四氯化碳诱导大鼠肝硬化腹水模型的改进与优化

目的应用四氯化碳（CCl4）联合苯巴比妥及乙醇的方法,以期建立稳定性、均一性、重复性良好且成模率较高的大鼠肝硬化腹水模型,为相关血浆蛋白制品的药效学评价等研究奠定基础。方法将90只雄性Wistar大鼠随机分为5组：正常对照组10只,腹腔注射橄榄油,正常饮水;模型组分为CCl4组、CCl4＋苯巴比妥组、CCl4＋乙醇组、CCl4＋苯巴比妥＋乙醇组,每组20只,给予不同饮用水处理,腹腔注射40%CCl4橄榄油混合液。各实验组腹腔注射剂量均为2 ml/kg,每周注射2次,共12周。建模过程中,定期测量体质量和腹围,采集静脉血监测肝功能指标和血浆胶体渗透压（COP）。建模结束后,随机处死各组大鼠,取肝右叶组织进行病理学鉴定。应用统计学方法对数据进行分析。结果各模型组在建模的第8～12周先后出现符合筛选标准的模型。其中,第8周时,CCl4＋苯巴比妥＋乙醇组大鼠开始出现腹水阳性体征,个别达到建模标准;第9周时,CCl4＋苯巴比妥组和CCl4＋乙醇组均有符合要求的模型产生;CCl4组至第10周时开始出现建模成功的大鼠。至12周建模结束时,与正常对照组相比,各模型组体质量、腹围、肝功能指标、COP等差异均具有统计学意义,以CCl4＋苯巴比妥＋乙醇组的差异最为明显。各模型组的成模率分别是65%、75%、75%和80%。镜下观察模型组大鼠的肝组织病理学切片,可见假小叶形成等典型的肝硬化形成特征。结论四氯化碳联合苯巴比妥与乙醇诱导大鼠肝硬化腹水动物模型较传统的方法可以有效提高实验动物的成模率,缩短建模周期。     

胆总管结扎术和CCl4诱导大鼠肝纤维化模型的建立

目的:构建大鼠肝纤维化动物模型。方法:取雄性Wistar大鼠180只,其中90只通过腹腔内注射四氯化碳,1.5mL/kg,每周1次,共10周,建立大鼠肝纤维化动物模型;另90只胆总管结扎,结扎时间是1d、2d、4d、7d,建立大鼠肝纤维化动物模型。造模成功后处死大鼠,立即取新鲜肝脏。应用HE染色及免疫荧光法观察实验大鼠肝组织病理学变化。结果:CCl4诱导建模第6周肝脏假小叶形成,大鼠肝脏有明显的纤维化病灶,在第7周始最为典型;胆总管结扎术4d和7d模型组肝脏假小叶形成,大鼠肝脏有明显的纤维化病灶。结论:胆总管结扎术和CCl4诱导可成功建立大鼠肝纤维化动物模型。     

茵陈五苓散对肝硬化腹水大鼠模型的影响

目的研究茵陈五苓散对肝硬化腹水大鼠血清AQP2表达和NO、NT-1水平的影响。方法采用苯巴比妥灌胃联合四氯化碳腹腔注射复制肝硬化腹水模型。将成模后大鼠随机分为模型组、螺内酯片组(0.066g·kg^-1)和茵陈五苓散低、中、高剂量组(生药4.3, 8.6, 17.2 g·kg^-1),每组10只,并选取10只正常大鼠灌服生理盐水作为空白组。硝酸还原酶法测定大鼠血清NO、ET-1的水平。RT-PCR测定大鼠肝组织AQP2 mRNA水平,Western blotting检测大鼠肝组织AQP2蛋白含量。结果与空白组大鼠比较,模型组大鼠血浆NO和ET-1水平显著升高(P<0.05)。与模型组大鼠比较,茵陈五苓散各剂量组和螺内酯片组大鼠血清NO、ET-1水平显著降低(P<0.05)。与空白组大鼠比较,模型组大鼠肝脏AQP2 mRNA和蛋白含量显著下降(P<0.05)。与模型组大鼠比较,茵陈五苓散各剂量组和螺内酯片组大鼠肝脏AQP2m RNA和蛋白含量显著增高(P<0.05)。结论茵陈五苓散治疗肝硬化腹水的机制与降低血清NO、ET-1水平及调节肝脏AQP-2基因表达有关。     

美洲大蠊提取物通过介导Nrf2/HO-1通路抑制氧化应激的抗肝纤维化作用

目的:探究美洲大蠊提取物(PA-B)对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化Nrf2/HO-1通路及氧化应激指标的影响.方法:采用腹腔注射40％ CCl4橄榄油溶液建立大鼠肝纤维化模型,48只大鼠随机分成正常对照组、肝纤维化模型组、秋水仙碱组、PA-B低剂量组、PA-B中剂量组、PA-B高剂量组,每组8只.治疗第4周末...     

