心脑舒通胶囊对氧糖剥夺/复氧损伤原代神经元的保护作用

[目的]探讨心脑舒通胶囊对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)损伤的原代神经元细胞活力及微管相关蛋白2(MAP-2)表达的影响.[方法]取新生24 h内SD大鼠的大脑皮质进行神经元原代培养,并通过免疫荧光法进行MAP-2目的蛋白鉴定;建立神经元OGD/R损伤的体外模型,CCK-8检测不同浓度的心脑舒通胶囊对体外正常培养和OGD...     

巴利森苷A对氧糖剥夺/复糖复氧损伤的HT22细胞的保护作用

目的：探讨巴利森苷A(PA)对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤的HT22细胞的保护作用。方法：将HT22细胞随机分为6组，分别是空白组(Control组)、OGD/R组、依达拉奉(EDA)组、PA低剂量组(40μmol·L^-1)、PA中剂量组(80μmol·L^-1)、PA高剂量组(160μmol·L^-1)。以连二亚硫酸钠(Na₂S₂O₄)10 mmol·L^-1合并无糖DMEM培养基造成氧糖剥夺培养2 h,然后恢复为无血清高糖DMEM培养2 h作复糖复氧处理，以建立体外OGD/R模型。EDA和PA组自氧糖剥夺前24 h即加入相应药物的浓度，一直持续到复糖复氧结束。采用MTT比色法检测细胞存活率；乳酸脱氢酶(LDH)法测定细胞损伤率；采用试剂盒法检测超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性、丙二醛(MDA)含量及细胞内的活性氧(ROS)水平；Western blot法检测各组细胞缺氧诱导因子通路相关蛋白HIF-...     

异甘草素对氧糖剥夺/复糖复氧损伤SH-SY5Y细胞的保护作用

目的研究异甘草素对氧糖剥夺/复糖复氧损伤SH-SY5Y细胞的保护作用。方法细胞SH-SY5Y建立OGD/R损伤细胞模型。NC Nrf2-siRNA、siRNA-Nrf2质粒转染SH-SY5Y细胞,并培养48 h,20μmol/L异甘草素预处理2 h后构建OGD/R损伤,24 h后继续加入20μmol/L异甘草素再培养24 h。OGD/R损伤48 h后,测定细胞活力,LDH水平,caspase-3、caspase活性,ROS、MDA、SOD、GSH水平;RT-PCR检测Bcl-2、Bax、NQO1、HO-1 mRNA表达;Western blot检测HO-1蛋白表达。结果 OGD/R诱导SH-SY5Y细胞活力降低,caspase-3、caspase活性升高,ROS、MDA水平升高,SOD、GSH-Px水平降低,Bcl-2、NQO1、HO-1 mRNA及HO-1蛋白表达降低,Bax mRNA表达增高(P<0.01);经异甘草素干预后,OGD/R SY5Y细胞活力升高,caspase-3、caspase活性降低,ROS、MDA水平降低,SOD、GSH水平及Bcl-2、NQO1、HO-1...     

黄芪黄酮对氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞的保护作用

目的:研究黄芪黄酮对氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞的作用。方法:取对数期PC12细胞,随机分为5组:正常组、模型组(氧糖剥夺/复氧复糖组)、黄芪黄酮低(0.001 mg/mL)、中(0.01 mg/mL)、高(0.1 mg/mL)剂量组。其中,模型组和黄芪黄酮低、中、高剂量组氧糖剥夺2 h后复氧复糖24 h,黄芪黄酮低、中、高剂量组在复氧复糖的同时予以黄芪黄酮不同剂量处理。用倒置相差显微镜观察PC12细胞的形态变化,MTT法和CCK-8法检测细胞的存活率。结果:正常组细胞状态良好,贴壁生长,细胞突起明显,各个突起之间交织在一起,细胞整体折光性较强,细胞表面光滑;与正常组相比,模型组部分细胞漂浮,突起收缩,细胞折光性差,细胞存活率明显降低(P0.05);与模型组相比,黄芪黄酮低、中、高剂量组细胞状态均有明显好转,突起可见,细胞存活率均有升高(P0.05);与黄芪黄酮低剂量组相比,黄芪黄酮中、高剂量组细胞状态较好,细胞存活率升高(P0.05);黄芪黄酮中剂量组与高剂量组之间差异不明显(P0.05)。结论:黄芪黄酮可改善氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞的生长状态,减轻细胞损伤,提高细胞存活率,发挥保护作用,且黄芪黄酮中、高剂量组的保护作用优于低剂量组。     

