不同光质对蚂蟥生长和内在品质影响的研究

50 d实验期内,比较红光(610±10)nm、蓝光(450±10)nm、白光(全光谱)和自然光(full spectrum)对30日龄蚂蟥生长和内在品质的影响。结果表明:30~40日龄期间,蓝光对蚂蟥的促生长作用最强,红光组和白光组在50 d后表现出明显的促进蚂蟥生长的优势,红光和白光最终质量显著高于蓝光和自然光(P0.05);红光下蚂蟥特定生长率(SGR)、增重率、消化酶活力均高于其他各组(P0.05);白光下蚂蟥SOD,CAT,ALP酶活性最高,与其他各组相比有显著差异(P0.05);不同光质对蚂蟥水分、总灰分、酸不溶性灰分、p H和抗凝血酶活性影响不显著。蚂蟥50日龄后,红光下消化酶活性最高且生长最快,白光下抗逆酶活性最高,光质对蚂蟥内在品质无显著影响。     

黄芪对蚂蟥生长和免疫及相关基因表达的影响

为了研究黄芪对蚂蟥生长和免疫影响及作用机制,在蚂蟥养殖水中添加黄芪,使养殖水中黄芪质量分数分别为0,0.01%,0.03%,0.05%,0.07%,0.09%。养殖60 d后测定生长性能、消化酶和抗逆酶活性、内在品质以及生长激素(growth hormone,GH)、胰岛素样生长因子-1(insulin like growth factor,IGF-1)和消化酶相关基因相对表达量;同时观察和统计热应激对蚂蟥生存状况的影响,测定热激蛋白HSP70和免疫相关基因相对表达量。结果表明:黄芪组最终体质量、增重率和特定生长率、消化酶和抗逆酶活性以及GH,IGF-1和消化酶相关基因相对表达量均高于空白组,且随浓度的增加呈先升后降趋势,其中0.05%组显著高于其他组别(P<0.05);黄芪组与空白组蚂蟥内在品质无显著性差异。蚂蟥存活率与热应激处理时间呈负相关;随着热应激处理时间的延长,蚂蟥HSP70和免疫相关基因相对表达量呈先升高后降低趋势,热应激24 h时最高;黄芪组存活率、HSP70和免疫相关基因相对表达量均高于空白组,其中0.05%组显著高于其他组别(P<0.05)。综上,黄芪能提高蚂蟥消化酶、抗逆酶活性及相关基因的表达,促进蚂蟥生长、提高免疫能力、增加其抗热应激能力。建议在蚂蟥实际生产中添加0.05%黄芪以提高养殖效益。     

不同养殖密度和换水频率对蚂蟥生长和内在品质影响的研究

采用生物量测定、3,5-二硝基水杨酸比色法、对-棕榈酸硝基苯酯(ρ-NPP)比色法、福林-酚法等方法研究不同养殖密度和换水频率对蚂蟥生长、消化酶活性、生化指标和内在品质的影响。结果表明:蚂蟥的最终质量,特定生长率(SGR),增重率(WGR),淀粉酶,脂肪酶,蛋白酶活力,SOD,CAT,ALP酶活性与密度呈反比,与换水频率呈正比(P0.05);换水频率与水中氨氮、亚硝酸盐和硫化氢呈负相关,与溶氧量呈正相关;养殖密度和换水频率对蚂蟥水分、总灰分、酸不溶性灰分、p H和抗凝血酶活性影响不显著。因此,每亩50万条为较适宜的养殖密度,每72 h 1次为较适宜的换水频率。     

恒温越冬对蚂蟥生长及性腺发育的影响

为了探究恒温越冬对蚂蟥生长、性腺发育及内在品质的影响。将越冬期蚂蟥置于21℃的光照培养箱,以自然越冬蚂蟥为对照,越冬结束后测定蚂蟥的体质量、性腺质量及内在品质,石蜡切片观察蚂蟥精卵巢组织形态。结果表明,与自然越冬组相比,恒温越冬蚂蟥体质量是其2.35倍,雌雄性腺质量分别增加11.54%,48.33%,卵巢囊泡内卵黄期细胞和胶膜形成期细胞以及精巢囊腔内精原细胞和初级精母细胞均显著增加,抗凝血酶活性增加27.85%。综上,恒温能促进越冬蚂蟥生长、精卵细胞发育,提高抗凝血酶活性。     