黄精通过氧化应激和线粒体凋亡途径保护CCl4诱导的大鼠急性肝损伤

研究黄精(Polygonatum sibiricum,PS)对CCl4诱导的大鼠肝损伤的保护作用及其抗氧化机制.采用一次性腹腔注射50％四氯化碳油溶液建立大鼠急性肝损伤模型,用黄精水提物(PSAE)灌胃治疗,水飞蓟素作为阳性对照药物,连续7天.PSAE显著降低了血清丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶和碱性磷酸酶(AST、AL...     

虎杖水提液利胆保肝作用研究

目的初步研究虎杖水提液的利胆保肝作用。方法以大鼠胆管插管法,十二指肠给药,记录给药前1h,给药后1,2,3和4h胆汁流量及胆汁中胆红素(TBIL)和胆固醇(CHO)含量,观察虎杖水提液利胆作用;采用腹腔注射CCl4橄榄油溶液复制小鼠急性肝损伤模型,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)含量,观察其对肝的保护作用。结果虎杖水提液可增加大鼠胆汁分泌量(P<0.05或P<0.01);可明显降低CCl4模型小鼠血清ALT和AST含量(P<0.05或P<0.01)。结论虎杖水提液具有利胆和保肝作用。     

四氯化碳诱导大鼠肝纤维化进展期和恢复期模型的建立

目的确定肝纤维化进展期和恢复期。方法采用50%四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)皮下注射建立大鼠肝纤维化和自然恢复模型。检测血清中丙氨酸氨基转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(as-partate aminotransferase,AST)、透明质酸(hyaluronic acid,HA)、层粘连蛋白(laminin,LN)、Ⅳ-C型胶原(collagenⅣ,Ⅳ-C)和Ⅲ型前胶原(procollagenⅢ,PCⅢ)含量及肝组织羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)水平;HE染色和Masson胶原染色观察肝脏病理组织学改变。结果 CCl4注射8周,大鼠肝组织己出现慢性肝炎的病理变化,注射12～16周出现了典型的从肝纤维化—肝硬化的病理改变,同时大鼠血清中ALT、AST、HA、LN、Ⅳ-C和PCⅢ含量及肝组织Hyp水平逐渐上升。而随着恢复期的延长,血清中ALT、AST、HA、LN、Ⅳ-C和PCⅢ含量及肝组织Hyp水平逐渐下降。结论成功建立CCl4诱导的大鼠自愈性肝纤维化模型,并确定进展期和恢复期。     

四氯化碳不同给药途径复合乙醇诱导大鼠肝纤维化模型的研究

目的 比较四氯化碳(CCL4)腹腔注射、皮下注射复合乙醇灌胃SD大鼠制备肝纤维化动物模型,为研究肝纤维化病理机制、治疗提供质量稳定可靠的动物模型.方法 SD大鼠40只随机分为四组,每组10只,腹腔注射造模组用50％ CCL4橄榄油溶液腹腔注射(体积比:四氯化碳:橄榄油=1:1),剂量0.15 mL/100 9,2次/周;皮下注射造模组用50％ CCL4橄榄油溶液背部皮下注射,剂量0.3 mL/100g,2次/周,两组均在实验第2周开始给大鼠用30％乙醇灌胃,剂量1 mL/100g,隔天1次造模.腹腔注射对照组、皮下注射对照组,只采用等量橄榄油腹腔注射、皮下注射,生理盐水灌胃.对比研究CCL4不同给药途径复合乙醇灌胃建立大鼠肝纤维化模型的效果.结果 腹腔注射造模组第8周造模成功,造模结束时死亡3只,死亡率30％,皮下注射造模组第10周造模成功,造模结束时大鼠无死亡,两造模组比较,造模时间比较有显著性差异(P＜0.01),肝组织纤维化病理分级无显著性差异(P＞0.05).结论 两种方法均可成功建立肝纤维化模型,且各有优势,腹腔注射造模组成模时间短,有时间优势,但是死亡率高,皮下注射造模组成模时间长,死亡率低,有成活优势,可根据实验需求选择应用不同的方法构建动物模型.     

大黄酸对肝纤维化大鼠肝脏α-SMA、MMP-13及TIMP-1mRNA表达的影响

目的 研究大黄酸对腹腔注射四氯化碳(CCl4)致肝纤维化大鼠肝脏 α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)及金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)mRNA表达的影响.方法 2019年3月选取雄性SD大鼠60只,采用完全随机抽样法分为空白对照组(N组)、CCl4模型组(M组)、秋水仙碱组(...     