龙血通络胶囊对氧化低密度脂蛋白损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用

该文为观察龙血通络胶囊对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)致人脐静脉内皮细胞(EAhy.926细胞)损伤的保护作用。采用氧化低密度脂蛋白(100 mg·L~(-1))损伤建立体外人脐静脉内皮细胞损伤模型方法,MTT法检测龙血通络胶囊对正常细胞生长影响及对损伤细胞的保护作用,酶联免疫吸附法检测龙血通络胶囊对内皮细胞损伤后乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的影响,蛋白质印迹(WB)法检测细胞间黏附分子~(-1)(ICAM~(-1)),血管细胞黏附分子~(-1)(VCAM~(-1)),p65,p-p65,IKB,p-IKB的表达水平。结果显示,与正常对照组比较,ox-LDL损伤后EAhy.926细胞活力显著降低,细胞LDH漏出量增加(P0.01),NO含量、SOD活力均显著降低(P0.01,P0.05),细胞中MDA含量升高(P0.05),ICAM~(-1),VCAM~(-1),p-p65/p65,p-IKB/IKB等蛋白的表达量均显著升高(P0.01);与模型对照组比较,龙血通络胶囊(1,2 mg·L~(-1))对正常细胞生长无显著影响,可促进ox-LDL损伤的血管内皮细胞增殖(P0.05,P0.01),降低胞内MDA含量、减少细胞LDH释放量(P0.05),提高SOD活力及NO含量(P0.01,P0.05);可降低ICAM~(-1),VCAM~(-1),p-p65/p65,p-IKB/IKB的表达(P0.01)。结果提示龙血通络胶囊对ox-LDL所致的人脐静脉内皮细胞损伤具有明显的保护作用,说明龙血通络胶囊对动脉粥样硬化具有一定治疗作用。     

miR-204-5p在氧糖剥夺/复糖复氧致SH-SY5Y细胞损伤中的作用研究

目的观察miR-204-5p在氧糖剥夺/复糖复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation, OGD/R)致人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤中的作用并从炎症/凋亡途径探讨其机制。方法 SH-SY5Y细胞分为control组、OGD/R组、OGD/R+miR-204-5p mimic组、OGD/R+miR-204-5p inhibitor组、OGD/R+miR-204-5p mimic negative control组、OGD/R+miR-204-5p inhibitor negative control组。采用MTT法测定细胞增殖、流式细胞术、TUNEL染色法检测细胞凋亡、酶联免疫法检测炎症因子(IL-10、IL-1β、TNF-α、PGE2)含量、qRT-PCR检测miR-204-5p的表达、western blot检测炎症及凋亡相关蛋白(COX-2、Bcl-2、Bax)的表达。结果与对照组相比,OGD/R组细胞miR-204-5p表达显著降低,IL-1β、TNF-α、PGE2含量增多,IL-10含量减少,COX-2、Bax蛋白水平上升,Bcl-2蛋白水平下降,细胞损伤明显加重;与OGD/R组比较,miR-204-5p mimic下调COX-2、Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达,IL-10含量增加,IL-1β、TNF-α、PGE2含量减少,细胞活力明显增加、凋亡率显著降低,细胞损伤减轻。结论 miR-204-5p对OGD/R致SH-SY5Y细胞损伤具有明显保护作用,其机制可能与减轻细胞炎症和凋亡有关。     

