胰岛素样生长因子对体外培养豚鼠肋软骨细胞的影响

目的：了解胰岛素样生长因子(insulin-1ike growthfactor-1，IGF-1)对体外培养豚鼠肋软骨细胞分裂增殖及功能代谢的影响。方法：体外单层培养豚鼠肋软骨细胞，对照组培养液为无血流清DMEM，实验组在培养液DMEM中加入IGF-1使其终浓度分别为10ng／ml、50ng／ml、100ng／ml，作用6天后，检测细胞DNA含量和培养液中糖醛酸的含量。结果：IGF-1在10～100ng／ml浓度范围能明显增加培养软骨细胞的DNA及糖醛酸的含量，且以50ng／ml作用效果最明显，与对照组相比，有统计擘意义(P＜0．01)。结论：IGF-1对体外培养肋软骨细胞有刺激，并以剂量依赖性方式影响细胞的增殖及功能代谢。     

抗Fas抗体诱导软骨细胞凋亡及胰岛素样生长因子-1对其的保护作用

目的 建立抗Fas抗体诱导大鼠终板软骨细胞凋亡模型,检测胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)是否有延缓软骨细胞凋亡的作用,并进一步了解软骨细胞中整合素β1和黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)的表达情况.方法 取大鼠颈椎软骨终板软骨细胞行体外培养,应用抗Fas抗体(500 ng/ml)和人重组IGF-1(50 ng/ml)处理.光学显微镜观察细胞形态,透射电子显微镜、TUNEL法观察软骨细胞凋亡形态,免疫细胞化学法检测Bax、Bcl-2表达,实时荧光定量聚合酶链反应、免疫细胞化学和Western blot法检测整合素β1和FAK的基因与蛋白表达.结果 体外培养出软骨细胞并维持其表型.抗Fas抗体诱导软骨细胞发生凋亡,TUNEL染色证明软骨细胞凋亡率升高,透射电镜检查发现典型凋亡小体.与正常组比较,诱导凋亡组Bcl-2表达降低而Bax表达升高,整合素β1和FAK的基因与蛋白表达明显下调;抗Fas抗体与IGF-1联合干预后,Bcl-2表达升高而Bax表达降低,整合素β1和FAK的基因与蛋白表达明显上调.结论 抗Fas抗体可诱导体外培养的终板软骨细胞凋亡,抗Fas抗体与IGF-1联合应用,能延缓软骨细胞凋亡的过程,维持软骨细胞的功能.     

胰岛素样生长因子系统在恶性肿瘤发生中的作用

胰岛素样生长因子(insulin-like growth factors,IGF)系统及其受体信号传导在肿瘤形成中起重要作用,在人类肝细胞癌以及其他恶性肿瘤中,IGF系统中各成分表达存在异常.研究发现,IGF系统以及IGF-IR信号传导可能在肝癌形成、肝癌细胞增生及凋亡的调节中起重要的作用.IGF-IR刺激导致Raf/MEK/ERK信号传导途径变化.设计联合抗肿瘤治疗时,IGF系统日益受到重视,本文讲述了IGF系统在恶性肿瘤治疗中的作用前景,并着重介绍了其分子机制.     

软骨生长因子对兔软骨细胞作用的实验研究

目的：探讨软骨生长因子（CDGF）对体外培养兔软骨细胞的作用。研究了CDGF,胰岛素样生长因子－I（IGF－I）及软骨细胞生长代谢三者之间的关系。方法：体外单层培养兔软骨细胞,取生长良好的第二代细胞实验,分别或共同加入不同浓度CDGF和IGF－I,利用氯胺T法和MTTI地分别观察比较细胞培养液中羟脯氨酸与能量的合成及细胞的增殖情况,结果：CDGF与IGF－I均能剂量依赖性的促进细胞外基质中羟脯氨酸的合成以及细胞的增殖与能量合成;对两种作用的最佳刺激浓度,CDGF分别为16ng/ml和32ng/ml,IGF-I为30ng/ml;二者联合应用能明显增强对软骨细胞作用。结论：CDGF可以刺激软骨细胞的增殖与胶原合成,并与IGF－I有协同作用。     

