17β-雌二醇对人脐静脉内皮细胞内皮型一氧化氮合酶和一氧化氮的影响

背景门静脉高压时门静脉系统血管内皮广泛受损,除压力增高、血流冲击等因素外,体液因子的变化也是重要损伤因素之一.目的研究雌激素对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和一氧化氮(NO)的影响,探讨其在门静脉高压血管内皮病变中的意义.方法以不同浓度17β-雌二醇和雌激素受体拮抗剂他莫昔芬单独或联合作用于体外培养的HUVEC,检测eNOS活性和NO含量变化.结果与对照组相比,1×10-9～1×10-7 mol/L 17β-雌二醇均可增加HUVEC eNOS活性,提高NO含量;1×10-8～1×10-6 mol/L他莫昔芬对HUVEC eNOS活性和NO含量均无明显影响;1×10-7 mol/L 17β-雌二醇对经1×10-6 mol/L他莫昔芬预处理的HUVEC eNOS活性和NO含量无明显影响.结论17β-雌二醇可显著增加HUVEC eNOS活性,提高NO含量,他莫昔芬则可阻断其作用.门静脉高压血管内皮病变的形成与雌激素的作用有一定关系.     

SR-B1依赖PI3K-Akt-eNOS信号途径的激活介导HDL诱导内皮细胞PGI2释放

目的观察SR-B1介导HDL诱导内皮细胞PGI2生成的信号激活途径。方法分别转染pcDNA3.1(-)-hSR-B1重组表达质粒或SR-B1 siRNA48 h后,30 mg/L HDL孵育24 h;30 mg/L apoA1与ECV304内皮细胞共孵育24 h;分别用25μmol/L PI3K特异性抑制剂LY294002或50μmol/L eNOS特异性抑制剂L-NAME预处理3 h后,30 mg/L HDL孵育24 h。空白组作为阴性对照,30 mg/L HDL处理组为阳性对照,RT-PCR和/(或)Western blot检测PGIS、COX-2、CREB及磷酸化CREB的表达;免疫细胞化学法检测内皮细胞中COX-2蛋白的表达;ELISA法检测培养液中6-keto-PGF1α的生成。结果不管是mRNA水平还是蛋白水平,在过表达SR-B1后,HDL均不能显著上调COX-2的表达,然而,有趣地是siRNA沉默SR-B1后,可见HDL诱导内皮细胞COX-2的表达明显减少,且免疫细胞化学检测能得到相似的结果。30 mg/L apoA1孵育内皮细胞24 h后,COX-2表达亦出现增加。但是,不管是HDL单独处理还...     

雌激素和他莫昔芬对大鼠动脉血管平滑肌细胞雌激素受体及表型蛋白的影响

目的 探讨雌激素(E2)和他莫昔芬(TAM)对血管平滑肌细胞(VSMC)雌激素受体(ERs)及表型蛋白的影响.方法 体外培养大鼠胸主动脉VSMC,应用浓度为10-9、10-8和10-7 mmol/L的17β-雌二醇和浓度为10-8、10-7和10-6 mmol/L的TAM作用于VSMC 24 h.RT-PCR法检测实验后VSMC ERα、ERβ、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和骨桥蛋白(OPN) mRNA表达情况.     

17β-雌二醇对牛视网膜毛细血管内皮细胞eNOS mRNA及NO调控的实验研究

目的探讨17β-雌二醇(E2)在不同氧(O2)环境下对牛视网膜毛细血管内皮细胞(BRECs)一氧化氮合酶(eNOS)mRNA及NO的影响。方法在正常O2及缺O2环境下,采用不同生理浓度(10-12、10-10、10-8mol/L)的17β-E2及雌激素受体拮抗剂他莫昔芬处理培养的BRECs。采用RT-PCR检测eNOS mRNA,硝酸还原酶法测定NO。结果①低O2条件下BRECs的eNOS mRNA、NO表达较正常O2条件下明显增多(P<0.05)。②正常O2及低O2条件下,不同生理浓度17β-E2作用24 h后,17β-E2均呈浓度依赖性促进BRECs的eNOS mRNA、NO表达(P<0.05);10-8mol/L 17β-E2作用8、24 h,eNOS mRNA表达量呈时间依赖性增多(P<0.05)。结论生理浓度的17β-E2使BRECs的eNOS mRNA、NO表达呈浓度、时间依赖性增加。     