活血荣络方调控生物钟蛋白Bmal1改善bEnd.3细胞糖氧剥夺/复氧损伤后血管新生的机制研究

目的 基于阴阳理论及活血荣络方（Huoxue Rongluo Recipe,HXRL）对脑梗死后血管新生的影响,探讨HXRL调控生物钟蛋白脑和肌肉芳烃受体核转位蛋白1（brain and muscle Arnt-like 1,Bmal1）促内皮细胞血管新生的作用机制。方法 采用Western blotting检测小鼠脑微血管内皮细胞株（bEnd.3）受到糖氧剥夺/复氧（oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R）损伤后各时间点生物钟蛋白Bmal1和Clock的表达;利用染色质免疫共沉淀-测序分析（chromatin immunoprecipitation sequencing,ChIP-seq）明确Bmal1在全基因组中发挥的作用,以及对bEnd.3细胞生物进程、细胞组成及分子功能的影响。采用CCK-8法检测HXRL含药血清最佳干预浓度,敲降bEnd.3细胞Bmal1基因,设置对照组、模型组、HXRL含药血清组、si-Bmal1组和si-Bmal1＋HXRL含药血清组,通过划痕、迁移、成管等实验检测细胞迁移及血管形成能力;采用免疫荧光检测各组血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和神经源性基因Notch同源蛋白1（neurogenic locus notch homolog protein 1,Notch1）表达;采用Western blotting检测VEGF、基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinases 2,MMP2）、Notch1蛋白胞内结构域（notch1 intracellular domain,NICD）和δ样蛋白4（delta-like protein 4,DLL4）蛋白表达。结果 bEnd.3细胞受到OGD/R损伤后,Bmal1及Clock蛋白表达逐渐升高,造模8、12、16、20 h后具有显著差异（P＜0.05、0.001）。ChIP-seq提示Bmal1在内皮细胞中参与细胞发育、分化、增殖等进程,靶向调节VEGF、Notch1启动子区域。CCK-8实验结果显示,bEnd.3细胞受到OGD/R损伤后,10%的HXRL含药血清可有效改善细胞活力（P＜0.001）。划痕、迁移及成管实验证实HXRL含药血清可有效改善bEnd.3细胞OGD/R损伤后的迁移能力及血管生成能力（P＜0.05、0.01、0.001）,但在Bmal1敲降株中,该促进作用被抑制（P＜0.05、0.01、0.001）。免疫荧光及Western blotting结果显示,HXRL含药血清可进一步升高OGD/R损伤的bEnd.3细胞中VEGF、MMP2、NICD、DLL4、Bmal1及Clock蛋白表达（P＜0.05、0.01、0.001）,在Bmal1敲降株中,HXRL含药血清对VEGF、MMP2、NICD及DLL4的促表达作用被抑制（P＜0.05、0.01、0.001）。结论HXRL可有效促进内皮细胞经OGD/R损伤后的血管生成能力,其作用机制与调控生物钟Bmal1蛋白密切相关。     

miR-204-5p在氧糖剥夺/复糖复氧致SH-SY5Y细胞损伤中的作用研究

目的观察miR-204-5p在氧糖剥夺/复糖复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation, OGD/R)致人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤中的作用并从炎症/凋亡途径探讨其机制。方法 SH-SY5Y细胞分为control组、OGD/R组、OGD/R+miR-204-5p mimic组、OGD/R+miR-204-5p inhibitor组、OGD/R+miR-204-5p mimic negative control组、OGD/R+miR-204-5p inhibitor negative control组。采用MTT法测定细胞增殖、流式细胞术、TUNEL染色法检测细胞凋亡、酶联免疫法检测炎症因子(IL-10、IL-1β、TNF-α、PGE2)含量、qRT-PCR检测miR-204-5p的表达、western blot检测炎症及凋亡相关蛋白(COX-2、Bcl-2、Bax)的表达。结果与对照组相比,OGD/R组细胞miR-204-5p表达显著降低,IL-1β、TNF-α、PGE2含量增多,IL-10含量减少,COX-2、Bax蛋白水平上升,Bcl-2蛋白水平下降,细胞损伤明显加重;与OGD/R组比较,miR-204-5p mimic下调COX-2、Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达,IL-10含量增加,IL-1β、TNF-α、PGE2含量减少,细胞活力明显增加、凋亡率显著降低,细胞损伤减轻。结论 miR-204-5p对OGD/R致SH-SY5Y细胞损伤具有明显保护作用,其机制可能与减轻细胞炎症和凋亡有关。     