胰岛素样生长因子Ⅰ型受体单克隆抗体对结肠癌细胞细胞周期的影响

目的了解胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(IGF—IR)在人结肠癌细胞株HT-29上的表达情况，观察两种胰岛素样生长因子Ⅰ型受体单克隆抗体对HT-29细胞周期的影响。方法免疫组织化学法检测HT-29的IGF-ⅠR表达，流式细胞术检测两种IGF—ⅠR单克隆抗体对HT-29的细胞周期的影响。结果人结肠癌细胞株HT-29细胞膜高表达IGF—ⅠR，IGF-ⅠR单克隆抗体能使HT-29的细胞周期阻滞于任何一期，诱导凋亡，对结肠癌细胞起抑制作用。结论IGF-ⅠR单克隆抗体阻断IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ与IGF-ⅠR结合，阻滞HT-29的细胞周期，诱导凋亡。     

胰岛素样生长因子-Ⅰ促进体外组织工程软骨形成

目的　探讨胰岛素样生长因子 - (IGF- )体外促进以透明质酸 (HA)为支架材料的组织工程软骨形成的能力。　方法　分离培养人关节软骨细胞 ,分为 3组 :1IGF- 组 :HA支架材料 软骨细胞 IGF- ;2细胞组 :HA支架材料 软骨细胞 ;3对照组 :单纯 HA支架材料。各组在 DMEM中培养 ,3、6周停止培养 ,取组织块通过 HE染色判断培养组织的形态 ,采用甲苯胺蓝染色、 型胶原免疫组织化学及 、 型胶原 RT- PCR判断体外组织形成软骨的能力。　结果　 IGF- 组和细胞组在第 6周均能形成典型的软骨组织陷窝 ,细胞组的陷窝数量明显低于 IGF- 组 ;对照组不能形成软骨组织。 型胶原免疫组织化学示 IGF- 组阳性表达强于细胞组 ;RT- PCR示 IGF- 组的 型前胶原量明显高于细胞组 (P<0 .0 5 ) ,而 型前胶原的表达量明显低于细胞组 (P<0 .0 5 ) ,差异具有统计学意义。　结论　 IGF- 能促进体外构建的组织工程软骨形成 ,并提高其质量。     

转化生长因子β1基因单独转染及与胰岛素样生长因子1基因联合转染治疗兔膝骨关节炎

目的 观察重组大鼠转化生长因子β1(transforming growth factor beta-l,TGF-β1)基因单转染及与胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)基因共转染兔膝关节后对骨关节炎(osteoarthritis,OA)的治疗效果.方法 新西兰白兔24只,随机分为4组,Ⅰ组为空白对照组,Ⅱ组为手术对照组,Ⅲ组为TGF-β1基因转染组,Ⅳ组为TGF-β1和IGF-1双基因转染组.前十字韧带切断法制成兔膝关节OA模型,向膝关节内注射转染不同重组基因的阳性克隆软骨细胞.4、8周后,取关节标本进行Mankin评分,AB-PAS染色,TGF-β1、IGF-1、Ⅱ型胶原原位杂交和免疫组化检测,透射电镜观察.结果 Ⅱ组软骨损伤程度较大,其Mankin评分明显高于Ⅰ组和Ⅲ、Ⅳ组.各因子原位杂交和免疫组化染色,Ⅰ组及Ⅲ、Ⅳ组的灰度值均高于Ⅱ组,Ⅳ组的灰度值较Ⅲ组高;8周时各对应组灰度值较4周有明显下降.透射电镜观察显示,Ⅱ组的超微结构较Ⅰ组明显紊乱,治疗4周后,超微结构逐渐恢复正常,但在8周后紊乱程度又逐渐加重.结论 关节内注射转基因软骨细胞对OA有一定治疗作用;TGF-β1和IGF-1双基因治疗效果优于TGF-β1单基因;基因治疗4周后,基因表达逐渐减弱,基因治疗具时效性.     

