调节性T细胞外泌体对牙周膜干细胞成骨分化能力的影响

目的 研究调节性T细胞(regulatory T cells, Tregs)外泌体(exosomes)对牙周膜干细胞(PDLSCs骨分化能力的影响。方法 采用酶消化法分离及培养PDLSCs,通过流式细胞仪分选人外周血中Treg细胞,使用超速离心法提取Treg细胞外泌体,并进行蛋白鉴定,电镜以及粒径分析。在PDLSCs中加入不同浓度的treg外泌体,分别是1×10⁸,1×10¹⁰ particles/ml,并进行共培养。使用Real-time RT-PCR和Western Blot技术来检测7 d和14 d的成骨诱导后PDLSCs中Runx2和Osterix mRNA和蛋白的表达。使用茜素红染色技术进行评估,以了解成骨诱导21 d后钙结节形成的情况。通过Western blot检测treg细胞外泌体作用前后PDLSCs内Hes-1蛋白表达情况。结果 Treg细胞外泌体的形态为直径约139 nm的圆形或椭圆形囊泡。蛋白检测结果显示提取的treg外泌体中高表达CD63、TSG101、CD9和CD81。Treg细胞外泌体促进了PDLSCs的Runx2...     

骨髓间充质干细胞外泌体调控STAT3通路促进牙周膜干细胞成骨分化

目的:研究骨髓间充质干细胞(BMMSCs)外泌体调控信号转导与转录激活因子3(STAT3)通路促进牙周膜干细胞(PDLSCs)成骨分化的作用及机制.方法:原代培养BMMSCs和PDLSCs,取第3代BMMSCs细胞分离外泌体,取第3代PDLSCs细胞进行成骨诱导并分组,外泌体组加入15μg/mL重悬于磷酸盐缓冲液(PB...     

牙囊细胞成骨分化的研究进展

[摘要] 牙源性干细胞对口腔领域的新型细胞疗法的发展具有重要意义,引起广泛的关注。在牙体组织发育或再生过程中,牙源性干细胞也非常适合研究细胞过程。牙囊中的多能未分化细胞是牙源性干细胞的一种,这些细胞已被用于分化为成牙骨质细胞和成骨细胞的细胞过程的研究,对于牙周组织具有重要意义。本文关于信号通路、转录因子、细胞外基质蛋白对牙囊细胞成骨分化的研究作一综述。     

外泌体对脂多糖诱导的牙髓干细胞成骨分化的作用及代谢机制

目的:探究外泌体对脂多糖(LPS)诱导的牙髓干细胞(DPSCs)成骨分化的影响.方法:收集健康成人和儿童的脱落乳牙牙髓干细胞(SHED),分离、培养DPSCs和SHED并用流式细胞仪鉴定.收集SHED上清的外泌体,使用透射电镜、Western blot和粒径分析进行鉴定;检测对照组(10 mg/L PBS)、LPS组(10 mg/L LPS)和LPS+外泌体组(10 mg/L LPS+10 mg/L外泌体)的DPSCs细胞外酸化率(ECAR)和耗氧率(OCR)水平;加入线粒体呼吸酶抑制剂抗霉素A后,实时定量RT?PCR和茜素红染色检测各组DPSCs的成骨分化能力.结果:成功获得DPSCs和SHED来源外泌体;LPS可以提高DPSCs的ECAR水平,使OCR/ECAR水平下降,而加入外泌体后,DPSCs的OCR水平升高,OCR/ECAR水平得到恢复;外泌体可以恢复LPS诱导的成骨分化下降,而加入抗霉素A可以抑制外泌体的促成骨分化能力.结论:SHED来源的外泌体通过提高OCR/ECAR水平,来促进炎症微环境下DPSCs的成骨分化能力.     

