脓毒症大鼠心肌细胞凋亡与p53和Bcl-2基因表达的关系

目的 探讨脓毒症大鼠心肌细胞凋亡的变化及其与Bcl-2和p53基因mRNA表达的关系.方法 取体重190～220 g的成年雄性SD大鼠42只,随机分为三组,脓毒症组30只,正常对照组6只,假手术组6只;脓毒症组以盲肠结扎穿刺法(CLP)复制脓毒症大鼠模型,于术后3 h、9 h、12h、24 h各处死6只大鼠,假手术组麻醉满意后打开腹腔,正常对照组仅行麻醉术,均取1.0 mm3大小的心肌组织,另外余下的6只脓毒症鼠术后待其自然死亡不取心肌.采用电镜和TUNEL法检测大鼠心肌细胞的凋亡,用RT-PCR方法检测大鼠心肌细胞Bcl-2和p53基因mRNA的表达.结果 电镜下大鼠凋亡的心肌细胞胞膜皱缩,核固缩、边集、碎裂,胞膜突起、凋亡小体形成,TUNEL法检测各时间点的脓毒症大鼠心肌细胞的凋亡率均较正常对照组和假手术对照组明显升高(P＜0.05),术后12h达到峰值;p53 mRNA表达明显升高(P＜0.05),其表达量与心肌细胞凋亡指数呈正相关性(r=0.976,P＜0.05);Bcl-2 mRNA表达明显降低(P＜0.05),其表达量与心肌细胞凋亡指数呈负相关性(r=-0.833,P＜0.05).结论 脓毒症大鼠心肌细胞的凋亡明显增高,p53和Bcl-2 mRNA的表达异常是其可能机制之一.     

Bcl-2基因在脓毒症大鼠心肌细胞凋亡中作用的研究

目的:探讨Bcl-2基因在脓毒症大鼠心肌细胞凋亡中的意义.方法:以盲肠结扎并穿刺法制作脓毒症大鼠模型,用电镜和TUNEL法检测其心肌细胞凋亡变化,用免疫组化方法检测Bcl-2蛋白,用RT-PCR法检测其心肌细胞的Bcl-2基因mRNA的表达.用SPSS10.0软件完成统计分析.结果:一定时间内脓毒症大鼠心肌细胞凋亡数均明显高于正常对照组和假手术对照组(P＜0.05),Bcl-2蛋白表达阳性细胞数和mRNA表达量均较正常对照和假手术组明显降低(P＜0.05),其变化均与TUNEL法检测凋亡的结果一致(P＜0.05).结论:细胞凋亡可能是脓毒症中心肌损害的机制之一.Bcl-2基因的改变可作为脓毒症病情改变的标志.     

3cl-2基因在脓毒症大鼠心肌细胞凋亡中作用的研究

目的：探讨Bcl-2基因在脓毒症大鼠心肌细胞凋亡中的意义。方法：以盲肠结扎并穿刺法制作脓毒症大鼠模型。用电镜和TUNEL法检测其心肌细胞凋亡变化，用免疫组化方法检测Bcl-2蛋白，用RT-PCR法检测其心肌细胞的Bcl-2基因mRNA的表达。用SPSS10．0软件完成统计分析。结果：一定时间内脓毒症大鼠心肌细胞凋亡数均明显高于正常对照组和假手术对照组（P〈0．05），Bcl-2蛋白表达阳性细胞数和mRNA表达量均较正常对照和假手术组明显降低（P〈0．05），其变化均与TUNEL法检测凋亡的结果一致（P〈0．05）。结论：细胞凋亡可能是脓毒症中心肌损害的机制之一。Bcl-2基因的改变可作为脓毒症病情改变的标志。     

