HPLC-MS/MS测定血浆中的牡荆素及其大鼠体内药动学研究

目的:建立高效液相色谱-质谱/质谱联用法(HPLC-MS/MS)测定血浆中牡荆素的方法,并用于大鼠药动学研究。方法:采用Capcell Pak C18柱(50 mm×2.0 mm,I.D.,5μm),柱温25℃,流动相为甲醇∶水(95∶5,0.1%甲酸),流速为0.2 mL/min。用负离子电喷雾电离源,多反应方式检测,选择监测的离子反应为m/z 431～311(牡荆素)和m/z 269～225(大黄素,内标)。结果:牡荆素在0.5～2 000 ng/mL线性关系良好,相关系数为0.9960,最低定量限为0.5 ng/mL。加样回收率76.1%～89.0%,日内日间精密度RSD均小于11%。结论:该方法分析速度快、操作简单、灵敏度高,可用于大鼠血浆中牡荆素的浓度测定及药动学研究。     

HPLC-MS/MS测定血浆中的丙戊酸镁及其大鼠体内药动学研究

 目的 建立高效液相色谱-质谱/质谱联用法（HPLC-MS/MS测定人血浆中丙戊酸镁的方法, 并用于大鼠药动学研究。方法 采用Shim-pack XR-ODS柱（3.0 mm×75 mm, 柱温25 ℃, 流动相A为0.1%甲酸水溶液,B为甲醇,洗脱梯度为 0~1.0 min 80% B,80% B平衡1.0~5.0 min;流速0.4 mL·min - 1;用正离子电喷雾电离源, 多反应方式检测,丙戊酸镁用于定量分析的离子对为m/z 312.4→m/z102.2。血浆样品用甲醇沉淀蛋白后进样。结果 丙戊酸镁在6.25～4 000 ng·mL-1线性关系良好, 相关系数为0.995 9,最低定量限为6.25 ng·mL-1。加样回收率94.88%～97.62% , 日内日间精密度RSD均小于12%。丙戊酸镁缓释片起效慢,作用力维持时间比丙戊酸镁片长。结论 该方法分析速度快、操作简单、灵敏度高,适用于丙戊酸镁药动学研究。     

UPLC-MS/MS同时测定大鼠血浆中杜仲的五个成分及其药代动力学研究

目的建立大鼠血浆中京尼平苷酸、原儿茶酸、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷、松脂醇单葡萄糖苷的UPLC-MS/MS测定方法,并进行五种成分在大鼠体内药代动力学研究。方法大鼠静脉注射杜仲提取物后,采用甲醇沉淀血浆蛋白,以葛根素为内标,采用Waters BEH C18(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱,0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水溶液梯度洗脱,采用电喷雾电离源(ESI),以多反应监测(MRM)方式进行检测。结果京尼平苷酸等五种成分在血浆中呈良好线性关系。方法学考察均符合要求,日内、日间精密度、准确度和稳定性良好,提取回收率86.06%~104.39%,无基质效应。京尼平苷酸等5个指标成分在大鼠体内消除较快。结论建立的HPLC-MS/MS测定方法能快速灵敏地检测生物样品中京尼平苷酸、原儿茶酸、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷和松脂醇单葡萄糖苷的血药浓度,可用于五种成分的药代动力学研究。     

小鼠血浆葛根素的含量及其药代动力学研究

目的小鼠血浆中葛根素的含量及药代动力学研究。方法采用高效液相色谱法,流动相为甲醇-水(23∶77),流速1.0 ml.min-1,检测波长250 nm,柱温为25℃。结果葛根提取物口服后15min血液中即可检出葛根素,在体内呈二室模型分布,其主要药动学参数为A=1121.105 mg.L-1;B=237.5469 mg.L-1;α=0.6825 h-1;β=0.0459 h-1;Kα=1.3693 h-1;t1/2α=1.015 6 h;t1/2β=15.0984 h;K10=0.13 h-1;K21=0.230 5 h-1;K12=0.362 h-1;Cmax=456.637 6 mg.L-1;Tmax=1.242 7 h;AUC=5 824.714 4 mg.h.ml-1。结论葛根提取物口服后葛根素在小鼠体内吸收快、消除慢。     

