染料木黄酮对去势抵抗性前列腺癌VCaP细胞增殖的影响

目的:研究染料木黄酮(GDN)对去势抵抗性前列腺癌细胞VCa P增殖的抑制作用及可能机制。方法:以不同浓度(0、12.5、25、50、100、200μmol/L)的GEN处理去势抵抗性前列腺癌细胞VCaP,分别在24、48、72 h以CCK-8法测定细胞增殖;以流式细胞术检测细胞周期;以免疫荧光法检测Ki-67表达水平;以Western印迹法检测Cyclin D1、PCNA、P53及PSA表达水平。结果:12.5、25、50、100、200μmol/L GEN作用于VCaP细胞72 h后,对VCaP细胞的抑制率分别为(25.38±0.02)%、(31.14±0.29)%、(45.27±0.03)%、(52.19±0.05)%与(68.21±0.19)%,与对照组[(10.08±0.02)%]相比差异有统计学意义(P0.05)。流式细胞术显示GEN可导致VCa P细胞G2/M期阻滞(P0.05)。免疫细胞化学法检测显示GEN能够抑制细胞中Ki-67的表达。Western印迹显示去势抵抗性前列腺癌细胞内PSA、Cyclin D1、PCNA随着GEN浓度的增加逐渐下调,P53随着GEN浓度的增加逐渐上调(P0.05)。结论:GEN能够抑制体外培养的去势抵抗性前列腺癌细胞VCaP增殖,其作用机制可能与阻滞细胞周期并伴随相关周期蛋白表达的改变有关。     

染料木黄酮对去势大鼠骨组织形态计量学参数的影响

目的　研究染料木黄酮对去势大鼠股骨远端形态计量学参数的影响 ,为染料木黄酮防治骨质疏松提供理论依据。方法　雌性Wistar大鼠 4 7只 ,按体重随机分为 6组 :假手术组、去势对照组、去势 雌激素组 (2 0 μg/kg体重 )、去势 染料木黄酮组 (染料木黄桐剂量分别为 2 5、5 0、10 0mg/kg体重 )。饲养 3个月后处死 ,测定股骨形态计量学参数。结果　去势组与假手术组比较 ,骨小梁体积、平均骨小梁板密度和厚度减少 ,平均骨小梁板间隙和类骨质宽度增加 ,矿化延迟时间和类骨质成熟时间延长 ,且差异均具有显著性 (P <0. 0 5 )。染料木黄酮各组与去势组比较 ,骨小梁体积和平均骨小梁板厚度增加 ,平均骨小梁板间隙变窄 ,矿化延迟时间和类骨质成熟时间缩短 ,且差异均有显著性 (P <0 . 0 5 )。结论　染料木黄酮有促进骨形成 ,减少切除卵巢后骨量丢失的作用。     

染料木黄酮对去势小鼠脾细胞凋亡及雌激素受体表达的影响

目的探讨染料木黄酮(GEN)对去势(OVX)小鼠脾细胞凋亡、凋亡基因Fas、FasL及雌激素受体(ER)亚型表达的影响。方法流式细胞仪检测不同浓度GEN对OVX小鼠脾细胞的凋亡率,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测细胞内Fas、FasL及ERα、ERβ mRNA的表达。结果OVX+GEN组与青年组相比,脾细胞凋亡率在GEN两个高浓度(37.0、92.5μmol/L)时都显著增高(P均<0.05);而Fas基因表达在GEN 92.5μmol/L时显著增高(P<0.05),FasL基因表达在GEN两个高浓度均显著高于青年组(P均<0.05);与OVX空白组相比,GEN最高浓度(92.5μmol/L)时凋亡率显著增高(P<0.01),Fas、FasL基因的表达均显著增高(P均<0.05)。ERα、ERβ基因的表达随GEN浓度增加而呈增加趋势,在GEN最高浓度(92.5μmol/L)时显著高于OVX空白组(ERα:P<0.05;ERβ:P<0.01)。结论高浓度GEN致脾细胞凋亡,与上调凋亡促进基因Fas、FasL基因表达有关。低浓度GEN可能逆转OVX小鼠脾细胞凋亡。高浓度GEN增加ERα、ERβ基因表达。GEN对脾细胞凋亡、ERs表达的调节可能不完全通过ER途径。     