小窝蛋白-1在膜雌激素受体介导的内皮祖细胞增殖中的作用

目的 探讨微囊结构关键蛋白——小窝蛋白-1( caveolin-1,CAV-1)在膜雌激素受体介导的内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPC)增殖中的作用.方法 培养的EPC分别用不同浓度( 10-9～10-6 mol/L)雌二醇-牛血清白蛋白复合物(E2-BSA)作用24h或10-8 mol/L E2-BSA作用不同时间,或加雌激素受体阻断剂ICI 182,780、环糊精(MβCD)以及CAV-1 siRNA处理,在DMDM培养基中培养的EPC(不加任何试剂)作为对照,使用3H-脱氧胸苷掺入法检测其对EPC增殖的影响.CAV-1 siRNA干扰的效果利用免疫印迹法检测CAV-1蛋白表达来验证.结果 10-8 mol/L E2-BSA作用24h促进EPC增殖作用最大(比对照组高了约87.5％),ICI 182,780可以抑制其增殖作用,表明膜雌激素受体介导的信号通路参与了雌激素对EPC的增殖作用.用环糊精破坏微囊结构以及使用CAV-1 siRNA下调CAV-1蛋白表达都可抑制EPC的增殖(分别比10-8 mol/L E2-BSA组低了18.6％和41.2％).结论 膜雌激素受体可以通过CAV-1促进EPC的增殖.     

雌二醇对肾小管上皮细胞hUAT基因及蛋白表达的影响

目的观察不同浓度雌二醇对肾小管上皮细胞（HK-2细胞）人尿酸盐转运子（hUAT）基因表达的影响。方法取18瓶HK-2细胞,随机分为对照组、E1、E2组,每组6瓶。对照组培养液为DMEM＋0.5%乙醇,E1组为DMEM＋10^-8mol/L雌二醇＋0.5%乙醇,E2组为DMEM＋10^-6mol/L雌二醇＋0.5%乙醇。均培养48 h。采用实时荧光定量PCR及Western blot法分别检测三组细胞中hUAT mRNA及蛋白的相对表达量。结果所有标本均能检测到hUAT mRNA和蛋白的表达。E1组hUAT mRNA表达水平为对照组的167%,E2组hUAT mRNA表达水平为对照组的187%。蛋白表达与mRNA表达结果一致。结论雌二醇可上调hUAT mRNA及蛋白的表达。     

脑源性神经营养因子经NO/PKG/Sestrin2通路提高内皮细胞血管生成能力

目的研究脑源性神经营养因子(BDNF)对内皮细胞Sestrin2表达的影响及机制,并探讨其在血管新生中的作用。方法用100μg/L的BDNF分别处理人脐静脉内皮细胞(HUVEC)1 h、2 h、4 h、6 h、8 h,实时荧光定量PCR检测Sestrin2 mRNA水平,免疫荧光和Western blot检测Sestrin2蛋白表达。将HUVEC分为6组:对照组(Control组)、BDNF组(加BDNF 100μg/L)、BDNF+TrkB-Fc(1 mg/L)组、BDNF+KT-5823(500 nmol/L)组、BDNF+L-NAME(10~(-4) mol/L)组、BDNF+DMSO组,共干预4 h, Western blot检测Sestrin2蛋白表达。将HUVEC分为4组:对照组(Control组)、BDNF组(加BDNF 100μg/L)、BDNF+Sestrin2 siRNA组和BDNF+Control siRNA组,共干预6 h,细胞迁移实验和小管成形实验分别检测HUVEC迁移能力和血管生成能力。结果与0 h和1 h组比较,100μg/L BDNF分别干预HUVEC 2、4及6 h时段,Sestrin2 mRNA水平显著增高(P0.001),在2、4及8 h时段Sestrin2蛋白表达显著增高(P0.05);阻断NO/PKG通路可抑制BDNF诱导的Sestrin2表达上调(P0.001);抑制Sestrin2表达后,HUVEC迁移及小管形成能力较BDNF干预组显著降低(P0.01)。结论 BDNF通过NO/PKG通路促进内皮细胞表达Sestrin2,从而提高内皮细胞血管生成能力。     

