血单个核白细胞中CD36抗原基因表达的测定方法及其意义

为建立外周血单个核白细胞CD36抗原基因表达的测定方法，本文采用反转录聚合酶链反应技术定量测定CD36抗原基因的表达，用β－肌动蛋白作为内标物，用凝胶扫描技术进行定量。结果发现，反转录聚合酶链反应后电泳发现CD36抗原CDＮA片段为390碱基对，β－肌动蛋白CDＮA片段为540碱基对，以CD36抗原/β－肌动蛋白表示CD36抗原基因表达量是一个稳定的方法，颈动脉粥样硬化病人CD36抗原基因表达增加。结果提示，反转录聚合酶链反应是测定CD36抗原基因表达的理想方法，可以用于动脉粥样硬化的研究。     

中国人极低密度脂蛋白受体基因的克隆及其在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

为了研究极低密度脂蛋白受体结构与功能的关系,本文利用反转录聚合酶链反应技术从中国人心肌组织中克隆出极低密度脂蛋白受体的全长ｃＤＮＡ后,将其插入真核表达载体ｐｃＤＮＡ３获得重组体ｐＣＤ－ＶＲ。测序结果发现,这一源于中国人的极低密度脂蛋白受体基因ｃＤＮＡ的碱基序列与文献报道基本相符,反转录聚合酶链反应检测证实,转染ｐＣＤ－ＶＲ的中国仓鼠卵巢细胞可有效表达极低密度脂蛋白受体ｍＲＮＡ。脂蛋白结合实验结果发     

丙型肝炎病毒核心基因在真核细胞中的表达

丙型肝炎病毒核心基因在真核细胞中的表达陈智，何南祥，刘克洲，章明太，陈明华，孙永良，姚航平９例ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性的慢性丙型肝炎患者血清，用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增ＨＣＶ－Ｃ区片段基因。将ＨＣＶＤＮＡ插入质粒ｐＣＤＬ－ＳＲａ２９６，转染真...     

恶性疟原虫海南FCC1/HN株环子孢子蛋白(CSP)基因的克隆与表达

目的　为疟疾疫苗的研制提供靶抗原。方法　根据恶性疟原虫ＩＭＴＭ２２ 株７Ｇ８ 克隆环子孢子蛋白基因编码区序列, 设计一对引物, 采用ＰＣＲ技术从恶性疟原虫ＦＣＣ１／ＨＮ株基因组ＤＮＡ中特异扩增ＣＳＰ基因的Ⅰ区、中央重复区和Ⅱ区片段, 全长１－０８ｋｂ; 纯化扩增产物用ＨｉｎｄⅢ和ＢａｍＨ Ⅰ双酶切后, 定向克隆入ｐｃＤＮＡ３ 载体, 转化大肠杆菌ＴＧ１ 株, 重组克隆经筛选后, 用ＰＣＲ 扩增和ＨｉｎｄⅢ＋ ＢａｍＨ Ⅰ双酶切进行鉴定： 用磷酸钙贴壁细胞转化法将重组质粒ｐｃＤＮＡ—ＣＳＰ导入ＨｅＬａ细胞, 用Ｇ４１８ 筛选出稳定分泌ＣＳＰ抗原的阳性细胞克隆; 将阳性细胞克隆系扩大培养并用Ｇ４１８ 加压, 以表达重组ＣＳＰ, 分离细胞培养上清和培养细胞, 进行ＳＤＳ ＰＡＧＥ分析。结果　（１） 从ＦＣＣ１／ＨＮ株基因组ＤＮＡ中特异扩增出ＣＳＰ基因Ⅰ区, 中央重复区和Ⅱ区编码序列;（２） 将扩增的目的片段正向插入ｐｃＤＮＡ３ＨｉｎｄⅢ和ＢａｍＨⅠ位点; （３） 在人宫颈癌细胞系ＨｅＬａ 细胞中表达重组ＣＳＰ抗原, 其分子量为３８－３ｋＤａ, 蛋白扫描分析表达量占细胞培养上清液中蛋白总含量的１５－７７％ 。结论　成功构建真核表达系统ｐｃＤＮＡ３     