UPLC-MS/MS法同时测定大鼠血浆中赤芍提取物三种单萜类成分及其药代动力学研究

目的:研究赤芍提取物中3种有效成分芍药苷、芍药内酯苷和氧化芍药苷在大鼠体内药动学特点。方法:色谱采用Agilent Eclipse Plus C18色谱柱(4.6 mm×100 mm,3.5μm),体积流量0.5 m L/min,流动相采用0.05%甲酸乙腈-0.05%甲酸水,梯度洗脱,质谱采用电喷雾电离源,扫描方式为多反应离子监测。大鼠一次性经皮注射赤芍提取物后,采用UPLC-MS/MS法测定大鼠血浆、胆汁、尿液、粪便中芍药苷、芍药内酯苷和氧化芍药苷的含量,用药动学软件DAS 3.0分析3种成分的药动学特点。结果:3种成分的峰面积和质量浓度之间呈良好线性关系(r0.99),提取回收率在89.57%~111.21%之间,精密度、准确度、基质效应和稳定性均良好。结论:芍药苷和芍药内酯苷在大鼠体内具有吸收快,消除快的特点,氧化芍药苷半衰期稍长。这3种成分的主要排泄方式为粪便胆汁尿液。     

高效液相色谱法测定大鼠血浆中的丹参酮IIA浓度及其药代动力学研究

目的：建立高效液相色谱法测定大鼠血浆中丹参酮IIA含量的方法,并用于药代动力学研究。方法：采用色谱柱为Phenomenex Luna C18色谱柱（150 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为1.6‰甲酸：甲醇（80：20 v/v）,梯度洗脱,流速为1.0 m L·min^-1,紫外检测波长343 nm。大鼠单剂量静注10mg·kg^-1的丹参酮IIA,HPLC-UV法测定丹参酮IIA的血药浓度,并采用DAS 2.0软件计算药代动力学参数。结果：方法学实验结果表明内源性杂质不干扰丹参酮IIA和内标的测定,线性范围0.039-10μg·m L-1,定量下限为0.039μg·m L^-1。方法精密度、准确度、稳定性和回收率均符合生物样品测定的要求,适合大鼠血浆中丹参酮IIA浓度的测定,可以应用该方法进行丹参酮IIA的药代动力学研究。大鼠单剂量静注10 mg·kg^-1的丹参酮IIA后的AUC0→t、AUC0→∞、t1/2α分别为134.58±24.69μg·m L·min^-1;135.36±24.76μg·m L·min^-1;9.93±2.13min。结论：本方法操作简便、灵敏、专属性强,方法学考证符合生物样品测定的要求并成功用于丹参酮IIA在大鼠体内的药代动力学研究。     

HPLC测定静脉给药山楂叶提取物大鼠血浆中三种黄酮含量

目的:建立同时测定静脉给药山楂叶提取物后大鼠血浆中三种黄酮含量的HPLC方法。方法:采用HPLC,以黄芩苷为内标物,甲醇沉淀蛋白,Phenomsil C18(5μm,250×4.6 mm);流动相:甲醇-乙腈-四氢呋喃-0.4%醋酸水(6∶1.5∶18.5∶74);检测波长:332 nm。结果:实验表明VG药动参数AUC0→t与剂量的增长呈正比,VR、VIT在大鼠血浆中的AUC0→t与给药剂量不成正比,表明VR、VIT在大鼠血浆中遵循非线性药代动力学行为。结论:建立HPLC测定大鼠体内3种黄酮方法简单、专属性强,适用于黄酮类成分大鼠体内的药代动力学研究。     

UPLC-ESI-MS/MS法快速测定苦碟子注射液中4种黄酮类成分的含量

目的：采用超高效液相色谱串联质谱法快速测定苦碟子注射液中木犀草素、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷4种黄酮成分的含量。方法：采用Waters ACQUITY BEH C₁₈色谱柱（2.1mm×50mm,1.7μm）,流动相为乙腈-水系统梯度洗脱,流速为0.4mL?min^-1,柱温为40℃;在ESI负离子模式下,采用多反应离子监测（MRM）扫描方式进行检测。结果：苦碟子注射液中4种成分在3min内完全分离,线性范围内呈良好的线性关系（r>0.999 5）,加样回收率分别为97.64%、97.42%、101.24%、98.63%,RSD值分别为1.45%、1.93%、2.90%、1.62%。结论：该方法简便、准确、灵敏度高,可用于苦碟子注射液中4种黄酮成分的含量测定。     