银杏蜜环口服溶液对氧糖剥夺/复氧复糖模型小鼠脑微血管内皮细胞增殖及体外血管新生的影响

目的 探讨银杏蜜环口服溶液促进血管新生的能力及可能的作用机制.方法 银杏蜜环口服溶液取0.6,1.2,2.4,4.8,9.6 mg/ml浓度,CCK-8法检测细胞活力,筛选出银杏蜜环口服溶液有效且安全的剂量进行后续实验.实验分为正常组、模型组、尼莫地平组及银杏蜜环高、低剂量组.除正常组外,其余各组采用缺氧缺糖(4h)/...     

丹参-葛根提取物对氧糖剥夺/复氧损伤人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的保护作用

目的：基于氧化应激和凋亡探究丹参-葛根提取物对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)损伤SH-SY5Y细胞的保护作用。方法：采用水提法制备不同配伍比例丹参-葛根提取物,体外培养人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞并建立OGD/R损伤模型,采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法筛选最佳配伍比例提取物用于后续实验。将SH-SY5Y细胞分为空白组、OGD/R组和丹参-葛根(SP)提取物低、中、高剂量组(10、30、100 mg·L^-1),除空白组外,其余各组细胞在氧糖剥夺4 h后迅速复氧12 h进行OGD/R造模。采用CCK-8法检测细胞存活率,显微条件下观察细胞形态,分光光度计法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率、超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量,2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯荧光探针法(DCFH-DA)检测细胞活性氧(ROS)水平,JC-1法检测线粒体膜电位,Hoechst 33342染色法观察细胞核形态,流式细胞术结合异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染检测细胞凋亡。结果：丹参-葛根2∶1配伍时SH-SY5Y细胞的...     

心脑舒通胶囊对氧糖剥夺/复氧星形胶质细胞神经营养因子分泌的影响及对神经元的保护作用

[目的]探讨心脑舒通胶囊对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)处理的星形胶质细胞(C8-D1A)神经生长因子分泌的影响,以及研究心脑舒通药物处理的OGD/R胶质细胞条件培养液对神经元细胞(Neuro-2A)的保护作用。[方法] CCK-8检测心脑舒通对正常培养和OGD/R胶质细胞活力的影响;酶联免疫吸附(ELISA)法检测心脑舒通对OGD/R胶质细胞的脑源性神经营养因子(BDNF)、胶质源性神经营养因子(GDNF)、睫状神经营养因子(CNTF)释放的影响;CCK-8检测心脑舒通处理的胶质细胞条件培养液对OGD/R神经元细胞活力的影响。[结果] 1)心脑舒通对正常培养的胶质细胞活力无显著影响,但可以提高OGD/R后胶质细胞的增殖活力。2)0.1μg/mL心脑舒通可以显著提高OGD/R胶质细胞BDNF的释放。3)0.1μg/mL心脑舒通药物处理的胶质细胞条件培养液可提高OGD/R神经元的存活能力。[结论]心脑舒通对OGD/R损伤后的胶质细胞有一定保护作用,其处理后的胶质细胞条件培养液对神经元有一定的保护作用。     