ERK1/2蛋白在17β-雌二醇抑制睾酮诱导的心肌细胞肥大反应中的作用

目的 观察17β-雌二醇对睾酮诱导的心肌肥大反应的影响,探讨细胞外信号调节激酶(ERK1/2蛋白)在性激素对心肌肥大影响中的作用.方法 采用差速贴壁法分离、纯化培养新生SD大鼠心肌细胞,以Bradford法测定心肌细胞蛋白质含量,同位素法分析3H-亮氨酸(3H-Leu)掺入,以免疫印迹法检测心肌细胞ERK1/2蛋白表达水平的变化.结果 10-10 ～ 10-6 mol/L 17β-雌二醇可明显对抗睾酮诱导的心肌细胞蛋白质含量和3H-Leu掺入的增加,其中以10-8 mol/L 17β-雌二醇作用最为明显；预先给予10-6 mol/L雌激素受体拮抗剂他莫昔芬作用2h,可部分取消17β-雌二醇对睾酮诱导的心肌细胞蛋白质含量增加的抑制效应.用50μmol/L ERK1/2上游激酶MEK1/2的特异性抑制剂PD98059预处理2h不能增强17β-雌二醇对睾酮诱导的心肌细胞3H-Leu掺入的抑制作用；10-8 mol/L 17β-雌二醇可以对抗睾酮诱导的心肌细胞ERK1/2蛋白表达增加；10-6mol/L他莫昔芬预处理2 h可部分取消17β-雌二醇对睾酮诱导的心肌细胞ERK1/2蛋白表达增加的抑制作用.结论 17β-雌二醇经雌激素受体介导下调睾酮诱导的心肌细胞ERK1/2蛋白表达,从而抑制由睾酮诱导的心肌细胞肥大反应.     

干扰Sestrin2表达对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的观察干扰Sestrin2表达对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响。方法用ox-LDL处理HUVEC复制内皮细胞损伤模型。Western blot检测不同浓度ox-LDL处理HUVEC不同时间Sestrin2的蛋白表达水平及转染Sestrin2 siRNA后Sestrin2的蛋白表达水平;流式细胞术检测干扰Sestrin2表达后对ox-LDL诱导的HUVEC凋亡率的影响;Western blot检测干扰Sestrin2表达后对ox-LDL诱导的HUVEC中Caspase-3表达的影响及ox-LDL对HUVEC中JNK通路的影响。结果不同浓度(20、50和100 mg/L)的ox-LDL处理HUVEC 24 h均能明显上调Sestrin2表达;50 mg/L ox-LDL处理HUVEC不同时间(24 h和48 h)均能明显上调Sestrin2表达,24 h达高峰;转染Sestrin2 siRNA能明显抑制Sestrin2的表达;ox-LDL能明显诱导HUVEC凋亡,转染Sestrin2 siRNA能明显促进由ox-LDL诱导的HUVEC凋亡;ox-LDL能明显诱导p-JNK和p-c-Jun的表达,且SP600125能明显抑制由ox-LDL诱导的Sestrin2表达。结论 ox-LDL通过JNK/c-Jun信号通路诱导Sestrin2表达,干扰Sestrin2表达能明显促进ox-LDL诱导的HUVEC凋亡。     

