淫羊藿素通过BMP/Runx2/Osx信号通路促进大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化研究

目的观察淫羊藿素对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化过程中BMP/Runx2/Osx信号通路的影响,探讨其可能的作用机制。方法贴壁筛选法体外培养BMSCs,随机分为空白对照组、阳性转化液组、抑制剂组、淫羊藿素组及淫羊藿素+抑制剂组。ELISA法检测各组ALP活性、BGP、COL-Ⅰ、BMP-2、BMP-9蛋白分泌量;RTReal-TimePCR法检测各组ALP、BGP、Osterix和Runx2 mRNA基因表达。结果 ELISA实验结果表明,淫羊藿素能促进ALP细胞活性,促进BGP、COL-Ⅰ、BMP-2、BMP-9的蛋白表达,且随着干预时间延长而呈上升趋势。RT-PCR结果显示,淫羊藿素可显著上调成骨相关转录因子ALP、BGP,Runx2及Osterix的转录表达,与空白对照组比较差异显著(P0.05);与阳性对照液组比较差异显著(P0.05),但其活性较强。结论淫羊藿素能促进BMSCs定向成骨转化,其作用机制可能与激活BMP/Runx2/Osx信号通路有关。     

丹参酮对维甲酸致小鼠骨质疏松的防治作用

目的:研究丹参总酮对维甲酸致小鼠骨质疏松的防治作用,并探讨其主要作用机制。方法:维甲酸(90 mg.kg-1)致小鼠骨质疏松模型,丹参酮(40,80,160 mg.kg-1)灌胃给药,实验过程监测体重,2周后以比色法测定血清钙、磷含量和碱性磷酸酶(ALP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性,竞争放射免疫法测定血清中骨钙素(BGP)和雌二醇(E2)含量,取股骨进行骨组织形态学观察。结果:维甲酸可引起高转换型骨质疏松,丹参酮可升高E2值,降低P,ALP,TRAP,BGP水平。结论:丹参酮对维甲酸致小鼠骨质疏松有一定的防治作用,其机制可能与其减缓雌激素水平降低,抑制骨高转换有关。     

中西医联合诱导大鼠BMSCs增殖、骨向分化能力的研究

目的:探讨补肾益髓中药含药血清、转化生长因子-β1(TGF-β1)、骨形态发生蛋白2(BMP-2)联合诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖、骨向分化能力的研究。方法:采用全骨髓贴壁法分离及培养大鼠BMSCs。补肾益髓中药含药血清、TGF-β1及BMP-2的制备并确定最佳促BMSCs增殖、骨向分化添加浓度。实验分组:空白组、血清组、TGF-β1组、血清+TGF-β1组、BMP-2组、血清+BMP-2组、TGF-β1+BMP-2组、综合诱导组,酶联免疫分析检测Coll、BGP浓度。结果:TGF-β1最佳促BMSCs增殖浓度为10 ng/m L,BMP-2最佳促BMSCs骨向分化浓度是40 ng/m L;综合诱导组能明显促进大鼠BMSCs的I型胶原(Coll)、骨钙素(BGP)的表达量。结论:中西医联合诱导能够显著提高大鼠BMSCs增殖、骨向分化能力。     

老鹳草素通过Wnt/β-catenin信号通路影响小鼠骨髓基质干细胞的增殖和成骨分化

目的:观察Wnt/β-catenin信号通路在老鹳草素诱导小鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)增殖和成骨分化中的作用机制。方法:分离、培养小鼠BMSCs,分为对照组(DMEM/F12完全培养基)、老鹳草素低剂量组(10-9mol·L-1老鹳草素+DMEM/F12完全培养基)、老鹳草素中剂量组(10-8mol·L-1老鹳草素+DMEM/F12完全培养基)、老鹳草素高剂量组(10-7mol·L-1老鹳草素+DMEM/F12完全培养基)、老鹳草素高剂量+DKK1(Wnt/β-catenin信号通路特异性阻断剂)组和DKK1组。成骨诱导第7天时,采用CCK-8法检测细胞增殖,碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)试剂盒测定ALP活性及OCN含量。成骨诱导48 h时,采用Real time-PCR和Western-blot检测各组Wnt/β-catenin信号通路的关键信号分子Wnt3a、β-catenin、GSK-3β、Axin2、Runx2 mRNA和蛋白表达。结果:成骨诱导第7天时,老鹳草素各剂量组明显促进BMSCs的增殖,呈剂量依赖性(均P<0.05);同时ALP活性及OCN含量较对照组显著升高,呈剂量依赖性(均P<0.05)。成骨诱导48 h时,老鹳草素各剂量组Wnt3a、β-catenin、Axin2、Runx2 mRNA和蛋白表达较对照组显著上调,GSK-3βmRNA和蛋白表达较对照组显著下调,呈剂量依赖性(均P<0.05)。加入DKK1后,细胞增殖受到显著抑制,ALP活性及OCN含量显著降低(均P<0.05);同时Wnt3a、β-catenin、Axin2、Runx2 mRNA和蛋白表达显著下调,GSK-3βmRNA和蛋白表达显著上调(均P<0.05)。结论:老鹳草素能够明显促进BMSCs的增殖及向成骨方向分化,其机制与Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。     