猪囊尾蚴抗原与猪白细胞介素-4基因融合DNA疫苗载体的构建

目的： 为增强猪囊尾蚴抗原ｃ Ｃ１ 的免疫保护作用而构建一表达猪白细胞介素 ４（ Ｉ Ｌ ４）与 ｃ Ｃ１ 抗原融合蛋白的 Ｄ Ｎ Ａ 疫苗载体。方法： 通过聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ）,分别扩增猪 Ｉ Ｌ ４ｃ Ｄ Ｎ Ａ 和ｃ Ｃ１ｃ Ｄ Ｎ Ａ 片段并进行融合,获得的嵌合基因 Ｉ Ｌ ４ｃ Ｃ１ 中含有１０ 个氨基酸的中间接头序列,同时对其５’ Ａ Ｕ Ｇ 侧翼序列进行翻译优化突变。结果：经酶切鉴定,证实有一１．５ ｋｂ 的片段插入载体,其 Ｄ Ｎ Ａ 序列分析结果与文献报道和实验设计完全一致。结论：表达猪 Ｉ Ｌ ４ 与猪囊尾蚴抗原ｃ Ｃ１ 融合蛋白的 Ｄ Ｎ Ａ 疫苗载体构建成功。     

日本血吸虫中国大陆株21.7kDA分子（SjC21.7）的基因克隆 …

目的 克隆日本血吸虫中国大陆株２１．７ｋＤａ分子的编码基因。方法 合成１对特异性引物,通过聚合酶链反应技术从日本血吸虫中国大陆株ｃＤＮＡ中对目的基因进行扩增和克隆,对扩增产物进行核苷酸序列分析。结果 用聚合酶链反应,从日本血吸虫中国大陆株ｃＮＤＡ中扩增出１条单一的ＤＮＡ条带、大小约为５００－６００ｂｐ。核苷酸序列分析表明日本血吸虫中国大陆株２１．７ｋＤａ分子了的开放阅读框全长为５５８ｂｐ,与日本血     

扩张型心肌病HLA－DRB_1基因多态性的研究

借助聚合酶链反应（ＰＣＲ）／序列特异性引物（ＳＳＰ）技术对４２例扩张型心肌病（ＤＣＭ）患者和１６８例正常对照者进行人类白细胞抗原（ＨＬＡ）－ＤＲＢ１基因型分析。结果发现ＤＣＭ组ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊１１基因频率与对照组比较明显增高（２６．１９％对１３．１％，Ｐ＜０．０５），其ＲＲ＝２．３６。其他等位基因频率在ＤＣＭ组与对照组间差异无显著性。提示ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊１１基因可能与ＤＣＭ有关联。     

恶性疟原虫FCC1/HN株新抗原表达序列标记位(ESTs)的获得

目的： 以筛选恶性疟原虫ＦＣＣ１／ＨＮ 株λｇｔ１１ ｃＤＮＡ 表达文库所获得的强阳性克隆作基础, 对上述强阳性克隆的ｃＤＮＡ 插入片段进行ＤＮＡ 序列测定, 阐明相对应的新表达序列标签 （ＥＳＴｓ）, 作为发现新抗原基因的线索。方法：以ｃＤＮＡ 表达文库接头的较长链作ＰＣＲ引物、扩增ｃＤＮＡ 插入片段,将扩增产物克隆入Ｍ１３ ｍ ｐ１８测序载体, 进行部分ＤＮＡ 序列测定、编辑, 将之在ＧｅｎＢａｎｋ 中进行ＤＮＡ 序列同源性搜索比较和分析。结果： 获得１ 个Ｃ０３ 序列为已知恶性疟原虫热休克蛋白７０－２ 基因片段, 发现５ 个新的具有抗原意义的恶性疟原虫表达序列标记位 （ＥＳＴｓ）。结论： 这５ 个新的恶性疟原虫表达序列标记位为发现新的恶性疟原虫抗原基因奠定了基础。     

