小鼠卵母细胞体外成熟过程中卵丘细胞上细胞周期蛋白D2的表达

目的检测在小鼠卵母细胞体外成熟过程中卵丘细胞(CCs)上细胞周期蛋白D2(CCND2)表达水平的变化,探讨其在卵母细胞成熟中的作用。方法从3周龄雌性ICR小鼠获取GV期卵丘-卵母细胞复合体(GV-COCs),体外培养至MⅡ期卵丘-卵母细胞复合体(MⅡ-COCs)。收集对应的CCs,分成GV-CCs和MⅡ-CCs二组,实时定量逆转录聚合酶链反应和蛋白印迹方法检测CCND2mRNA和蛋白水平的表达;激光共聚焦免疫荧光技术观察COCs成熟前后CCND2的亚细胞定位。结果 GV-CCs的CCND2mRNA相对表达量(7.03±1.11),显著高于MⅡ-CCs组(1.40±0.11)(P0.01);同样,GVCCs组CCND2蛋白相对表达水平(1.98±0.16)也显著高于MⅡ-CCs组(1.16±0.14)(P0.01)。免疫荧光显示,COCs中CCND2定位于CCs,卵母细胞亦有表达;CCs中CCND2主要定位于胞核,胞质中少量表达,且GV-CCs主要表达在内层CCs,而MⅡ-CCs则失去这种表达极性,同时MⅡ-CCs的表达强度较GV-CCs减弱。结论卵母细胞体外成熟培养过程中,其周围的CCs上CCND2表达水平下降,且伴随细胞定位的改变,提示CCs上CCND2与卵母细胞成熟密切相关,可能参与了卵母细胞成熟过程。     

猪体外成熟卵母细胞的卵丘扩散与胚胎发育能力的相关性

目的　探讨卵母细胞体外成熟过程中卵丘扩散与其体外受精后胚胎发育能力的关系。　方法　取猪卵丘 卵母细胞复合体 (COCs)在体外进行成熟、受精和培养 ,在体外成熟培养液中添加不同直径卵泡 (<2 ,2～ 5和 >5mm)的不同浓度 (15%、5% )卵泡液。　结果　在含卵泡液的成熟培养液中培养 48h ,卵泡液明显抑制了COCs的卵丘扩散 (P <0 .0 5) ,但不影响第一极体的排出 ;COCs成熟培养 2 4h后 ,移入不含卵泡液的成熟培养液中继续培养 2 4h ,卵丘扩散显著高于对应的 48h培养组 (P <0 .0 5) ,但第一极体的排出率无显著差异 ;体外成熟过程中COCs扩散的卵丘面积与其受精后的胚胎发育能力 (发育到 2～ 4细胞、>4细胞和桑葚胚 /囊胚的百分率 )呈显著正相关 (P =0 .0 0 58,0 .0 0 0 1和 0 .0 3 4 8)。　结论　卵泡液对COCs的卵丘扩散有抑制作用 ,这种抑制作用与卵泡液的作用时间相关 ;在体外成熟过程中扩散的卵丘团面积可以作为预测卵母细胞受精后胚胎发育能力的参数     