HPLC-MS/MS测定大鼠血浆中刺五加、贯叶连翘提取物主要活性成分浓度及其药动学研究

目的 建立HPLC-MS/MS测定刺五加提取物、贯叶连翘提取物主要活性成分在大鼠血浆中药物浓度的方法,应用于刺五加提取物、贯叶连翘提取物及其联用时主要活性成分在大鼠体内的药动学研究,并使用DAS3.2.8软件对主要活性成分的药动学参数进行非房室模型拟合.方法 以Welch Ultimate XB-C18(2.1 mm×...     

UPLC-MS-MS法同时检测大鼠血浆中没食子酸和芍药苷的浓度及其药代动力学研究

目的：建立一种用于同时检测大鼠血浆中没食子酸和芍药苷的准确、灵敏的超高液相色谱-串联质谱分析方法,并研究没食子酸、芍药苷在大鼠体内的药代动力学。方法：大鼠静脉注射赤芍提取物后,采用乙腈沉淀血浆蛋白,通过BEH C₁₈（2.1 mm×50 mm,1.7 μm）柱分离,0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水梯度洗脱,流速0.35 mL·min^-1,1 μL进样分析,采用电喷雾离子化三重四极杆串联质谱,以多反应监测（MRM）方式进行负离子模式检测。用于定量分析的二级碎片离子分别为m/z 169.0→125.0（没食子酸）和m/z 525.1→449.1（芍药苷）。结果：没食子酸、芍药苷分别在0.056~41.2 mg·L和0.36~265.1 mg·L线性关系良好,日内、日间精密度（RSD）均<10.5%,低、中、高浓度下没食子酸的回收率分别为87.5%,103.3%,89.5%,芍药苷的回收率为88.5%,105.0%,107.4%。两种成分在大鼠体内的平均滞留时间均较短在 37 min以内。结论：方法快速、专属性强、灵敏度高,适用于赤芍提取物的临床前药代动力学研究。     

HPLC-MS/MS测定大鼠血浆中的芍药苷及 其药动学研究

目的：建立HPLC-MS/MS分析方法测定大鼠血浆中的芍药苷含量，并用于研究当归对赤芍主要有效成分芍药苷的药动学影响。方法：质谱检测方式：多反应离子监测，选择监测的离子为m/z 450~m/z 327 (芍药苷) 和m/z 388~m/z 225(栀子苷)。大鼠分别灌胃赤芍煎液和赤芍及当归煎液，芍药苷剂量均为294.78 mg·kg-1。HPLC-MS/MS法测定芍药苷的血药浓度，并计算芍药苷药动学参数。结果：单独服用赤芍煎液时芍药苷的主要药动学参数分别为Cmax(1.55±0.53) mg·L-1，Tmax(0.9±0.3) h，t1/2(1.51±0.63) h，MRT(3.08±0.74) h，AUC0→τ(4.68±0.85) mg·h-1·L-1。同时服用当归煎液和赤芍煎液时芍药苷的Cmax，Tmax，t1/2，MRT，AUC0→τ分别为(0.93±0.42) mg·L-1，(1.5±0.8) h，(3.08±1.79) h，(5.19±1.95) h，(3.36±0.56) mg·h-1·L-1。两组药动学参数中，MRT，Cmax和AUC0→τ具有显著性差异(P<0.05)。结论：当归能显著影响赤芍主要有效成分芍药苷的药动学。     

