percoll密度梯度离心分层法特大鼠脾淋巴细胞中具有NK活性的细胞相对集中。这部分细胞主要的大颗粒淋巴（LGL）细胞，并表达OX8…     

IL—4局部过继免疫抗小鼠膀胱癌的实验研究

目的观察白细胞介素4（IL－4）局部过继免疫治疗小鼠膀胱癌的效应并探讨其相关机制。方法利用4～5周龄近交系T739小鼠建立皮下移植性膀胱移行细胞癌模型并随机分为对照组及IL－4组。于癌细胞接种后5天、10天、15天．瘤体内浸润注射0．1mlIL－4（100U／ml）或Hanks平衡盐溶液（对照组）。定期测量肿瘤体积,MTT比色法检测荷瘤鼠细胞免疫功能．观察膀胱癌组织病理学改变及荷瘤鼠生存期。结果局部免疫治疗2周后．比较对照组,IL－4明显抑制了膀胱癌体积的增长（P＜0．05）,IL－4组脾脏NK细胞活性（39．48％±4．85％）及T淋转刺激指数（1．30±0．04）较对照组NK细胞活性（25．28％±4．62％）及T淋转刺激指数（1．03±0．13）显著提高（P均＜0．05）。对照组及IL－4组荷瘤鼠平均生存期分别为21．56±3．47天及28．44±5．08天,两者有显著性差异（P＜0．01）。IL－4组肿瘤间质内可见大量淋巴细胞浸润,癌组织形成片状坏死灶。结论外源性IL－4局部应用,通过趋化、激活淋巴细胞等,诱导细胞免疫反应．直接发挥较强的抗膀胱癌效应．也有助于机体全身抗瘤免疫功能的恢复。     

IL-12协同B7-1转基因细胞增强C57BL/6小鼠的抗肿瘤免疫

目的：应用逆转录病毒构建IL－12、B7－1表达载体,以研究基因修饰的肿瘤细胞的癌疫苗作用。方法：将两种表达载体分别转染EL－4胸腺瘤细胞,使该细胞能表达分泌B7－1或IL－12,并研究了该基因导入细胞的抗肿瘤免疫效果。结果：当接种了EL－4／IL－12转染细胞后,在C57BL／6同系鼠中其基因导入细胞的肿瘤原性比较EL－4／Wt和EL－4／Neo组明显减少（P＜0．01）,在EL－4／IL－12组的肿瘤被排斥后,实验动物体内诱发了抗EL－4／Wt的全身性、保护性免疫,用51Cr释放测定法证明有一个较强的抗EL－4／Wt和一个较弱的抗同系Lewis肿瘤细胞的CTL活性,体内淋巴细胞消除分析的结果提示减少的肿瘤原性主要与CD4＋、CD8＋和NK细胞有关。用EL－4／IL－12基因转染的瘤细胞进行疫苗治疗比较用EL－4／Neo瘤细胞作疫苗治疗能更加有效地延缓已建立的EL－4／Wt肿瘤的生长（P＜0．005）,EL－4／IL－12和EL－4／B7－1基因联合转染组比用单一的转基因细胞增强了治疗效果（P＜0．005）。结论：研究结果提示应用IL－12进行血液肿瘤的治疗是有效的,IL－12和B7－1联合使用在未来人类癌症的治疗中有一定的应用前景。     