卵丘细胞上AIFM2和FDX1的表达及其与小鼠卵母细胞成熟的关系

目的检测小鼠卵母细胞体外、体内成熟过程中卵丘细胞(CCs)上线粒体相关凋亡因子2(AIFM2)和铁氧化还原蛋白1(FDX1)的表达,探讨其在卵母细胞成熟中的作用。方法从3周龄ICR雌性小鼠获取体内成熟卵丘-卵母细胞复合体(IVV-COCs)以及GV期卵丘-卵母细胞复合体(GV-COCs),并将GV期体外培养至MⅡ期卵丘-卵母细胞复合体(IVMCOCs)。收集对应的CCs,分成GV-CCs、IVM-CCs和IVV-CCs 3组。实时定量逆转录聚合酶链反应检测AIFM2和FDX1mRNA水平的表达,以GAPDH为参照;激光共聚焦免疫荧光技术观察COCs的AIFM2和FDX1的亚细胞定位。结果IVM-CCs和IVV-CCs的AIFM2mRNA相对表达量[分别为(0.72±0.01)和(0.67±0.02)]显著高于GV-CCs组[(0.10±0.06)](P0.01);同样,IVM-CCs和IVV-CCs的FDX1mRNA相对表达量[分别为(1.58±0.35)和(1.82±0.34)]也显著高于GV-CCs组[(0.10±0.03)](P0.01);而IVM-CCs和IVV-CCs的AIFM2和FDX1表达水平均无显著性差异(P0.05)。免疫荧光显示,AIFM2和FDX1主要定位于CCs胞质中,在GV-COCs中各层均有表达,且GV期卵母细胞中也有表达;IVMCOCs和IVV-COCs中表达阳性的细胞数目较GV期增加。结论卵母细胞成熟后,其CCs上AIFM2和FDX1的表达升高,表明AIFM2和FDX1参与了卵母细胞成熟过程,有望作为预测卵母细胞成熟的生物标记物。     

体内外成熟卵丘复合体中卵丘细胞蛋白质组学差异的研究

目的比较体内外成熟卵丘复合体的卵丘细胞蛋白质组学差异,探讨体外成熟卵母细胞发育能力差的原因,进一步阐明卵母细胞发育调控机制。方法收集20例因男性因素行卵胞浆内单精子注射-压胎移植(ICSI-ET)的患者成熟卵丘复合体的卵丘细胞为对照组,该20例患者的不成熟卵丘复合体经体外培养成熟后的卵丘细胞为实验组,将两组卵丘细胞进行双向凝胶电泳分析,并通过质谱技术鉴定差异蛋白质。结果实验组与对照组相比共有13个蛋白质表达上调(其中7个蛋白质的表达水平,实验组是对照组的3倍以上;6个蛋白质在实验组有表达,而在对照组中无表达),10个蛋白质表达下调(其中2个蛋白质的表达水平,对照组是实验组的3倍以上;8个蛋白质在实验组无表达,而在对照组中有表达),筛选质谱鉴定了6个蛋白点,得到5种蛋白质包括PRO2044蛋白、KIAA1191蛋白、乙酰辅酶A酰基转移酶2、11型角蛋白亚基蛋白和ARID2蛋白。结论通过蛋白质组学研究技术发现卵丘复合体在体内成熟与体外成熟存在差异,这些差异蛋白质主要与清除自由基、抗凋亡、细胞周期调控等相关,推测这些蛋白质的表达异常可能与体外成熟卵母细胞质量差的原因有关。     

卵丘细胞在卵母细胞发育过程中的作用

卵母细胞能否正常发育成熟是影响女性生育能力的重要因素,目前人们普遍认为,人类卵母细胞和卵丘细胞之间的相互交流,对于卵母细胞发育是不可或缺的。在卵泡窦腔形成过程中,颗粒细胞分化为壁颗粒细胞和卵丘细胞,卵丘细胞与其他卵泡细胞不同,具有本身独特的功能、促进排卵前卵母细胞的生长和成熟及支持排卵后卵母细胞功能的作用。本文主要对卵丘细胞的功能及在卵母细胞发育过程中的作用进行论述。     

