胎儿动脉平滑肌细胞培养方法的研究

目的：对胎儿动脉平滑肌细胞培养方法进行研究。方法：贴块法，酶解法，贴块＋酶解法。结果：３种方法成功培养了胎儿动脉平滑肌细胞，培养的细胞呈典型“峰－谷”样生长，透射电镜下可见胞浆内含有肌丝束及其相联的致密性。结论：贴块法培养ｈＡＳＭＣ生长周期较长，但成功率较高，酶解法的消化程度不易掌握，但其生长周期较前者短４￣５ｄ；二者相结合法的贴块培养细胞从组织块中迁移萌出时间比常规贴块法短１￣２ｄ。     

人脐动脉平滑肌细胞培养方法的探讨

目的研究人脐动脉血管平滑肌细胞的培养方法.方法运用贴块法进行人脐动脉血管平滑肌细胞的培养,并用倒置显微镜进行形态学观察和用免疫组化对培养细胞进行鉴定.结果运用贴块法成功培养了人脐动脉血管平滑肌细胞,培养的细胞呈典型"峰谷"样生长,免疫组化S-P法检测α-平滑肌肌动蛋白单克隆抗体(α-SMActin)表达,确认为人血管平滑肌细胞.经传代培养至3～5代,细胞生长特性未见异常改变.结论贴块法培养的人脐动脉血管平滑肌细胞生长稳定性好,且培养与纯化能同步进行.     

成人肠系膜动脉平滑肌细胞培养的探讨

目的研究成人肠系膜动脉血管平滑肌细胞的生物学特性及培养方法.方法运用贴块法进行成人肠系膜动脉血管平滑肌细胞的培养,并用倒置显微镜进行形态学观察和用免疫组化对培养细胞进行鉴定.结果运用贴块法成功培养了成人肠系膜动脉血管平滑肌细胞,培养的细胞呈典型"峰谷"样生长,免疫组化S-P法检测α-平滑肌肌动蛋白单克隆抗体(α-SMActin)表达,确认为人血管平滑肌细胞(hVSMC).经传代培养至3～5代,细胞生长特性未见异常改变.结论贴块法培养的成人肠系膜动脉血管平滑肌细胞生长稳定性好,且培养与纯化能同步进行.     

关于动脉平滑肌细胞培养的几个问题

动脉平滑肌细胞是进行平滑肌细胞的分子生物学研究的基本条件，可用于多种与平滑肌细胞生长、增殖有关的疾病发病机理及药物作用机制的研究，如动脉粥样硬化、药物的钙通道开放（桔抗）作用、血管损伤引起钙稳态失衡等。作者采用组织贴块法，取材于大鼠主动脉中膜进行培养。通过实践与摸索，对如何提高培养成功率，增强细胞功能稳定性，提高细胞质量提出了与经典培养方法不同的几点看法，现讨论如下。ISipo公司胎牛血清（rps）与国产四季青公司胎牛血清的比较血清是培养细胞不可缺少的天然培养基。血清中含有多种维持细胞生长、增殖的重要…     

关于动脉平滑肌细胞培养的几个问题

平滑肌细胞异常增殖及其从动脉中层向内膜迁移过程是动脉粥样硬化和血管成形术后再狭窄等心血管疾病的重要发病因素。血管平滑肌细胞(ＶＳＭＣ)常用于多种与平滑肌细胞生长增殖有关疾病的发病机理及药物作用机制的研究 ,提高培养成功率 ,增强细胞功能稳定性 ,提高细胞质量是进行ＶＳＭＣ的分子生物学研究的重要条件。作者采用组织贴块法取材于大鼠主动脉中膜进行培养。通过实践和摸索 ,提出几点看法 ,现讨论如下。1　组织块大小边缘密度翻面时间观察时间对原代细胞萌发的影响　　对于贴块法的原代培养来源 ,由于细胞并非直接获得 ,而是从组…     

胎儿脐动脉血管平滑肌细胞贴块培养方法的改进

目的 探讨胎儿脐动脉血管平滑肌细胞的培养方法.方法 取无菌新鲜健康孕妇胎儿脐动脉,采用组织贴块法培养血管平滑肌细胞,并用α-actin肌动蛋白免疫组化方法对培养的细胞进行鉴定.结果 运用此方法成功地培养出胎儿脐动脉血管平滑肌细胞,培养的细胞呈典型的"峰-谷"样生长特性,用抗平滑肌α-肌动蛋白(α-actin)的单克隆抗体做免疫组化检测,低倍镜下可见细胞普遍呈阳性反应,高倍镜下可见α-actin肌动蛋白在胞浆内均匀分布.结论 此方法取材容易,操作简单,费用低廉,为人动脉血管平滑肌细胞的培养提供了一种实用、可靠的方法.     