HPLC-MS/MS测定大鼠血浆中的芍药苷及其药动学研究

目的：建立HPLC-MS／MS分析方法测定大鼠血浆中的芍药苷含量，并用于研究当归对赤芍主要有效成分芍药苷的药动学影响。方法：质谱检测方式一：多反应离子监测，选择监测的离子为m／z450～m／z327（芍药苷）和m／z388～m／z225（栀子苷）。大鼠分别灌胃赤芍煎液和赤芍及当归煎液，芍药苷剂量均为294．78mg&#183;kg^-1。HPLC-MS／MS法测定芍药苷的血药浓度，并计算芍药苷药动学参数。结果：单独服用赤芍煎液时芍药苷的主要药动学参数分别为Cmax（1．55&#177;0．53）mg&#183;L^-1，Tmax（0．9&#177;0．3）h，t1/2（1．51&#177;0．63）h，MRT（3．08&#177;0．74）h，AUC0→T（4．68&#177;0．85）mg&#183;h^-1&#183;L^-1。同时服用当归煎液和赤芍煎液时芍药苷的Cmax，Tmax，t1/2,MRT，AUC0→T，分别为（0．93&#177;0．42）mg&#183;L^-1。，（1．5&#177;0．8）h，（3．08&#177;1．79）h，（5．19&#177;1．95）h，（3．36&#177;0．56）mg&#183;h-1&#183;L^-1。两组药动学参数中，MRT，Cmax和AUC0→T具有显著性差异（P〈0．05）。结论：当归能显著影响赤芍主要有效成分芍药苷的药动学。     

沙棘膏中槲皮素、山柰素、异鼠李素血药浓度的HPLC-MS/MS测定及大鼠体内药代动力学研究

建立大鼠血浆中槲皮素、山柰素、异鼠李素的HPLC-MS/MS分析方法,用于沙棘膏中3种黄酮类成分在正常大鼠体内的药代动力学研究。该实验选用正常SD大鼠,单剂量灌胃沙棘膏(槲皮素26.35 mg·kg^-1、山柰素4.040 mg·kg^-1、异鼠李素31.37 mg·kg^-1)后不同时间点采血,采用高效液相色谱-质谱连用(HPLC-MS/MS)系统进行槲皮素、山柰素、异鼠李素血药浓度测定,以kinetica 5.0.11软件,对数据进行二房室动力学拟合,计算主要药动学参数。经方法学考证,槲皮素、山柰素、异鼠李素的线性范围分别为7.500~600.0 μg·L^-1(R²=0.998 5),1.000~80.00 μg·L^-1(R²=0.998 5),10.00~800.0 μg·L^-1(R²=0.998 0),日内、日间精密度RSD≤14%,血浆样品冻融1次,－20 ℃放置15 d,室温放置6 h以及处理后的分析物-20 ℃放置24 h的稳定性均良好,符合生物样品分析要求。大鼠灌胃沙棘膏后的药代参数如下,槲皮素t_1/2β(113.3±19.37) h,AUC_0-t(12 542.14±3 504.05) μg·h·L^-1,MRT_0-∞(119.6±13.29) h,C_max(164.6±27.33) μg·L^-1,T_max(5.199±0.840 3) h;山柰素t_1/2β(79.85±17.15) h,AUC_0-t(934.51±94.59) μg·h·L^-1,MRT_0-∞(81.50±13.75) h,C_max(80.15±14.24) μg·L^-1,T_max(3.827±0.902 7) h;异鼠李素t_1/2β(118.3±20.73) h,AUC_0-t(26 067.77±4 124.60) μg·h·L^-1,MRT_0-∞(129.0±16.30) h,C_max(269.6±29.32) μg·L^-1,T_max(6.513±1.450) h。该文所建立的灵敏、准确的HPLC-MS/MS检测方法适用于大鼠血浆中槲皮素、山柰素、异鼠李素成分的药代动力学研究。     

UPLC-MS/MS同时测定大鼠血浆中异荭草素, 野黄芩苷和木犀草苷及其药代动力学研究

目的:建立利用UPLC-MS/MS同时测定大鼠血浆中异荭草素、野黄芩苷和木犀草苷等3种黄酮的分析方法,并研究大鼠静脉注射3个剂量的注射用复方荭草后的药代动力学特征。方法:血浆样品采用酸化后甲醇沉淀蛋白,采用WatersAcquity BEH C18色谱柱,流动相为0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水梯度洗脱,采用电喷雾电离源(ESI),扫描方式为多反应离子监测(MRM)。结果:3种黄酮成分在大鼠血浆中线性关系良好,提取回收率78.56%～101.91%,日内、日间精密度和准确度良好,各物质在大鼠体内的平均滞留时间均较短(<22 min)。结论:该方法特异、快速、准确和灵敏,可用于注射用复方荭草在大鼠体内的药动学研究。     