猪囊尾蚴抗原与猪白细胞介素-4基因融合DNA疫苗载体的构建

目的： 为增强猪囊尾蚴抗原ｃ Ｃ１ 的免疫保护作用而构建一表达猪白细胞介素４（ Ｉ Ｌ４）与 ｃ Ｃ１ 抗原融合蛋白的 Ｄ Ｎ Ａ 疫苗载体。方法： 通过聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ）,分别扩增猪 Ｉ Ｌ４ｃ Ｄ Ｎ Ａ 和ｃ Ｃ１ｃ Ｄ Ｎ Ａ 片段并进行融合,获得的嵌合基因 Ｉ Ｌ４ｃ Ｃ１ 中含有１０ 个氨基酸的中间接头序列,同时对其５’ Ａ Ｕ Ｇ 侧翼序列进行翻译优化突变。结果：经酶切鉴定,证实有一１．５ ｋｂ 的片段插入载体,其 Ｄ Ｎ Ａ 序列分析结果与文献报道和实验设计完全一致。结论：表达猪 Ｉ Ｌ４ 与猪囊尾蚴抗原ｃ Ｃ１ 融合蛋白的 Ｄ Ｎ Ａ 疫苗载体构建成功。     

DNA甲基化与肝癌研究进展

ＤＮＡ甲基化是转录水平的ＤＮＡ的修饰方式之一,其在调节基因表达及维持细胞正常分化中起着重要作用。正常情况下细胞内约７５％的胞嘧啶一鸟嘌呤碱基对中的胞嘧啶（Ｃ）处于甲基化状志,它是维持细胞稳定性的重要因素,其水平下降或模式改变可导致基因结构和功能的异常,是细胞癌变中重要的一步。大量实验表明,在肿瘤的发生发展中存在ＤＮＡ甲基化水平和模式的紊乱。研究发现,化学致癌剂诱发的大鼠肝结节增生和肝癌中可发现ｃ－ｍｙｃ、ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因的ＤＮＡ甲基化模式改变,而相应癌基因表达增加［１］。我国为肝癌（ＨＣＣ）…     

冠状动脉粥样硬化与血浆内皮素的相关性

为探讨冠状动脉粥样硬化与血浆内皮素的关系,本文应用放射免疫法检测了４３例冠状动粥样硬化性心脏病患者和２１例正常人血浆内皮素水平,并按冠状动脉受累支数不同将冠状动脉粥铧性心脏病患者分为冠状动脉多支病变组和单支病变组。结果发现,冠状动脉粥样硬化性心脏病患者血浆内皮素水平明显高于正常对照组（Ｐ〈０．０１）,冠状动脉多支病变组与单支病变组比较有显著性差异（Ｐ〈０．０５）,冠状动脉狭窄支数与血浆内皮素浓度呈     