气道平滑肌细胞培养方法探讨

目的建立气道平滑肌体外稳定培养的方法。方法利用组织贴块法和胶原酶消化法培养大鼠气道平滑肌细胞,培养的细胞经形态学和免疫细胞化学染色鉴定。结果培养细胞呈典型的"谷峰状"生长,胞浆内特异性的平滑肌肌动蛋白阳性表达,符合平滑肌细胞的形态学特征和生物学特性。结论建立了高纯度、性能稳定且生长快速的大鼠ASMCs体外培养模型,为相关疾病的研究奠定良好的基础。     

气道平滑肌细胞培养的探讨

目的 建立气道平滑肌体外稳定培养的方法。方法 利用组织贴块法和胶原酶消化法培养大鼠气道平滑肌细胞,培养的细胞经形态学和免疫细胞化学染色鉴定。结果 培养细胞呈典型的"谷峰状"生长 ,胞浆内特异性的平滑肌肌动蛋白阳性表达,符合平滑肌细胞的形态学特征和生物学特性。结论 建立了高纯度、性能稳定且生长快速的大鼠ASMCs 体外培养模型,为相关疾病的研究奠定良好的基础。 【关键词】 气道 平滑肌细胞 细胞培养     

大鼠肾入球动脉平滑肌细胞原代培养及鉴定方法的研究

目的建立一种重复性好、传代次数多的大鼠肾小球入球动脉平滑肌细胞(RASMCs)培养方法。方法在无菌条件下,分离大鼠肾动脉并穿刺插管,用生理盐溶液灌注至肾脏变白,取肾皮质经筛网过滤,取筛网上组织,经胶原酶消化,培养RASMCs。同时进行形态学观察及0.4%台盼蓝染色测定细胞活力测定,采用免疫荧光染色技术,对平滑肌α-肌动蛋白、肌球蛋白重链进行鉴定。结果形态学、间接免疫荧光染色鉴定表明培养细胞为RASMCs;细胞存活率在96%以上;原代培养后1周左右即可传代,至少可以传10代以上,并且细胞形态、生长特点不发生明显的改变。结论滤网及酶消化法分离RASMCs,方法简单、高效,且重复性好,培养的原代RASMCs具有数量多、生长迅速的特点。     

人动脉平滑肌细胞贴块培养法

应用贴块法成功地进行了人动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）原代培养。培养出的人ＳＭＣ呈典型的“谷”与“峰”样生长，电镜下见细胞浆内含有肌丝结构，马氏染色呈红色。经历１０个月传代培养至３５代，该细胞生长未见异常改变。文内还讨论了人主动脉ＳＭＣ体外培养应注意的问题。     

缺氧性肺动脉高压发病中肺动脉平滑肌细胞增殖与凋亡变化

目的：研究缺氧性肺动脉高压发病中肺动脉平滑肌细胞增殖与凋亡变化。方法：用压缺氧法复制大鼠缺氧性肺动脉高压模型,用右心导管法测量平均肺动脉压,称量法计算右心室肥大指数,HE染色结合形态计量分析进行缺氧性肺血管重塑观察,Tunel法行肺动脉平滑肌细胞凋亡检测。结果：缺氧7d大鼠平均肺动脉压开始升高,肺动脉出现缺氧性肺血管重塑;缺氧14d及21d平均肺动脉压进一步升高,缺氧性肺血管重塑更明显,右心室肥大指数增加。对照组及缺氧3d、7d、14d、21d组肺动脉平滑肌细胞凋亡指数差异无显著意义。平均肺动脉压与WA％（血管壁横断面积与血管横断面积比值）及右心室肥大指数呈正相关,WA％与肺动脉平滑肌细胞凋亡指数之间无直线相关关系。结论：缺氧性肺动脉高压发病中肺动脉平滑肌细胞增殖同时不伴有凋亡水平的显著变化。     

大鼠血管平滑肌细胞的培养与鉴定

目的:改进大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)的培养方法。方法:采用机械刮除、差异贴壁等手段进行组织贴块法原代培养,胰蛋白酶消化传代,并应用相差显微镜和即用型SABC免疫组化染色试剂盒对细胞进行形态学和免疫组化鉴定。结果:镜下培养细胞呈典型的"谷-峰状"生长,免疫组化染色显示胞浆内-αactin阳性表达,锥虫蓝染色检测细胞传代成活率95%。结论:本法可获纯度高、结构和功能良好的VSMCs。     

动脉内膜损伤模型中合成型平滑肌细胞的培养

目的 建立更新近在体情况的合成型血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）的培养体系。方法 培养细胞取材于兔动脉内膜损伤后的增生内膜。结果 培养细胞１０天后光镜下表现典型的“峰”、“谷”样排列,免疫组化证实昌ＶＳＭＣ,电镜下细胞表现有全成型细胞的特点。结论直接对合成型ＶＳＭＣ的培养优于单纯中膜ＶＳＭＣ培养。     