不同月龄蚂蟥内在品质及最佳采收期研究

目的:比较不同月龄蚂蟥内在品质及生长的差异,为其药材质量控制及最佳采收期的确定提供理论依据.方法:水分、醇溶性浸出物、总灰分、酸不溶性灰分、抗凝血酶活性测定都参考20HD5年版<中国药典>;结果:各月龄采集的蚂蟥其品质均符合国家药典标准,其中醇溶性浸出物含量以9月龄蚂蟥最高,6月龄的其次,而且9月龄蚂蟥与4月龄、7月龄、11月龄的蚂蟥有显著性差异(P＜0.05);抗凝血酶活性含量以6月龄蚂蟥最高,10月龄其次,而且6月龄与4月龄、5月龄有显著性差异(P＜0.05),与其他月龄无显著性差异;6月龄的蚂蟥干重最高,与其他月份采集的有显著性差异(P＜0.05).结论:江浙一带人工养殖的蚂蟥最佳采收期为11月份(即6月龄).     

Wp-PKC对蚂蟥性腺发育影响的研究

蛋白激酶C(PKC)是一类广泛参与细胞增殖和发育的激酶,蚂蟥体内PKC(Wp-PKC)属于经典PKC.为探究Wp-PKC对蚂蟥生殖细胞发育的影响,在蚂蟥养殖水体中分别添加:17β-雌二醇(17β-E2)(100 ng·mL-1)、甲基睾酮(MT)(150 μg·L-1)、150 μg·L-1(MT)+0.5 mg·L-...     

夏枯草内在品质及生长特性对铅、铜、镉胁迫的响应

目的:研究不同浓度处理水平的铅(Pb)、铜(Cu)、镉(Cd)3种重金属单一胁迫对夏枯草内在品质及生长特性的影响.方法:以<中药材生产质量管理规范,GAP(试行)>和土壤环境质量标准为主要指导原则,设定不同浓度水平处理夏枯草植株,测定相关指标,结合统计方法进行分析比较.结果:接近土壤环境质量二级标准上限值时,夏枯草生长正常,减产幅度在正常范围内,果穗重金属含量也在<药用植物及制剂外经贸绿色行业标准>限值内,同时能一定程度上增加熊果酸的积累;栽培夏枯草土壤中的重金属Pb,Cu,Cd临界值分别可以确定为400,100,1.0 mg·kg~(-1).结论:低浓度胁迫对夏枯草毒害作用较低,同时能一定程度上增加熊果酸的积累,高浓度水平对夏枯草的毒害作用明显,3种重金属胁迫使植株各部位相应重金属含量增加的趋势大致相同.     

温度和体重对蚂蟥人工繁殖影响的研究

目的：确定蚂蟥的最佳产卵温度、体重以及孵化的最适温度。方法：在不同温度、体重条件下观察蚂蟥产卵和孵化。结果与结论：蚂蟥产卵和孵化的最适温度是25 ℃,产卵的最佳体重为20 g左右；温度能影响蚂蟥产卵前后的体重,而体重对其的影响不明显；当卵重在0.1～2.0 g时与孵出量成正比,当卵重大于2.0 g时孵出量反而有所下降。     

采收及加工方法对金边蚂蟥抗凝血酶活性影响的研究

研究了采收及不同加工方法对金边蚂蟥抗凝血酶活性的影响规律。分别设置了6种加工方法,4个部位和5个体重等级,采用凝血酶直接滴定法分别对各处理样品进行抗凝血酶活性测定。结果表明,在加工方法中,金边蚂蟥鲜品经冷冻干燥处理后其抗凝血酶活性最高,达1 303.56 U·g~(-1),而90℃烘干样品最低,为15.44 U·g~(-1);在不同部位中,金边蚂蟥头部的抗凝血酶活性最高,为226.42 U·g~(-1),尾部仅为102.12 U·g~(-1);在不同体重级别中,金边蚂蟥体重≤10 g时,抗凝血酶活性最高,为328.86 U·g~(-1),体重≥40 g时,抗凝血酶活性最低,为87.71 U·g~(-1)。综上所述,采收及不同加工方法对金边蚂蟥抗凝血酶活性均有显著性影响。在金边蚂蟥加工中应该选取体质量在20~30 g的金边蚂蟥,优先选用超低温冷冻干燥方法进行干燥,其次选用晒干方法进行干燥。     

