卵母细胞体外成熟技术在体外受精-胚胎移植中的补救应用

目的 对未成熟卵的体外成熟(IVM)技术在体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中的补救性应用进行总结,探讨影响其治疗结果的因素.方法 在IVF-ET治疗中,对卵巢反应不良、卵泡发育迟缓和卵泡过多生长有发生过度刺激可能需要取消治疗周期的患者,在B超引导下经阴道卵泡穿刺术取卵后,对未成熟卵进行体外培养成熟后进行IVF或卵胞浆内单精子显微注射,良好胚胎进行移植.结果 取卵周期33个,共获未成熟卵214个,进行体外培养后126个成熟;32个周期进行常规胚胎移植,8例临床妊娠,移植周期临床妊娠率为25.00%(8/32);7例分娩8个健康婴儿.结论 未成熟卵IVM技术是IVF-ET治疗不孕不育中有效的补充方法,可以补救未成熟的卵,减少患者取消IVF-ET治疗周期的发生.     

卵母细胞体外成熟技术在体外受精-胚胎移植中的补救应用

目的对未成熟卵的体外成熟(IVM)技术在体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中的补救性应用进行总结,探讨影响其治疗结果的因素。方法在IVF-ET治疗中,对卵巢反应不良、卵泡发育迟缓和卵泡过多生长有发生过度刺激可能需要取消治疗周期的患者,在B超引导下经阴道卵泡穿刺术取卵后,对未成熟卵进行体外培养成熟后进行IVF或卵胞浆内单精子显微注射,良好胚胎进行移植。结果取卵周期33个,共获未成熟卵214个,进行体外培养后126个成熟;32个周期进行常规胚胎移植,8例临床妊娠,移植周期临床妊娠率为25.00%(8/32);7例分娩8个健康婴儿。结论未成熟卵IVM技术是IVF-ET治疗不孕不育中有效的补充方法,可以补救未成熟的卵,减少患者取消IVF-ET治疗周期的发生。     

精子冷冻损伤与妊娠结局的相关性分析

目的研究精子冷冻损伤对体外授精-胚胎移植(IVF-ET)周期胚胎质量及妊娠结局的影响。方法回顾性分析供精周期与常规辅助生殖技术(ART)治疗周期的受精率、卵裂率、可移植胚胎率、优质胚胎率以及妊娠率的差异。结果供精IVF在受精率、卵裂率、优质胚胎率和妊娠率均低于常规IVF周期,且差异有统计学意义(P<0.05);供精卵胞浆内单精子显微注射术(ICSI)周期较ICSI周期在卵裂率、可移植胚胎率、优质胚胎率和冷冻周期率差异有统计学意义(P<0.05);而两者受精率及妊娠率差异无统计学意义(P>0.05)。结论冷冻后精子损伤可造成精子与卵子的结合能力及体外授精能力的下降;精子冷冻损伤只影响胚胎质量但不影响最终妊娠率。     

自然周期未成熟卵体外培养、受精和胚胎移植研究

目的:探讨自然周期成熟卵体外成熟培养(In vitromaturation,IVM)、受精和胚胎移植技术在治疗不育症中的应用.方法:选取30对接受体外授精/卵胞浆内单精子显微注射-胚胎移植(In vitrofertilization/intracytoplasmic sperminjection-embryotransfer,ⅣF/ICSI-ET)助孕的小育夫妇为对象,在自然月经周期卵泡直径>10 mm、内源性LH(Luteinizing hormone)峰出现之前采卵.采卵当日成熟卵(Metaphase Ⅱ,M Ⅱ)行IVF授精,未成熟卵进行体外培养24～48 h,成熟至M Ⅱ期后行ICSI授精,受精后72 h行胚胎移植.结果:30个ⅣM周期中,2个周期取卵末获卵.另28个周期共获卵113个,其中成熟卵29个,退化卵10个,未成熟卵74个,体外培养后成熟印个,成熟率81.08%.20个周期有胚胎移植,6例临床妊娠.其中5例成功分娩足月健康婴儿(1例来自成熟卵、4例来自未成熟卵),1例临床妊娠流产.结论:自然周期未成熟卵IVM、受精和胚胎移植技术可以用于治疗不育患者.     