神经肽对大鼠成骨细胞胰岛素样生长因子-1及其受体基因表达的影响

目的观察神经肽类物质降钙素基因相关肽（CGRP）、P物质（SP）在鼠成骨细胞表面受体的分布，探讨神经肽对大鼠成骨细胞胰岛素样生长因子（IGF）-1和胰岛素样生长因子1型受体（IGF-1R）基因表达的调控作用。方法取出生1d的Wistar大鼠颅盖骨成骨细胞进行体外原代和传代培养，应用免疫组织化学技术检测体外培养的鼠成骨细胞表面神经肽受体的分布情况，用不同浓度的CGRP和SP分别对传代成骨细胞处理6、12和24h，原位杂交技术检测观察成骨细胞二种目的基因（IGF-1、IGF-1R）的mRNA表达强度变化以及时间效应和剂量．效应的关系。结果（1）大鼠成骨细胞表面有CGRP、SP受体表达。（2）CGRP可以刺激成骨细胞IGF-1mRNA表达，以10^-8mol／L作用12h最为明显。CGRP亦能够上调成骨细胞IGF一1RmRNA表达，而且维持时间达24h具有明显的剂量时间依赖性。（3）SP可以刺激成骨细胞IGF-1mRNA表达，以10^-6mol／L作用12h最为明显。SP亦能够上调成骨细胞IGF-1RmRNA表达，而且维持时间达24h具有明显的剂量时间依赖性。结论神经肽CGRP，SP通过增强IGF-1的自分泌作用即诱导内源性IGF基因表达来间接地调节成骨细胞活性，从而发挥成骨效应。     

新辅助化疗对乳腺癌患者胰岛素样生长因子-1受体表达的影响

目的 探讨新辅助化疗对乳腺癌组织中胰岛素样生长因子-1受体(insulin-like growth factor-1 receptor,IGF-1R)表达的影响,以有助于乳腺癌治疗的选择及预后判断.方法 通过免疫组化SP法检测40例Ⅱ/Ⅲ期乳腺癌患者在化疗前、后乳腺癌组织中IGF-1R表达的情况.术前采用空心针穿刺活检予以病理确诊并行IGF-1R表达的测定.化疗方法统一采用TAC方案(多西他赛、表柔比星及环磷酰胺),经过2个疗程的化疗,再行乳腺癌改良根治术,比较化疗前、后IGF-1R表达的变化.新辅助化疗的临床疗效通过体检和乳腺B超测量肿瘤的最大直径,按WHO的统一判定标准来评价.结果 40例Ⅱ/Ⅲ期乳腺癌患者经2个周期的新辅助化疗后,29例(72.5%)获得了部分缓解,无完全缓解病例,无进展病例.化疗后25例IGF-1R由高表达变为低表达(P＜0.01).结论 新辅助化疗可能部分通过抑制IGF-1R的表达来抑制乳腺癌的增殖.     

胰岛素样生长因子对合成代谢和免疫功能的影响

本文介绍了胰岛素样生长因子对肠道粘膜细胞生长代谢和免疫功能的影响，用胰岛素样生长因子增强的全静脉营养治疗处于分解代谢状态的某些疾病，可通过其生长激素及胰岛素样的促合成代谢作用，提高蛋白质的合成率，对机体的免疫功能有明显的增强作用。     

Chemosensitization of human prostate cancer using antisense agents targeting the type 1 insulin-like growth factor receptor

OBJECTIVE: To assess the effect of the downregulation of type 1 insulin-like growth factor receptor (IGF1R) on the chemosensitivity of prostate cancer cells. IGF1R is overexpressed by prostate cancer compared with benign prostatic epithelium and IGF1R expression commonly persists in androgen-independent metastatic disease at levels comparable to those in the primary. MATERIALS AND METHODS: Human androgen-independent DU145 prostate cancer cells were transfected with IGF1R antisense oligonucleotides or antisense RNA. Transfected cultures were treated with cisplatin, mitoxantrone, paclitaxel or vehicle control, and survival measured using a clonogenic assay. RESULTS: Both antisense strategies suppressed IGF1R protein levels to 30-50% of those in control cultures. This was associated with 1.5-2-fold enhancement of sensitivity to cisplatin, mitoxantrone and paclitaxel, and an increase in cisplatin-induced apoptosis. CONCLUSION: This approach has potential for development as a clinical treatment for advanced prostate cancer and other chemoresistant tumours.     