肿瘤抗原致敏的树突状细胞联合IL-2活化的淋巴细胞胸腹腔输注治疗晚期癌性胸腹水

目的：观察肿瘤抗原致敏的树突状细胞联合白细胞介素2活化的淋巴细胞胸膜腹腔内输液治疗晚期癌性胸腹水的效果,为肿瘤的生物治疗提供新的思路。方法：分离晚期癌症患者外周血中单个核细胞,制备单核细胞来源的DC（MoDC)和IL－2活性的淋巴细胞。用患者胸腹腔积液中分离的肿瘤细胞制备冻融抗原致敏MoDC后,联合IL－2活化的淋巴细胞给患者胸腹腔输注,X线或B超监测免疫治疗后胸腹腔积液的变化,FACS分析治疗前后胸腹水中淋巴细胞表面细胞因子受体的表达情况,结果：经肿瘤抗原MoDC联合IL－2活化的淋巴细胞胸瘤腔输液后,胸腹水中表达IL－2R的淋巴细胞数目明显增多,表达IL－10R的淋巴细胞数目明显减少,光镜下可见较多的DC对淋巴细胞黏附及淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤,免疫治疗组完全缓解率46．9％,部分结解率53．1％,有效率100．0％,明显高于DDP对照组（P＜0．05）,结论：肿瘤抗原致敏的MoDC联合IL－2活化的淋巴细胞胸腹腔内输注能显著地促进胸腹水中肿瘤浸润性淋巴细胞的增殖和活化。提高了癌症患者的免疫功能,有效地治疗癌性胸腹水,其机制与肿瘤抗原致敏的MoDC对肿瘤抗原的有效提呈和IL－2活化的淋巴细胞对肿瘤细胞的直接杀伤作用有关。     

芦荟提取物C诱生小鼠肿瘤坏死因子的研究

目的：研究芦荟提取物C(aloe extract C，AE—C)在BALB／C鼠体内诱导产生肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)。方法：连续5d给小鼠注射AE—C，第6天取血分离血清，应用结晶紫染色法测其TNF活性，观察经AE—C诱生的鼠血清对多种瘤细胞的杀伤作用，杀伤作用的持续时间和对温度的敏感性及血清不同稀释度的杀伤效果。结果：AE—C能诱导小鼠产生TNF-α，与对照组比较作用明显(P＜0．01)；并且对多种靶细胞有显著的杀伤作用；TNF活性24h达高峰，第4天。下降明显，5—d接近正常水平；血清标本稀释至200倍时，仍具有较强的杀伤活性；诱生后的TNF有一定的温度敏感性。结论：芦荟提取物C有诱生BALB／C鼠产生肿瘤坏死因子的作用。     

抗原致敏DC联合CIK细胞对肺癌细胞杀伤作用的研究

[ 目的]研究肿瘤抗原致敏的树突状细胞（DC）联合细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）对肺腺癌原代细胞的杀伤作用，及肺癌细胞杀伤作用中细胞因子水平。[方法]取健康人外周血单个核细胞（PBMNC），常规诱导出DC、CIK、LAK细胞；用肺癌A549细胞提取的肿瘤抗原冲击DC，倒置显微镜下观察DC形态，流式细胞仪检测DC经抗原冲击和未经抗原冲击后其表型变化：把CIK细胞、DC-CIK细胞、LAK细胞和DC-LAK细胞作为效应细胞，肺腺癌原代细胞作为靶细胞，共分为4组，在10：1、20：1、50：1的效靶比时，进行杀伤试验，使用LDH释放法测定杀伤活性；ELISA法检测杀伤试验中细胞因子IL-2、IL-12、IFN-γ的分泌水平。[结果]DC经肿瘤抗原冲击后在镜下呈典型成熟形态；DC—CIK细胞对肺腺癌原代细胞的杀伤活性高于CIK细胞、LAK细胞和DC—LAK细胞（P〈0．05），随着效靶比的升高，DC—CIK细胞对肺癌细胞的杀伤效应随之增强（P〈0．05）；细胞杀伤试验中DC—CIK细胞组中IFN-γ、IL-12的分泌量明显高于其它3组（P〈0．05）：而IL2的分泌量以DC-LAK细胞组为最高，DC—LAK和LAK细胞组明显高于其他2组（P〈0．05）。[结论]肿瘤抗原致敏的DC可诱导特异性CIK细胞，显著提高CIK细胞对肺腺癌原代细胞的杀伤作用，其杀伤作用可能与IFN-γ、IL12的分泌量有关。     