玻璃化冷冻与慢速程序冷冻法保存人MⅠ期卵母细胞的效果比较

目的:探讨玻璃化冷冻与慢速程序冷冻法对人未成熟卵母细胞的存活及胚胎发育潜能的影响。方法:体外受精-胚胎移植中获得的251个MⅠ期卵母细胞随机分3组,第1组94个先玻璃化冷冻保存,第2组63个先慢速程序冷冻保存,两组冻融后的未成熟卵母细胞再进行IVM,用ICSI技术对成熟卵母细胞完成授精,并进行体外胚胎培养。第3组94个MⅠ期卵母细胞先进行IVM,再进行玻璃化冷冻保存,与第1组先玻璃化冷冻保存再IVM的顺序不同,冻融后同样用ICSI技术对获得的成熟卵母细胞完成授精,并进行体外胚胎培养。结果:玻璃化冻融组复苏存活率、体外成熟率、受精率、及卵裂率均高于慢速程序冻融组(P均<0.05);先玻璃化冷冻再IVM与先IVM再玻璃化冷冻的复苏存活率、体外成熟率、可用卵比率、受精率及卵裂率无统计学意义(P均>0.05)。结论:玻璃化冻融人未成熟卵母细胞能获得更好的冷冻保存效果;玻璃化冷冻与IVM的顺序不影响未成熟卵母细胞的利用。     

不同受精方式对获卵数较少患者妊娠结局的影响

目的比较获卵数少的患者采用不同受精方式对其妊娠结局的影响。方法回顾性分析127个周期获卵数少于6个的患者,采用体外受精（IVF）或卵胞浆内单精子显微注射术（ICSI）,比较两组受精率、多精受精率、取消周期率以及妊娠率的差异。结果两组患者年龄、不孕年限、不孕原因差异无统计学意义（P〉0.05）;两组患者获成熟卵率、可移植胚胎率、优质胚胎率、周期取消率、临床妊娠率差异无统计学意义（P〉0.05）I,CSI组较IVF组受精率、冷冻周期率明显高（P〈0.05）;两组按精液情况分层,男方精液正常的患者ICSI组比IVF组受精率明显升高（P〈0.05）,但在多精受精率、可移植胚胎率、优质胚胎率、冷冻周期率、取消周期率和临床妊娠率、单个取卵周期累计妊娠率等差异均无统计学意义;男方临界精液质量组的患者ICSI组可移植胚胎、冷冻周期率、取卵周期累计妊娠率较IVF组显著增加（P〈0.05）,周期取消率明显降低（P〈0.05）,受精率、优质胚胎率和临床妊娠率均高于IVF组,但无统计学意义（P〉0.05）。结论男方临界精液质量组获卵少患者采用ICSI可提高卵子的利用率及累计妊娠率,男方精液正常获卵少患者行ICSI无明显优势。     

卵子冷冻技术的临床应用

目的 探讨卵母细胞冷冻技术在临床应用.方法 将258例接受体外受精-胚胎移植(IVF-ET)和单精子卵浆内注射(ICSI)治疗,取卵数≥20枚的258个周期,分为部分卵母细胞冷冻组(简称冻卵组)84个周期和胚胎冷冻组(简称冻胚组)174个周期,比较两组新鲜周期受精率和临床妊娠率.总结了23个卵母细胞冷冻复苏周期及19个移植周期(其中4个周期为捐赠周期)的复苏率,受精率,卵裂率,胚胎种植率,临床妊娠率,比较冻胚组冻胚复苏移植的临床结局.结果 冻卵组和冻胚组新鲜周期的受精率和临床妊娠率差异无统计学意义(P>0.05);19个卵母细胞冷冻复苏的移植周期与56个冷冻胚胎复苏的移植周期的胚胎种植率和临床妊娠率差异亦无统计学意义(P>0.05);卵母细胞冷冻复苏的移植周期妊娠率为47.4%(9/19),其中冻卵捐赠4个移植周期,2例临床妊娠(1例已分娩).结论 对于接受IVF/ICSI治疗的不孕妇女,由卵巢刺激产生的较多卵母细胞,无论是否选择冷冻部分卵母细胞,对其新鲜周期的受精率和妊娠率没有影响;冻卵移植周期与冻胚移植周期的妊娠率差异也无统计学意义;但是卵母细胞冷冻在生育力保存和分享捐赠方面较冻胚具有显著的优势.     

