漆姑草水提物对K562细胞凋亡及细胞周期影响

目的 探讨漆姑草水提物(HSJ)对人白血病细胞株K562细胞凋亡及细胞周期影响。方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测HSJ对K562细胞的增殖抑制作用;台盼蓝拒染法观察HSJ对细胞生长曲线影响;流式细胞仪检测HSJ对K562细胞凋亡影响;DNA倍体分析法检测HSJ对K562细胞周期时相影响。结果 HSJ对K562细胞增殖抑制率随剂量增加而增加,作用48 h半数抑制浓度(IC₅₀)为1.35 mg/mL; 1.0、2.0、4.0 mg/mL HSJ处理后,K562细胞凋亡率分别为(8.39±0.81)%、(8.88±1.12)%、(13.42±2.04)%,均高于对照组的(4.60±1.09)%(P<0.05);HSJ能够引起细胞周期进程的改变,与对照组比较,HSJ增加K562细胞中G2期细胞比例(P<0.05),降低S期时相细胞比例(P<0.05),降低增殖指数(PI)(P<0.05),HSJ将K562细胞阻滞于G2期。结论 HSJ对K562细胞具有增殖抑制作用,其机制与诱导细胞凋亡和阻滞K562细胞在G2期有关。     

预热对K562细胞肿瘤坏死因子α敏感性的影响

为探讨预热对肿瘤细胞肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）敏感性的影响及其机理,将白血病患者胸腔渗出细胞系（Ｋ５６２细胞）在４０℃预热不同时间（０,３０,６０,９０,１２３０,１５０和１８０ｍｉｎ）,使细胞热应激蛋白７０（ＨＳＰ７０）高表达;然后将预热６０ｍｉｎ细胞和未预热细胞分别暴露于５０,１００,２００和４００Ｕ／ｍｌ的ＴＮＦ－α１６小时,用ＭＴＴ比色法检测细胞活力。保持ＴＮＦ－α浓度为１００Ｕ／ｍｌ,     

黄粉虫抗菌肽对K562细胞周期的影响及与羟基脲对细胞增殖抑制的比较

目的观察黄粉虫抗菌肽对K562细胞周期的影响;比较该抗菌肽与羟基脲对K562细胞的增殖抑制作用。方法用流式细胞仪检测黄粉虫抗菌肽对K562细胞周期的影响。黄粉虫抗菌肽与羟基脲分别设置5个浓度组,用MTT比色法分别求出2种药物不同浓度对K562的抑制率,根据浓度和抑制率用SPSS软件求出回归方程和IC50。结果细胞周期G0/G1期和G2/M期细胞比例增加,S期细胞比例下降。其中只有G0/G1期和S期与对照组相比,差异具有统计学意义（P〈0.01）。说明抗菌肽可使细胞周期阻滞于G0/G1期,从而抑制S期DNA的合成。抗菌肽和羟基脲的IC50分别为29.98和3644.45μg/ml。结论抗菌肽可通过影响细胞周期来发挥抗K562细胞的作用。抗菌肽明显优于羟基脲对K562细胞的增殖抑制作用,有较好的应用前景。     

褐藻糖胶对人白血病细胞株K562凋亡的影响

目的探讨海带提取物褐藻糖胶对体外培养的人髓系白血病细胞株K562生长的影响．从细胞凋亡角度研究其抗肿瘤机制。方法采用肿瘤细胞体外培养、单细胞凝胶电泳、凋亡细胞DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞技术．观察不同剂量褐藻糖胶对体外培养的白血病细胞株K562细胞的影响。结果噻唑蓝（MTT）实验结果显示，褐藻糖胶对K562细胞均具有较强的杀伤作用，尤其以1g／L剂量组为明显。单细胞凝胶电泳实验结果表明，褐藻糖胶对肿瘤细胞DNA有明显损伤作用．尤其以1g／L剂量组的影响最为明显。DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测结果显示．经褐藻糖胶处理后，肿瘤细胞洲亡率上升，其中1g／L剂量组较为明显。提示褐藻糖胶可能通过诱导肿瘤细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用。结论褐藻糖胶可通过诱导肿瘤细胞凋亡，从而达到抗肿瘤的目的。     