壮骨伸筋胶囊对去势大鼠骨密度及骨代谢的影响

目的:研究壮骨伸筋胶囊(Zhuanggu Shenjin capsules,ZSJ)对去卵巢骨质疏松大鼠骨密度及骨代谢的影响,并探讨其相关的作用机制。方法:将72只SD大鼠按随机分为假手术组(12只)和造模组(60只),模型组采用摘除大鼠双侧卵巢,将去卵巢大鼠随机分为模型组、阳性药结合雌激素组、壮骨伸筋胶囊高、中、低剂量组(5.42,2.71,1.36 g·kg~(-1)),每组12只。连续ig 13周,每周连续ig 6 d,实验结束,取血和骨组织,测定骨密度及血清中血钙(Ca),碱性磷酸酶(ALP),抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP),雌二醇(E2),骨钙素(BGP),降钙素(CT)的变化;甲苯胺蓝染色观察骨组织病理学。结果:与假手术组比较,模型组大鼠骨密度,血清E2含量明显降低,大鼠血清ALP,TRAP,BGP含量明显升高(P0.05,P0.01),子宫系数明显降低(P0.01),骨组织病理学观察显示模型组骨小梁稀疏,骨小梁间有断裂并且分离,间隙增大,排列紊乱,骨板层结构疏松,骨质疏松特征明显;与模型组比较,壮骨伸筋胶囊高、中剂量组能够显著增加模型大鼠的骨密度(P0.01),增加模型鼠血清E2含量(P0.05),降低模型大鼠血清ALP,TRAP,BGP含量(P0.05),但是对血钙和CT作用却不明显,骨组织病理学观察显示骨组织结构趋于完整。结论:壮骨伸筋胶囊能提高去卵巢骨质疏松大鼠骨密度,提高雌激素水平,改善骨代谢水平,从而起到防治骨质疏松的作用。     

补肾活血颗粒对去势大鼠血生化的影响

目的:观察补肾活血颗粒对去势大鼠血生化一般指标钙(Ca)、磷(P)、雌激素(E2),骨形成指标碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(BGP),骨吸收指标抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP5b)、I型胶原C端肽(CTX)、羟赖氨酸糖苷(GHYL)的影响。方法:取24只雌性大鼠切除卵巢造成骨质疏松模型,随机分成补佳乐组、模型对照组、假手术组、补肾活血组4组,各组对应给予补佳乐、0.9%氯化钠溶液、0.9%氯化钠溶液、补肾活血方灌胃3个月,采用全自动生化检测Ca、P、ALP,用ELISA方法检测E2、TRAP5b、BGP、CTX、GHYL。结果:应用补肾活血颗粒后大鼠血生化一般指标Ca、P下降,E2升高,成骨细胞分泌的骨形成指标ALP、BGP升高,胶原蛋白的分解产物CTX、GHYL有所升高,而破骨细胞分泌的TRAP5b并没有明显改变。结论:从血生化可以推测补肾活血颗粒对增强成骨细胞分化增值及活性功能作用明显,而对破骨细胞作用并不显著。     