人未成熟卵母细胞体外成熟培养在多囊卵巢综合征不孕妇女中的应用

目的：探讨未成熟卵母细胞体外成熟培养-胚胎移植技术（IVM—ET）在多囊卵巢综合征（PCOS）患者不孕症治疗中的临床应用前景。方法：将39例PCOS不孕妇女分未成熟卵母细胞体外成熟培养（IVM）组和常规体外受精／卵胞浆内单精子显微注射（IVF／ICSI）组。IVM组;11例PCOS患者,用小剂量促性腺激素（Gn）刺激后取未成熟卵母细胞体外培养28h,行卵胞浆内单精子显微注射（ICSI）,继续培养3d后行胚胎移植。IVF／ICSI组：28例PCOS患者,用常规IVF／ICSI技术助孕。结果：IVM组获卵数123枚,体外培养成熟率为82．93％（102／123）,受精率为98．04％（100／102）,卵裂率为92．00％（92／100）,优胚率为39．13％（36／92）,移植10个新鲜胚胎周期,临床妊娠2例,临床妊娠率为2／10,累计妊娠率4／11。与同期28例施行IVF／ICSI的PCOS患者进行比较,其Gn天数、用量、HCG日E2水平、获卵数、优胚率显著低于IVF／ICSI组,差异有统计学意义（P〈0．05）;卵裂率无明显差异（P〉0．05）;种植率、临床妊娠率均低于IVF／ICSI组,但差异无统计学意义（P〉0．05）;IVM组无中重度卵巢过度刺激综合征（OHSS）和自然流产的发生,而IVF／ICSI组中重度OHSS发生率为10．71％（3／28）、自然流产率为3／10,但差异亦无统计学意义（P〉0．05）。结论：IVM技术为PCOS患者的治疗开辟了一条新的途径,同时在减少外源性Gn用量,有效控制卵泡数量和E2水平方面具有明显优势。但对其能否降低OHSS风险以及成功率较低等问题,有待进一步研究。     

两种培养基对胚胎质量和IVF-ET妊娠率的影响

目的：探讨试用Earle‘s和HTF两种培养液对胚胎质量及体外受精（IVF）妊娠结局的影响。方法：对1999年8月－2001年8月间行试管儿（IVF－ET）的患者其中33例共363个卵子分别使用Earle‘s培养液（23例23个周期）与使用HTF培养液（10例10个周期）两组进行培养，分析 精率，卵裂率，优质胚胎率及妊娠率，并进行统计学分析。结果；使用HTF培养液组的优质胚胎率，胚胎着床率及妊娠率分别为36．9％，19．6％，60．0％，使用Earle‘s培养液组分别为22．3％，3．4％，13．0％，两组比较有非常显著性差异（P＜0．01）。结论：采用HTF培养液培养更适合卵子及胚胎的体外发育，从而提高了胚胎质量及IVF的妊娠率。     

玻璃化冷冻人卵母细胞体外受精－胚胎移植9例临床分析

目的：探讨人卵母细胞玻璃化冷冻在体外受精－胚胎移植（ IVF-ET）中的应用效果。方法行IVF-ET 治疗、因取卵日男方因素无法进行受精的患者9例,对其成熟卵子进行玻璃化冷冻保存,解冻后进行卵胞浆内显微授精（ICSI）,记录卵子复苏、受精、卵裂及移植后妊娠情况。结果9例患者共解冻复苏58枚卵子,复苏率68．2％（58／85）;复苏后进行ICSI的成熟卵子中,受精40枚,形成胚胎34枚,受精率69．0％,卵裂率85．0％。7个移植周期共移植胚胎15枚,临床妊娠3例,临床妊娠率42．9％。结论人卵母细胞玻璃化冷冻可以获得一定的临床妊娠率,在IVF-ET中可作为临床治疗的选择之一。     

冻存复苏人卵巢皮质在裸鼠体内的发育及卵细胞的提取

目的 探求冻存复苏人卵巢皮质在裸鼠体内的发育及卵细胞的提取。方法 取手术切除的5例患者的卵巢皮质，放入1．5mol／L的二甲基亚砜＋10％血清中，应用可控程序冻冰仪逐渐降温，移入液氮中冻存。3个月后，将融解的卵巢皮质移植入90只裸鼠皮下，注射hFSH12周，刺激卵泡生长。注射hCG36h后，用18号针头穿刺提取卵细胞。结果 卵巢直径为3～9mm，穿刺获19个卵细胞，放入TC-199培养基，加20％胎牛血清。25mmol／L丙酮酸，75mIU／mLFSH和LH培养，获15个分裂中期的次级卵母细胞。结论 人卵巢组织冻融后可异体移植生长，且其卵细胞可在体外发育成熟。     