染料木黄酮在减轻肾间质纤维化中的作用

目的 探讨染料木黄酮(Genistein)在减轻单侧输尿管结扎模型(UUO)诱导肾间质纤维化中的作用及可能机制.方法 将30只SD大鼠随机分为5组,A组:假手术+DMSO 1 ml/d×14 d;B组:假手术+Genistein每日20 mg/ks体重×14 d;C组:UUO+DMSO 1 ml/d×14 d;D组:UUO+Genistein 5mg/kg体重每日×14d;E组:UUO+Genistein 20mg/kg体重每日×14d.术后14d比较各组大鼠左/右肾重量和长度的比值;酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测血清INF-y和TGFa1表达;病理观察肾小管扩张和肾间质增生的程度,免疫组织化学观察肾脏á-SMA和ED-1表达.结果 C、D、E组左/右肾重量及长度比值均明显高于A、B组,但E组左/右肾重量及长度比值、血清TGF-a1及INF-y浓度、肾小管扩张分数和肾小管容量分数、á-SMA和ED-1的表达均低于C组.结论 染料木黄酮可明显降低由单侧输尿管结扎模型所导致的肾间质纤维化的病理改变,其可能机制是染料木黄酮抑制TGF-a1及INF-y的表达,从而抑制肾小管上皮细胞向成纤维细胞转化.     

染料木黄酮对骨肉瘤细胞增殖及侵袭的影响及作用机制

目的 探讨染料木黄酮对人骨肉瘤MG-63细胞增殖、侵袭的影响及其作用机制.方法 用染料木黄酮处理MG-63细胞,CCK-8法检测细胞增殖;Transwell小室体外侵袭实验法检测MG-63细胞侵袭能力;实时定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白印迹法(Western blot)分别检测MG-63细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2／MMP-9的mRNA及蛋白水平.结果CCK-8法表明染料木黄酮处理组MG-63细胞增殖被明显抑制,抑制率最高(85.3±5.1)％(P＜0.05);染料木黄酮在0、12.5、25.0、50.0 μmol/L时穿膜细胞数分别为(96.5±5.5)、(88.4±3.2)、(53.8±4.4)、(36.6±3.8)个,可明显降低MG-63细胞的侵袭能力(P＜0.05);染料木黄酮处理后MMP-2及MMP-9的mRNA表达水平明显下降(P＜0.05);MMP-2/MMP-9蛋白表达水平也明显下降,且具有时间依赖性.结论染料木黄酮抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖及侵袭转移能力,这种作用与MMP-2及MMP-9表达变化有关.     

染料木黄酮对大鼠移植动脉血管平滑肌细胞的影响

目的研究染料木黄酮(Gen)对大鼠移植动脉血管平滑肌细胞的影响。方法以BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,建立腹主动脉移植模型,将受者随机分为3组。实验组(n=8):受者术后腹腔注射Gen 20 mg·kg~(-1)·d~(-1)×60 d;对照1组(n=8):受者术后腹腔注射溶剂二甲基亚砜0.5 ml×60 d;对照2组(n=6):受者术后不给予任何处理。腹主动脉移植后60 d取移植血管进行组织学观察,测量血管内膜厚度;免疫组织化学染色检测血管平滑肌细胞的增殖和迁移情况;酶联免疫(ELISA)法检测血清中血管内皮生长因子(VEGF)、γ-干扰素(INF-γ)的变化。结果实验组与两个对照组比较,内膜增厚不明显且巨噬细胞浸润减少;血管平滑肌细胞增殖和迁移减少(P均<0.01);两个对照组血清中VEGF、INF-γ表达显著高于实验组(P<0.01)。结论染料木黄酮在预防和治疗移植动脉硬化的过程中,对移植动脉血管平滑肌细胞的增殖和迁移有抑制作用,其机理可能与影响VEGF等的表达有关。     