卵巢储备功能减退患者卵泡液外泌体对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

目的 探讨卵巢储备功能减退(DOR)患者卵泡液外泌体对小鼠卵母细胞体外成熟的影响,以期为女性因DOR导致的生育功能降低和不孕症的发生提供新的科学实验数据。方法 选取SPF级4～6周龄C57BL/6J未孕雌性小鼠,收集未成熟卵母细胞并进行体外成熟培养;同时收集DOR患者卵泡液,并提取外泌体。利用Dio荧光标记外泌体后与小鼠未成熟卵丘-卵母细胞复合物(COCs)共孵育培养,观察外泌体摄入情况;通过添加不同浓度0、50、100和150μg/ml外泌体处理小鼠未成熟COCs 16 h观察卵丘扩展和第一极体排出情况,分析其对卵母细胞成熟的影响并筛选出最佳处理浓度;设置分组为体内成熟组(control)、外泌体添加组(exo+)和未添加组(exo-),各组成熟后的COCs利用qPCR检测卵丘扩展相关基因Has2、Tnfaip6和Ptgs2以及凋亡相关基因Bax、Bcl2的mRNA相对表达水平,分析各组间的差异。结果 (1)Dio标记的外泌体与小鼠COCs共孵育,卵丘颗粒细胞上能观察到明显的Dio荧光信号,证实COCs能够摄入外泌体;(2)不同浓度外泌体处理组的GV期卵母细胞百分比均显著高于0μg/...     

多精受精中人卵丘颗粒细胞差异基因表达分析

目的 筛选人卵丘颗粒细胞中影响卵母细胞多精受精的差异表达基因。方法 筛选3名因输卵管因素导致继发不孕的患者为研究对象,长方案促排卵后,在授精前10 min,对每个卵母细胞外围的卵丘颗粒细胞进行切割,分装无菌管保存。卵冠丘复合体(OCCC)进行微滴授精,受精后17～18 h,观察受精情况;并根据卵母细胞受精情况分为多精受精组和正常受精组,收集两组对应的颗粒细胞。提取颗粒细胞总mRNA,构建cDNA文库并进行测序,将得到的数据进行生物信息学分析,筛选出差异表达基因,并将差异表达基因进行基因本体论(GO)分析和京都基因和基因组数据库(KEGG)分析。结果 与正常受精组比较,多精受精组中显著上调的基因有106个,显著下调的基因有33个。上调的基因主要涉及P53信号通路、PI3K-AKT信号通路、肌动蛋白细胞骨架信号通路和HIPPO信号通路,其中基因BMP2、SESN3、CDK6、GRLF1(ARHGAP35)与多精受精有关。结论 与正常受精比较,多精受精时颗粒细胞存在差异表达的基因,对这些基因的进一步了解可能为后续开展异常受精的影响因素分析提供一定参考。     

分泌型卷曲相关蛋白家族成员在多囊卵巢患者不同成熟度卵母细胞周围的卵丘颗粒细胞中的基因表达

目的探讨在多囊卵巢综合征(PCOS)患者与非PCOS患者中,分泌型卷曲相关蛋白(sFRPs)家族成员基因在不同成熟度卵母细胞周围的卵丘颗粒细胞上的表达差异。方法收集27例接受体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕治疗的不育女性患者(其中11例PCOS患者,16例非PCOS患者),通过控制性促排卵治疗后,采用标准长方案促排卵,经阴道超声引导下穿刺取卵后,获得共198枚卵丘-卵母细胞复合体(PCOS患者98枚,非PCOS患者100枚);采用机械剥离法获取卵丘颗粒细胞,根据卵母细胞成熟度不同,将对应的卵丘颗粒细胞分为4组:非PCOS患者成熟卵母细胞周围的颗粒细胞组(CCN-MII),非PCOS患者非成熟卵母细胞周围的颗粒细胞组(CCN-MI+GV),PCOS患者成熟卵母细胞周围的颗粒细胞组(CCP-MII)和PCOS患者非成熟卵母细胞周围的颗粒细胞组(CCP-MI+GV)。通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测部分sFRPs家族基因成员(sFRP1、sFRP2、sFRP3、sFRP4、sFRP5)在PCOS及非PCOS患者不同成熟度卵母细胞周围的卵丘颗粒细胞上的表达情况。结果 (1)PCOS患者中,在未成熟卵母细胞周围的颗粒细胞中sFRP4的表达显著高于在成熟卵母细胞周围的颗粒细胞中的表达,即sFRP4在CCP-MⅠ+GV组表达高于CCP-MⅡ组[(7.80±1.21)vs.(1.00±0.00)](P0.05);(2)在非PCOS患者中,sFRPs家族成员sFRP4和sFRP5在不同成熟度卵泡母细胞周围的卵丘颗粒细胞中表达变化显著,CCN-MⅠ+GV组中的表达量均显著高于CCN-MⅡ组[sFRP4(7.04±1.30)vs.(1.00±0.00)](P0.05)和[sFRP5(2.84±0.73)vs.(1.00±0.00)](P0.05);(3)sFRP4的表达在PCOS及非PCOS患者间成熟卵母细胞对应的颗粒细胞组间均无显著性差异。结论在PCOS患者中,仅sFRP4在卵丘颗粒细胞上的表达与卵母细胞的成熟度相关;而在非PCOS患者中,sFRP4和sFRP5的表达均与卵母细胞的成熟度相关,其表达量随卵母细胞成熟而降低。     