补肾活血汤调控Runx2及Osterix促进BMSCs成骨分化的作用研究

目的:探讨补肾活血汤提高骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal cells,BMSCs)Runx2及Osterix基因表达,促进成骨分化的作用。方法:从双侧股骨和胫骨分离大鼠BMSCs并使用腺病毒载体转染BMSCs细胞,构建过表达Runx2细胞株,Q-PCR法对转染细胞株进行鉴定,CCK8法评价补肾活血汤对BMSCs活性的影响,ALP半定量活性检测法评价补肾活血汤对BMSCs成骨分化的影响,RT-PCR、Western Blot法检测补肾活血汤对成骨相关标志物Runx2和Osterix表达量的影响。结果:成功构建过表达Runx2的BMSCs细胞,补肾活血汤组在25μg/m-200μg/ml之内对细胞活性没有影响,与正常培养组比较补肾活血汤100μg/ml组ALP活性显著提高,与正常培养组比较补肾活血汤50μg/ml、100μg/ml组Runx2和Osterix的mRNA和蛋白相对表达量显著增加。结论:补肾活血汤能提高BMSCs中Runx2和Osterix的表达,促进成骨分化。     

老鹳草素对小鼠骨髓基质干细胞成骨分化相关基因表达的影响

目的:观察老鹳草素对小鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)向成骨细胞分化的影响,并对成骨分化过程中相关基因表达进行检测。方法:分离、培养小鼠BMSCs,加入不同浓度老鹳草素(1×10-9,1×10-8,1×10-7mol·L-1)培养,另设空白组,分别于成骨诱导第7,14天采用碱性磷酸酶(ALP),骨钙素(OCN)试剂盒测定ALP活性及OCN含量,并进行ALP染色。于成骨诱导第21天时采用茜素红染色检测成骨分化过程中钙结节形成数量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)检测BMSCs成骨分化过程中OCN,ALP,骨涎蛋白(BSP),Runt相关转录因子2(Runx2)mRNA和蛋白表达的变化。结果:与空白组比较,成骨诱导后第7,14天时,老鹳草素各剂量组ALP活性,OCN含量及ALP染色强度均明显升高(P0.05),成骨诱导第21天时,老鹳草素各剂量组矿化结节数量及OCN,ALP,BSP,Runx2 mRNA和蛋白表达均明显升高(P0.05)。结论:老鹳草素能够明显促进BMSCs向成骨方向分化,成骨相关基因OCN,ALP,BSP,Runx2均参与这一过程。     

补肾壮骨通络中药联合碳酸钙D3治疗骨质疏松性骨折疗效及对ALP、BGP、BMP-2的影响

目的观察补肾壮骨通络中药联合碳酸钙D3治疗骨质疏松性骨折疗效及对碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(BGP)、骨形态发生蛋白2(BMP-2)的影响。方法将150例骨质疏松性骨折患者随机分为2组,对照组75例给予碳酸钙D3治疗,观察组70例在此基础上给予补肾壮骨通络中药治疗,统计2组近期疗效,观察2组治疗前后骨痂生长评分、VAS评分、股骨颈骨密度、ALP、BGP及BMP-2水平变化情况。结果观察组近期总有效率显著高于对照组(P0.05);2组治疗后骨痂量、骨痂密度、骨痂边缘及断端边缘骨痂生长评分均显著高于治疗前(P均0.05),且观察组各项评分均显著高于对照组(P均0.05);2组治疗4周、8周及12周后VAS评分均显著低于治疗前(P均0.05),且观察组治疗后各时间点VAS评分均显著低于对照组(P均0.05);2组治疗后股骨颈骨密度及ALP、BGP、BMP-2水平均显著改善(P均0.05),且观察组各项指标改善情况均显著优于对照组(P均0.05)。结论补肾壮骨通络中药联合碳酸钙D3治疗骨质疏松性骨折可促进骨折愈合,降低疼痛程度,提高骨密度,调节ALP、BGP及BMP-2水平,值得推广应用。     