PTK787对早产儿视网膜病变大鼠模型血管内皮生长因子及其受体mRNA表达的影响

目的:研究受体酪氨酸激酶亚群抑制剂PTK787对早产儿视网膜病变(ROP)大鼠模型血管内皮生长因子(VEGF)及其受体VEGFR-2 mRNA的影响。方法:建立波动氧(80%和10%氧浓度24 h交替)诱导的SD大鼠ROP模型。67只新生SD大鼠随机设立空气组、模型组、治疗组(腹腔注射PTK787 50 mg/kg);每组随机抽取6只新生鼠,利用实时定量荧光PCR,观察生后12天及第17天的视网膜组织VEGF与VEGFR-2 mRNA表达,数据采用比较CT值法(2-CT法)分析基因相对表达量。选择GAPDH为内参。结果:12天及17天模型组较对照组VEGF与VEGFR-2 mRNA表达量明显增多,而治疗组未见异常。结论:PTK787对ROP病变大鼠模型VEGF与VEGFR-2 mRNA表达呈明显的负性调控作用。     

三氧化二砷对人红白血病细胞增殖抑制作用

三氧化二砷(arsenic trioxide,As₂O₃)是中药砒霜的主要有效成分。新近研究发现,As₂O₃对多种肿瘤细胞具有广谱的细胞毒效应^(1-2),被首选用于血液系统恶性肿瘤的治疗。本研究以人红白血病细胞株(K562细胞)为靶点,观察不同浓度的As₂O₃制剂对K562细胞增殖周期的影响及亚细胞结构改变,旨在为人红白血病的治疗提供理论依据。     

LXA4对人白血病细胞K562与HL60膜受体ALX表达的影响

目的比较脂氧素A4受体(lipoxin A4 receptor,ALX)在人白血病细胞K562与HL60细胞的表达情况,研究脂氧素A4(Lipoxin A4,LXA4)对K562与HL60膜受体ALX的表达影响,探索LXA4对K562与HL60细胞作用效应强弱不同的可能因素。方法体外培养人白血病细胞K562与HL60,实验分为空白组和LXA4(50、100、200 nmol/L)处理组。采用免疫荧光技术检测K562和HL60细胞是否表达LXA4受体ALX;用不同浓度LXA4作用24 h后,RT-PCR和Western blotting检测并比较各实验组K562与HL60膜受体ALX的表达变化。结果免疫荧光检测显示,K562与HL60胞膜周围及胞浆内有明显绿色荧光,提示二者表达LXA4受体ALX;RT-PCR和Western blotting检测结果表明:随LXA4作用浓度的增高,K562与HL60细胞膜受体ALX的表达呈增高趋势(P<0.05),组间比较,ALX表达差异无统计学意义(P>0.05);K562与HL60空白组比较即从基础水平比较ALX的表达水平无明显差异(P>0.05)。结论 LXA4可上调K562与HL60膜受体ALX的表达,且LXA4对K562与HL60效应强弱的不同并非ALX基础表达水平不同所导致,可能存在其他影响因素。     

氯化甲基汞及三氧化二砷对K562细胞凋亡的影响

目的研究氯化甲基汞（MMC）及三氧化二砷（ATO）对K562细胞凋亡的影响。方法K562细胞经1．25、2．5、5、10和20μmol／LMMC或ATO作用24h，采用FITC-“Annexin”V／PI双染法进行细胞凋亡率的检测。结果K562细胞接触不同剂量MMC或ATO 24h，随着剂量增加凋亡率不断增加，5．0μmol／L的细胞凋亡率分别为（31．54±6．35）％和（25．37±7．68）％，与空白对照组（10．36±3．23）％比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论MMC及ATO均能促进K562细胞凋亡，且呈剂量依赖性。     