卵母细胞授精前剥除部分卵丘细胞对体外受精-胚胎移植结局的影响

目的研究授精前剥除部分卵丘细胞的卵母细胞的受精、胚胎发育和临床结局。方法授精前用机械法剥除卵母细胞外包裹的部分卵丘细胞,每个卵母细胞采用微滴法单独受精(A组)。对照组(B组)采用常规体外受精-胚胎移植(IVF-ET)受精方式进行。比较两组受精率(2PN、1PN和3PN)、卵裂率(2PN、1PN和3PN)、优胚率、临床妊娠率、种植率和流产率。结果 A组和B组的受精率分别是76.51%和73.74%(2PN受精率分别是60.64%,61.62%;1PN受精率分别是1.61%,0.86%;3PN受精率分别是10.44%,9.69%)、卵裂率分别是98.95%和99.17%(2PN卵裂率分别是97.02,98.01%;1PN卵裂率分别是100%,85.71%;3PN卵裂率分别是100%,100%)、优质胚胎率分别是60.75%,62.68%、临床妊娠率分别是63.89%,61.76%、种植率分别是48.00%,38.78%、流产率分别是9.09%,11.90%。所有指标均无统计学意义。结论卵母细胞授精前剥除部分卵丘细胞不会影响IVF-ET的临床结局,为利用卵丘细胞进行非侵入性种植前遗传学诊断提供临床依据。     

颗粒细胞复合体在卵母细胞体外成熟培养中作用的研究

目的探讨颗粒细胞复合体应用于未成熟卵母细胞体外成熟培养(IVM)中的作用。方法收集2015年1月至2017年6月在我院生殖医学科接受ICSI-ET治疗的156例不育患者促排卵周期中废弃的未成熟卵母细胞为研究对象。共收集MⅠ期和GV期未成熟卵母细胞305枚,以随机方式入组到对照组(C组,培养时不添加颗粒细胞复合体)和实验组(T组,培养时添加颗粒细胞复合体)进行培养,并按照MⅠ期和GV期未成熟卵母细胞的不同分为4个亚组:MⅠ-C组、MⅠ-T组和GV-C组、GV-T组。观察各组的体外成熟及受精后胚胎发育情况等。结果 MⅠ-T组体外培养48h后的总成熟率显著高于MⅠ-C组(88.42%vs.73.62%,P0.01),体外培养24h的成熟率(80.00%vs.65.93%)、正常受精率(69.74%vs.53.33%)、受精率(75.00%vs.55.00%)及优质胚胎率(35.56%vs.12.00%)均显著高于MⅠ-C组(P0.05),且MⅠ-T组的卵母细胞利用率亦显著高于MⅠ-C组(21.05%vs.5.00%,P0.01);MⅠ-T组获得4个囊胚,多于MⅠ-C组(1个囊胚)。GV-T组体外培养48h的总成熟率显著高于GV-C组(65.00%vs.35.59%,P0.01);GV-T组培养24h的各项指标与GV-C组比较均无显著性差异(P0.05);GV-T和GV-C两组均未获得囊胚。结论含有颗粒细胞复合体的共培养体系可以提高促排卵周期中不同来源未成熟卵母细胞的体外成熟率,改善MⅠ期成熟卵母细胞的发育潜能,但是否能改善GV期卵母细胞的发育潜能尚需进一步研究。     