通络生骨胶囊对糖皮质激素致血管内皮细胞功能损伤的保护作用

目的 观察通络生骨胶囊（TLSGC）对糖皮质激素致血管内皮细胞功能损伤的影响,并从丝裂原活化蛋白激酶激酶（MEK）/细胞外调节蛋白激酶（ERK）信号通路初步探索其作用机制。方法 取正常SD大鼠胸主动脉环,用甲泼尼龙琥珀酸钠（MPS,0.04 g·L^-1）和（或）血管内皮细胞生长因子（VEGF,20 μg·L^-1）体外干预,加入TLSGC（12.5,25,50 μg·L^-1）连续作用5 d,观察血管环芽出的微生血管数目、长度和面积;此外,以甲泼尼龙琥珀酸钠（MPS,0.04 μg·L^-1）加入由VEGF（20 μg·L^-1）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,再加入TLSGC（12.5,25,50 μg·L^-1）,然后分别采用transwell迁移,transwell侵袭及管腔形成实验检测HUVEC的迁移、侵袭及管腔形成能力,并以硝酸还原酶法检测细胞上清中一氧化氮（NO）含量,干粉法检测细胞上清中内皮素-1（ET-1）含量,蛋白免疫印迹法检测细胞中血管内皮细胞生长因子受体2（VEGFR2）,ERK,磷酸化（p）-ERK,MEK和p-MEK蛋白表达量。结果 与正常组比较,MPS能明显抑制由VEGF诱导的大鼠胸主动脉环微血管数目、长度和面积以及HUVEC细胞迁移、侵袭和管腔形成能力,降低NO并升高ET-1含量,MPS还能明显减少由VEGF诱导的VEGFR2,p-MEK和p-ERK在HUVEC中的蛋白含量（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,TLSGC能剂量依赖地改善由MPS降低的大鼠胸主动脉环微血管数目、长度和面积以及HUVEC细胞迁移、侵袭和管腔形成能力,提高HUVEC中的NO,VEGFR2,p-MEK和p-ERK蛋白含量并降低ET-1含量（P<0.05,P<0.01）。结论 TLSGC对糖皮质激素所致血管内皮细胞血管生成和分泌功能的损伤具有保护作用,其机制可能与活化MEK/ERK信号通路有关。     

龙血通络胶囊对H2O2诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:本文探讨过氧化氢(H_2O_2)诱导PC12细胞损伤后,龙血通络胶囊的神经保护作用及其潜在作用机制。方法:以500μmol·L~(-1)H_2O_2构建PC12细胞损伤模型,实验分为空白组,模型组(H_2O_2,500μmol·L~(-1)),龙血通络胶囊组(LTC,1,2,4 mg·L~(-1))。通过细胞增殖毒性检测(CCK-8),胞内活性氧(ROS)水平,线粒体膜电位水平(JC-1),细胞凋亡率以及蛋白免疫印迹法(Western blot)评价龙血通络胶囊对H_2O_2诱导PC12细胞损伤的神经保护作用。结果:与空白组比较,模型组的细胞存活率显著降低(P0.01),ROS水平显著上升(P0.01),线粒体膜电位水平下降,细胞凋亡率显著升高(P0.01),剪切的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved PARP)水平显著上升(P0.01)。与模型组比较,LTC组(1,2,4 mg·L~(-1))能浓度依赖性升高细胞的存活率(P0.01),降低ROS水平(P0.05),维持线粒体膜电位水平,降低细胞的凋亡水平(P0.01),并显著降低PARP蛋白的剪切水平(P0.01)。结论:龙血通络胶囊对H_2O_2诱导的PC12细胞损伤具有显著的保护作用,其作用机制可能是通过抑制胞内氧化应激,维持线粒体功能,促进DNA修复等途径进而抑制神经细胞凋亡。     