不同温度和pH对蚂蟥消化道酶活性影响的初步研究

目的:测定和比较不同温度和pH条件下蚂蟥Whitmania pigra消化道内淀粉酶、蛋白酶及脂肪酶的活性.方法:实验设计了从7～ 52℃10个温度梯度,pH从2.2 ～11.2共10个梯度,测定不同温度及pH条件下蚂蟥消化道内淀粉酶、蛋白酶及脂肪酶活力的变化.结果:当温度在7 ～52℃,pH2.2～11.2,蚂蟥消化道内脂肪酶在温度为37℃,pH为8.2时酶活最大;淀粉酶在温度为37℃,pH为5.2时酶活最大;蛋白酶在温度为42℃,pH为3.2,9.2时酶活较大.结论:蚂蟥消化道内脂肪酶的最适温度为37℃,最适pH为8.2;淀粉酶最适温度为37℃,最适pH5.2;蛋白酶最适温度为42℃,最适pH为3.2,9.2.     

蚂蟥蛋白激酶C基因的克隆和表达分析

蛋白激酶C(PKC)是一类广泛参与细胞增殖和发育的蛋白激酶,但在雌雄同体动物蚂蟥性腺中的发育机制尚不清楚.为探究蛋白激酶C在蚂蟥生殖细胞的发育过程中的作用,该研究克隆蚂蟥PKC基因,进行生物信息学分析,采用荧光定量PCR技术进行雌雄性腺的表达分析.结果 表明:①克隆得到的Wp-PKC全长2 580 bp,相对分子质量7...     

蚂蟥Guamerin基因的克隆及吸食后时空表达分析

该研究对非吸血蛭蚂蟥体中弹性蛋白酶抑制剂基因(wp Guamerin)进行了克隆和生物信息学分析,同时对该基因在蚂蟥不同组织、不同吸食阶段的时空表达特点进行研究。结果表明,蚂蟥wp Guamerin基因全长295 bp,相对分子质量为9 145.95 Da,包含1个编码83个氨基酸的开放阅读框,与吸血蛭Guamerin氨基酸序列相似性均在29%~65%;wp Guamerin编码的蛋白无信号肽,属于亲水性蛋白,二级结构主要由α-螺旋、延伸链、折叠和无规则卷曲组成。wp Guamerin在肌肉中表达量显著高于唾液腺,在嗉囊和肠中无表达;吸食后wp Guamerin在肌肉和唾液腺的表达量分别在第1,3天达到最高。因此,wp Guamerin是有别于吸血蛭Guamerin的小分子多肽蛋白,在蚂蟥消化道中不表达,主要在肌肉中表达,吸食行为可刺激蚂蟥肌肉和唾液腺wp Guamerin基因的表达而不能诱导蚂蟥消化道wp Guamerin的表达。     

宽体金线蛭室内产茧、孵化及仔蛭饥饿研究

目的：建立宽体金线蛭室内网箱湿土养殖新模式,为中药材生产质量管理规范及规模化繁养殖提供参考依据。方法：以野外采捕的具有生殖环带的宽体金线蛭为试验材料,在室内采用网箱湿土法养殖,进行宽体金线蛭产茧、卵茧孵化及仔蛭饥饿试验研究。结果：亲蛭采用网箱湿土法养殖17d,其平均成活率为90％;产茧前具有生殖环带（土黄色）,产茧后生殖环带消失;亲蛭产卵茧后平均体重下降率达（29．94±0．01）％;产卵茧期间共收获卵茧79枚,平均产茧量为1．8枚／条,卯茧平均重量为（0．50±0．21）g／枚,平均长径和短径分别为（1．75±0．31）cm／枚和（1．10±0．18）cm／枚;卵茧在室温下（14—33℃）孵育34d,共孵出仔蛭865条,每枚卵茧孵出（11．4±2．0）条仔蛭,卵茧孵化率达92．57％。初孵仔蛭平均个体体重为（0．0205±0．0084）g。饥饿试验表明,在140d时,对照组存活11条水蛭,成活率仅22％,其平均个体体重为（0．1084±0．0877）g,仔蛭个体体重有随日龄的增加而增加趋势;饥饿组仔蛭在140d时全部死亡。结论：在适宜的条件下,采用网箱湿土养殖法,宽体金线蛭可在室内产茧,卵茧集中孵育及亲蛭和仔蛭分开饲养。     