山羊卵泡大小对卵母细胞体外发育能力的影响

目的比较不同大小山羊卵泡的卵母细胞体外成熟、体外受精及胚胎发育的能力。方法收集不同大小山羊卵泡的卵母细胞,分3组进行体外培养。Ⅰ组：卵泡直径≥5.0mm;Ⅱ组：卵泡直径3.0～4.9mm;Ⅲ组：卵泡直径〈3.0mm。观察各组卵母细胞体外成熟率、体外受精率、卵裂率及囊胚形成率。结果3组卵母细胞体外成熟率与受精率差异无统计学意义（均P〉0.05）。Ⅲ组卵母细胞的卵裂率及囊胚形成率分别为53.8%和28.6%,均显著低于Ⅰ组和Ⅱ组（均P〈0.01）。结论在进行山羊未成熟卵体外成熟培养时,卵泡直径≥3mm的卵母细胞体外发育潜能较卵泡直径〈3mm的卵母细胞好。     

人胎儿卵巢组织异种移植后卵母细胞的发育及成熟能力

目的探讨人胎儿卵巢组织冷冻复苏、体外培养和异种移植后卵母细胞的发育和成熟情况。方法取5例胎龄20周引产的胎儿卵巢,采用丙二醇慢速冷冻保存,复苏后在组织培养条件下进行体外培养,6d后移植到免疫缺陷小鼠的肾被膜下,应用卵泡刺激激素作用23周后取出卵巢组织,机械法取出窦卵泡内的卵母细胞,结合体外成熟培养,观察卵子成熟情况,并通过移植前后组织学和增殖细胞核抗原(PCNA)表达变化观察卵泡发育情况。结果冷冻复苏组织和新鲜卵巢组织中各期卵泡的构成比之间差异无显著性(P>0.05);培养组织与新鲜组织和冻融组织相比,增殖期卵泡的比例显著增加(P<0.05);移植组织与新鲜组织、冻融组织和培养组织相比,增殖期卵泡比例亦显著增加(P<0.05)。各组织中原始卵泡均未见PCNA阳性表达,其表达最早出现于初级卵泡,新鲜组织和冻融组织中偶可见PCNA阳性表达,而培养组织和移植组织中可见明显的PCNA阳性表达。从移植卵巢的窦卵泡中获得未成熟卵子42个,经体外成熟培养有21.43%的卵子可发育到MII期。结论人胎儿卵巢组织能耐受冻融、组织培养和移植过程,其卵泡能够重新生长发育,恢复内分泌功能,且不影响卵母细胞的发育及成熟能力。     

In vitro maturation of immature oocytes and IVF/ICSI in PCOS patients

In vitro maturation (IVM) programme has developed a culture technique for supporting the growth and maturation of immature oocytes since late of 1980s and has become important in ART methods. The establishment of an IVM programme can yield many advantages. Patients suffering from congenital or postnatal reproductive disorders, such as premature ovarian failure (POF) or polycystic ovarian syndrome (PCOS), can achieve pregnancies by transfer of viable embryos derived from IVM and in vitro fertilisation (IVF) systems. However, the pregnancy rate of IVM-IVF programme for PCO patients was still low. This disadvantage was caused by poor maturation of human immature oocytes and no synchronisation with implantation windows. Recently, application of FSH/hCG priming or optimal maturation medium for proper cytoplasmic maturation improves the success rate of IVM procedures. Indeed, increasing oocyte viability by employing optimised IVM system would also reduce ethical concerns about the disposal of retrieved oocytes with low developmental competence, and concerns about the abuse of the manipulation of human embryos.     