蛋白质组技术在胃癌相关标志物筛查中的应用

目的 建立胃癌组织和正常胃组织双向凝胶电泳图谱，鉴定差异表达蛋白，从中发现有意义的胃癌相关标志物。方法 采用双向凝胶电泳（2-DE）分离胃癌组织和正常胃组织总蛋白，银染显色，PDQuest软件分析，从中选取差异表达蛋白质点，通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）或MALDI-TOF-TOF-MS鉴定差异表达的蛋白质。结果 获得重复性和分辨率较好的胃组织双向凝胶电泳图谱；发现23个差异表达蛋白质，其中15个得到鉴定，在肿瘤组织中高表达的有10个，其余5个在肿瘤组织中低表达。结论 建立了胃癌组织和正常胃组织双向凝胶电泳图谱，并应用质谱技术鉴定了15个差异表达蛋白质。     

大鼠精子发生过程中热休克蛋白70-2特异表达的研究

目的运用蛋白质组学方法,寻找大鼠精子发生相关蛋白质,找到目标蛋白质后,进一步用免疫组织化学方法做定位研究。方法用重力沉降法(STAPUT法)从9 d龄雄性大鼠睾丸中分离出A型精原细胞,从成年的雄性大鼠睾丸中分离出粗线期精母细胞、圆形精子细胞。分别提取这3种细胞的总蛋白质,进行双向电泳。对所得双向电泳凝胶扫描,分析并找出差异蛋白质。对挑选出的差异蛋白质做质谱分析,发现在这3种不同细胞的表达上有明显差异的蛋白。进一步做睾丸免疫组织化学组织定位、定量研究。结果双向电泳结果显示,HSP70-2在粗线期精母细胞、圆形精子细胞中表达量较高, 在A型精原细胞则表达量极少。HSP70—2在粗线期精母细胞中表达量最大。用HSP70—2抗体对大鼠睾丸组织切片行免疫组织化学研究,发现粗线期精母细胞、Sertoli细胞、Leydig细胞有阳性颗粒反应。HSP70—2主要表达于细胞质。结论 HSP70—2在精子发生过程中有明显的差异表达,推测其对精子发生起重要调节作用。     

Primary establishment of human uterine muscle proteomic profiling by two-dimensional electrophoresis and mass spectrometry

Objective:To establish the protein profiling of human uterine muscle by two-dimensional electrophoresis.Methods:Five patients who underwent trans-abdominal hysterectomy due to cervical carcinoma in situ were in-cluded in this study.Postoperative uterine muscles were normal histologically.The total protein extracts from uter-ine muscle were separated using two-dimensional electrophoresis(2DE).Protein spots were stained by silver and de-tected by image analysis software.Matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry(MALDI-TOF-MS)and peptide mass fingerprint(PMF)were used to identify the selected protein spots.Results:Well-resolved,reproducible 2DE maps of human uterine muscle were obtained.Average protein spots were 468±52 and matching rate was 82.76%.Five protein spots were successfully identified by mass spectrome-try.Conclusions:2DE coupled with MALDI-TOF-MS and PMF is a useful approach for establishing human uterine muscle proteomic profiling.This data will be useful for establishing human uterine muscle proteome database.     

