前列腺特异性抗原多克隆抗体的制备及初步应用

用盐析法，阴，阳离子交换柱层析及凝胶过滤法，从人前列腺组织中分离纯化前列腺特异性抗原，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示其分子量为３４ＫＤ。以该抗原常规免疫家兔，获得抗ＰＳＡ多克隆抗体，此抗体经进一步纯化后，以免疫印迹技术证实它具有ＰＳＡ３４特异性。     

小鼠肝脏免疫抑制蛋白质的分离和纯化

我们应用硫酸铵分段盐析,结合多种离子交换柱层析和羟磷灰石柱层析,从正常小鼠肝浸液中分离纯化出一种免疫抑制蛋白质,在体外它能很强地抑制小鼠T和B淋巴细胞对促有丝分裂原和同种异型抗原的增生反应。纯化的免疫抑制蛋白质经聚丙烯酰胺凝胶电泳及等电聚焦电泳鉴定均为一条带,其pI值在7.5～7.8之间。Sephadex G-100凝胶层析测得纯化蛋白质的分子量为78,000,SDS-PAGE测得此蛋白质亚基的分子量为38,500。同时经初步鉴定,此纯化的蛋白质既非糖蛋白又非脂蛋白。     

人类精浆特异性抗原p30理化性质的初步研究

作者在分离纯化人类精浆特异性抗原p30的基础上,用不同凝胶浓度的SDS-PAGE检测该纯化p30的分子量,用等电聚焦检测其等电点,并分析其氨基酸组成。结果证明p30与前列腺特异性抗原属同一种糖蛋白。本文还探讨了不同作者所测p30理化参数不一致的原因。     

人心肌特异性肌钙蛋白的提取与鉴定

目的从人心肌组织中提取和纯化心肌特异性肌钙蛋白,为建立心肌梗塞病人免疫诊断试剂准备抗原。方法取新鲜人心室肌组织经捣碎离心提取,ＤＥＡＥ５２柱层析纯化,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳鉴定。结果１００ｇ心室肌可提取３７ｍｇ纯品肌钙蛋白。结论本次提取的心肌特异性肌钙蛋白纯度较高,能作抗原使用。     

人补体Cls纯化及其检测

我们采用中性条件沉淀人血浆优球蛋白,经 DEAE 柱层析,最终获得纯化的 Cls 抗原。用微量免疫法制备人 Cls 血清经免疫化学方法鉴定后证实为单特异性抗人 Cls 血清。随着加入的聚合 IgG 量的增加,血清中可检测的 Cls 逐渐减少,这提示该抗血清仅能特异性地检测未活化的 Cls,而不能检测 Cls,用这种抗血清作免疫单向扩散定量测定 Cls,可以了解 Cl 活化程度。这在补体经典途径激活的研究中不失为一稳定而简易的方法。     

纯化抗原半定量检测幽门螺杆菌感染

目的 :鉴定并提取幽门螺杆菌 ( Hp)特异性抗原 ,建立测定抗 Hp抗体的半定量免疫酶技术。　 方法 :10株 Hp可溶性蛋白用于十二烷基磺酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹分析 ,凝胶层析提取特异性抗原 ,方阵滴定建立免疫酶方法。纯化抗原与全菌抗原同批检测 136例患者 ,以免疫印迹分析作为金标准。　 结果 :Hp主要特异性抗原分子量为 660 0 0 ,590 0 0 ,310 0 0和2 50 0 0 ,Sephadex G- 2 0 0柱层析第 1峰提取物含其中 3种抗原成分。纯化抗原 EL ISA测定抗 HpIg G,敏感性 98.9% ,特异性 92 .5% ,准确性 97.0 % ,优于应用全菌抗原的检测结果。　 结论 :本实验建立的检测抗 Hp Ig G方法 ,具有敏感、特异、半定量可靠、可目测定性及可用于微量检测等特点 ,值得推广应用     

中压液相层析法纯化人血清载脂蛋白AⅠ和AⅡ的研究

目的 建立中压液相层析分离法纯化人HDL主要载脂蛋白AⅠ、AⅡ等的方法。方法 以人血清高密度脂蛋白制品为原料，经一次性密度梯度超离心法纯化HDL，去脂HDL经中压Sephacryl S-200柱层析获apoE、AⅠ、AⅡ及Cs粗品。用Sephadex G-75柱层析分离apoAⅠ及AⅡ。结果 纯化的载脂蛋白apoAI及AⅡ经免疫和SDS-PAGE鉴定为免疫纯及电泳纯。结论 建立了一种可大量、快速、高分辨分离纯化载脂蛋白apoAⅠ及AⅡ的方法，为今后载脂蛋白和脂蛋白的基础和临床研究提供必要的实验材料。     