微小RNA调控牙周膜干细胞成骨分化的研究进展

牙周炎是一种常见的慢性感染性疾病,可导致牙周支持组织的进行性破坏.牙周膜干细胞具有成骨向分化能力,在牙周组织再生领域中拥有广阔的应用前景.微小RNA(microRNA,miRNA)是长度约18～25个核苷酸的非编码单链RNA,可靶向mRNA 3'非翻译区(untranslated region,UTR),进而导致mRN...     

circRNA SIPA1L1修饰外泌体对脂多糖刺激下人牙髓干细胞成骨分化的影响

目的:探究环状RNA(circRNA)信号诱导增殖相关蛋白1样蛋白1(signal-induced proliferation-associated 1 like 1,SIPA1L1)修饰人牙髓干细胞(human dental pulp stem cell, hDPSC)来源外泌体(exosome, Exo)对脂多糖(lipopolysaccharides, LPS)刺激下的hDPSC成骨分化能力的影响。方法:将circSIPA1L1过表达质粒载体转染至hDPSC后分离Exo,透射电镜观察形态特征，Western blot测定Exo标志蛋白CD81、Hsp70、TSG101表达，qRT-PCR检测circSIPA1L1相对表达量，用PHK26荧光标记Exo并观察hDPSC摄取情况。hDPSC分为对照组、LPS组、LPS+hDPSC Exo组、LPS+circSIPA1L1-hDPSC Exo组，CCK-8检测各组hDPSC增殖；酶联免疫吸附测定(ELISA)各组hDPSC培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6水平，茜素红染色检测各组hDPS...     

T型钙通道对人牙囊细胞成骨分化的影响

目的:探讨Ca2+对人牙囊细胞(hDFCs)成骨分化的影响及其分子机制.方法:分离培养hDFCs,免疫荧光染色及流式细胞术检测hDFCs的来源.反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测L型钙通道、T型钙通道、三磷酸肌醇受体以及雷诺定受体在hDFCs的表达及-成骨分化相关基因RUNX相关转录因子2(runt-related...     

褪黑素对人牙周膜细胞成骨分化能力的影响

目的 探讨褪黑素对人牙周膜细胞(hPDLCs)成骨分化能力的影响.方法 原代培养法成功提取hPDLCs后,加入不同浓度的褪黑素作为实验组,空白对照组不加褪黑素.MTT法检测不同浓度褪黑素对细胞增殖的影响,相关试剂盒检测碱性磷酸酶(ALP)的活性和表达后,采用茜素红S染色、Real-time PCR和Western Bl...     

人牙周膜细胞在矿化液作用下的增殖、成骨分化与相关基因表达

目的：分离培养人牙周膜细胞（PDLCs）,观察矿化液对PDI。Cs细胞增殖和成骨分化的影响。方法：酶解组织块后获得人PDLCs,矿化液处理后观察对细胞影响。采用MTT法检测对细胞增殖;流式细胞分析细胞周期改变;分别通过碱性磷酸酶（ALP）染色、茜素红染色,RT—PCR观察矿化液诱导成骨分化的效果。结果：矿化液对人PDI．Cs的增殖无显著影响,高浓度地塞米松（Dex）的矿化液有一定抑制作用。含Dex的矿化液可促进成骨分化,包括ALP活性提高,矿化结节形成,以及成骨基因的表达上调。$100A4和PLAP-1是相对特异的牙周膜标志,也参与矿化液诱导的成骨分化的调控过程。结论：含地塞米松的矿化液可有效促进人PDLCs的成骨分化,对细胞增殖影响较小。PDI,Cs是一种新型的种子细胞,可应用于骨组织工程。     

神经营养素3促进人牙囊细胞成骨分化

目的 研究神经营养素3（NT-3）对人牙囊细胞（hDFCs）成骨分化的影响。方法 体外分离并培养hDFCs,免疫细胞化学染色法鉴定细胞来源,CCK-8法检测不同质量浓度NT-3对hDFCs增殖活性的影响,同时检测NT-3对hDFCs的碱性磷酸酶（ALP）活性,以及骨形态发生蛋白-2（BMP-2）、骨钙素（OCN）mRNA相对表达量的影响,并用茜素红染色法检测矿化情况。结果 波形丝蛋白和角蛋白染色结果表明hDFCs为间充质细胞来源。NT-3对hDFCs增殖活性无明显影响;当NT-3质量浓度为25、50、100 ng·mL^-1时能明显增强ALP活性,提高BMP-2、OCN mRNA的相对表达量,与对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）,NT-3质量浓度为100 ng·mL^-1时BMP-2、OCN mRNA的相对表达量达到最高。当NT-3质量浓度为50、100 ng·mL^-1时矿化结节数量最多。结论 适宜质量浓度的NT-3能促进hDFCs的成骨分化。     