青少年特发性脊柱侧凸患者胰岛素样生长因子-1受体基因多态性研究

目的 探讨胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)基因多态性与青少年特发性脊柱侧凸(AIS)易感性之间的关联性.方法 实验对象为200例MS患者(AIS组)和200名年龄、性别匹配的健康青少年(对照组),记录AIS组的身高、体蓖、月经初潮年龄(女性)、侧弯类型、最大Cobb角和Risser征等临床指标.采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法对所有研究对象进行IGF-1R基因分型,比较不同基因型在AIS组和对照组之间的分布差异,并分析基因多态性与临床指标的相关性.结果 AIS组与对照组的IGF-1R基因等位基因及基因型分布无统计学差异(P＞0.05).女性AIS患者不同基因型所对应的最大Cobb角、Risser征及月经初潮年龄之间差异也无统计学意义(P＞0.05).结论 IGF-1R基因多态性与AIS的发生发展均无相关性.     

胰岛素样生长因子1受体抑制剂可减轻糖尿病肾病小鼠肾小管病变

目的探讨胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)抑制剂在缓解糖尿病肾病(DKD)小鼠肾小管病变中的作用。方法C57BL/6J雄性小鼠被随机分为正常对照组(n=10)和DKD模型组(n=30)。用单次腹腔注射链脲佐菌素(STZ,150 mg/kg)的方法建立糖尿病肾病模型。建模成功后,DKD模型组小鼠被随机分为DKD组(n=10)、贝那普利组(n=10)和IGF-1R抑制剂组(n=10)。IGF-1R抑制剂组给予30 mg·kg-1·d-1 IGF-1R抑制剂灌胃;贝那普利组给予30 mg·kg-1·d-1贝那普利灌胃;正常对照组和DKD组分别给予等量生理盐水灌胃。8周后处死小鼠,记录小鼠体重、肾重。收集小鼠血清、尿液和肾脏样本。自动生化仪上测定血糖、尿白蛋白等生化指标,计算尿白蛋白排泄率。HE、PAS染色法观察小鼠肾脏病理改变。免疫组化、Western印迹法测定肾组织磷酸化(p)IGF-1R的表达。结果与正常对照组比较,DKD组小鼠的随机血糖、肾重/体重、尿白蛋白排泄率明显升高(均P<0.01)。DKD组小鼠肾脏病理表现为肾小球增大,肾小管管腔狭窄,肾小管肿胀、萎缩;近端小管上皮(PTE)细胞数目减少,肾小管损伤评分增加,平均肾小球体积增大,肾组织pIGF-1R表达增加(均P<0.05)。与DKD组相比,IGF-1R抑制剂组和贝那普利组小鼠尿白蛋白排泄率显著降低(P<0.01),肾脏病理改变减轻,且IGF-1R抑制剂组的作用效果更加显著。与DKD组相比,IGF-1R抑制剂组肾组织pIGF-1R蛋白表达减少(P<0.05);与贝那普利组相比,IGF-1R抑制剂组肾组织pIGF-1R蛋白表达减少(P<0.05)。结论IGF-1R抑制剂能减轻DKD小鼠肾小管病变,且效果优于贝那普利。     