不同浓度雌激素对软骨细胞金属蛋白酶mRNA表达的影响

目的；观察不同浓度雌激素对体外培养兔关节软骨细胞金属蛋白酶mRNA表达的影响。方法：体外培养雌兔关节软骨细胞，随机分为A、B两组，A组中加入17β雌二醇0、10^-6、 10^-7、10^-8、10^-9、10^-10、10^-11、10^-12mol/L干预72h；B组先用10mg/ml IL-1β干预24h， 随后分别加入0、10^-6-10^-12mol/L 17β＝雌二醇作用72h。采用RT－PCR方法观察软骨 细胞金属蛋白酶mRNA表达状况。结果：10^-6、10^-8、10^-9、10^-12mol/L雌二醇组，IL－1β＋雌二醇0mol/L组及IL－1βmRNA表达状况。结果：10^-6、10^-8、10^-9、10^-12mol/L雌二醇组，IL－1β^ 雌二醇0mol/L组及IL－1β＋雌二醇10^-11mol/L 表达MMP－1 mRNA；政党为软骨细胞不表达MMP－8mRNA,10^-8、10^-9、10^-12mol/L雌二醇组及IL－1β^＋雌二醇10^-6、10^-7、10^-10mol/L组表达MMP－8mRNA；所有软骨细胞均未表达MMP－13mRNA；正常软骨细胞不表达TIMP－1 mRNA,10^-6、10^-8、10^-10、10^-11mol/L雌二醇组及IL－1β 雌二醇10^-12mol/L组表达TIMP－1mRNA。结论：雌激素对关节软骨细胞 金属蛋白酶表达的调控作用随其浓度变化而不同。低于生理浓度的雌激素（10^-12mol/L）对延缓软骨退变较适宜。     

17-β雌二醇对大鼠成骨细胞β2肾上腺素受体表达的影响

目的探讨17-β雌二醇对大鼠成骨细胞β2肾上腺素受体(β2AdR)表达的影响。方法新生SD大鼠颅骨经多次酶消化、反复贴壁和分离纯化培养得到纯净成骨细胞并进行碱性磷酸酶(ALP)染色。加入不同浓度17-β雌二醇(10-6～10-9mmol/L)培养,在不同时间点采用RT-PCR法检测细胞β2AdR mRNA基因表达,采用Western blot法检测细胞中β2AdR蛋白的表达。结果 RT-PCR和Western blot检测结果表明,随着17-β雌二醇浓度的升高,7、14d培养组成骨细胞β2AdR mRNA和β2AdR蛋白表达水平均逐渐下降,并呈现药物浓度依赖性,对照组表达水平最高。结论 17-β雌二醇可抑制成骨细胞β2AdR的表达,可能是其调控骨代谢的机制之一。     

正五聚蛋白3对血管紧张素Ⅱ刺激后血管内皮细胞凋亡及血管活性物质分泌的影响

目的探讨正五聚蛋白(PTX)3对血管紧张素(Ang)Ⅱ刺激后的血管内皮细胞(HUVECs)凋亡及血管活性物质分泌的影响。方法以10~(-7) mol/L AngⅡ刺激体外培养的HUVECs 0、12、24和48 h后,Western印迹检测HUVECs中PTX3蛋白的表达。利用Lipofectamine2000将PTX3 siRNA转染至HUVECs,Western印迹检测其转染效果。将HUVECs随机分为空白组(未做任何处理)、AngⅡ组(10~(-7)mol/L AngⅡ刺激)、AngⅡ+siNC组(转染阴性对照序列后,给予10~(-7) mol/L AngⅡ刺激)和AngⅡ+siPTX3组(转染PTX3 siRNA后,给予10~(-7)mol/L AngⅡ刺激),噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的增殖情况,流式细胞仪检测各组细胞的凋亡,实时聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组细胞中血管活性物质内皮素(ET)-1和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达。结果随着AngⅡ刺激时间的延长,PTX3蛋白表达水平显著升高。转染PTX3 siRNA后成功下调了AngⅡ引起的PTX3表达。AngⅡ刺激可引起HUVECs增殖减弱,凋亡增强,ET-1和iNOS mRNA表达升高;下调PTX3表达能够减弱AngⅡ引起的HUVECs损伤,促进HUVECs增殖,抑制凋亡,并下调ET-1和iNOS mRNA表达。结论 PTX3在AngⅡ刺激后HUVECs中表达升高,下调其表达可抑制AngⅡ诱导的细胞凋亡及血管活性物质的分泌。     