改良大鼠血管平滑肌细胞的原代培养

目的探讨提高大鼠血管平滑肌细胞原代培养效率的方法。方法采取组织块贴壁法进行原代培养,高糖DMEM培养基中加入血小板源性生长因子-B(platelet-derived growth factor-b,PDGF-B),用细胞形态学及免疫组织化学法对血管平滑肌细胞鉴定。结果原代培养,4～6天可见细胞长出,2周可以传代;传代培养,1周可以传代1次。镜下可见细胞以梭形为主,呈"峰-谷"状生长,免疫组化染色可见细胞浆内有大量染成棕黄色的肌丝。结论在采用组织块贴壁法进行培养时,加入PDGF-B培养,可获得纯度高、活性好的血管平滑肌细胞,并缩短了培养周期。     

血管内皮和平滑肌细胞联合培养构建组织工程化血管的方法

目的：探讨组织工程血管种子细胞原代培养、传代扩增、鉴定的方法，为组织工程血管的构建提供理想的种子细胞。方法：无菌条件下取正常产妇分娩的脐带动静脉，ROSS法（即组织贴块法）原代培养混合血管细胞。倒置相差显微镜、免疫组化法对细胞进行鉴定。结果：倒置显微镜显示原代细胞及经传代培养后的细胞，呈现内皮样细胞、平滑肌样细胞混合生长的特征。免疫组化法检测示内皮细胞Ⅷ因子、平滑肌细胞α-肌动蛋白呈阳性反应。细胞经3次～5次传代，数量可增殖达到8×10^6—10×10^6。结论：使用组织贴块法原代培养可获得内皮细胞、平滑肌细胞混合体，细胞经体外联合培养、传代可以达到组织工程血管种子细胞所需的数量。     

瞬时感受器电位香草酸受体1在低氧诱导肺动脉平滑肌细胞内钙升高中的作用

目的观察记录低氧条件培养的人肺动脉平滑肌细胞中瞬时感受器电位香草酸受体1(transient potential vanilloid receptor1,TRPV1)对细胞内Ca2+浓度(用340nm/380nm的荧光强度比值表示)的影响,探讨TRPV1在低氧性肺动脉平滑肌细胞增生中的作用。方法应用4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(4′,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色、流式细胞周期测定以及细胞内Ca2+浓度测定的方法检测细胞增生及细胞内Ca2+浓度变化。结果低氧能明显促进人肺动脉平滑肌细胞的增生,升高人肺动脉平滑肌细胞内静息Ca2+浓度,显著加强环并偶氮酸(cyclopiazonic acid,CPA)诱发的库容性Ca2+内流(capacitative Ca2+entry,CCE),上述效应均可被TRPV1阻断剂Capsazepine(CPZ)所抑制。结论在人肺动脉平滑肌细胞中,TRPV1可能是低氧所致细胞内Ca2+浓度增加、CCE增强和细胞过度增生的重要途径或调制因素。     

The Role of Serotonin 2C Receptor in Pulmonary Arterial Smooth Muscle Cells Proliferation and Contraction in Rats

Objective To examine the role of 5-HTEc receptor in pulmonary arterial smooth muscle cells （PASMCs） proliferation and contraction induced by 5-HT. Methods Small interfering RNA （siRNA） was used to knock down the expression of 5-HTEcR. We used MTT assay and cell cycle analysis to demonstrate the proliferation of PASMCs. The length of PASMCs was measured to show the cells contractile function. Results Administrated of 5-HTEcR-specific siRNA, 5-HTEc receptor expression in PASMCs was significantly suppressed. MTT assay and cell cycle analysis showed that 5-HT-induced cell growth in PASMCs was attenuated. Contraction of PASMCs induced by 5-HT was also obviously reduced. Conclusion 5-HTEc receptor mediates the proliferation and contraction of PASMCs induced by 5-HT.     

内皮祖细胞定向分化平滑肌细胞的实验研究

目的内皮祖细胞是一种理论上非常合适的血管组织工程种子细胞,最终分化成成熟内皮细胞。实验拟证实内皮祖细胞可以定向分化成平滑肌细胞。方法以猪为实验动物,采集骨髓单核细胞,分离培养内皮祖细胞,然后应用血小板衍生生长因子(PDGF)BB诱导内皮祖细胞定向分化。通过免疫组化和免疫荧光法鉴定细胞类型。结果经过诱导的内皮祖细胞定向分化成平滑肌细胞。未经诱导的细胞分化成内皮细胞。结论内皮祖细胞不仅可以分化成内皮细胞,而且可以在PDGF-BB作用下分化成平滑肌细胞,是一种理想的血管组织工程种子细胞来源。