人胆囊组织蛋白质表达谱的建立

目的:建立胆固醇结石病人与正常人胆囊组织的蛋白质表达谱,用于比较胆囊组织的蛋白质组学研究,为阐明胆石成因提供实验依据。方法:提取胆固醇结石病人及正常人的胆囊壁组织总蛋白,构建相应的双向电泳表达图谱,应用ImageMaster图像分析软件对双向电泳图谱进行图像分析。结果:两组样本均获得分辨率高、重复性好的双向电泳图谱,胆固醇结石组与正常组病人组内蛋白质平均匹配点数分别为632±61和606±64,各匹配率分别为73.46%和71.49%。组间蛋白质平均匹配点为474,匹配率为70.64%。胆固醇结石病人的28个蛋白点表达上调,7个点表达下调,与正常人间蛋白表达差异明显(P0.05)。结论:初步建立了胆固醇结石病人与正常人胆囊组织的差异蛋白质表达谱,分析两者间差异蛋白点,为胆石成因研究提供实验基础。     

双向凝胶电泳和质谱技术在睾丸蛋白表达研究中的应用

目的 :探讨双向凝胶电泳和质谱技术在睾丸蛋白表达研究中的应用。　方法 :用双向凝胶电泳分离成年雄性ICR小鼠睾丸总蛋白 ;从胶上切下 2个蛋白点 ,经胶内原位酶解后 ,用质谱仪测得其肽质量指纹谱 ;再通过数据库检索鉴定蛋白质。　结果 :从胶上切下的 2个蛋白点数据库检索结果是小鼠血清白蛋白和蛋白质二硫化物异构酶。　结论 :用双向凝胶电泳分离睾丸蛋白样品取得了很高的分辨率 ,质谱技术鉴定蛋白快速方便 ,可用于从蛋白质组水平上研究睾丸表达的蛋白     

应用蛋白质组学方法研究黄芪总黄酮对人肝癌细胞的影响

目的：应用蛋白质组学方法研究黄芪总黄酮（TFA）对人肝癌细胞的影响。方法：随机将BEL-7402人肝癌细胞分成两组,一组为对照组,另一组以黄芪总黄酮（剂量为半数抑制率）处理48h。用双向凝胶电泳建立黄芪总黄酮组和对照组对人肝癌细胞蛋白质组影响的二维凝胶电泳图谱,用MALDI—TOF-MS生物质谱对差异的蛋白质进行鉴定分析。结果：黄芪总黄酮作用于人肝癌细胞的蛋白质组,质谱鉴定出10个差异蛋白：胆绿素还原酶B、转胶蛋白2、抗氧化蛋白1、磷酸化应激诱导蛋白1、内质网蛋白29、磷酸甘油酸变位酶1、胆绿索还原酶B、ABHD14B蛋白、LASP-1和NM23A;其中磷酸化应激诱导蛋白1表达下调,其他蛋白均上调。结论：黄芪总黄酮中的某些蛋白如转胶蛋白2、磷酸化应激诱导蛋白1、抗氧化蛋白1、内质网蛋白29、磷酸甘油酸变位酶1、胆绿素还原酶B等可能与黄芪总黄酮抗肿瘤作用机制相关。     

许旺细胞源神经营养蛋白的质谱分析

目的　采用质谱技术研究许旺细胞源神经营养蛋白 (SDNP)的分子结构。　方法　将纯化后保持活性的SDNP ,用TPCK 胰蛋白酶酶解 ,行激光飞行时间质谱检测 ,测定肽质量指纹质谱 ,以及碎片结构分析测序列 ,然后在相应的质谱数据库中检索。　结果　 (1)激光飞行时间质谱测得完整样品中SDNP的分子量 ;(2 )同时测得酶解样品中几十个肽段的质谱图 ,各肽段的分子量亦相应测出 ,检测8个肽段参数 ,通过蛋白质谱数据库MS Fit检索未发现有蛋白 10 0 %吻合 ,Hypotheticalprotein有 5个肽段符合 (吻合率 62 % ) ;(3 )取酶解质谱中的 2 3 0 5Da片段经质谱碎片分析得到若干碎片离子类型图谱 ,从获得的参数通过蛋白质谱数据库MS Tag检索得出该片段的氨基酸序列。　结论　通过质谱检测 ,许旺细胞源神经营养蛋白的相对分子质量是 66× 10 3 ,部分片段的氨基酸序列为EPVKKVTNSRRAKP TKPNGHIAN。     