雌二醇对成骨细胞OPG和RANKL的影响

目的探讨不同浓度17β-雌二醇(E2)作用下体外培养大鼠成骨细胞护骨素(OPG)、细胞核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)的表达及雌激素治疗骨质疏松的机制。方法采用不同浓度(10-10、10-9、10-8、10-7mol/L)17β-E2刺激培养的大鼠成骨细胞(OB),RT-PCR方法检测OPG、RANKL mRNA的表达。结果原代OB呈多角形、梭形,传代OB胞核较大,细胞质内见黑色颗粒,细胞形态为多角形或梭形,见突起,三代细胞碱性磷酸酶染色阳性,胞质见大量灰黑色颗粒,细胞鉴定符合成骨细胞特征。不同浓度(10-9、10-8、10-7mol/L)17β-E2对OB OPG mRNA表达具有显著的增强作用(P<0.05),其中10-8mol/L 17β-E2对OB OPG mRNA表达最高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),而10-10mol/L 17β-E2对成骨细胞OPG mRNA表达几乎无影响,与对照组比较无显著差异(P>0.05),10-10、10-9、10-7mol/L 17β-E2对成OB RANKL mRNA表达几乎无影响,与对照组比较无明显差异(P>0.05),其中10-8mol/L17β-E2对OB RANKL mRNA的表达具有明显的抑制作用,其与对照组比较差异明显(P<0.05)。结论雌激素治疗骨质疏松的作用可能与其促进成骨细胞OPG表达、抑制RANKL表达相关。     

雌激素对高糖诱导的HepG2细胞ACAT2表达的影响

目的 探讨雌激素对高糖诱导的酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶2(ACAT2)在HepG2细胞中表达的影响.方法 将培养好的HepG2细胞以0.7×106/L接种于六孔培养板内,加入无血清培养基继续培养24h,将细胞分为四组,对照组加入正常培养基,甘露醇组计入终浓度为25 mmol/L甘露醇溶液,高糖组加入的葡萄糖溶液培养基孵育12 h;雌激素组用含总浓度25 mmol/L葡萄糖的培养基与细胞孵育4h后,再加入终浓度为1×10-8 moL/L的17β-雌二醇孵育8h.RT-PCR和Western blot法检测各组ACAT2的表达水平.结果 高糖组HepG2细胞ACAT2的表达明显高于对照组和雌激素组(P＜0.001),雌激素组与对照组、甘露醇组比较无统计学意义.结论 雌激素可下调高糖诱导的ACAT2表达.     