胱抑素C水平与冠心病的相关性研究

目的了解胱抑素C水平与冠状动脉病变严重程度的关系。方法选择疑诊冠心病且行选择性冠状动脉造影的冠心病患者114例(冠心病组).根据临床病史和冠状动脉造影结果分为2组:急性冠状动脉综合征(acute coronarysyndromes,ACS)组73例,稳定性心绞痛(stable angina pectoris,SAP)组41例;另选择非冠心病(冠状动脉造影阴性)患者38例作为对照组。采用Gensini评分系统对冠状动脉病变程度进行评分。应用免疫比浊法测定血清胱抑素C水平。分析血清胱抑素C水平与冠状动脉病变严重程度及病变支数的相互关系。结果 ACS组和SAP组血清胱抑素C水平明显高于对照组[(2.2±3.5)mg/L vs(1.6±4.1)mg/L vs(0.7±2.9)mg/L,P<0.01].且ACS组血清胱抑素C水平明显高于SAP组(P<0.05)。Gcnsini积分≥30分患者血清胱抑素C水平明显高于Gensini积分<30分患者[(2.6±2.7)mg/L vs(1.8±5.2)mg/L,P<0.01]。3支病变患者血清胱抑紊C水平和Gensini积分较单支病变和双支病变患者明显增高[(2.8±1.8)mg/L vs(1.9±3.4)mg/L vs(2.1±4.1)mg/L;(49±16)分v5(17±9)分vs(28±1 8)分,P<0.05,P<0.01];双支病变患者Gensin积分较单支病变患者明显增高(P<0.01);而单支病变与双支病变患者血清胱抑素C水平差异无统计学意义(P>0.05)。血清胱抑素C水平与冠状动脉病变严重程度Gensini积分呈正相关(r=0.673,P<0.01)。结论胱抑素C水平与冠状动脉病变严重程度及病变支数显著相关,胱抑素C水平可以作为评价冠状动脉病变严重程度的一个指标。     

124例冠心病患者三磷酸腺苷结合盒转运体A1基因启动子区-477CT单核苷酸多态性分析

目的 研究三磷酸腺苷结合盒转运体A1基因启动子区-477C/T单核苷酸多态性与血浆高密度脂蛋白胆固醇和冠心病的关系。方法 用聚合酶链反应限制片长多态性检测124例冠心病患者和111例正常人的三磷酸腺苷结合盒转运体A1基因启动子区-477位点基因型，并比较基因型在冠心痛组与正常人组间、冠心痛组中不同临床表现型之间分布的差异性及三种基因型与冠心痛相关临床指标的关系。结果 TT基因型及T等位基因在冠心病组中的分布频率明显高于正常人组（P〈0．05和P〈0．01）。急性冠状动脉综合征组，TT基因型及T等位基因明显高于稳定型心绞痛组（P〈0．05和P〈0．01）。多支病变组TT基因型明显高于单支病变组（P〈0．05）。在冠心病组中，TT基因型血浆高密度脂蛋白胆固醇水平明显低于CC基因型（P〈0．001）。结论 三磷酸腺苷结合盒转运体A1基因启动子区-477C／T单核苷酸多态性可显著影响中国冠心痛患者血浆高密度脂蛋白胆固醇水平，而且与冠状动脉病变程度及冠心病严重程度相关。     

胎盘生长因子对评估冠心病患者冠脉病变的价值

目的探讨胎盘生长因子(PLGF)在冠心病患者冠状动脉支架置入术前后中的表达及其对评估冠脉病变严重程度的价值。方法 2010年11月至2011年4月入住本院心血管内科胸痛患者与同期健康体检者,测定其血浆PLGF水平。按冠脉造影结果分为冠心病组与非冠心病组;按是否行冠脉支架置入术把冠心病组分为支架置入组(PCI组)、非支架置入组(非PCI组);按累及冠脉病变血管数把冠心病组分为单支组、双支组、多支组,测定其术前与术后第1天的PLGF水平。结果 1)冠心病组术前PLGF明显高于非冠心病组与对照组,差异有统计学意义(P<0.01);2)术前与术后PLGF水平在PCI组明显高于非PCI组,但均低于各自组术前,P<0.05;3)在术前血浆PLGF水平多支组明显高于单支组与双支组,术后三组PLGF水平均明显低于术前,P<0.05,而术前单支组、双支组之间与术后上述三组各自间差异无统计学意义(P>0.05);4)单支组、双支组、多支组比较,行PCI的PLGF水平均高于非PCI组,P<0.05。结论检测血浆PLGF水平在胸痛的鉴别诊断中具有一定意义,有助于冠心病的早期诊断;需要血运重建的冠状动脉病变PLGF水平明显增高,且通过冠状动脉支架置入术后PLGF水平均明显回落,能初步评估冠脉病变的严重程度。     