Identification of the noncollagenous proteins of bovine bone by two-dimensional gel electrophoresis

Summary We have characterized the noncollagenous proteins of bovine bone using two high-resolution gel electrophoretic techniques. Proteins were extracted from bone tissue by extended dialysis against 0.5 M EDTA. In some cases, a preextraction was done in guanidine HCl. Bovine plasma was also examined to identify the proteins in bone that might also be present in blood. We have scored 160 major, reproducible spots on our standard preparation bone map. These comprise about 40 individual protein groups. There are many more minor spots present which puts the total number present over 200. Of these groups, 15 are not present on plasma maps. Bone proteins identified in this way include actin, bone Gla-protein, and osteonectin. The remainder are unknown. Bone Gla-protein is present in bovine bone in four isoelectric forms, pI=3.95−4.50. Electroblotting analysis of EDTA and guanidine HCl extracted material failed to reveal any higher molecular weight immunologically reactive species. The plasma proteins found in bone include, but are not limited to albumin, apo A-I lipoprotein, IgG, IgM, transferrin, α-2-HS-glycoprotein, and hemoglobin. Extraction with guanidine HCl plus EDTA significantly enriches the yield for the nonplasma proteins but does not appear to extract any additional bone proteins.     

肝大部切除术后小鼠血浆蛋白质组双向凝胶电泳图谱差异分析

目的利用蛋白质组学的研究方法建立分辨率高和重复性好的肝大部切除术后小鼠血浆的双向凝胶电泳图谱，描述肝大部切除后早期血浆蛋白质组变化的概况。方法以肝大部切除术方法制备小鼠模型，对12h后切肝组及对照组小鼠血浆样品分别进行双向凝胶电泳，每组设平行胶3块，凝胶经银染显色后，Imaging Master 2D图像分析软件进行比较分析，识别差异表达的蛋白质。结果与对照组比较。切肝后12h小鼠血浆蛋白中新增蛋白点37个，缺失15个，浓度上调蛋白点4个，下调7个，总的差异表达蛋白点数为63个。结论本研究建立了分辨率高且重复性较好的肝再生小鼠的血浆蛋白质组学双向凝胶电泳图谱，发现了一批与对照组相比差异表达的蛋白质。为进一步分析鉴定与肝脏再生启动相关的关键蛋白，探寻肝脏再生的机制莫定了基础。     

Establishment of a high-resolution 2-D reference map of human spermatozoal proteins from 12 fertile sperm-bank donors

Aim： To extend the analysis of the proteome of human spermatozoa and establish a 2-D gel electrophoresis （2-DE） reference map of human spermatozoal proteins in a pH range of 3.5-9.0. Methods： In order to reveal more protein spots, immobilized pH gradient strips （24 cm） of broad range of pH 3-10 and the narrower range of pH 6-9, as well as different overlapping narrow range pH immobilized pH gradient （IPG） strips, including 3.5-4.5, 4.0-5.0, 4.5-5.5, 5.0-6.0 and 5.5-6.7, were used. After 2-DE, several visually identical spots between the different pH range 2-D gel pairs were cut from the gels and confirmed by mass spectrometry and used as landmarks for computer analysis. Results： The 2-D reference map with pH value from 3.5 to 9.0 was synthesized by using the ImageMaster analysis software. The overlapping spots were excluded, so that every spot was counted only once. A total of 3 872 different protein spots were identified from the reference map, an approximately 3-fold increase compared to the broad range pH 3-10 IPG strip （1 306 spots）. Conclusion： The present 2-D pattern is a high resolution 2-D reference map for human fertile spermatozoal protein spots. A comprehensive knowledge of the protein composition of human spermatozoa is very meaningful in studying dysregulation of male fertility.