线粒体损伤在脓毒症大鼠心肌细胞凋亡中的作用

目的 探讨线粒体损伤在脓毒症大鼠心肌细胞凋亡中的作用及其可能机制.方法 72只SD大鼠随机(随机数字法)分为2组:(1)阴性对照组18只,腹腔注射无菌生理盐水;(2)脓毒症组,按大肠杆菌内毒素注射后6、12、24 h分为3个亚组,各18只.取心脏组织,光镜和电镜下观察组织病理学和超微结构的变化,TUNEL法原位检测心肌细胞凋亡并计算凋亡指数,免疫印迹法检测核转录因子-κB (NF-κB) p65的表达,黄嘌呤氧化酶法测定线粒体超氧化物歧化酶(SOD)活性,比色法检测线粒体还原型谷胱甘肽(GPx)活性,硫代巴比妥酸法测定线粒体脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量,OxyBlot TMas蛋白氧化检测试剂盒观察线粒体蛋白氧化.结果 脓毒症大鼠心肌有炎症细胞浸润,细胞水肿及空泡形成,并且在24 h最明显;心肌细胞凋亡指数和核蛋白NF-κB p65活化均显著增加(P＜0.05).脓毒症大鼠心肌线粒体损伤明显,至24 h病变最严重,线粒体膜破碎,线粒体嵴消失,大量空泡形成.脓毒症大鼠心肌线粒体抗氧化酶SOD和GPx活性显著下降(均P＜0.05),线粒体脂质过氧化和蛋白氧化均显著增加(均P＜0.05),并呈时间依赖性.结论 线粒体损伤在脓毒症心肌细胞凋亡中发挥重要作用,其作用机制可能与线粒体抗氧化物酶活性降低,活性氧产生过多和聚集有关.     

细胞凋亡及Bcl-2和Bax基因表达在脓毒症大鼠肾脏损伤中的作用

目的:探讨细胞凋亡及Bcl-2、Bax在脓毒症大鼠肾损伤中的作用。方法:大鼠分为正常组(n=6)、假手术组和脓毒症组(均n=24)。采用盲肠穿孔结扎术建立脓毒症模型。建模后3、6、12、24h测定血Cr、BUN,电镜观察肾组织超微结构,免疫组化法检测Bcl-2、Bax表达。结果:脓毒症组Cr、BUN较假手术组明显增高,随时间呈上升趋势;电镜下见肾小管上皮细胞凋亡;6h组Bax表达明显增加(0.485±0.011vs0.351±0.020;P<0.01),随病程延长,Bcl-2表达有所增加(P>0.05),Bcl-2/Bax比值降低(0.725±0.035vs0.991±0.060;P<0.01),随病程延长而下降。结论:脓毒症后Bax表达增强、抑制Bcl-2的表达,引起细胞凋亡及肾脏损伤。     

谷氨酰胺对脓毒症大鼠心肌细胞Bcl-2/Bax表达的影响

目的 研究脓毒症大鼠心肌细胞凋亡与Bcl-2/Bax基因及蛋白表达的关系,探讨谷氨酰胺(Gin)对脓毒症心肌细胞凋亡的保护作用.方法采用内毒素(LPS 4 ms/ks)腹腔注射法制作脓毒症大鼠模型,实验地点在中山大学北校区动物实验中心.健康Sprague-Dawley(sD)大鼠72只随机分为对照组、LPS组及LPS+Gln(0.3g/kg)组,再分为0 h,6 h,12 h,24 h亚组(腹腔注射后每组成功存活至观察时间点的大鼠累积达到6只,n=6),检测各时点心肌细胞凋亡率和Bcl-2及Bax蛋白的含量,同时检测心肌Bcl-2及Bax mRNA表达.对结果进行方差分析和相关性统计分析.结果 LPS组大鼠心肌细胞凋亡率6 h、12 h及24 h均明显高于埘照组(F=186.786,P<0.01);心肌细胞Bax蛋白表达术后6 h降低(F=9.027,P<0.01),之后高于对照组;而Bcl-2蛋白表达6 h,12 h及24 h均低于对照组(F=301.142,P<0.01);Bax/Bcl-2蛋白表达比明显高于对照组(F=527.373,P<0.01);BaxmRNA和Bcl-2 6 h,12 h及24 h较对照组均明显上调(F=126.157,80.745,P<0.01).LPS+Gln组与LPS组比较,6 h,12 h及24 h心肌细胞凋亡率明显低于LPS组(F=75.187,P<0.01);Bax蛋白表达下降(F=20.981,P<0.01),而Bcl-2蛋白却升高(F 164.969,P<0.000);Bax/Bcl-2蛋白表达比降低(F=141.426,P<0.01);Bax mRNA和Bcl-2 6 h,12 h及24 h组较LPS组均明显下调(F=103.463,89.373,P<0.01).结论 Bcl-2抗凋亡基因及Bax促凋亡基因及其蛋白的表达参与脓毒症心肌细胞凋亡;应用Gln能影响凋亡相关基因及蛋白表达,减轻脓毒症心肌细胞的凋亡,改善脓毒症预后.     