声辐射力脉冲成像技术在大鼠肝纤维化诊断中的应用价值

目的 探讨声辐射力脉冲（ARFI）成像技术诊断大鼠肝纤维化程度的价值.方法 32只SD大鼠随机分为正常对照组（16只,普通饲料喂养及生理盐水灌胃处理）和模型组（16只,高脂饲料喂养加CCl4溶液灌胃处理）.第8周及12周ARFI测定两组肝脏剪切波速度（SWV）,同时分批处死大鼠取肝脏组织进行病理检查,观察两组SWV值与肝病理变化的关系.结果 病理显示模型组大鼠第8周时肝脏出现不同程度的纤维化改变,第12周时肝脏表现为肝硬化改变.两组大鼠第8周和第12周肝脏SWV值差异有统计学意义（P＜0.05）,且随着肝纤维化程度的加重,SWV值增加.结论 ARFI能有效地诊断大鼠肝纤维化程度.     

Regulation of renal cytochrome P-450. Effects of two-thirds hepatectomy, cholestasis, biliary cirrhosis and post-necrotic cirrhosis on hepatic and renal microsomal enzymes

The possibility of a relationship between hepatic and renal cytochrome P-450 contents was assessed in rats with liver disease. In rats killed 3 days after two-thirds hepatectomy (a model for hepatocellular insufficiency), the total microsomal cytochrome P-450 content of the whole liver was decreased by 60% as compared to that in control rats; renal cytochrome P-450 was increased by 30% while the 7-ethoxycoumarin deethylase activity of kidney microsomes was increased by 80%. In rats killed 7 days after bile duct ligation (a model for cholestasis) or 35 days after bile duct ligation (a model for biliary cirrhosis), hepatic cytochrome P-450 was decreased by 60% and 45%, respectively, while renal cytochrome P-450 content was increased by 50% and 150%, respectively. In contrast, in rats killed 15 days after the last dose of carbon tetrachloride, 1.3 ml/kg twice weekly for 3 months (a model for post-necrotic cirrhosis), both hepatic and renal cytochrome P-450 contents remained unchanged. Phenobarbital (80 mg/kg daily for 3 days) was a poor inducer of renal cytochrome P-450 in sham-operated rats but became a potent inducer of renal cytochrome P-450 in rats with two-thirds hepatectomy. We conclude that renal cytochrome P-450 is increased in three models in which hepatic cytochrome P-450 contents are decreased (two-thirds hepatectomy, cholestasis and biliary cirrhosis), but remains unchanged in a model of severe liver pathology, in which hepatic cytochrome P-450 content is not modified (late, post-necrotic cirrhosis). The hypothetical role of endogenous inducer(s) is discussed.     

Protective effect of curcumin in rat liver injury induced by carbon tetrachloride

This study was carried out to investigate the protective effects of curcumin on acute or subacute carbon tetrachloride-induced liver damage in rats. Acute hepatotoxicity was induced by intraperitoneal injection of carbon tetrachloride after 4 consecutive days of curcumin treatment. Subacute hepatotoxicity was induced by oral administration of carbon tetrachloride twice a week during 4 weeks of curcumin treatment. In rats with acute liver injury, curcumin (100 and 200 mg kg(-1)) lowered the activity of serum alanine aminotransferase to 52-53% (P < 0.05) and aspartate aminotransferase to about 62% (P < 0.05) those of control rats. In rats with subacute liver injury, curcumin (100 mg kg(-1)) lowered the activity of serum alanine aminotransferase to 34% (P < 0.01) and alkaline phosphatase to 53% (P < 0.05) of control rats. The liver hydroxyproline content in the curcumin (100 mg kg(-1))-treated group was reduced to 48% of the carbon tetrachloride control group (P < 0.01). Malondialdehyde levels in curcumin (100 mg kg(-1)) treated rat liver was decreased to 67% of the control rat liver (P < 0.01) in subacute injury. It was concluded that curcumin improved both acute and subacute liver injury induced by carbon tetrachloride in rats.     

腹腔注射四氯化碳致Wistar大鼠肝纤维化模型制作的探讨

目的：通过筛选腹腔注射CCl4致Wistar大鼠肝纤维化模型的最佳剂量,追踪观察模型大鼠血清及肝组织学指标的时效及量效关系。方法：采用随机对照分组的方法,对各模型组的Wistar大鼠给予不同剂量的CCl4,进行腹腔注射,每周2次,共8周。分别于第3、6、8周随机处死动物总数的三分之一,检测血清ALT、AST水平及肝组织SOD活性、MDA含量的变化。另取肝组织进行病理切片镜下观察,以明确其肝纤维化程度。结果：造模8周间,与A组比较,各模型剂量组血清ALT、AST水平均显著升高（P〈0．01）,肝组织SOD活性显著降低（P〈0．01）,MDA含量显著升高（P〈0．01）。造模结束,D组共死亡6只,肝腹水2只;C组死亡2只;B组死亡1只。随着CCl4剂量的增加,大鼠肝组织的病理损伤明显加重。结论：该方法肝损伤明显、死亡率低、周期短、对其他重要脏器影响小,可作为慢性肝损伤、肝纤维化较好的模型。     