多精受精与体外受精-胚胎移植结局的关系

目的：探讨体外受精－胚胎移植（IVF－ET）过程中多精受精对IVF结局的影响。方法：回顾性分析496个IVF－ET周期、5349个卵细胞的资料，比较有多精受精与无多精受精周期的获卵数、成熟卵比例、受精率、分裂率、卵裂胚胎数、妊娠率等指标。结果：有多精受精发生的周期，成熟卵比例、受精率以及分裂率分别为67％、76．7％和95．6％，均显著高于无多精受精周期（分别为60％、60．7％和88．7％），P＜0．01。有多精受精的周期妊娠率略高于无多精受精周期（分别为25．7％和23．6％），但无统计学上的显著性差异（P＞0．05）。结论：多精受精与卵细胞对精子的接受能力有关，预示较好的IVF结局。     

昆明小鼠成熟卵母细胞体外受精及受精卵体外培养的研究

目的通过比较获能受精液成分及成熟卵母细胞的处理方法，观察对昆明小鼠体外受精(IVF)效果的影响和用于早期胚胎培养的三种发育培养液培养效果，探讨并建立起适合于昆明小鼠卵子体外受精与受精卵体外发育的实验体系。方法用T6或FM两种获能受精液对采自昆明雄鼠附睾尾的精子与成熟卵母细胞进行体外受精(IVF)，受精前对成熟卵母细胞选用透明质酸酶去除卵丘细胞和不去卵丘细胞(对照组)两种方法进行处理，受精卵分别用M16、改良的CZB液(mCZB)和改良的M16液(mM16)三种发育培养液对体外受精胚进行培养。结果选用FM获能受精液的受精率极显著高于T6液(92．3％对64．7％)，且体外受精前先用透明质酸酶处理的成熟卵母细胞比对照组成熟卵母细胞受精率要低(59．2％对64．7％)，但差异不显著；用mM16培养液进行培养时桑胚率及囊胚率(55．3％和35．6％)显著高于mCZB(13．3％和8．1％)和M16培养液(17．3％和14．7％)，后两者差异不显著。结论昆明小鼠卵子体外受精时宜选用FM受精获能液，不宜用透明质酸酶去除卵丘细胞，且宜选用mM16培养液对昆明小鼠体外受精卵进行早期培养，其中的亚硫磺酸钠可有效的克服2-细胞胚后的体外发育阻滞现象。     

体外受精周期中空卵泡综合征3例报道及文献复习

目的：探讨体外受精（in vitro fertilization,IVF）周期中空卵泡综合征（empty follicle syndrome,EFS）发生的原因及应对策略。方法：分析3例EFS患者的临床资料,并复习文献。结果：2例因EFS取消周期,在随后的周期中,虽未再次发生EFS但结局均不满意,其中1例因卵巢储备功能下降仅获1枚Ⅲ级胚胎,另1例2个周期共获14枚卵,其中11枚为GV期卵。第3例患者一侧卵巢取卵出现EFS,第二次注射人绒毛膜促性腺激素（hCG）补救,24h再次取卵,部分卵泡已排出,获2枚MⅡ卵及2枚胚胎,因出现卵巢过度刺激综合征取消移植。结论：EFS可能与hCG药物及卵巢功能紊乱有关;再次注射hCG补救对挽救周期有效,但更应注重预防及个体化补救措施。     

不同体外受精周期所获生殖泡期卵母细胞体外 成熟后结果比较

 【目的】 研究对比体外受精-单精子卵胞浆内注射(IVF-ICSI)周期所获生殖泡期(GV)不成熟卵母细胞以及体外成熟(IVM)周期所获GV期卵母细胞体外培养成熟后的胚胎发育情况&#65377;【方法】 163个IVF-ICSI周期中所获987个成熟卵为Ⅰ组,所获GV期卵进行体外培养后成熟的132个卵为Ⅱ组, 另有37个IVM周期中所获GV期卵体外培养后成熟的235个卵为Ⅲ组&#65377;对3组均进行ICSI,并对其受精率&#65380;卵裂率及胚胎发育进行比较&#65377;【结果】 Ⅰ组的受精率&#65380;卵裂率以及优质胚胎率均显著高于Ⅱ组及Ⅲ组(分别为84.9%,98.1%和61.6%;72.0%,90.5%和22.1%; 75.3%,94.4%和25.1%)&#65377;Ⅰ组的胚胎卵裂球数目及胚胎形态评分均显著优于Ⅱ组及Ⅲ组(P < 0.05);Ⅱ组与Ⅲ组相比差异无统计学意义&#65377; 【结论】 体内成熟卵形成的胚胎形态好于生殖泡期卵体外培养成熟者,IVF-ICSI周期的生殖泡期不成熟卵形成的胚胎形态学上与IVM周期的类似&#65377;