17β-雌二醇对脂肪细胞促酰化蛋白受体和下游信号蛋白表达的影响

目的观察17β-雌二醇对3T3-L1(前)脂肪细胞促酰化蛋白受体C5L2 mRNA、细胞表面C5L2蛋白和促酰化蛋白下游信号蛋白表达的影响。方法体外培养3T3-L1细胞,"鸡尾酒"方法诱导细胞分化,用不同浓度17β-雌二醇作用于3T3-L1(前)脂肪细胞,孵育过夜后收获细胞,采用RT-PCR和流式细胞仪检测促酰化蛋白受体mRNA和蛋白表达情况;采用Western Blot法检测基础状态和促酰化蛋白刺激时Gαq/11、Gβ、p-PKCα和p-PKCζ蛋白表达。结果10-8mol/L17β-雌二醇轻度增加3T3-L1成熟脂肪细胞和前脂肪细胞C5L2 mRNA和蛋白的表达,10-6mol/L时3T3-L1成熟脂肪细胞C5L2 mRNA和蛋白表达分别下降了40%(P<0.05)和21%(P<0.05)。但前脂肪细胞C5L2mRNA和蛋白表达水平差异均无显著性。高浓度(10-6mol/L)17β-雌二醇组在一定程度上抑制促酰化蛋白刺激的成熟脂肪细胞Gαq/11、Gβ、p-PKCα和p-PKCζ的表达,促酰化蛋白刺激的蛋白表达分别减少了17%、23%、15%和15%(P均>0.05);在前脂肪细胞,10-6mol/L17β-雌二醇仅抑制促酰化蛋白刺激的Gαq/11蛋白表达24%(P<0.05),对Gβ、p-PKCα和p-PKCζ的表达无明显差异。但17β-雌二醇作用后,在一定程度上"中和"促酰化蛋白对Gαq/11、Gβ、p-PKCα和p-PKCζ的促进作用。结论高浓度雌激素可诱导促酰化蛋白抵抗发生,促酰化蛋白抵抗可能参与了高浓度雌激素引起的脂肪细胞胰岛素抵抗状态的病理生理过程。     

缬沙坦对血管紧张素Ⅱ抑制klotho基因表达的影响

目的:研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)调控klotho基因表达的机制,探讨缬沙坦(valsartan)对其调控作用的影响。方法:将大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)与干预药物共培养。(1)按AngⅡ浓度梯度0(对照组)、10-9、10-8、10-7、10-6、10-5mol/L和时间梯度0(对照组)、3、6、12和24h分组培养,用RT-PCR检测klotho mRNA的表达水平。(2)按Valsartan浓度梯度0(对照组)、10-9、10-7、10-5和10-3mol/L分组培养,RT-PCR检测klothomRNA的表达。(3)设对照组、AngⅡ(10-7mol/L)组、AngⅡ(10-7mol/L) Valsartan(10-5mol/L)组和Valsartan(10-5mol/L)组,用RT-PCR和免疫组化法检测klotho mRNA和蛋白表达。结果:(1)AngⅡ对klotho mRNA表达呈量效抑制关系,但在时效关系上,klotho在3h点被AngⅡ抑制(P<0.05),6~12h klotho mRNA表达量逐渐增加,而24h后klotho mRNA表达减少,呈明显抑制状态(P<0.05)。(2)不同浓度Valsartan对klotho mRNA的表达无显著影响,组间差异无统计学意义(P>0.05)。(3)AngⅡ可明显抑制klotho表达(P<0.05),给予Valsartan阻断AngⅡ作用后,klotho表达增高(P<0.05),而Valsartan本身对klotho表达无影响(P>0.05)。结论:AngⅡ对klotho基因的抑制作用呈浓度依赖性,Valsartan可拮抗AngⅡ对klotho基因的抑制作用,血管紧张素Ⅱ1型受体是AngⅡ调控klotho基因表达的关键环节。     

金雀异黄酮对成骨细胞增殖的影响及其可能的分子生物学机制

目的观察金雀异黄酮（GS）对绝经期骨质疏松患者骨膜成骨细胞增殖的影响及其分子生物学机制。方法用噻唑蓝比色法和流式细胞术分别检测GS对成骨细胞增殖活力和细胞周期分布的影响；Western—blot技术分析GS对细胞周期蛋白D和E表达的影响。结果GS可显著提高成骨细胞增殖活力，与溶剂对照组比较，10^-8mol／L、10^-7mol／L和10^-6mol／L GS时，细胞增殖率分别为137％、155％和161％；提高S期和M／G2期细胞分布比例，并伴有G0／G1期细胞比例降低；它莫西芬可抑制10^-7mol／L和10^-6mol／L GS促成骨细胞增殖效应。Western—blot的检测结果显示，10^-8mol／L和10^-7mol／L GS对成骨细胞处理24h，提高细胞周期蛋白D和E蛋白质的表达（P〈0．05）。结论由于雌激素受体拮抗剂它莫西芬可抑制GS对成骨细胞的促增殖作用，表明金雀异黄酮可通过激活雌激素受体途径，表现出雌激素效应，并促进骨组织代谢中的骨形成作用。     