HPLC-MS/MS同时测定广金钱草中8种成分在大鼠胆汁中的浓度及其排泄动力学研究

建立同时测定灌胃给予大鼠广金钱草提取物后胆汁中7种黄酮和1种酚酸类化合物浓度的HPLC-MS/MS,并用于胆汁排泄研究。大鼠灌胃给予广金钱草提取物后,分别在0~1,1~2,2~4,4~6,6~8,8~12,12~24 h时间段收集胆汁。色谱柱采用Diamonsil C18column(4.6 mm×150 mm,5μm),柱温40℃。以甲醇-0.01%乙酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速0.8 m L·min~(-1)。质谱采用电喷雾离子源(ESI),负离子模式下检测,多反应离子监测(MRM)模式进行定量。结果表明8种成分在测定浓度范围内线性关系良好(r≥0.991 5),日内、日间精密度RSD15%,准确度RE-15%~15%,稳定性良好。提取回收率63.2%,内标归一化的基质因子RSD均未超过15%,符合要求。大鼠胆汁排泄研究结果显示,8种成分在胆汁中的原型排泄率均比较小,并且不同个体之间差别较大。该研究方法灵敏度高,选择性好,样品处理简单,可用于灌胃给予大鼠广金钱草提取物后胆汁中8种成分的排泄动力学研究。     

UHPLC-MS/MS同时测定清感童饮中6种有效成分在大鼠体内血药浓度及药代动力学研究

[目的] 本实验旨在研究清感童饮活性成分在大鼠血浆中的药代动力学特征。[方法] 实验建立大鼠血浆中甘草次酸、木犀草素、芹菜素、芍药苷、连翘酯苷A、连翘苷等6种活性成分的超高效液相色谱-串联质谱（UHPLC-MS/MS）检测方法,考察大鼠灌胃给药清感童饮后,6种成分在大鼠体内的药代动力学特征。采用WELCN Ultimate XB-C₁₈色谱柱（2.1 mm×100 mm,3 μm）分离;流动相为0.1%甲酸水（A）-乙腈（B）;梯度洗脱;进样量3 μL;流速为0.2 mL/min;柱温40 ℃;在多反应监测模式（MRM）下正、负离子同时测定。[结果] 结果显示,大鼠血浆样品中各成分的线性关系均良好（r>0.99）,其日内、日间精密度、准确度、稳定性、基质效应以及提取回收率均符合生物样品的分析要求。药动学参数结果显示,各成分的t_1/2z为1.18~34.12 h,T_max为0.44~19.33 h,C_max为9.00~318.09 μg/L,AUC_0~t为12.40~15 969.32 h·μg/L,MRT_0~t为2.23~23.19 h。[结论] 本实验所建立的检测方法快速、准确、重复性好,可适用于清感童饮中甘草次酸、木犀草素、芹菜素、芍药苷、连翘酯苷A、连翘苷在大鼠血浆中的药动学研究。     

液质联用检查15种降压类药物及数据检索库的建立

 目的为打击中药制剂及保健食品中非法添加化学药物现象,建立准确、灵敏的HPLC-MS/MS方法甄别中药制剂及保健食品中可能添加的15种化学降压药物。方法采用Waters Sunfire C₁₈色谱柱,梯度洗脱:流动相A为20 mmol·L^-1醋酸铵溶液,流动相B为甲醇-乙腈(2∶1),检测波长为230 nm,流速为1 mL·min^-1(分流比为4∶1)。选择正负离子全扫描方式检测临床常用的15种降压药,利用质谱解析软件研究了上述化合物的质谱裂解规律。通过比较样品峰与对照品峰的一级质谱、二级质谱质荷比,确定样品中是否掺杂了化学药物。结果在上述色谱及质谱条件下,15种降压药物HPLC图谱分离度良好,质谱分辨率符合鉴别要求。HPLC-MS/MS方法测定上述化学物质的最小检出量为1～80 ng。结论该方法灵敏度、准确性、重现性均可满足定性检查的要求,简便,快捷。     