踝臂指数与冠状动脉病变严重性的关系研究

目的　探讨踝臂指数(ABI)与冠状动脉病变程度的关系。方法　选择性冠状动脉造影患者5 2例分为冠心病组和正常组(对照组) ,其中冠心病组(依据主要分支狭窄≥70 %的患者做leaman冠状动脉记分,将冠状动脉记分≤6分与>6分的两组,将各组患者的ABI进行对比研究,并将冠心病组中的冠状动脉记分与患者的ABI进行直线相关分析。结果　正常组与冠心病组ABI比较(P <0. 0 .0 1)、冠心病组中冠脉记分≤6分与>6分两组患者ABI比较(P <0 . 0 5 ) ,冠脉单支病变与多支病变患者ABI比较(P <0 . 0 0 1) ,均具有显著性差异,冠脉病变记分与ABI呈显著性负相关(r=- 0 . 4 5 ,P <0 . 0 5 )。结论　踝臂指数与冠心病发生,发展密切相关,有助于预测冠状劲脉病变程度。     

冠心病患者核因子κB的变化及其临床意义

目的 探讨冠心病（CHD）患者外周血核因子κB（NF-κB）的变化及其临床意义.方法 入选163例患者,CHD组103例,其中ACS组71例,SAP组32例,对照组60例.检测外周血浆NF-κB浓度.同时经选择性冠状动脉造影检查.比较不同冠状动脉病变支数、冠状动脉病变程度、冠状动脉病变类型的血浆NF-κB水平;并进行冠心病患者 Gensini积分与NF-κB等危险因素的多因素logistic回归分析.结果 ①ACS组、SAP组与对照组相比NF-κB浓度明显升高,且ACS组较SAP组升高更明显,差异有统计学意义（P＜0.01）;②单支、双支、三支病变组、对照组各组间NF-κB浓度比较差异有统计学意义（P＜0.01）,但单支病变组与对照组比较差异无统计学意义;③轻度、中度、重度病变组、对照组各组间NF-κB浓度比较差异有统计学意义（P＜0.01）,但轻度病变组与对照组比较差异无统计学意义;④A型、B型、C型病变组、对照组各组间NF-κB浓度比较差异有统计学意义（P＜0.01）,但A型病变组与对照组比较差异无统计学意义;⑤Gensini积分与CHD危险因子logistic回归分析显示高水平核因子κB、高血压、高脂血症、年龄＞60岁、男性均为严重冠状动脉病变的相关危险因素.结论 CHD患者NF-κB活性增高,是严重冠脉病变的相关危险因素,在CHD发生、发展中可能起着重要作用.     

C反应蛋白水平与冠心病的相关性研究

目的 探讨冠状动脉粥样硬化心脏病(CHD)与C反应蛋白(CRP)之间的关系.方法 测定50例正常对照人群和80例经冠状动脉造影证实为CHD患者血浆的CRP水平,其中单支病变30例、双支病变25例、三支病变25例;稳定型心绞痛31例、不稳定型心绞痛25例,急性心肌梗死24例.结果 CRP 水平在稳定型心绞痛组、不稳定型心绞痛组、急性心肌梗死组依次增高;稳定型心绞痛组(F=1.826,P＜0.05)、不稳定型心绞痛组(F=4.232,P＜0.01)及急性心肌梗死组(F=6.745,P＜0.01)的CRP水平均明显高于对照组,在冠心病组中,双支病变组(F=7.925,P＜0.01)以及三支病变组(F=9.467,P＜0.01)中CRP 水平也明显高于对照组.结论 CRP水平与冠心病和冠脉病变程度相关.     