牙周膜相关蛋白1在人牙周膜细胞成骨分化过程中的表达

目的 研究牙周膜相关蛋白1（PLAP-1）在人牙周膜细胞（PDLC）成骨分化过程中的表达变化,为明确PLAP-1 在牙周组织中的作用奠定基础.方法 酶消化法培养人PDLC,免疫细胞化学染色鉴定其来源和PLAP-1 的表达,茜素红染色和碱性磷酸酶（ALP）实验鉴定其成骨分化能力,定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测其成骨分化过程中,PLAP-1、Periostin、RGD-CAP、RUNX2、OCN 和OPN mRNA 表达变化,Western blot 检测PLAP-1、RUNX2 和OCN 蛋白表达变化并进行统计分析.结果 培养的人PDLC 来源于间充质;人PDLC 矿化诱导21 d 后茜素红染色阳性,矿化诱导后7、14、21 d 时ALP 活性较对照组明显增高（P ＜ 0.05）,具有成骨分化能力;PLAP-1 免疫细胞化学染色阳性;定量RT-PCR 和Western blot 结果显示,人PDLC 在mRNA 和蛋白水平均表达PLAP-1,且mRNA 表达量随人PDLC 成骨分化过程发生变化,诱导14 d上调,诱导21 d 下调,较对照组有明显差异（P ＜ 0.05）,Western blot 检测蛋白表达显示类似的表达趋势.结论 PLAP-1 在基因及蛋白水平均高表达于人PDLC,其表达量随人PDLC 成骨分化成一定模式,提示其参与调控牙周膜的功能与稳定,但其精细的调控功能还有待进一步深入研究.     

LMK-235对牙周膜细胞成骨和成牙本质分化的影响

目的：探讨Ⅱa类组蛋白去乙酰化酶抑制剂LMK?235对人牙周膜细胞（human periodontal ligament cells,hPDLCs）早期成骨和成牙本质分化的影响。方法通过酶消化法获得hPDLCs,分别用浓度为0、50、100、250、500 nmol/L的LMK?235处理第三代hPDLCs 3 d。MTT法检测hPDLCs的增殖,同时qRT?PCR检测成骨及成牙本质相关因子Runx2、ALP及DMP?1 mRNA的表达水平。结果 MTT结果显示100 nmol/L的LMK?235对hPDLCs增殖具有促进作用。qRT?PCR结果表明100 nmol/L处理组Runx2 mRNA的表达水平为对照组的1.77倍（P＜0.05）;而ALP mRNA的表达水平在实验组均高于对照组（P＜0.05）,同时100 nmol/L处理组表达量最高;DMP?1 mRNA的表达水平在50 nmol/L及100 nmol/L组较对照组升高（P＜0.05）。结论浓度为100 nmol/L的Ⅱa类组蛋白去乙酰化酶抑制剂LMK?235促进hPDLCs增殖,并通过上调Runx2、ALP、DMP?1等成骨及成牙本质相关因子mRNA表达来促进hPDLCs早期成骨及成牙本质分化。     

丹酚酸B对人牙周膜细胞成骨分化的影响

目的探讨中药丹参主要活性成分丹酚酸B（SalB）对人牙周膜细胞（hPDLCs）成骨分化的影响。方法取第3代hPDLCs进行实验,运用甲基噻唑基四唑（MTT）法检测不同浓度丹酚酸B对hPDLCs增殖活性影响,通过检测碱性磷酸酶（ALP）活性、矿化结节染色、骨钙素（OCN）mRNA表达来探讨丹酚酸B对hPDLCs成骨分化的影响。结果丹酚酸B对hPDLCs增殖活性无影响。当丹酚酸B浓度为0.5、1、5 μmol·L^-1时均能增加hPDLCs的ALP活性和OCN mRNA表达,与OIM组比较差异有统计学意义（P<0.05）;且当丹酚酸B浓度为0.5、1、5 μmol·L^-1时hPDLCs形成矿化结节数量明显高于OIM组。结论适宜浓度的丹酚酸B能有效促进hPDLCs成骨分化。     