不同提取法炮制对水蛭体外溶栓活性的影响

目的:研究炮制对水蛭体外溶栓活性的影响。方法:采用水提取法和仿生提取法对水蛭净制品、烫制品、酒制品进行提取,选用纤维蛋白平板法和纤维蛋白原平板法,以平板上透明圈面积为指标进行纤溶活性测定;并建立体外血栓模型,通过血凝块的失重比进一步评价水蛭不同炮制品的溶栓活性。结果:水蛭在炮制前后均能在纤维蛋白平板上产生透明圈。采用水提取法时,烫制品和酒制品的溶圈面积减小,炮制后纤溶活性降低,活性顺序为:净制品酒制品烫制品。而采用仿生提取法时,显示烫制和酒制后水蛭纤溶活性升高,活性顺序为:烫制品酒制品净制品。体外血栓模型中,血凝块失重比结果与纤溶活性测定结果一致,采取水提取法时,炮制使溶栓活性降低,而采用仿生提取法时显示炮制使溶栓活性增加。结论:与水提取法比较,仿生提取法更符合水蛭经口服后在人体内的消化吸收过程,其结果更有说服力。传统炮制可增强水蛭溶栓活性。     

不同产地野生和人工养殖蚂蟥内在质量比较研究

目的:探讨不同产地蚂蟥的内在质量差异性,为新品种筛选提供理论依据。方法:参考《中国药典》(2005年版)一部测定不同产地水蛭药材的水分、醇溶性浸出物、总灰分、酸不溶性灰分、抗凝血酶活性,采用高效液相色谱法测定其黄嘌呤,次黄嘌呤含量。结果:江宁试验基地人工养殖品种在醇溶性浸出物、总灰分、酸不溶性灰分、抗凝血酶活性、黄嘌呤、次黄嘌呤等含量上均相对高于其他种群,浙江桐乡基地大面积养殖品种多项指标高于野生品种。结论:经过人工育苗、养殖的蚂蟥品质优良,建议大面积推广养殖。     

手针与电针对急性运动大鼠骨骼肌肌浆网Ca~(2+)的影响

目的:研究手针和电针对急性游泳运动大鼠骨骼肌肌浆网Ca2+含量、Ca2+-ATP酶活性的影响,探讨针灸增强运动能力的作用机制。方法:60只SD雄性大鼠随机分为空白对照组、模型组、手针组、电针组。手针组和电针组在急性游泳运动前运用针刺和电针两种不同的方法,对"大椎"命门"环跳"足三里"穴进行20 min刺激。其中手针组运用捻转手法,每间隔3~5 min运针1次(频率约为120~140次/min),每次运针30~60 s;电针组在针刺后接BX型电针仪,电针参数为音频脉冲调制波,频率为500~800 Hz,电流为0.20~0.25 mA。采用比色法分别测定骨骼肌肌浆网Ca2+含量、Ca2+-ATP酶活性指标。结果:骨骼肌肌浆网Ca2+含量模型组明显低于空白对照组、手针组和电针组(P<0.01);肌浆网Ca2+-ATP酶活性模型组亦明显低于空白对照组、手针组和电针组(P<0.05,0.01)。手针组肌浆网Ca2+-ATP酶活性比空白对照组明显升高(P<0.05);手针组Ca2+含量及Ca2+-ATP酶活性与电针组比较,两组间差异无显著性意义(P>0.05)。结论:针刺可以提高大鼠肌浆网Ca2+-ATP酶活性,增强肌浆网对细胞内Ca2+浓度的调节作用,参与肌肉兴奋收缩偶联并维持肌细胞胞质Ca2+稳态,这是针灸增强运动能力的重要因素之一。