基于组蛋白去乙酰化酶2介导的成骨细胞分化通路探讨电针治疗骨质疏松症的效应机制

目的:观察电针对骨质疏松大鼠股骨组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)、组蛋白H3、骨形成相关基因及蛋白表达的影响,探讨电针改善骨质疏松症的机制。方法:将雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组和阳性药物(E2)组,每组10只。采用去势法建立骨质疏松大鼠模型。电针组电针双侧"肾俞""脾俞"穴,10 min/d;E2组予20μg/mL 17β-雌二醇(E2)皮下注射,100μg/kg。均每周一、三、五治疗,共治疗8周。采用显微计算机断层扫描成像法检测大鼠股骨组织微观结构变化;蛋白质免疫印迹法检测大鼠股骨HDAC2、组蛋白H3和成骨细胞转录因子(Runx2)蛋白表达;比色法及酶联免疫吸附法检测大鼠血清中碱性磷酸酶(ALP)和E2含量;实时荧光定量PCR法检测大鼠股骨Runx2 mRNA表达;免疫荧光双标法检测大鼠股骨中乙酰化组蛋白H3/Runx2及Runx2/ALP蛋白的共表达。结果:与假手术组比较,模型组股骨松质骨密度(TBMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数量(Tb.N)均显著降低(P0.01),骨小梁分离度(Tb. Sp)、骨小梁模式因子(Tb.Pf)、结构模型指数(SMI)均显著升高(P0.01)。与模型组比较,电针组大鼠股骨TBMD、BV/TV和Tb. N显著升高(P0.01,P0.05),Tb. Pf和SMI显著下降(P0.05,P0.01);E2组大鼠股骨TBMD、BV/TV和Tb. N显著升高(P0.01), Tb. Sp、Tb. Pf和SMI均显著下降(P0.01)。与假手术组比较,模型组大鼠股骨中HDAC2、组蛋白H3表达水平显著升高(P0.01), Runx2蛋白和mRNA表达水平显著降低(P0.01),血清E2和ALP含量显著降低(P0.01),股骨中乙酰化组蛋白H3、Runx2、ALP的荧光强度显著降低(P0.01)。与模型组比较,电针组HDAC2、组蛋白H3表达水平显著降低(P0.01),Runx2蛋白和mRNA表达水平显著升高(P0.05,P0.01),血清ALP含量显著升高(P0.05),乙酰化组蛋白H3、Runx2、ALP荧光强度显著升高(P0.01);E2组Runx2蛋白和mRNA表达水平显著升高(P0.01),血清E2和ALP含量显著升高(P0.01,P0.05),Runx2和ALP荧光强度显著升高(P0.01)。与E2组比较,电针组HDAC2和组蛋白H3蛋白表达水平显著降低(P0.01),Runx2 mRNA表达水平显著下降(P0.05),乙酰化组蛋白H3荧光强度显著升高、Runx2荧光强度显著降低(P0.05)。结论:电针治疗骨质疏松可上调体内骨形成相关基因的表达,下调对骨形成通路有抑制作用蛋白的表达,使骨密度升高、骨体积和骨小梁数量增加,并促进骨小梁由杆状向板状变化,其机制可能与组蛋白乙酰化修饰有关。     

刘氏正骨方2号对过表达Sclerostin腺病毒转染后BMSCs促成骨分化的影响

目的探究刘氏正骨方2号对过表达Sclerostin腺病毒转染后BMSCs中Wnt信号通路及成骨相关因子的影响。方法分别用刘氏正骨方2号含药血清、BMP-2干预BMSCs,并分为对照组、中药组、BMP-2组,采用CCK-8法检测细胞活性,ALP染色、茜素红染色检测成骨诱导28 d后各组细胞ALP活性和矿化情况,荧光定量PCR、Western Blot法检测各组细胞中Col1A2、OCN、OPN、Sclerostin表达。采用腺病毒转染技术过表达BMSCs中Sclerostin基因,分为空白对照组、过表达Sclerostin组,再分别用空白血清、中药血清体外干预3 d后,检测Wnt信号通路相关分子(LRP5、β-catenin)和成骨相关因子Runx2的表达情况。结果与空白对照组比较,中药组BMSCs细胞活性及成骨分化程度增强,BMP-2组成骨分化程度高于中药组,但BMP-2组细胞活性最低(P0.05);在Sclerostin基因表达方面,中药组出现表达抑制,而BMP-2组呈上调趋势(P0.05)。腺病毒转染BMSCs可抑制BMSCs细胞活性,上调Sclerostin mRNA和蛋白表达。与NT比较,Ad-SOST组细胞活性降低,LRP5、β-catenin、Runx2表达下调(P0.05);与空白血清比较,中药血清干预后NT组、Ad-SOST组细胞活性不同程度增强,而LRP5、β-catenin、Runx2表达上调(P0.05)。结论刘氏正骨方2号具有增强BMSCs细胞活性、促进成骨分化作用,可影响过表达Sclerostin腺病毒转染后BMSCs的LRP5、β-catenin、Runx2表达。     