实验性急性心肌梗死心肌细胞凋亡与p53和Bcl-2蛋白表达的相关性研究

目的　探讨p5 3和Bcl- 2蛋白在实验性急性心肌梗死 (AMI)心肌细胞凋亡中的作用。方法　用TUNEL法检测 48只兔AMI模型梗死区的心肌细胞凋亡 ,用免疫组化法检测p5 3和Bcl- 2蛋白在心肌细胞中的表达水平 ,并探讨它们之间的相互关系。结果　TUNEL法发现兔梗死区心肌细胞凋亡千分率在冠脉结扎前 (0h)和结扎后 1、2、3、4、6、8、12h的改变如下 :0h组 (31 0 0± 14 0 0‰ )和 12h组 (6 8 0 0± 31 72‰ ) <1h组 (142 33± 5 3 5 2‰ ) <2h组 (370 83± 6 6 0 1‰ )和 8h组 (32 1 17± 86 43‰ ) <3h组 (5 86 83± 5 5 0 2‰ ) <4h组 (836 17± 43 73‰ ) (P均 <0 0 5 ) ,即急性心梗心肌细胞凋亡数在冠脉结扎后 1h时开始逐渐增多 ,到 4h时达高峰 ,其后逐渐下降 ,到 12h时已逐渐降至正常 ;阳性表达的p5 3蛋白积聚于胞核内 ,阳性心肌细胞千分率在冠脉未结扎 (0h)组 (4 5± 4 14 )和结扎后 1h组 (37 33± 35 43‰ )、2h组 (71 33± 5 4 93‰ )、8h组 (76 6 0±45 31‰ )、12h组 (6 5 0± 4 32‰ ) (P均 <0 0 5 ) ,而其它各组之间相互比较则无统计学上的差异 (P均 >0 0 5 ) ;阳性的Bcl- 2蛋白积聚于胞浆中 ,阳性心肌细胞千分率在冠脉结扎后 3h组 (41 0 0± 2 1 6 0‰ )、4h组 (6 83± 5 34‰ )和 6     