大豆提取物染料木黄酮对前列腺癌的影响

大豆提取物染料木黄酮可能是前列腺癌发病的重要影响因素之一；对前列腺癌的多个细胞系具有明确的抑制作用，其抑制机制可能是阻滞细胞周期于Ｇ２－Ｍ期，亦可能是影响了雄激素作用，或抑制了５α－还原酶，现研究集中于动物模型实验以进一步证实其对前列腺癌的作用。     

糖皮质激素抑制Leptin、VEGF蛋白表达诱导骨质疏松作用机制研究

目的 通过比较糖皮质激素诱导骨质疏松模型大鼠（GIOP）在成模前后骨密度、病理组织以及瘦素（leptin）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）蛋白差异表达变化阐释糖皮质激素性骨质疏松的作用机制。方法 采取大腿内侧交替肌肉注射地塞米松注射液（DEX）建立骨质疏松症大鼠实验模型,连续注射8周,造模8周后处死各组大鼠,对右侧股骨胫骨进行骨密度检测、HE 染色,确定最佳造模剂量,继而通过免疫组织化学、蛋白免疫印迹的方法检测正常SHAM与DEX大鼠Leptin、VEGF蛋白的表达。结果 结合骨密度和HE染色的结果,确定DEX 2.5 mg/kg为地塞米松注射液诱导继发性骨质疏松的最佳造模剂量,免疫组织化学和蛋白免疫印迹检测发现,与SHAM组相比,DEX 2.5 mg/kg组大鼠Leptin、VEGF蛋白的表达均降低,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 糖皮质激素诱导的骨质疏松是通过抑制Leptin、VEGF蛋白表达,抑制血管生成进而抑制成骨发挥作用的,据此推测Leptin、VEGF可能是糖皮质激素性骨质疏松发病的潜在作用靶点。     

染料木黄酮对糖尿病股骨头生长板早闭及骨质疏松的影响

目的探讨染料木黄酮(genistein,Gen)对糖尿病大鼠股骨头生长板退化及骨质疏松的保护作用。方法建立速发型链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)糖尿病大鼠模型,随机分为正常组(CON)、糖尿病组(DM)、Gen干预组(Gen)。每天1次,灌胃给药(4.0 mg/kg),每组20只。15 w后光镜下作组织病理学分析及组织计量学测定;利用Van Gieson胶原纤维染色法观察胶原纤维沉积变化;ELISA测定血清蛋白聚糖和生化检测各组股骨头组织匀浆的醛糖还原酶(AR)活性。结果 CON组骨小梁粗厚、有完整的成骨细胞区。DM组骨小梁稀疏细薄、细胞核固缩;生长板厚度、生长板细胞柱密度均明显小于对照组(P0.01);生长板钙化区胶原纤维明显增多;AR活性增大(P0.01);蛋白聚糖含量明显增加(P0.01)。Gen组骨小梁排列较紧密;生长板较DM组厚、生长板细胞柱密度大(P0.01)。AR活性降低(P0.01),蛋白聚糖下调(P0.01)。结论染料木黄酮可减轻糖尿病生长板的萎缩退化和骨质疏松变化,防止生长板过早闭合。     

染料木黄酮诱导前列腺癌DU-145细胞凋亡的研究

【摘要】〓目的〓探讨染料木黄酮诱导前列腺癌细胞系DU-145细胞凋亡的作用。方法〓在Caspase抑制剂Z-VAD存在或不存在的情况下,以染料木黄酮作用于前列腺癌DU-145细胞,采用MTT法检测细胞存活率、Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡、PI染色法流式细胞术检测细胞周期、JC-1染色法流式细胞术测定细胞线粒体膜电位(△ψm),比色检测试剂盒测定caspase-8活性。结果〓染料木黄酮能明显降低前列腺癌DU-145细胞的存活率、诱导癌细胞凋亡、降低△ψm及提高caspase-8活性(全部P<0.05)。Z-VAD能够逆转Gen抗前列腺癌的效应。结论〓染料木黄酮使细胞阻滞于G0和G1,分别通过凋亡信号通路的外源性和内源性途径,诱导前列腺癌细胞凋亡。     