何首乌-牛膝药对提取物抗维甲酸诱导的小鼠骨质疏松药效物质基础研究

目的分析何首乌-牛膝药对提取物对维甲酸诱导的小鼠骨质疏松作用,研究药对提取物中β-蜕皮甾酮、二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚四种药效成分与骨质疏松指标ALP、TRAP、E_2和ALP/TRAP的相关性。方法采用水回流法,以溶剂倍量、提取时间和提取次数为因素安排正交实验。应用酶标法检测不同提取物对维甲酸诱导骨质疏松模型小鼠血清ALP、TRAP、E_2水平。应用RP-HPLC梯度洗脱法检测提取物中β-蜕皮甾酮、二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚的含量。应用综合评分标定值确定最佳提取工艺。应用spss pearson法分析提取物中四种成分与模型小鼠血清ALP、TRAP、E_2和ALP/TRAP的相关性。结果各组提取物对TRAP、E_2和ALP/TRAP影响较大,对ALP影响较小。TRAP与β-蜕皮甾酮、二苯乙烯苷和大黄素呈中等负相关;E_2与β-蜕皮甾酮、大黄素呈中等相关。结论何首乌-牛膝药对提取物对维甲酸致小鼠骨质疏松有显著治疗作用,其机制可能为为升高ALP和E_2水平、降低TRAP水平。β-蜕皮甾酮、二苯乙烯苷、大黄素与ALP、TRAP、E_2和ALP/TRA等指标呈现良好相关性,含量高有利于骨质疏松的治疗。     

针刺对去卵巢大鼠骨质疏松症骨代谢及血清雌二醇含量的影响

目的:研究针刺对去卵巢大鼠骨代谢生化指标及雌二醇的影响,探讨运用针刺方法对骨质疏松症模型进行干预治疗的机制。方法:采用6月龄雌性SD大鼠40只,随机分为假手术组、模型组、针刺组和己烯雌酚对照组,每组10只。除假手术组外,其余各组切除双侧卵巢建立骨质疏松症模型。造模2月后开始治疗,假手术组、模型组大鼠用生理盐水灌胃,己烯雌酚组以己烯雌酚生理盐水混悬液(2.25μg/ml)灌胃,均以1ml/100g的标准灌服,每日1次,连续灌服2月;针刺组针刺双侧"大杼"肾俞"脾俞"穴,每日1次,每次持续30min,每隔10min轻捻转行针1次,10次为1个疗程,共治疗6个疗程。用常规生化法检测血清碱性磷酸酶(ALP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)水平,用放射免疫法检测血清骨钙素(BGP)、雌二醇(E2)水平。结果:与假手术组比较,模型组子宫湿重、E2水平均显著降低(P<0.01),ALP、BGP、TRAP水平均显著升高(P<0.01,0.05);与模型组比较,针刺组及己烯雌酚组能明显抑制子宫萎缩(P<0.01),血清E2显著增高(P<0.01),ALP、BGP及TRAP水平显著降低(P<0.01),体重显著降低(P<0.01);针刺组与假手术组比较,ALP、BGP及TRAP水平差异无显著性意义(P>0.05),两组体重增长水平相当(P>0.05)。结论:针刺能明显阻止去卵巢大鼠体重的增加,提高血清E2水平,显著控制ALP、BGP与TRAP的增高,可能对骨质疏松症有一定的防治作用。     

强骨胶囊联合维生素 D 治疗骨质疏松性骨折临床研究

目的:观察强骨胶囊联合维生素D治疗骨质疏松性骨折患者的有效性及安全性。方法:将104例骨质疏松性骨折患者按随机数字表法分为2组,对照组52例服用维生素D治疗,观察组52例采用强骨胶囊与维生素D联合治疗。对比2组骨折愈合时间、治疗前后股骨颈骨密度及各生化指标、不良反应。结果:2组治疗前股骨颈骨密度比较,差异无统计学意义(P 0.05)。治疗后,观察组骨折愈合时间短于对照组,且股骨颈骨密度大于对照组,差异有统计学意义(P 0.05)。2组治疗前骨钙素(BGP)、碱性磷酸酶(ALP)、骨形态发生蛋白2 (BMP-2)水平比较,差异无统计学意义(P 0.05)。治疗后,观察组BGP、BMP-2水平较对照组升高,而ALP较对照组降低,差异有统计学意义(P 0.05)。对照组不良反应发生率为7.69%,观察组为5.77%,2组比较,差异无统计学意义(P 0.05)。结论:强骨胶囊联合维生素D治疗骨质疏松性骨折患者的效果显著,不仅可促进骨折愈合,提高骨密度,还可调节BGP、ALP、BMP-2水平,且不良反应少,安全可靠。     