人肝脏F蛋白放射免疫分析方法的建立及其临床意义

目的建立人血清肝脏F蛋白的放射免疫分析方法(RIA),初步探讨其在肝脏疾病中的临床意义。方法通过低温超速离心、层析分离等电聚焦方法,纯化人肝脏F蛋白并保留了原有的免疫活性;用常规方法免疫兔子,得到多克隆抗体;纯化的F蛋白用Iodogen法125I标记;建立放免药盒。测定116例正常人和167例不同疾病患者的血清F蛋白浓度。结果抗血清亲和常数Ka值为1.33×1010L/mol,F蛋白的标记率为34.8%,放化纯度为92.0%,比活度为3548GBq/g,标准曲线ED50为(22.39±4.15)μg/L,非特异性结合率(NSB)<5.0%,灵敏度为1.26μg/L;批内CV为4.1%,批间CV为8.5%;回收率为(98.77±2.87)%,工作范围为0～80μg/L,正常人血清中F蛋白水平浓度为(14.52±4.15)μg/L,肝细胞损伤时血清F蛋白水平显著升高(P<0.01)。阳性检出率原发性肝癌85.4%、急性肝炎89.2%、酒精性肝炎79.6%、肝硬化64.5%。结论该方法可测范围广、灵敏度高、特异性强、重复性好、非特异性结合率低。当肝细胞损伤时,血清F蛋白浓度明显升高,因此,RIA测定血清F蛋白极有可能成为一种反映肝细胞损伤程度的灵敏的和特异的新指标。     

人肝特异性F抗原的分离纯化及其性质的初步研究

本文对人肝组织特异性 F 抗原进行了分离纯化,取得少量精品(PAGE纯),并对该抗原一些特性做了研究。以 CBA 抗 Balb/c 鼠肝血清通过免疫双扩散法进生鉴定,纯化倍数达580倍。还初步确定了肝特异性 F 抗原的分子量为43KD,等电点在6.7～6.9之间。     

一种新的胃癌相关糖脂糖蛋白抗原的研究

报告一株鼠抗人胃癌单克隆抗体(单抗)MG7相应抗原的纯化及鉴定。单抗MG7经盐析沉淀,DEAE-52纤维素柱层析纯化后,与溴化氰活化的Sepharose 4B偶联,制备免疫吸附剂,用免疫亲和层析的方法从胃癌组织可溶性抗原提取液中纯化出MG7相应抗原。经高效薄层色谱,TLC放射免疫自显影,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及免疫印渍等实验分析,证实MG7相应抗原含有中性糖脂和糖蛋白,抗原决定簇存在于糖链上,是一种新的胃癌相关抗原。     

免疫亲和层析纯化棘球蚴囊液特异性抗原的研究

应用兔抗健康人血清球蛋白吸附柱、兔抗猪囊尾蚴血清球蛋白吸附柱分别对人棘球蚴囊液粗抗原进行了免疫亲和吸附，制得纯化抗原，并用ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ法检测其抗原性。试验表明：经兔抗猪囊尾蚴血清球蛋白吸附柱纯化的抗原与人猪囊虫病血清的交叉反应为０，表明基本去除了粗抗原中所含的与猪囊尾的交叉成份。经兔抗健康人血清球蛋白吸附柱吸附后的抗原，并不影响对棘球蚴病人的阳性检出率，并在琼脂扩散试验中与兔抗人血清球蛋白之间没有出现沉淀线，这表明基本除去了粗抗原中的宿主成分。表明免疫亲和层析是一个有效的抗原纯化方法     

p11融合蛋白表达、纯化及抗血清的制备

目的：表达GST－p11和6xHis-p11融合蛋白并制备GST－p11特异性抗体。方法：将人p11基因克隆人两种原核表达载体pGEX-4T-2和pQE30,分别在大肠杆菌BL21和M15中表达，用Glutathione Sepharose 4B和Ni-NTA agarose亲和柱分别纯化目的蛋白。利用纯化的GST－p11蛋白制备多克隆抗体。结果：得到高表达量的融合蛋白，经亲和层析柱纯化获得较高纯度的GST－p11和6xHis-p11蛋白。以GST－p11蛋白免疫新西兰兔得到p11多克隆抗体，Westernblotting证实该杭体能够识别6xHis-p11蛋白，具有较高特异性。结论：利用原核表达人p11融合蛋白制备的p11多克隆抗体具有较好的特异性，为研究p11蛋白在蛋白转运和定位过程中的作用提供重要的技术和材料保障。     