HPLC-MS/MS测定人血浆中丁螺环酮浓度及人体药动学

 目的建立测定人血浆中丁螺环酮的LC-MS/MS方法,并用于缓释盐酸丁螺环酮胶囊的临床药动学试验。方法血浆样品经固相萃取后,以10mmol·L^-1的甲酸铵溶液-含0.5‰甲酸的乙腈溶液为流动相,梯度洗脱,经Symmetry C₁₈色谱柱(2.1mm×150mm,5μm)分离。通过电喷雾离子源,以多反应离子监测(MRM)方式进行检测。用于定量分析的离子反应分别为m/z 386→121.7(丁螺环酮)和409→237.7(内标,氨氯地平)。结果LC-MS/MS测定人血浆中丁螺环酮的线性范围为0.025～12.8μg·L^-1,r=0.9993。该方法的绝对回收率为74.97%～77.83%,相对回收率为93.67%～102.0%,日内、日间精密度(RSD)分别为0.9%～5.1%和1.9%～6.7%。在临床药动学研究中,应用此法测试了10名受试者口服盐酸丁螺环酮缓释胶囊后血浆中丁螺环酮的浓度。结论本法快速、准确,灵敏度高,重现性好,可以满足本试验低浓度药物测定及药动学研究要求。     

高效液相色谱-串联质谱法同时测定马鞭草中5种糖苷类成分的含量

目的建立高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法同时测定马鞭草中桃叶珊瑚苷、戟叶马鞭草苷、马鞭草苷、龙胆苦苷、毛蕊花糖苷的含量。方法色谱柱采用Waters SunfireTMC18(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸水(25∶75→40∶60),梯度洗脱,流速0.8 m L/min,进样量5μL,柱温30℃;采用电喷雾离子源(ESI),以多反应监测方式(MRM)进行定量分析。桃叶珊瑚苷、戟叶马鞭草苷、马鞭草苷、龙胆苦苷在正离子电离模式下定量分析离子对分别为m/z 167.2→m/z 149.1、m/z 243.2→m/z 225.2、m/z 227.2→m/z195.2、m/z 195.2→m/z 177.2。毛蕊花糖苷在负离子电离模式下定量分析离子对为m/z461.3→m/z 161.0。结果桃叶珊瑚苷、戟叶马鞭草苷、马鞭草苷、龙胆苦苷、毛蕊花糖苷五种组分在120~1 200,10 000~100 000,5 000~50 000,1.2~12,510~5 100μg/L的浓度范围内与峰面积均呈良好的线性关系,平均回收率分别为101.2%,98.63%,99.45%,101.6%,100.3%。结论本法操作简便、准确、具有良好的重现性,为马鞭草药材的合理应用及质量控制奠定了基础。     

HPLC-MS法快速测定健康人体血浆中环维黄杨星D的浓度及其药代动力学研究

[目的]建立测定血浆中环维黄杨星D(C<,26>H<,46>N<,20)的液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS),并用于测定环维黄杨星D在健康人体中的药代动力学参数.[方法]血浆样品经液-液萃取后,进行色谱分离,在离子阱质谱仪上,以选择反应监测(SRM)方式进行定量分析,用于监测的离子为质核比(m/z)403→m/z 372(环维黄杨星D)和m/z 380→m/z 362(内标盐酸多奈哌齐).18名健康志愿者静脉滴注环维黄杨星D后,用液质联用法测定人血浆中环维黄杨星D的药物浓度.[结果]环维黄杨星D最低定量限为0.2 μg/L,线性范围为0.2～25μg/L,精密度与准确度符合生物样品分析要求.用该方法测得受试者滴注2.5、4.0、6.0 mL黄杨宁注射液的药峰浓度(Cmax)分别为(2.78±1.28)、(4.12±1.38)和(5.09±1.23)μg/L,药峰时间(Tmax)皆为(4.00±0)h,药一时曲线下面积(AUC<,0-28>)分别为(18.46±7.39)、(21.86±5.03)和(25.37±11.49) μg/L·h.[结论]该法灵敏、专一、快速,可作为环维黄杨星D的临床药代动力学检测的方法.