RNA干扰抑制雌激素受体α亚基对雌激素诱导人成骨样细胞护骨素表达的影响

目的 探讨RNA干扰抑制人成骨样细胞株MG63中雌激素受体α亚基(estrogen receptor α subunit ERα)后，对17β-雌二醇(E2)诱导护骨素(OPG)表达的影响。方法 利用计算机辅助设计ERα特异性siRNA，体外合成siRNA基因，并将其定向克隆入真核表达载体pSilencer4．1-CMV。以脂质体法转染ERα siRNA载体至人的成骨样细胞株MG63中，鉴定后分别用不同浓度的雌激素或G蛋白抑制剂苏拉明干预经ERα siRNA转染的MG63细胞或未经ERα siRNA转染的MG63细胞，RT-PCR法检测OPG mRNA的表达水平。结果 双酶切法鉴定重组质粒后，RT-PCR法鉴定ERα siRNA载体可特异地抑制MG63细胞中ERα的表达。不同浓度的17β-E2上调MG63细胞OPG mRNA的表达，其中以10^-7mol／L的作用最强。但经ERα siRNA载体抑制MG63细胞ERα亚基后，17β-E2上调MG63细胞OPG mRNA表达的作用消失。结论 17β-E2主要经ERα亚基上调MG63细胞OPG的表达。     

雌激素对肿瘤坏死因子诱导的内皮细胞凋亡的影响

目的 观察17β-雌二醇(E2)及肿瘤坏死因子(TNFα)对培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响.方法 将HUVEC分为4组,空白对照组、TNFα(40 μg/L)组、TNFα(40 μg/L)加E2(1 μmol/L)和E2(10 μmol/L)组,各组细胞经维持液培养48 h使细胞生长同步,加入相应药物培养24 h后收获细胞.采用免疫组化方法测定bcl-2蛋白表达及流式细胞仪测定细胞凋亡发生百分率.结果 TNFα诱导的细胞凋亡发生率较正常对照组明显增多(P＜0.001),bcl-2蛋白表达少,DNA直方图上可见高大的凋亡峰,而雌激素干预后凋亡发生率明显降低(P＜0.001),bcl-2蛋白表达增加.结论 E2可增加bcl-2蛋白的表达,抑制TNFα诱导的人内皮细胞细胞凋亡的发生率,维持内皮细胞结构和功能的完整,可能为其抗动脉粥样硬化的机制之一.     

氧化型低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞TET2表达及自噬的影响

目的 观察氧化型低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞自噬的影响及其调节机制.方法 氧化型低密度脂蛋白孵育人脐静脉内皮细胞24 h,RT-PCR检测TET2 mRNA表达,Western blot检测TET2以及自噬标记物Beclin 1、LC3的表达.TET2 siRNA转染人脐静脉内皮细胞,Western blot检测Beclin 1、LC3的表达.结果 人脐静脉内皮细胞经不同浓度氧化型低密度脂蛋白孵育24h后,浓度依赖性地下调TET2 mRNA以及蛋白的表达(P＜0.05),并且下调Beclin 1表达以及LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ的比值.TET2 siRNA转染人脐静脉内皮细胞后,Beclin 1表达以及LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ的比值明显降低.结论 氧化型低密度脂蛋白促进人脐静脉内皮细胞自噬,可能与下调TET2表达相关.