丁型肝炎抗体诊断试剂的研制

取乙型肝炎患者Delta抗体(抗—HD)阳性血清,经硫酸铵盐析和DE—52柱层析,得到纯化的抗—HD抗体,用辣根过氧化物酶标记。用丁型肝炎病毒(HDV)感染慢性携带土拨鼠肝炎病毒的东方土拨鼠(Woodchuck)后,取其肝组织制成匀浆,离心后经Sepharose 4B柱,免疫亲和层析柱,获得高丰度的HDAg。双抗体夹心法测定其滴度高达1∶10~6。制备成ELISA竞争抑制法检测抗HD试剂盒,其特异性、敏感性、重复性与爱尔兰同种试剂比较结果一致。     

p11融合蛋白表达、纯化及抗血清的制备

目的 :表达GST p11和 6xHis p11融合蛋白并制备GST p11特异性抗体。方法 :将人p11基因克隆入两种原核表达载体pGEX 4T 2和pQE30 ,分别在大肠杆菌BL2 1和M15中表达 ,用GlutathioneSepharose 4B和Ni NTAagar ose亲和柱分别纯化目的蛋白。利用纯化的GST p11蛋白制备多克隆抗体。结果 :得到高表达量的融合蛋白 ,经亲和层析柱纯化获得较高纯度的GST p11和 6xHis p11蛋白。以GST p11蛋白免疫新西兰兔得到p11多克隆抗体 ,Westernblotting证实该抗体能够识别 6xHis p11蛋白 ,具有较高特异性。结论 :利用原核表达人p11融合蛋白制备的p11多克隆抗体具有较好的特异性 ,为研究p11蛋白在蛋白转运和定位过程中的作用提供重要的技术和材料保障     

抗人精子外套抗原单抗的纯化及相应抗原的提纯和鉴定

目的：研究人类精浆中一类特异性的抗原成份（精子外套抗原sperm－coatingantigens，SCA）。方法：本实验用已制备得的一株抗人精浆来源的精子外套抗原单克隆杂交瘤细胞株D1．在小鼠腹腔增殖生产大量腹水单克隆抗体，通过快速蛋白液相层析仪（FPLC）系统的羟基磷灰石柱，一次性从小鼠腹水中纯化此抗体，并制备免疫亲和层析柱，从精浆中分离到相应的抗原成份。结果：经鉴定该抗原成份分子量为20kD，来源于精囊腺，具有器官特异性。结论：该SCA的提纯，为抗精子避孕疫苗的研制提供了基础实验材料，并且有助于进一步研究其在生殖活动和免疫不孕病因中的作用。     

人EC-SOD的克隆及高效表达

将编码人胞外超氧化物歧化酶（EC-SOD）成熟肽的cDNA插入含T7启动子的质粒pET-28a( )中构建表达质粒pET-EC-SOD，表达菌株用1mmol/L异丙基硫代-β-D半乳糖苷（IPTG）诱导表达3h-5h后，产生较多的重组人EC-SOD，并形成包含体。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析表明，表达的重组蛋白占菌体可溶性蛋白质的26%以上。经纯化和复性后的EC-SOD比活为每毫克纯化酶蛋白1200U。将EC-SOD转染粉纹夜蛾Tn-5Bl-4细胞，经扩增后在细胞内进行表达。SOS-PAGE分析结果表明，粉纹夜蛾细胞中表达一相对分子质量约为28ku的特异蛋白质带，Western blot分析表明，该特异条带即为EC-SOD蛋白，连苯三酚自氧化法测得表达产物比活为每毫克细胞裂解物260U。     

孕妇血清中早孕因子的分离与纯化

目的：建立一条从妊娠早期妇女血清中分离纯化早孕因子的技术路线，获得高纯度的早孕因子。方法：采用依次经过DEAE 52阴离子交换层析、SP Sepharose F．F阳离子交换层析、ConA Sepharose 4B亲和层析和Heparin Sepharose Cl-6B亲和层析分离纯化的方案，最终得到具有早孕因子活性的Heparin-Ⅱ成分，早孕因子活性采用活性玫瑰花环抑制实验检测。采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定纯化物。结果：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示有一条电泳区带，相对分子量为10．91kDa。结论：这条分离纯化早孕因子的技术路线是可行的，得到的相对分子量为10．91kDa的蛋白质为电泳纯的早孕因子。     

广东菲牛蛭中有效抗凝物质的分离纯化

目的从广东菲牛蛭鲜体中分离纯化有效抗凝物质,并对其生化性质进行测定。方法用水提醇沉、离子交换、反相层析法等分离纯化广东菲牛蛭中的抗凝物质,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其蛋白的分子质量,并运用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI—TOF—MS／MS）进行分析。结果从广东菲牛蛭中分离出得到一种电泳纯的活性多肽,其相对分子质量为19．2kDa。所得菲牛蛭抗凝活性多肽每克蛋白所含单位抗凝活性≥2548000ATU,活性回收率约为53％。结论从广东菲牛蛭鲜体中分离出的活性抗凝多肽对凝血酶具有极强的抑制作用,开发应用前景广阔。