氟伐他汀对骨质疏松大鼠骨折愈合过程中血管内皮生长因子的影响

目的探讨氟伐他汀对骨质疏松大鼠骨折愈合过程中血管内皮生长因子（VEGF）的影响。方法卵巢切除后3个月已经出现骨质疏松的SD大鼠72只,于股骨中段制造骨折模型,再随机分为给药组和对照组,每组36只,给药组手术次日给予10mg/kg.d氟伐他汀灌胃,疗程为6w,对照组给予安慰剂。利用免疫组化及原位杂交检测骨折愈合过程中给药组和对照组骨折后3、7、14、21、28和42d骨痂中VEGF、VEGF mRNA的表达,并用真彩色图像分析仪作图像分析。结果给药组和对照组在骨折愈合过程中VEGF及VEGF mRNA基因表达的细胞定位无差别,且表达模式基本相似。术后14d,阳性细胞的阳性程度给药组比对照组显著性强（P〈0.05）。结论氟伐他汀对骨质疏松大鼠骨折愈合过程中VEGF的合成分泌有一定促进作用。     

金雀异黄酮对去势大鼠骨质疏松的影响

目的观察金雀异黄酮对实验性骨质疏松大鼠骨密度(bonemineral density,BMD)和血清骨代谢生化指标的影响。方法切除SD雌性大鼠双侧卵巢建立骨质疏松动物模型,给予金雀异黄酮皮下注射,治疗8w后监测大鼠腰椎及股骨的骨密度,检测血清骨碱性磷酸酶(ALP)、血清钙(Ca)、血清磷(P)等骨代谢生化指标。结果去势后的大鼠腰椎及股骨的骨密度降低;采用金雀异黄酮治疗后骨密度明显升高,与阴性对照组的比较差异具有统计学意义(P<0.05),与假手术组比较无显著性差异。假手术组和金雀异黄酮组血清ALP活性低于阴性对照组。结论金雀异黄酮可调节骨代谢,显著提高骨质疏松大鼠的骨密度。     

红车轴草异黄酮对去卵巢大鼠骨质疏松防治作用的实验研究

目的探讨红车轴草异黄酮对去卵巢大鼠引起的大鼠骨质疏松症的防治作用。方法采用切除大鼠双侧卵巢方法建立大鼠骨质疏松模型，以尼尔雌醇作阳性对照，采用放射免疫法检测实验大鼠血清雌二醇（E2）、促黄体生成素（LH）、骨钙素（BGP）、白细胞介素6（IL-6），用生物化学法检测大鼠血浆抗酒石酸盐酸磷酸酶（TRAP）。同时用定量超声检测大鼠股骨近端超声振幅衰减（BUA）及大鼠股骨骨干重和骨灰重。结果红车轴草总异黄酮可显著提高E2水平，降低LH及BGP、TRAP和IL-6活性，显著提高实验大鼠股骨干重、灰重。同时大鼠股骨近端BUA明显升高。结论红车轴草异黄酮具有提高雌激素作用，可有效抑制骨吸收，降低骨转化率，加强成骨细胞活性，增加骨密度。对去卵巢引起的大鼠骨质疏松症具有明显的防治作用。     

Influence of ferutinin on bone metabolism in ovariectomized rats. I: role in preventing osteoporosis