阻断胰岛素样生长因子Ⅰ型受体对肝癌细胞生长的影响

目的了解胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(IGF-ⅠR)在人肝癌细胞株HepG2及正常人肝细胞株Chang Liver的表达和定位;观察胰岛素样生长因子Ⅰ型受体单克隆抗体(αIR3)对HepG2细胞生长的生物学作用。方法免疫组织化学法检测HepG2及Chang Liver细胞的IGF-ⅠR表达;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测αIR3对HepG2细胞增殖的影响;流式细胞术分析αIR3对HepG2细胞细胞周期及凋亡的影响;透射电镜观察αIR3作用于HepG2细胞后的形态学变化。结果与Chang Liver细胞相比,HepG2细胞膜高表达IGF-ⅠR;αIR3(0.1μ/ml)作用于HepG2细胞48h,其相对生长指数(GI)为103.41%,与对照组相比差异有统计学意义(F=19.936,P<0.01),αIR3(0.2～4.0μg/ml)作用于HepG2细胞24h～96h,其GI分别为97.63%～70.51%,且呈时间-剂量依赖关系,与对照组相比差异有统计学意义(F=3.902～34.95,P<0.05或P<0.01);αIR3(0.5～2.0μ/ml)能增加G_0/G_1期HepG2细胞比值、减少S期HepG2细胞比值(F=1099.055、450.056,P<0.01),但对G_2/M期HepG2细胞比值无明显影响,同时使细胞凋亡率也增高(F=3465.914,P<0.01);透射电镜观察到细胞凋亡现象。结论肝癌细胞的恶性表型与IGF-ⅠR的过度表达有关;在一定浓度范围,胰岛素样生长因子Ⅰ型受体单克隆抗体αIR3可以通过阻断IGF-ⅠR抑制HepG2的增殖、诱导其凋亡。     

Effect of insulin-like growth factor-1 on apoptosis of rat testicular germ cells induced by testicular torsion

OBJECTIVE: To investigate the possible protective role of insulin-like growth factor-1 (IGF-1, reported to have a protective effect in experimental models of hypoxic ischaemia), and the involvement of apoptotic cell death in a model of torsion/detorsion of the rat testis. MATERIALS AND METHODS: Adult male Wistar rats were divided into five groups of five rats each. Group 1 underwent a sham operation as a control; in group 2 the testis was twisted and in group 3 then untwisted; in group 4 IGF-1 was injected subcutaneously just before bilateral torsion, and then the right testis removed after 4 h and the left after 24 h; in group 5, IGF-1 was injected immediately after bilateral detorsion and then the testes removed as in group 4. Both testicles were examined histologically, with apoptosis detected using the in situ DNA fragmentation (TUNEL) system, with combined enzymology and immunohistochemistry techniques. RESULTS: In groups 2 (torsion) and 3 (detorsion), light microscopy of the testis showed some degenerative changes in the germ cells. Compared to group 1, apoptosis was more significant in group 3 than in the other groups. Group 4 (torsion/IGF-1) had a similar number of apoptotic germ cells as in group 2 (torsion) after 24 h, but fewer than the same group after 4 h. In group 5 (detorsion/IGF-1), apoptosis was reduced by IGF-1 significantly more than in group 3 (P < 0.05). Apoptosis was significantly less in spermatids in group 5 than in group 3 (P < 0.05). CONCLUSIONS: IGF-1 seems to lower the levels of germ cell apoptosis, which may be important for protecting the testes from torsion/detorsion injury. Further clinical studies are needed to evaluate this protective effect in testicular torsion/detorsion.     

力学刺激对软骨细胞整合素亚单位的调控

骨关节炎（osteoarthritis,OA）是以关节软骨退变、关节缘骨质增生为主要改变的疾病。机械应力可以调节细胞的多种功能,而整合素作为细胞表面应力受体之一,主要介导细胞与细胞外基质（extracellularmatrix,ECM）间的黏附,在传导力学信号从而调节细胞的生理功能方面起着重要作用。因此,在软骨病变早中期选择适当的良性刺激（如推拿手法）作用于软骨,调控整合素的表达影响软骨细胞的功能,修复损伤的软骨细胞,延缓关节软骨退变,这对于骨关节炎的治疗有重要意义。     

Interaction of basic fibroblast growth factor with bovine growth plate chondrocytes.