谷氨酰胺对脓毒症大鼠心肌细胞Bcl-2/Bax表达的影响

目的 研究脓毒症大鼠心肌细胞凋亡与Bcl-2/Bax基因及蛋白表达的关系,探讨谷氨酰胺(Gin)对脓毒症心肌细胞凋亡的保护作用.方法采用内毒素(LPS 4 ms/ks)腹腔注射法制作脓毒症大鼠模型,实验地点在中山大学北校区动物实验中心.健康Sprague-Dawley(sD)大鼠72只随机分为对照组、LPS组及LPS+Gln(0.3g/kg)组,再分为0 h,6 h,12 h,24 h亚组(腹腔注射后每组成功存活至观察时间点的大鼠累积达到6只,n=6),检测各时点心肌细胞凋亡率和Bcl-2及Bax蛋白的含量,同时检测心肌Bcl-2及Bax mRNA表达.对结果进行方差分析和相关性统计分析.结果 LPS组大鼠心肌细胞凋亡率6 h、12 h及24 h均明显高于埘照组(F=186.786,P<0.01);心肌细胞Bax蛋白表达术后6 h降低(F=9.027,P<0.01),之后高于对照组;而Bcl-2蛋白表达6 h,12 h及24 h均低于对照组(F=301.142,P<0.01);Bax/Bcl-2蛋白表达比明显高于对照组(F=527.373,P<0.01);BaxmRNA和Bcl-2 6 h,12 h及24 h较对照组均明显上调(F=126.157,80.745,P<0.01).LPS+Gln组与LPS组比较,6 h,12 h及24 h心肌细胞凋亡率明显低于LPS组(F=75.187,P<0.01);Bax蛋白表达下降(F=20.981,P<0.01),而Bcl-2蛋白却升高(F 164.969,P<0.000);Bax/Bcl-2蛋白表达比降低(F=141.426,P<0.01);Bax mRNA和Bcl-2 6 h,12 h及24 h组较LPS组均明显下调(F=103.463,89.373,P<0.01).结论 Bcl-2抗凋亡基因及Bax促凋亡基因及其蛋白的表达参与脓毒症心肌细胞凋亡;应用Gln能影响凋亡相关基因及蛋白表达,减轻脓毒症心肌细胞的凋亡,改善脓毒症预后.     

p53和Bcl-2基因mRNA在老年急性心肌梗死猝死者心肌细胞凋亡中作用的研究

目的探讨p53和Bcl-2基因在老年急性心肌梗死(AMI)猝死者心肌细胞凋亡中的作用.方法用TUNEL法检测15例老年AMI猝死者和10例心脏正常车祸死亡者的心肌细胞凋亡,用以cDNA为内参标准的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测心肌细胞内p53和Bcl-2基因mRNA表达量,并探讨它们之间的相互关系.结果TUNEL法发现,猝死者梗死区的每千个心肌细胞凋亡数老年AMI猝死组明显高于对照组(P=0.000);猝死者梗死区心肌细胞中p53基因mRNA表达量明显高于对照组(P=0.000),梗死区心肌细胞凋亡数与其中p53mRNA表达量的对数值成明显正相关性(r=0.883,P<0.001);Bcl-2基因mRNA表达量则明显低于对照组(P=0.000),且梗死区心肌细胞凋亡数与其内Bcl2mRNA表达量的对数值成明显负相关性(r=-0.907,P<0.001);猝死者p53和Bcl-2基因的mRNA表达量对数值之间呈明显的负相关性(r=-0.849,P<0.001).不同支数冠脉病变猝死者之间的比较1支、2支和3支病变者在心肌细胞凋亡数、p53和Bcl-2mRNA表达量方面,相互之间比较均无统计学上的差异(可能是因为例数少).结论老年AMI猝死者梗死区心肌细胞存在明显的凋亡现象,且受p53与Bcl-2两者相反调节其凋亡(p53基因上调、Bcl-2基因下调).     