Phytoestrogens play a role in maintaining bone mass in the post-menopausal period for their putative function as osteoprotective agents. The aim of the present study was to investigate the influence of Ferutinin, a phytoestrogen found in the plants of Ferula genus, on bone loss in ovariectomized rats. Such an animal model can simulate the various clinical syndromes deriving from osteoporosis. The effect of the daily oral administration of ferutinin to ovariectomized rats (dosed at 2 mg/kg per day for 30 and 60 days) was compared to that of estradiol benzoate (subcutaneously administered at the dose of 1.5 μg/rat twice a week). After the sacrifice, histomorphometrical analyses were performed on trabecular bone of L4–L5 vertebrae and distal femoral metaphysis, as well as on cortical bone of femoral diaphysis; biochemical parameters (bone mineral components and markers) were also evaluated from the rat serum. The histomorphometrical analyses of trabecular and cortical bone from lumbar vertebrae and femur showed that ferutinin has the same antiosteoporotic effect of estradiol benzoate on bone mass, and in some cases is even stronger. This fact suggests that it could prevent osteoporosis caused by severe estrogen deficiency in ovariectomized rats. The possibility of using ferutinin as an alternative to the commonly employed hormonal replacing therapy in post-menopausal women is discussed.     

骨疏康对卵巢切除大鼠骨质量及基因表达的影响

为进一步探讨骨疏康防治骨质疏松的作用机理。方法将２７只３月龄Ｗｉｓｔａｒ雌性大鼠随机分为三组：假手术组、卵巢切除术、骨疏康组。给药后１２周同时处死。取大鼠血、尿检测骨代谢生化指标,取得骨或腰椎测量骨密度,骨形态计量学参数、骨生物力学参数,取股骨和胫骨,测定骨粘连蛋白ｍＲＮＡ表达。     

反义寡核苷酸抑制胆管癌细胞血管内皮生长因子基因表达的效应

目的 探讨不同修饰的反义寡核苷酸（ＯＤＮ）抑帛因管内皮生长因子基因表达的效应。方法 将４种没修饰的反义ＶＥＧＦＯＤＮ分别加入 胆管癌细胞中,用ＲＴ－ＰＣＲ及免疫组织化学技术检测胆管癌细胞中ＶＥＧＦｍＲＮＡ及蛋白表达,同时测定各上清液刺激血管内皮细胞生长的受抑情况。结果 反义ＶＥＧＦＯＤＮ明显抑制胆管癌细胞ＶＥＧＦ基因及蛋白的表达,其中以工修饰的ＯＤＮ３抑制作用最强,在１０、２０μｍｏｌ／ＬＯＤＮ作     

rhBMP-2体外诱导骨质疏松大鼠BMSCs成骨及VEGF表达的研究

目的:观察骨形态发生蛋白-2对骨质疏松时骨髓基质干细胞(BMSCs)体外成骨及成骨因子VEGF表达的影响,为骨质疏松证的防治提供新的方法。方法:将20只6月龄,体重(300±20) g雌性SD大鼠双侧卵巢切除,术后3个月利用双能X线骨密度仪测量大鼠全身骨密度并与术前比较,确保造模成功,并运用全骨髓贴壁法培养骨质疏松大鼠BMSCs,倒置相差显微镜下观察BMSCs形态。随机把骨质疏松大鼠BMSCs 第2代(p2)细胞分成实验组和对照组,分别加入完全培养基(含rhBMP-2)、成骨诱导液进行成骨诱导。2周后茜素红染色法检测各组细胞钙结节的形成,酶标仪测定碱性磷酸酶活性及RT-PCR法检测VEGF的表达量。结果:(1)大鼠全身骨密度:手术前后大鼠全身骨密度分别为(0.179±0.007),(0.158±0.006) g/cm²,差异有统计学意义(t=4.180,P<0.05).(2)茜素红染色:BMSCs(P2)成骨诱导2周后实验组染色效果明显强与对照组。(3)碱性磷酸酶活性:BMSCs(P2)成骨诱导2周后碱性磷酸酶活性实验组明显高于对照组,分别为(15.62±1.27),(8.62±0.93) μg/prot,差异有统计学意义(t=7.709,P<0.01).(4)BMSCs(P2)成骨诱导2周后VEGF表达:实验组明显高于对照组,分别为3.723±0.143,0.950±0.072,差异有统计学意义(t=29.462,P<0.01).结论:rhBMP-2能提高去卵巢骨质疏松大鼠BMSCs的体外成骨能力,可促进成骨因子VEGF的表达,调控VEGF的表达可能是骨形态发生蛋白-2参与骨代谢的机制之一。     