藁本内酯预处理对糖氧剥夺-复糖氧损伤血管内皮细胞活性及NO/NOS与HIF-1α、VEGF、Tubulin表达的影响

目的:研究藁本内酯对糖氧剥夺-复糖氧损伤血管内皮细胞活性及NO/NOS与HIF-1α、VEGF、Tubulin表达的影响。方法:将融合生长的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)预处理给予藁本内酯1h后,用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)制备糖氧剥夺-复糖氧损伤(oxygen-glucose deprivation-reperfusion injury,OGD-R)模型,采用MTT法检测细胞活性,微板法检测细胞内丙二醛(MDA)、细胞外一氧化氮(NO)含量与测定细胞内一氧化氮合酶(NOS)活性,WTS-1法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性;采用高内涵分析系统检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达,采用蛋白免疫印迹法测定细胞内微管蛋白Tubulin的表达。结果:与溶剂对照组比较,OGD-R损伤的HUVEC细胞活力明显下降,细胞内MDA含量增加而SOD活性降低、细胞外NO含量与细胞内NOS活性均下降,细胞内HIF-1α、VEGF和Tubulin表达明显上升;藁本内酯20、40、60μmol/L可提高OGD-R损伤的HUVEC的活力,降低细胞内MDA含量和提高SOD活性,同时增加细胞外NO含量与细胞内NOS活性,提高细胞内HIF-1α、VEGF的表达和Tubulin的含量。结论:藁本内酯预处理对OGD-R损伤的HUVEC有保护作用,可对抗细胞氧化损伤,并调节内皮细胞功能。     

芹菜素对氧糖剥夺损伤小胶质细胞的抗炎作用

目的探讨芹菜素对氧糖剥夺(OGD)损伤后复氧复糖(OGD/R)小胶质细胞中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)产生的影响。方法将原代培养的小胶质细胞随机分为正常组、二甲基亚砜(DMSO)组及芹菜素(10、25、50μmol/L)组,其中DMSO组和芹菜素组小胶质细胞进行OGD8h,之后加入相应药物培养基,观察24h后,收集细胞上清,用双抗夹心酶联免疫吸附法检测上清中IL-1β、TNF-α含量。结果24h后DMSO组细胞上清中IL-1β、TNF-α含量增多(P0.01)。芹菜素组TNF-α、IL-1β分泌量明显低于DMSO组。芹菜素可以抑制OGD后小胶质细胞的炎症反应,且呈剂量依赖性。结论芹菜素可以通过减少OGD/R小胶质细胞中IL-1β、TNF-α的产生而发挥神经保护作用。     

槲皮素对高糖损伤血管内皮细胞的保护作用

目的:研究槲皮素对高糖损伤血管内皮细胞(VECs)的保护作用。方法:实验分对照组,损伤组和槲皮素保护组。用含10 mg/ml葡萄糖、20％胎牛血清的DMEM培养基离体培养 VECs。MTT比色法测细胞存活数量,荧光分光光度法测细胞释放一氧化氮(NO)量及细胞内脂质过氧化物丙二醛(MDA)的生成量,分光光度法测细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放量。结果:10~(-2)、10~(-3)、10~(-4)、10~(-5)mg/ml槲皮素可促进高糖损伤的VECs增殖,10~(-2)、10~(-3) mg/ml槲皮素,可抑制高糖损伤的VECs释放LDH,减少MDA生成量,促进其释放NO。结论:槲皮素对高糖损伤VECs有保护作用。     

芦荟苷对PC12细胞氧糖剥夺再灌注损伤的保护作用

目的探讨芦荟苷对PC12细胞氧糖剥夺再灌注损伤是否具有保护作用。方法将PC12细胞随机分为正常组、模型组、尼莫地平组、芦荟苷低、中、高剂量组,采用氧糖剥夺再灌注损伤模型,通过采用2-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT)检测细胞存活率,紫外分光光度计检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,荧光分光光度计测定细胞内活性氧(ROS)含量;运用激光共聚焦显微镜(CLSM)测定PC12细胞线粒体膜电位水平(MMP);通过生化方法测定丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果与正常组相比,芦荟苷(10,20,和40μg/ml)可以显著升高细胞存活率,降低细胞内乳酸脱氢酶漏出率、活性氧含量和线粒体膜电位水平,并且降低丙二醛和升高超氧化物歧化酶活性。结论芦荟苷对PC12细胞氧糖剥夺再灌注损伤具有明显的保护作用。     