卷柏提取物对去卵巢大鼠骨代谢的影响

目的研究卷柏提取部位(A、B、C、D)对去卵巢大鼠血清雌二醇水平及骨代谢生化指标的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用6月龄雌性Wistar大鼠70只,按体质量随机分为假手术组、模型组、阳性对照组和4个卷柏不同提取部位用药组,每组10只。除假手术组外,其余各组切除双侧卵巢建立模型。手术1周后开始给药,连续给药26周后处死大鼠。用放射免疫法检测雌二醇(E2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血清骨钙素(BGP)、降钙素(CT)水平,用常规生化法检测血清碱性磷酸酶(ALP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性。结果大鼠去除卵巢以后,E2、CT水平明显降低,ALP、TRAP、BGP、TNF-α水平明显升高。给药26周后,用药组ALP、TRAP、BGP、TNF-α水平比模型组明显降低(P0.01);E2、CT水平明显升高(P0.01)。结论卷柏提取物对去卵巢大鼠骨代谢有一定的调节作用,能够提高血清雌激素水平,提示卷柏提取物对骨质疏松症有一定预防和治疗作用。     

复叶耳蕨总黄酮通过BMP信号通路促进MSC成骨分化

目的:研究复叶耳蕨总黄酮(total flavonoids from Arachniodes exilis,TFA)对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化的作用及其分子机制。方法:通过茜素红染色、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性考查BMSCs成骨情况;RT-PCR检测Ⅰ型胶原酶α1(collagen typeⅠα1,COL1A1)、骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)、骨桥蛋白(osteopotin,OPN)、BMP2、BMP4、Runx2、Osterix转录水平;ELISA检测骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)信号通路相关蛋白BMP2、BMP4、Runx2表达情况。结果:TFA能显著增加BMSCs碱钙结节的形成、ALP活性,上调COL1A1、OCN、OPN的表达,促进BMSCs成骨分化,而Noggin能抑制该作用;TFA能显著上调BMP2、BMP4、Runx2、Osterix的表达。结论:TFA可能通过BMP信号通路促进大鼠BMSCs成骨分化。     

微小RNA-34a对强直性脊柱炎滑膜成纤维细胞成骨分化的影响

目的:探讨miRNA-34a对强直性脊柱炎(AS)滑膜成纤维细胞成骨分化的影响及其机制。方法:将滑膜成纤维细胞分为正常组(来自创伤性骨折患者的细胞)、AS对照组(来自AS患者的细胞)、AS+NC组(转染阴性对照并给予转化生长因子-β1(TGF-β1)和骨形态发生蛋白2(BMP-2)处理AS细胞)和AS+miRNA-34a寡核苷酸模拟物(miRNA-34a mimics)组(转染miRNA-34a mimics并给予TGF-β1和BMP-2处理AS细胞),采用实时-PCR检测各组细胞中miRNA-34a和成骨相关基因碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)、Runt相关转录因子2(Runx2) mRNA以及Notch信号通路的Notch1受体与其下游靶基因Hes1 mRNA的表达水平;将Notch信号通路激活剂rhNF-κB加入含miRNA-34a mimics的细胞中,观察ALP、OCN和Runx2 mRNA的表达变化。结果:与正常组相比,AS对照组和AS+NC组细胞中miRNA-34a表达降低,ALP、OCN、Runx2、Notch1和Hes1 mRNA的表达水平均明显升高(P0.05);与AS+NC组相比,AS+miRNA-34a mimics组细胞中miRNA-34a表达升高,而ALP、OCN、Runx2、Notch1和Hes1 mRNA的表达水平均明显降低(P0.05)。给予rhNF-κB作用后,miRNA-34a mimics对ALP、OCN和Runx2 mRNA的抑制作用减弱。结论:miRNA-34a可通过调控Notch信号通路抑制AS滑膜成纤维细胞的成骨分化能力。     