谷氨酰胺对脓毒症大鼠肝脏Bcl-2和p53表达的影响

目的研究谷氨酰胺对脓毒症大鼠肝脏B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)及p53基因表达的影响,探讨谷氨酰胺对脓毒症大鼠肝脏的保护作用机制。方法选取SPF级健康成年大鼠42只随机分成三组:假手术组6只,手术组18只,谷氨酰胺组18只,手术组及谷氨酰胺组采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症模型,假手术组只打开腹腔翻动盲肠。各组大鼠于术后12 h取肝脏标本,制作病理切片观察其病理变化,实时荧光定量聚合酶链式反应法检测各时相点大鼠肝脏Bcl-2 mRNA及p53 mRNA表达。结果手术组大鼠肝脏有明显病理变化,而谷氨酰胺组大鼠虽有一定病理变化,但程度较手术组明显减轻。手术组术后12 h肝脏细胞Bcl-2 mRNA表达水平较假手术组明显下调(0.20±0.05 vs 1.00±0.00,P<0.05),而p53 mRNA的表达水平手术组较假手术组明显上调(36.85±0.15 vs1.00±0.00,P<0.01);谷氨酰胺组术后12h肝脏细胞Bcl-2 mRNA表达水平较手术组明显上调(0.38±0.04 vs0.20±0.05,P<0.05),而p53 mRNA的表达水平较手术组明显下调(12.74±0.27 vs 36.85±0.15,P<0.01)。结论谷氨酰胺可能通过影响Bcl-2及p53的表达来抑制脓毒症大鼠肝脏细胞的损伤。     

急性心肌梗死猝死者心肌细胞凋亡与p53蛋白和Bcl2蛋白表达

目的 :探讨 p5 3和 Bcl 2蛋白在急性心肌梗死 (AMI)猝死者心肌细胞凋亡中的作用。方法 :用凋亡原位末端标记检测 (TU NEL)法检测 2 0例 AMI猝死者和 10例心脏正常车祸死亡者心肌细胞凋亡 ,用免疫组化法检测 p5 3和 Bcl 2蛋白在心肌细胞中表达水平 ,并探讨其相互关系。结果 :AMI猝死者梗死区心肌细胞凋亡数为 (5 5 7.95± 144 .10 )个 / 10 0 0个 ,明显高于正常对照组 (34.30± 2 0 .6 8)个 / 10 0 0个 (P<0 .0 5 ) ;猝死者梗死区心肌细胞中 p5 3蛋白表达阳性细胞数为 (4 41.6 5± 131.6 8)个 / 10 0 0个 ,明显高于正常对照组 (2 0 .2 0±2 6 .2 7)个 / 10 0 0个 (P<0 .0 5 ) ,且与梗死区心肌细胞凋亡数成明显的正相关性 (r=0 .6 5 5 3,P<0 .0 0 2 ) ;Bcl 2蛋白表达阳性细胞数为 (36 .2 5± 43.17)个 / 10 0 0个 ,明显低于正常对照组 (10 0 .10± 71.34)个 / 10 0 0个 (P<0 .0 5 ) ,且与梗死区心肌细胞凋亡数成明显负相关性 (r=- 0 .810 3,P<0 .0 0 1) ;梗死区心肌细胞内 p5 3与Bcl 2蛋白表达数之间呈明显的负相关性 (r=- 0 .80 78,P<0 .0 0 1)。不同支数冠状动脉病变猝死者梗死区心肌细胞的凋亡数 1支者 (5 0 6 .38± 175 .88)个 / 10 0 0个 ,2支者 (5 5 4.38± 92 .15 )个 / 10 0 0个 ,3支者 (6 6 8.2     

Intestinal mucositis: the role of the Bcl-2 family, p53 and caspases in chemotherapy-induced damage

Intestinal mucositis occurs as a consequence of cytotoxic treatment through multiple mechanisms including induction of crypt cell death (apoptosis) and cytostasis. The molecular control of these actions throughout the gastrointestinal tract has yet to be fully elucidated; however, they are known to involve p53, the Bcl-2 family and caspases. This review will provide an overview of current research as well as identify areas where gaps in knowledge exist.     