阿魏酸对不同时间点糖氧剥夺诱导脑微血管内皮细胞氧化损伤的保护作用

目的探讨阿魏酸(Ferulic acid,FA)对不同时间点糖氧剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)诱导脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs)氧化损伤的保护作用。方法采用混合气体的方法(95%N2+5%CO2)建立OGD体外模型,通过MTT法检测细胞活力、流式细胞术检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生量,硫代巴比妥酸显色法检测细胞丙二醛(methane dicarboxylic aldehyde,MDA)水平,氮蓝四唑显色法检测细胞总超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性。结果 OGD对BMEC细胞造成的氧化损伤程度呈时间依赖性,FA能显著提高被损伤的细胞存活率,减少ROS的生成量,明显降低细胞内MDA的水平,并提高SOD活性。结论 FA对不同时间点OGD诱导BMEC细胞氧化损伤具有良好的保护作用,其作用机制可能与缓解细胞氧化应激状态有关。     

黄芩提取物对高糖诱导血管内皮细胞凋亡的作用

普遍认为,内皮细胞凋亡触发糖尿病微血管病变进展。而研究结果提示,黄芩对内皮细胞有调整作用本次探讨了其对高糖诱导体外培养的血管内皮细胞凋亡的作用。材料和方法:干燥的黄芩根(1kg)用80%乙醇(3L)提取3次。提取液过滤后,挥去溶剂并冻干。提取物用DMSO溶解后,用相应的培养基稀释到适当浓度(DMSO终浓度为0.05%)。牛肺动脉内皮细胞于添加20%胎牛血清、100μU/mL青霉素、100μg/mL链霉素的M199培养基中进行培养。采用[3H]-胸腺嘧啶脱氧核苷掺入法检测细胞增殖;DNA凝胶电泳法、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)…     

过表达JAK1对岩藻多糖保护神经元免受糖氧剥夺/复氧损伤的影响

[目的] 研究探讨岩藻多糖是否通过抑制Janus激酶1/信号转导和转录激活因子3（JAK1/STAT3）信号通路来保护神经元免受糖氧剥夺/复氧损伤（OGD/RP）引起的氧化损伤和细胞凋亡。[方法] 建立大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞（PC12）OGD/RP模型，采用CCK8法筛选出岩藻多糖对OGD/RP模型的最大浓度；流式细胞术检测细胞凋亡；活性氧（ROS）荧光探针（DCFH-DA）法测定细胞ROS水平；酶联免疫吸附实验（ELISA）检测超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）含量；JC-1法测定线粒体膜电位（MMP）变化；透射电镜观察线粒体自噬情况；蛋白免疫印记法（Western Blot）检测线粒体自噬、细胞凋亡及JAK1/STAT3通路等相关蛋白的表达。[结果] 通过CCK8筛选出OGD/RP损伤模型下400 mg/kg岩藻多糖组的细胞活性及增殖能力最强，用于后续实验研究；与OGD/RP组相比，OGD/RP+岩藻多糖组细胞中SOD、GSH-Px的含量、线粒体自噬体数量、MMP值及PTEN诱导假定激酶1（PINK1）、帕金蛋白（Parkin）及微管相关蛋白轻链3（Lc3B）蛋白的相对表达增加，细胞凋亡率、细胞凋亡相关蛋白、ROS含量及p-JAK1/JAK1、p-STAT/STAT3蛋白的相对表达量降低；与OGD/RP+岩藻多糖- pcDNA-NC组相比，OGD/RP+岩藻多糖+pcDNA3.1-JAK1组的细胞中SOD、GSH-Px的含量、线粒体自噬体数量、MMP值及PINK1、Parkin及Lc3B蛋白的相对表达下降，而ROS含量增加。[结论] 岩藻多糖能够通过抑制JAK/STAT信号通路，降低细胞凋亡及氧化损伤，促进线粒体自噬，达到保护神经元免受OGD/RP损伤的目的。