重组人IL-15诱导的黏附性NK细胞及其免疫学特性初探

目的 初步探讨重组人白细胞介素（rhIL)-15诱导的黏附NK细胞的免疫学特性。方法 首先经淋巴细胞分离液、贴壁黏附及尼龙毛柱黏附对外周血NK细胞进行初步分离,然后联合使用Percoll不连续密度梯度离心法和T细胞Panning法进一步纯化NK细胞,流式细胞仪鉴定NK细胞并检测其纯度。应用rhIL-2(6000U/ml)和rhIL-15(6000U/ml)诱导纯化的NK细胞（R－NK）转变为黏附NK细胞（A－NK）,再用细胞计数法、MTT法和RT－PCR方法检测两种细胞因子诱导所得A－NK细胞的增殖和杀伤活性等。结果rhIL-15诱导的A－NK细胞在黏附率、增殖活性和细胞毒活性方面均显著高于rhIL-2诱导的A－NK。结论 IL－15是优于IL－2的A－NK细胞诱导剂。     

健康人和肿瘤患者CIK细胞的生物学特性比较

目的比较健康人和肿瘤患者外周血来源的CIK细胞的体外扩增速度、细胞表型和杀伤活性;观察健康人CIK细胞对裸鼠体内移植瘤的预防和治疗作用。方法常规无菌采集健康人和肿瘤患者外周血单核细胞各10份,定向诱导成CIK细胞,然后直接活细胞计数法比较两者的扩增速度;流式细胞仪检测比较两者细胞表型;MTT法比较两者对K562和LOVO细胞株的杀伤活性。取30只裸鼠分为3个组,预防组：裸鼠先尾静脉注射CIK细胞,连续5天,第6天背部皮下接种A549细胞。治疗组：裸鼠于第一天接种A549细胞,次日,分为3组,第一组局部（接种A549部位）注射CIK细胞;第二组尾静脉注射CIK细胞;第三组局部（接种A549部位）及尾静脉均注射CIK细胞,均连续治疗5天。对照组：裸鼠,第一天背部皮下接种A549细胞,第二天开始在尾静脉注射生理盐水,连续5天。四周后处死全部裸鼠,测量肿瘤大小,称重,计算肿瘤体积,抑瘤率,并做病理检查。结果健康人CIK细胞的扩增速度显著高于肿瘤患者CIK细胞（P〈0．05）;流式细胞仪检测显示健康人CIK细胞CD3^＋CD8^＋、CD3^＋CD56^＋细胞百分比显著高于患者CIK细胞（P〈0．05）;健康人CIK细胞对K562,LOVO的杀伤活性强于患者CIK细胞（P〈0．05）。对照组各裸鼠背部皮下移植瘤出现较早,并且以相近速率快速生长,体积较大;CIK细胞预防组及治疗组中局部注射组和尾静脉注射组的移植瘤出现较晚,生长较慢,体积较小,联合治疗组治疗效果更佳（P〈0．05）。结论体外实验中,健康人CIK细胞体外扩增快,CD3^＋CD8^＋、CD3^＋CD56^＋细胞比例高,对肿瘤细胞的杀伤活性强于肿瘤患者CIK细胞。动物实验中,健康人CIK细胞对裸鼠移植瘤有预防和治疗作用。     

腹部肿瘤病人rIL-2/LAK治疗前后T细胞亚群、淋巴细胞转化试验及NK细胞活性变化

本文对30例晚期腹部肿瘤患者rIL－2／LAK治疗前后的免疫功能进行动态观察。检测指标包括T细胞亚群（CD3、CD4、CD8及CD4／CD8）。淋巴细胞转化试验（LymphocytesBlastogenesisTestLBT）和NK细胞活性。结果表明：肿瘤患者经rIL－2／LAK治疗后，CD3、CD4明显升高．CD8也略有升高．CD4／CD8明显升高；淋巴细胞转化率明显升高；经rIL－2／LAK治疗后，NK细胞活性增强。这反映肿瘤患者经rIL－2／LAK治疗后机体细胞免疫功能得到增强。