复合脉冲电磁场对去卵巢大鼠骨质疏松预防作用的研究

目的 观察复合脉冲电磁场（PEMFs)对去卵巢大鼠骨质疏松（OP）的预防作用,以寻求防治OP的新途径。方法 3月龄SD大鼠随机分为正常对照组（N）、去卵巢组（O）、去卵巢加苯甲酸雌二醇处理组（E）及去卵巢加PEMFs处理组（EM）,治疗8周后测定骨生物力学、骨密度、骨形态学。结果 生物力学性能测定显示,经PEMFs治疗后股骨最大抗拉强度和椎骨最大抗压强度明显提高,较O组分别增加39．2％、37．9％（P＜0．01）,并超过N组和E组（P＜0．01）;EM组骨密度（BMD）尽管未恢复至正常（P＜0．05）,但与0组相比仍有明显改善（P＜0．01）,且已基本达到E组水平;骨形态学分析发现EM组骨小梁增宽、致密,分布有序,结构优于O组和E组。结论 PEMFs能够增加骱密度,改善骨生物力学性能和骨结构。鉴于其对OP的预防作用主要是通过提高骨质量来实现的,我们认为在PEMFs一定程度上优于苯甲酸雌二醇,是颇具潜力的预防骨质疏松的方法。     

低频脉冲电磁场对去势骨质疏松大鼠腰椎骨形态计量学的影响

目的观察低频脉冲电磁场(pulsed electromagnetic fields,PEMFs)对去势骨质疏松(osteoporosis,OP)大鼠腰椎骨组织形态计量学的影响,探讨PEMFs治疗OP的作用机制。方法将66只3月龄雌性SD大鼠随机分为假手术组(A组,n=12)、PEMFs实验组(B组,n=12)、雌激素对照组(C组,n=12)、卵巢切除对照组(D组,n=30)。A组大鼠仅切除卵巢周围部分脂肪组织,不切除卵巢;其余各组大鼠均切除双侧卵巢,制备去势OP大鼠模型。术后12周,B组采用低频PEMFs(8 Hz、3.8 mT、40 min/d)干预治疗30 d;C组采用倍美力0.065 mg/(kg.d)灌胃30 d;A、D组正常饲养。观察各组大鼠一般情况,术后12周检测血清雌二醇水平;干预治疗30 d后处死大鼠,取L4椎体作组织学切片,行静态骨形态计量学分析。结果术后D组大鼠毛发逐渐稀疏,活动迟缓,精神不振,反应较迟钝;A、B、C组大鼠毛发均光洁,精神及活动正常。术后12周,A组和D组大鼠血清雌二醇水平分别为(54.93±23.52)pg/mL和(31.99±23.45)pg/mL,比较差异有统计学意义(t=2.345,P=0.029)。干预治疗30 d后HE染色观察示,D组骨质变薄,骨髓扩大,骨小梁分布稀疏并变细,见断裂现象;A、B、C组骨小梁粗细一致,分布均匀,无断裂现象。B组大鼠L4椎体骨小梁面积百分比显著高于D组(P<0.05),也高于A、C组,但差异无统计学意义(P>0.05);骨小梁厚度显著高于D组(P<0.05),低于A、C组,但差异无统计学意义(P>0.05);骨小梁数量显著低于D组(P<0.05),高于A、C组,但差异无统计学意义(P>0.05);骨小梁分离度高于D组,低于A、C组,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 8 Hz、3.8 mT的PEMFs干预30 d可有效改善去势OP大鼠骨显微结构,增加骨小梁面积百分比、骨小梁厚度,降低骨小梁数量,对大鼠OP有良好的防治作用。