热暴露对K_(562)细胞生存能力的影响

哺乳动物细胞正常生存温度是 3 7℃ ,低温可以抑制细胞的代谢 ,有利于细胞的长期保存 ;而高温就有可能引起细胞的凋亡或死亡。肿瘤细胞是一种对环境温度比较敏感的一类细胞 ,在临床上人们利用肿瘤细胞的这个特点 ,在肿瘤治疗中用肿瘤局部加热的方法 ,以达到杀死肿瘤细胞的目的 ,称为肿瘤热疗。国外学者对前列腺肿瘤细胞、胃癌细胞、NIH3T3细胞系均进行了高温对肿瘤细胞活性影响的实验[1 ] ,但尚未见热暴露对造血系统肿瘤细胞活性影响的实验研究资料。从现有的研究资料发现 ,肿瘤热疗与化疗药物同时使用可以增强化疗药物的治疗效果 ;但是也…     

诱导分化剂和热应激对K562细胞JWA和热应激蛋白70表达的影响

目的　研究诱导K5 6 2细胞分化和热应激过程中 ,JWA表达的特点 ,探讨JWA与热应激蛋白 (Hsp70 )表达的关系以及参与诱导分化和热应激可能的机制。方法　分别建立K5 6 2细胞诱导分化和热应激模型 ,采用Western blot方法检测JWA、Hsp70、热休克转录因子 (HSF1)、HSF2蛋白表达水平。结果　 (1)佛波酯 (TPA ,10 0ng ml)、氯化高铁血红素 (hemin ,3× 10 - 5mol L)、阿糖胞苷 (Ara C ,80ng ml)、阿霉素 (adriamycin ,4× 10 - 8mol L)、全反式维甲酸 (ATRA ,1× 10 - 6 mol L)、三氧化二砷 (As2 O3,1× 10 - 6 mol L)分别诱导K5 6 2细胞 4 8h ,JWA、Hsp70蛋白表达水平均明显增加 ;HSF2在hemin、Ara C、ad riamycin诱导下表达增加 ;(2 )在 4 2℃不同时间 (10、2 0、30、4 5、6 0、90min)和不同温度 (39℃、4 2℃、4 5℃ )处理下 ,Hsp70表达水平的变化与JWA蛋白表达水平的变化趋势基本相似 ,且HSF1在热应激早期表达。结论　在诱导分化、热应激过程中 ,JWA与Hsp70蛋白表达水平均明显上调 ,且变化趋势有一定的相似 ,但所涉及的细胞内信号转导通路可能不是惟一的。JWA表达与HSF1或HSF2似乎没有直接的特征性联系。     

HSP70高表达对K_(562)细胞热耐力的影响

用硫酸镉诱导细胞ＨＳＰ７０ 高表达,ＲＴ—ＰＣＲ 检测ＨＳＰ７０ｍ ＲＮＡ 水平并观察ＨＳＰ７０ 水平对细胞热耐力的影响。发现硫酸镉作用于细胞１ｈ 后,细胞的ＨＳＰ７０ 水平显著增高, ＨＳＰ７０ 水平高的细胞其热耐力明显强于ＨＳＰ７０ 水平低的细胞组;ＨＳＰ７０ 水平与细胞热耐力间正相关。提示化学因素诱导的ＨＳＰ７０ 表达增高可以保护热暴露细胞,提高细胞热耐力     

HSP70高表达对K562细胞热耐力的影响

为探讨ＨＳＰ７０高表达与细胞热耐力的关系,用硫酸镉诱导细胞ＨＳＰ７０高表达;ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ水平;观察ＨＳＰ７０水平对细胞热耐力的影响。结果：硫酸镉作用于细胞１ｈ后,细胞的ＨＳＰ７０水平显著增高,ＨＳＰ７０水平高的细胞其热耐力明显强于ＨＳＰ７０水平低的细胞组;ＨＳＰ７０水平于细胞热耐力间正相关。结论：化学因素诱导的ＨＳＰ７０表达增高可以保护热暴露细胞,提高细胞热耐力。     