炎症微环境对人牙周膜成纤维细胞增殖与成骨分化的影响

目的: 观察脂多糖模拟的炎症微环境对体外培养的人牙周膜成纤维细胞（periodontal ligament cells, PDLCs）增殖与成骨分化的影响。方法: 体外培养鉴定人牙周膜成纤维细胞,分别用浓度为0、0.1、10 μg/mL脂多糖作用于细胞,采用MTT法观察脂多糖对PDLCs增殖的影响,运用实时定量PCR和Western印迹法检测脂多糖模拟的炎症微环境对PDLCs成骨分化的影响。采用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学分析。结果: 0.1 μg/mL脂多糖促进PDLCs增殖,增强成骨标志物mRNA和蛋白的表达;10 μg/mL脂多糖可抑制PDLCs的增殖及碱性磷酸酶、RUNX2、Ⅰ型胶原、骨形态发生蛋白2的表达,其结果有统计学意义。结论: 高浓度脂多糖（10 μg/mL）模拟的炎症微环境对PDLCs增殖及成骨分化有抑制作用,低浓度脂多糖（0.1 μg/mL）对PDLCs的增殖和成骨分化有促进作用。     

炎症微环境下芦丁对牙周膜干细胞成骨分化能力的影响

目的 研究芦丁（rutin）对炎症微环境下牙周膜干细胞成骨分化能力的影响。方法 采用有限稀释法分离纯化获得牙周膜干细胞,采用流式细胞术鉴定牙周膜干细胞。以脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）刺激牙周膜干细胞,建立体外炎症模型。实验分为4组,第1组使用α-MEM培养基培养牙周膜干细胞,第2组使用含有脂多糖的α-MEM培养基培养牙周膜干细胞,第3组在含有脂多糖的α-MEM培养基加入芦丁培养牙周膜干细胞,第4组使用含有芦丁的α-MEM培养基培养牙周膜干细胞。通过碱性磷酸酶染色、碱性磷酸酶活性测试、茜素红染色、RT-PCR以及蛋白免疫印迹等方法检测成骨分化能力的改变。采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计分析。结果 CCK-8和碱性磷酸酶活性测试结果显示,10 μmol/L芦丁对炎症状态下牙周干细胞增殖和成骨分化作用最明显。碱性磷酸酶染色和茜素红染色结果显示,10 μmol/L芦丁可以改善炎症微环境下牙周膜干细胞的成骨分化能力。RT-PCR、蛋白免疫印迹结果显示,芦丁可以增强炎症状态下COL1、ALP、RUNX2等成骨基因和成骨蛋白的表达。结论 芦丁可以增强炎症微环境下牙周膜干细胞的成骨分化能力。     

miR-335对牙囊干细胞成骨分化能力的影响

目的 体外研究大鼠牙囊干细胞成骨分化能力,以及miR 335对牙囊干细胞成骨分化能力的影响。 方法 双向差速法体外分离培养大鼠牙囊干细胞,进行成骨诱导。用茜素红染色检测成骨分化的能力,进而用qRT-PCR检测miR-335的表达,并且在瞬时转染miR-335 mimics和inhibitor后成骨诱导,用PCR和Western Blot的方法检测成骨能力的改变。 结果 双向差速法培养的牙囊干细胞具有成骨样细胞分化能力。成骨诱导的牙囊干细胞中miR-335表达降低,转染mimics后成骨能力降低,转染inhibitor后成骨能力升高。 结论 在体外条件miR-335可以抑制牙囊干细胞成骨分化。     

脂多糖对牙周膜细胞生物学性状的影响

脂多糖(LPS)具有多种生物学活性和免疫学特性,对牙周组织具有很高的毒性和抗原性,是牙周炎重要的病因之一.本文就LPS的化学组成,LPS对牙周膜细胞(PDLC)超微结构、对PDLC增殖及其成骨能力、对PDLC胶原降解、对PDLC附着能力的影响以及LPS诱导PDLC产生多种炎性递质、LPS对PDLC在其他方面的作用等研究...     

非编码RNA调控人牙周膜干细胞成骨向分化的研究进展

牙周炎是一种常见的炎症性疾病,以牙齿支持结构的进行性损伤为特点,是我国成人牙齿丧失的主要原因。治疗牙周炎的目的不仅是通过控制炎症来阻止疾病发展,更重要的是获得牙周再生。人牙周膜干细胞具有成骨向分化潜能,有望在牙周组织修复再生的临床应用上发挥重要作用。非编码RNA(ncRNA)一般是指不编码蛋白质的RNA。伴随高通量检测技术的不断发展,发现了大量的种类丰富的ncRNA,其生物学功能也被不断揭示。越来越多证据显示,ncRNA在分子机制及细胞组织层面对疾病的发生、发展起重要调控作用,因此探索ncRNA调控机制可为牙周再生的研究提供新思路。本综述主要阐述了目前研究较多的几种ncRNA在人牙周膜干细胞成骨向分化中的调控机制。