淫羊藿苷对骨髓间充质干细胞骨向诱导的实验研究

目的通过研究淫羊藿苷(icariin,ICA)对骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BM-SCs)增殖和骨向分化能力的影响,并观察其促BMSCs骨向分化过程中对细胞因子转化生长因子β1(TGF-β1)、骨形成蛋白-2(BMP-2)表达的影响,分析可能的作用途径,为阐释其防治骨质疏松(osteoporosis,OP)的作用机理提供实验依据,并为以TGF-β1、BMP-2作为筛选防治OP药物进行实验研究。方法以碱性磷酸酶(ALP)等指标确定干预药物不同浓度梯度中最佳促BMSCs骨向分化剂量;分组实验,通过检测诱导分化过程中ALP和钙化结节等指标的表达,来观察其对BMSCs骨向分化能力的影响;采用ELISA法检测骨向分化过程中TGF-β1、BMP-2的表达。结果(1)ICA最佳促BMSCs骨向分化浓度为1×10-9mol/L。ICA10-9组能促进成骨指标的表达和TGF-β1和BMP-2分泌增加;(2)能促BMSCs骨向分化能力的ICA各诱导组均伴随TGF-β1和BMP-2分泌增加。结论ICA能促进BMSCs骨向分化;在BMSCs骨向分化过程中,上调TGF-β、BMP-2的表达量可能是各干预药物促进BMSCs骨向分化的作用机制之一。     

基于分子对接的方法探讨桑根酮C对MC3T3-E1细胞的作用

目的:观察桑根酮C(SanC)对地塞米松(DEX)作用下小鼠MC3T3-E1成骨细胞增殖与分化的影响,并探讨其作用机制。方法:将SanC与同源建模所得的Runt-相关转录因子2(Runx2)蛋白结构进行分子对接。不同浓度SanC(8,16,32μmol·L^-1)和1μmol·L^-1DEX共同作用MC3T3-E1细胞,而后采用细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK-8)法检测SanC对MC3T3-E1成骨细胞增殖影响。试剂盒测定MC3T3-E1成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性和茜素红染色检测骨矿化结节的形成。采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测Runt-相关转录因子2(Runx2),ALP,和锌指结构转录因子(Osterix)mRNA的表达水平。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Runx2蛋白表达。结果:SanC与Runx2对接打分为-9.78。与正常组比较,DEX组显著降低细胞存活率(P<0.01),其中7 d存活率差异达到最大;与DEX组比较,SanC能显著促进MC3T3-E1的细胞增值(P<0.01),其中32μmol·L^-1SanC作用细胞7 d增殖率差异达到最大。与正常组比较,DEX组Runx2,ALP和Osterix mRNA的表达均有一定程度升高(P<0.05);与DEX组比较,不同浓度SanC组依赖性上调Runx2,ALP和Osterix mRNA的表达(P<0.01)。与正常组比较,DEX组Runx2蛋白表达明显下降(P<0.05);与DEX组比较,SanC干预下细胞Runx2蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论:桑根酮C能促进MC3T3-E1成骨细胞增殖、分化和矿化,其机制可能与上调Runx2表达有关。     

机械刺激/铁调控成骨细胞活性促进骨愈合的实验研究

目的:探讨机械刺激/铁通过体内外COX2/PGE2通路介导成骨细胞活性、促进骨愈合的潜在机制。方法:将18只10周龄雄性Balb/c小鼠随机分成正常组、骨折组、机械刺激/铁组3组,制作小鼠胫骨骨折动物模型,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测Ⅰ型胶原c端交联末端肽(CTx)、骨钙素(OC)浓度;取骨折组成骨细胞培养并用Western Blot法检测成骨细胞相关蛋白表达,免疫荧光检测成骨细胞核膜上COX2总蛋白量,用流式细胞仪分析铁对成骨细胞COX2/PGE2通路和细胞凋亡的影响。结果:机械刺激/铁组较骨折组骨折线模糊,血清中CTx含量降低、骨钙素含量升高,血清骨钙素(BGP)、碱性磷酸酶(ALP)和COI1水平均升高;铁能使成骨细胞CTx含量升高,骨钙素含量降低;骨折组BGP、ALP和COI1蛋白上升较正常组和高/低铁组明显;铁激活成骨细胞COX2/PGE2通路,且高铁组可显著提高COX2、PGEX和PGE2蛋白水平,成骨细胞核膜上COX2荧光强度较低铁组和正常组明显增强;高铁组上调多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)和Bax水平、下调Bcl2水平,更能显著降低成骨细胞凋亡率,同时高铁组C...