邻苯二甲酸二丁酯对EL4细胞增殖作用的影响

目的探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对激活与未激活的小鼠淋巴瘤细胞(EL4细胞)增殖作用的影响。方法用佛波醇酯(简称PMA,1、5、10 ng/ml)激活EL4细胞,分别用不同浓度的DBP(0.1、1、2.5、5、10μmol/L)在无或有PMA激活条件下作用EL4细胞24 h及48 h,以MTT法检测细胞增殖情况。结果与对照组相比,不同浓度的DBP单独作用于未激活的EL4细胞24 h及48 h均未引起细胞明显增殖。以5 ng/ml PMA激活EL4细胞,0.1~2.5μmol/L DBP作用细胞24 h就能明显促进细胞增殖,而5μmol/L DBP在48 h时细胞增殖作用显著(P<0.05)。结论DBP能明显促进激活的EL4细胞增殖,且DBP与PMA对EL4细胞增殖有协同作用,可能与DBP的免疫毒性有关。     

HSP70高表达对K562细胞化疗敏感性研究

目的：研究化学因素引起的热应激蛋白70（HSP70）升高对K562细胞化疗药物体外敏感性的影响。方法：用氯化镉诱导K562细胞使其HSP70高表达，在高表达细胞中分别加入甲氨蝶呤（MTX）、丝裂霉素C（Mitomycin C）、顺氯氨铂（PDD）、平阳霉素（Bleomycin）等4种化疗药物，药物浓度以临床一次用量的1／250为中剂量，中剂量的1／10、10倍分别为低剂量和高剂量，作用16h后用MTT比色法检测细胞活力；HSP70用RT－PCR检测。结果：氯化镉可诱导细胞HSP70高表达，其中作用4h后表达最高；HSP70高表达可以降低细胞对化疗药物的敏感性，HSP70表达水平越高，细胞对化疗药物的敏感性越低。结论：非热诱导的HSP70高表达可以降低肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，其结果与热诱导的作用相似。     

K562细胞消减cDNA文库的构建

目的：构建氯化血红素诱导性K562细胞抑制消减cDNA文库，以期鉴定出K562细胞中氯化血红素诱导性表达的珠蛋白合成调节因子cDNA基因。方法：采用不同浓度的氯化血红素诱导培养K562细胞，经联苯胺阳性细胞百分率及血红蛋白浓度分析，选择其最佳诱导浓度。分别提取氯化血红素诱导培养的K562细胞（tester，检测子）和未加诱导剂培养的K562细胞（driver，驱赶子）mRNA，逆转录合成双链cDNA。经两轮消减杂交，两轮PCR扩增后，正向消减的PCR产物与T载体连接，构建K562细胞抑制消减cDNA文库，文库经蓝-白筛选后，纯化阳性克隆质粒，EcoR I酶切及PCR扩增插入片段。结果：以50μmol/L氯化血红素诱导K562细胞，其联苯胺阳性细胞百分率及血红蛋白浓度均达到最大值，故选择50μmol/L氯化血红素诱导培养K562细胞并构建K562细胞抑制消减cDNA文库。文库鉴定证实其阳性克隆中分别含有不同长度的插入片段。结论：成功构建了氯化血红素诱导性K562细胞抑制消减cDNA文库，该消减cDNA文库结合生物信息学（Bioinformatics）分析可用于深入研究K562细胞内氯化血红素诱导性表达基因的结构和功能。     

酒精对体外培养人红白血病细胞活性影响的研究

目的 了解长期饮酒对人体组织细胞损伤的可能原因。方法 采用不同浓度酒精加入体外培养的人红白血病(K562)细胞中,用荧光显微镜和倒置光显微镜观察细胞形态学变化,用琼脂糖凝胶电泳的方法检测细胞DNA裂解。结果 1％酒精能有效诱导K562细胞凋亡,且随剂量增大凋亡时间缩短。5％酒精作用30h则可引起细胞坏死。结论 长期饮酒者血液中有核细胞数量减少,可能与其促凋亡作用有关。