同型半胱氨酸与冠心病关系的探讨

目的　探讨同型半胱氨酸 (Hcy)水平与冠心病 (CHD)的关系。方法　 187例住院患者 ,分为CHD组 93例及对照组 94例 ,测定Hcy水平与吸烟史、糖尿病、高血压、年龄、性别、脑梗死史、心肌梗死史、血脂各指标之间的关系。已行冠状动脉造影者按前降支、回旋支、右冠状动脉中任 1支血管狭窄≥ 5 0 %者诊为单支病变组 ,2支以上为多支病变组。任 1支血管狭窄 <5 0 %者诊为冠状动脉造影阴性组。冠心病的多个易患因素进行logistic回归分析。结果　Hcy水平 :(1)CHD组显著高于对照组 ;(2 )有心肌梗死史者高于无心肌梗死史者 ;(3)与吸烟史、高血压、糖尿病、脑梗死史、年龄、性别、血脂各指标之间无明显相关关系 ;(4 )多支病变组显著高于冠状动脉造影阴性组 ,单支病变组略高于冠状动脉造影阴性组 ;(5 )logistic回归分析示Hcy水平、吸烟、高血压是冠心病发病的危险因素。结论　Hcy水平升高与CHD密切相关 ,有心肌梗死史者Hcy水平增高明显 ;冠状动脉病变支数越多 ,血浆Hcy水平越高。     

冠状动脉粥样硬化患者影像表现与冠状动脉循环血浆内皮素-1和一氧化氮水平的关系

目的　观察冠状动脉粥样硬化影像表现与冠状动脉循环血浆内皮素 - 1( ET- 1)和一氧化氮 ( NO)水平的关系。方法　 5 1例行冠状动脉造影者 ,造影前取血测定冠状静脉窦 ( CS)和冠状动脉开口 ( AO)血浆 ET- 1和 NO水平。冠状动脉腔径狭窄≥ 5 0 %者为严重冠状动脉病变组 ,反之为对照组。分析记录严重冠状动脉病变组病变血管数、狭窄病变数、闭塞病变数和病变范围积分。结果　 1.严重冠状动脉病变组 CS血浆 ET- 1水平 ( ET- 1CS)和 CS与AO的差值 ( ET- 1CS- AO)明显高于对照组 ( P<0 .0 5 ) ;严重冠状动脉病变组 ET- 1CS明显高于 AO血浆 ET- 1水平( ET- 1AO) ( P<0 .0 5 )。 2 .严重冠状动脉病变组 NOCS和 NOCS- AO明显低于对照组 ( P<0 .0 5 ) ;严重冠状动脉病变组NOCS明显低于 NOAO( P<0 .0 5 )。 3 .严重冠状动脉病变组 ,ET- 1CS- AO与冠状动脉病变范围积分呈显著正相关 ( P<0 .0 5 ) ,NOCS- AO与冠状动脉病变范围积分呈显著负相关 ( P<0 .0 5 )。结论　冠状动脉粥样硬化影响冠状动脉循环血浆 ET- 1和 NO水平 ,粥样硬化病变范围与冠状动脉循环血浆 ET- 1和 NO水平有相关关系     

冠心病患者血清补体C3、C4及HDL－C水平分析

目的分析冠心病(CHD)患者血清补体C3、C4与HDL－C的水平。 方法依据病情将2016年5月至2017年10月西安市第五医院收治的137例CHD患者分为急性冠脉综合征组(ACS组,80例)和稳定性冠心病组(SCHD组,57例),选取同时期健康体检的60例健康人员纳为对照组。对比3组患者补体C3、C4、HDL－C水平,分析补体C3、C4水平与HDL－C水平的相关性。 结果ACS组和SCHD组患者补体C3水平均高于对照组(P<0.05);ACS组患者补体C3水平高于SCHD组(P<0.05);ACS组患者补体C4水平高于对照组(P<0.05),SCHD组患者补体C4水平低于对照组(P<0.05);对照组HDL－C水平高于ACS组和SCHD组患者(P<0.05)。ACS组和SCHD组患者血清补体C3、C4水平与HDL－C水平无关(P>0.05),对照组血清补体C3水平与HDL－C水平呈负相关(P<0.05)。 结论CHD患者血清补体C3、C4水平升高,HDL－C水平降低,炎症反应影响血清补体与HDL－C水平的相关性。