The basic fibroblast growth factor (bFGF) family of peptides influences a wide range of cellular actions. To better understand the possible role of bFGF in the growth plate, we have characterized the interaction of this growth factor with isolated bovine growth plate chondrocytes. Basic FGF interacts with two classes of binding sites on these cells. One is consistent with high-affinity bFGF receptors and the other with low-affinity heparin-like binding sites on the chondrocyte surface. Radiolabeled bFGF binding studies revealed approximately 4 x 10(6) binding sites per cell, with a Kd of approximately 42 nM. Graded concentrations of heparin or NaCl competed with [125I]-labeled bFGF in a dose-dependent fashion, reducing [125I]-labeled bFGF binding by 75 and 97%, respectively. The data suggest the presence of a high-capacity, low-affinity class of binding sites with the properties of a heparin-like moiety. Affinity cross-linking of [125I]-labeled bFGF to chondrocytes labeled two principal species with apparent molecular masses of 135 and 160 kDa. Labeled bFGF was specifically displaced from both species by subnanomolar concentrations of unlabeled bFGF. These high-affinity, low-capacity binding sites are characteristic of classical bFGF receptors. Binding of [125I]-labeled bFGF to these sites was also influenced by heparin, consistent with coregulation of binding to the two classes of binding sites. The data suggest that bFGF participates in the regulation of skeletal growth at the growth plate and that this regulation may involve bFGF interaction with at least two distinct classes of binding sites.     

pcDNA3+转化生长因子-β1单独转染及其与pAT153+胰岛素样生长因子-1共转染兔软骨细胞的研究

目的 探讨重组大鼠转化生长因子-β1基因（pcDNA3＋TGF-β1）单独转染及其与重组大鼠胰岛素样生长因子-1基因（pAT153＋IGF-1）共转染兔软骨细胞后细胞增殖及所分泌的TGF-β1因子、IGF-1因子、Ⅱ型胶原的变化。方法 兔软骨细胞体外分别用pcDNA3＋TGF-β1单转染、pcDNA3＋TGF-β1和pAT153＋IGF-1共转染，筛选阳性克隆后，进行原位杂交、免疫组织化学、免疫荧光检测、流式细胞仪检测、^3H．TdR（^3H标记的胸腺嘧啶脱氧核苷）检测。结果 基因转染组与空白组相比，TGF-^31、IGF-1、Ⅱ型胶原的含量均明显提高，空白组、基因单转染组、基因双转染组软骨细胞位于S期的比例分别为5．6％、33．4％、40．1％，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 基因pcDNA3＋TGF-β1、pAT153＋IGF-1转染软骨细胞后，细胞分泌的TGF-Ⅱ1、IGF-1及Ⅱ型胶原显著增多，细胞增殖明显增强，上述基因转染有助于软骨细胞活力的提高；pcDNA3＋TGF-β1和pAT153＋IGF-1双基因共转染软骨细胞后，细胞分裂增生活跃程度及分泌的TGF-β1、IGF-1和Ⅱ型胶原含量高于pcDNA3＋TGF-β1单基因转染，多基因共转染作为将来骨性关节炎基因治疗的方法，其治疗效果可能会优于单基因转染。     

胰岛素样生长因子Ⅰ型受体单克隆抗体对结肠癌细胞生长的影响

目的探讨胰岛素样生长因子Ⅰ型受体（insulin-like growth factorⅠ receptor,IGF-ⅠR）在人结肠癌细胞株HT-29上的表达,以及两种胰岛素样生长因子Ⅰ型受体单克隆抗体（IGF-ⅠRMcAb）对HT-29细胞增殖的影响.方法免疫组织化学法检测HT-29的IGF-ⅠR表达,MTT法检测两种IGF-ⅠR McAb对HT-29的抑制增殖作用及诱导凋亡情况.结果人结肠癌细胞株HT-29细胞膜高表达IGF-ⅠR.IGF-ⅠR McAb能抑制HT-29细胞增殖,McAb对HT-29细胞的抑制作用随抗体浓度增大而增大.IGF-ⅠR McAb诱导HT-29凋亡,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.01）.结论IGF-ⅠR McAb通过阻断IGF-ⅠR抑制结肠癌细胞增殖、诱导细胞凋亡.