新型复合式肝损伤大鼠模型的建立

目的建立一种由猪血清、四氯化碳、乙醇3种因素刺激的新型肝损伤大鼠模型。方法将56只健康雄性大鼠随机分为A、B、C、D、E 5组,其中A至D组为实验组,E为空白对照组。除空白对照组外,其余各组连续4周多因素诱导肝损伤模型。每周摘眼球取血,测定血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)活性。第4周取血后处死动物,取肝脏进行切片观察。结果多因素诱导肝损伤各模型组AST和ALT均不同程度的升高,与空白对照组相比,在不同时间点上有显著性差异(P<0.05)或非常显著性差异(P<0.01)。病理切片也证实各实验组出现不同程度的肝损伤。结论由猪血清、四氯化碳、乙醇3种因素诱导可建立较为理想的大鼠肝损伤模型。     

Effect of phenobarbital treatment on carbon tetrachloride-mediated cytochrome P-450 loss and diene conjugate formation.

The effect of phenobarbital treatment on the linkage between carbon tetrachloride-mediated cytochrome P-450 loss and lipid peroxidation in rat liver microsomes was studied. Male Sprague-Dawley rats, pretreated with 3 daily i.p. doses of phenobarbital (50 mg/kg) or saline, were orally dosed with carbon tetrachloride (0.01-2.5 ml/kg), with liver microsomes prepared at 7.5-180 min after carbon tetrachloride treatment. In vivo cytochrome P-450 loss displayed pseudo-first-order kinetics, and the initial rates of diene conjugate formation were saturable with dose. Phenobarbital pretreatment decreased the in vivo t0.5,max from 27.0 to 15.6 min, and increased the Kd,app from 0.78 to 1.30 ml/kg for carbon tetrachloride mediated cytochrome P-450 loss. Phenobarbital had no effect on the in vivo Vmax (1.03 to 1.04 delta OD232 nm/min/mg phospholipid) for carbon tetrachloride mediated diene conjugate formation, but decreased the Km,app from 0.22 to 0.10 ml/kg. These results are consistent with destruction of cytochrome P-450 heme resulting from a metabolite which does not leave the site of generation, and with phenobarbital pretreatment enhancing the initiation of lipid peroxidation.     

大鼠终末期肝硬化模型的制备

目的建立稳定可靠的大鼠终末期肝硬化的动物模型。方法将80只6月龄雄性大鼠,随机分为2组,实验组,行左肾静脉周围、肾上腺周围及精索静脉周围去血管化。伤口愈合后,以苯巴比妥钠的溶液代替饮用水2周后,经皮下及肌肉注射四氯化碳,剂量根据体重的变化及肝硬化的病理过程进行调整,每周2次,共持续8周。同时大鼠予高脂、低蛋白食物代替饲料,用5％的乙醇代替饮水。对照组皮下注射生理盐水,频率、剂量和持续时间同实验组。各周测定大鼠的体重。8周后取肝组织行病理学检查,测定门静脉压力及部分肝功能。结果实验组60只大鼠造模结束时,死亡6只,死亡率10％。实验结束时,成功造模大鼠54只,且均达到成模标准,成模率90％。对照组20只全部存活。结论采用手术、药物与饮水联合,并根据体重的变化及肝硬化的病理过程调整四氯化碳剂量可建立稳定、可靠的大鼠终末期肝硬化模型。     

肝纤维化大鼠肝组织生长抑素受体的表达

目的探讨大鼠实验性肝纤维化形成过程中肝组织生长抑素受体(SSTR)的表达及其变化,为临床肝纤维化及肝硬化的治疗提供借鉴。方法取SD大鼠60只,其中40只按皮下注射四氯化碳一周2次,每次2mL/kg的方法造成肝纤维化模型,另外20只皮下注射相同容量生理盐水作为正常对照组(A组)。根据造模的不同时间及肝组织的病理改变,20只造模7周后的SD大鼠设为肝纤维化组(B组),20只造模12周后的SD大鼠设为肝硬化组(C组)。采用免疫组织化学方法检测肝组织中SSTR的表达及分布。结果A组仅见少量SSTR_1表达,未见SSTR_2及SSTR_3表达。与A组相比,B组和C组SSTR_1、SSTR_2及SSTR_3表达均增强,其中尤以C组最为显著(B组各值与A组相比P<0.05;C组各值与A组相比P<0.01,C组各值与B组相比P<0.05)。结论肝纤维化肝组织中SSTR_1、SSTR_2及SSTR_3的表达增强,且与肝纤维化进展程度相关。