膀胱移行细胞癌中细胞凋亡、Bcl-2、p53表达与预后的关系

了解膀胱移行细胞癌中细胞凋亡与细胞增殖的关系,以及与相关基因蛋白表达的关系及其预后意义。方法利用ＴＵＮＥＬ法及免疫组化Ｓ－ＰＦ法检测３０例膀胱移行细胞癌及１０例“正常膀胱粘膜”中的细胞凋亡指数以及Ｂｃｌ－２、ｐ５３的表达,同时计算核分裂指数。     

甘露糖结合凝集素对甲状腺癌细胞p53及Bcl-2蛋白表达的影响

目的探讨甘露糖结合凝集素（MBL）对甲状腺癌细胞株p53及凋亡基因Bcl-2基因表达的影响。方法将0、1mg／L的重组人甘露糖结合凝集素（RhMBL）（对照组、实验组）分别作用于两种甲状腺癌细胞株（甲状腺乳头状癌细胞和甲状腺滤泡状癌细胞）,利用蛋白印记（WesternBlot）检测p53、Bcl-2的表达。结果重组人甘露糖结合凝集素作用于甲状腺癌细胞株后,可使p53及Bcl-2蛋白相对表达量下调。（1）甲状腺乳头状癌细胞：p53蛋白对照组的表达量为1．51±0．29、实验组为0．74±O．07,两组比较差异有统计学意义（t=7．63,P=0．040）;Bcl-2蛋白对照组的表达量为1．20±0．07,实验组为0．59±0．04,两组比较差异有统计学意义（t=6．28,P=0．001）。（2）甲状腺滤泡状癌细胞：p53蛋白对照组的表达量为0．88±O．14,实验组为0．35±0．08,两组比较差异有统计学意义（t=3．29,P=0．003）;Bcl-2蛋白对照组的表达量为1．07±0．11,实验组为0．33±0．06,两组比较差异有统计学意义（t=5．73,P=0．000）。结论MBL在其诱导甲状腺癌细胞凋亡、抑制其增殖的的过程中,Bcl-2和p53可能发挥着一定的作用。     

ASPP家族及其与p53相互作用的研究进展

p53是一个肿瘤抑制蛋白,它通过影响编码细胞周期相关蛋白质的基因表达来调控细胞周期的G1停滞,同时还会因为DNA的损伤增多,诱导细胞发生细胞凋亡。p53诱导细胞凋亡的机制多年来一直不太清楚,而最近发现的 p53凋亡刺激蛋白 ASPP蛋白家族对 p53 诱导细胞凋亡的机制的研究有了新的进展。ASPP蛋白家族与 p53 的作用主要是特异性增强 p53 的细胞凋亡功能,而对 p53的细胞生长停滞功能则没有作用。ASPP蛋白家族增强 p53 的细胞凋亡功能是通过增强 p53的促凋亡基因启动子与DNA的结合而促进细胞凋亡,现就此作一综述。     

自然流产蜕膜、绒毛组织细胞凋亡与p53、Bax、Bcl-2蛋白表达的关系

目的:从细胞凋亡角度探讨早期自然流产发病机制。方法:标本取自在空军总医院妇科就诊行流产的患者,自然流产组蜕膜及绒毛标本23例,并以正常早孕蜕膜及绒毛标本22例为对照组。采用TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化SP法检测p53、Bax及Bcl-2蛋白的表达。结果:与对照组比较,自然流产组蜕膜及绒毛组织细胞凋亡指数均明显增加(P<0.01),p53及Bax蛋白的表达也均明显增加(P<0.01),而Bcl-2蛋白的表达明显降低(P<0.01)。结论:细胞凋亡过度为自然流产发病机制之一,p53通过Bax/Bcl-2途径参与了自然流产蜕膜及绒毛组织细胞的凋亡调节。     

食管癌的危险因素与Bcl-2 P^53的相关性研究

目的研究Bcl-2、P53与食管癌危险因素之间的相关关系,从分子水平对食管癌病因进行初步探讨.方法采用流行病学病例对照研究和免疫组化方法,研究分析食管癌危险因素Bcl-2、P53基因表达情况. 结果社会文化、生活水平较低,长期大量饮酒和营养缺乏是台州地区食管癌发生的主要危险因素并与Bcl-2、P53阳性表达存在明显相关性. 结论社会生活水平较低,长期大量饮酒、营养缺乏是台州地区食管癌主要的危险因素,Bcl-2、P53在食管癌发生中起重要作用.