miR-214和miR-181c在胃癌组织中的表达及预后价值

目的探讨微小RNA-214（miR-214）和miR-181c在胃癌组织中的表达水平及对预后的影响。 方法选取2014年1月至2015年1月于川北医学院附属医院收治的68例胃癌患者为研究对象,均接受手术治疗,出院后随访1~60个月。利用实时荧光定量PCR技术检测患者癌组织和癌旁组织miR-214、miR-181c相对表达量;利用Kaplan-Meier曲线进行生存分析;Cox多因素回归分析影响胃癌患者预后的独立危险因素。 结果胃癌组织中miR-214、miR-181c表达水平均明显低于癌旁组织,差异有统计学意义（P<0.05）。根据miR-214、miR-181c表达均值将患者分为高表达组和低表达组,miR-214、miR-181c表达水平与年龄、性别、淋巴结是否转移无关,与TNM分期、肿瘤分化程度有关（P<0.05）。患者总生存率为44.12%,miR-214低表达组和高表达组术后5年累积生存率分别为35.71%、57.69%,两组间比较差异有统计学意义（P=0.035）;miR-181c低表达组和高表达组术后5年累积生存率分别为35.55%、60.87%,差异有统计学意义（P=0.024）。Cox多因素回归分析结果显示,TNM分期高（HR=1.569,95% CI：1.029~2.391,P=0.036）、miR-214低表达（HR=1.643,95% CI：1.294~2.087,P<0.001）及miR-181c低表达（HR=1.327,95% CI：1.045~1.685,P=0.021）是影响胃癌患者预后的独立危险因素。 结论miR-214、miR-181c在胃癌组织中表达显著下调,与胃癌患者临床病理参数及不良预后有关,参与胃癌的发生发展过程。     

miR-153在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨miR-153在胃癌中的表达及其临床意义。方法:收集49例胃癌根治术后组织和配对癌旁正常组织标本,采用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-153的表达水平,并分析其与胃癌临床TNM分期、肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移等临床病理参数之间的关系。结果:miR-153在胃癌组织中的表达量显著低于相应癌旁正常组织(P0.01),miR-153的表达量与胃癌淋巴结转移有关(P0.05),与民族、性别、年龄、分化程度、肿瘤大小、临床TNM分期等病理参数无关(P0.05)。结论:miR-153在胃癌组织中低表达,提示miR-153可能与胃癌的发生发展有关。     

miR-143和miR-145在胃癌中的表达及功能研究

目的：探讨miR-143和miR-145在胃癌组织中的表达情况,观察其生物学功能。方法通过高通量芯片检测比较11对胃癌原发灶及其配对肝转移灶的miRNA表达谱,采用Real-time PCR方法观察miR-145和miR-143在55例胃癌组织中的表达情况。同时使用Transwell方法观察其对细胞转移能力的影响。结果 miR-143和miR-145在胃癌组织中的表达明显低于癌旁正常组织（miR-143：0．028±0．005比0．052±0．014,P＝0．058;miR-145：0．922±0．135比1．772±0．285,P＝0．007）,在转移灶中的表达明显低于原发灶（miR-143：0．059±0．025比0．182±0．045,P＝0．021;miR-145：0．164±0．076比0．594±0．283,P＝0．042）,相关性分析显示,miR-143和miR-145表达具有显著相关性（r＝0．400, P＝0．000）。体外实验显示,两者可协同抑制胃癌细胞系转移。结论 miR-145和miR-143可能参与胃癌转移进程,并且两者可能发挥协同作用。     

miR-155和miR-30a在胃癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨胃癌组织和癌旁组织miR-155和miR-30a的表达差异及其临床意义.方法 收集手术切除的胃癌标本52例,采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应( RT-qPCR)检测癌及癌旁组织标本miR-155和miR-30a的表达水平,分析其与临床病理的关系.结果 miR-155在胃癌组织中表达量(0.84 ±2.27)显著高于其在配对癌旁组织中的表达值(0.28 ±0.56,P＜0.05);miR-155高表达与淋巴结转移有关(P＜0.05).miR-30a在胃癌组织中表达量(3.16±8.11)显著低于其在配对癌旁组织中的表达值(15.87±35.58,P＜0.05).miR-30a的低表达与肿瘤侵犯层次、淋巴结转移有关(P＜0.05).结论 miR-155和miR-30a与胃癌发生发展密切相关,可能成为胃癌的潜在诊断及治疗靶点.     

miR-125a在胃癌组织中的表达及临床意义

探讨miR-125a在胃癌中的表达及临床意义。选取2014年7月—2015年12月我院收治的50例胃癌患者的肿瘤组织和癌旁组织。采用RT-PCR技术检测miR-125a-3p和miR-125a-5p的表达水平。胃癌组织中miR-125a-3p、miR-125a-5p表达量均低于癌旁组织,差异有统计学意义(P0.05)。胃癌组织中miR-125a-3p、miR-125a-5p的表达与分化程度、肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移有关(P0.05)。随着患者肿瘤恶性程度的增加,miR-125a-3p、miR-125a-5p的表达不断降低,胃癌患者在miR-125a-3p、miR-125a-5p表达水平方面,肿瘤直径≤5 cm高于肿瘤直径5 cm、临床分期Ⅰ~Ⅱ期高于Ⅲ~Ⅳ期、无淋巴结转移高于淋巴结转移,且差异均有统计学意义(P0.05)。胃癌组织中miR-125a-3p与miR-125a-5p的表达呈正相关(r=0.397,P=0.016)。胃癌组织中miR-125a低表达;miR-125a的表达与胃癌分化程度、肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移有关;miR-125a在胃癌发病、进展中起类似于抑癌基因的作用。     

miR-622在胃癌细胞中的表达及其功能的研究

目的 研究miR-622在胃癌细胞中的表达,探讨miR-622在胃癌中的生物学功能.方法 采用实时荧光定量PCR检测miR-622在胃癌细胞中的表达,以胃癌细胞SGC-7901和NCI-N87为模型瞬时转染miR-622寡核苷酸前体或抑制体,通过克隆形成、侵袭和划痕实验验证其在胃癌细胞中的功能.结果 荧光定量PCR实验结果表明:miR-622在胃癌细胞SGC-7901中相对表达量为1.29±0.58,而在NCI-N87细胞中相对表达量为10.96±1.02.在SGC-7901细胞中转染了miR-622 寡核苷酸前体,克隆形成率为76％.划痕试验中愈合能力为(11±7)μm,胃癌细胞侵袭能力为(732±3)个,与对照组相比差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 miR-622能够促进胃癌细胞克隆形成、迁移和侵袭.     

miR-449b多态性位点rs10061133差异调控LHCGR表达

目的探究miR-449b多态性位点rs10061133 AG在卵巢功能不全(POI)中的可能作用机制。方法生物信息学预测可能与POI相关的miR-449b潜在靶基因。双荧光素酶检测LHCGR是否为miR-449b的靶基因以及miR-449b rs10061133不同基因型对LHCGR表达调控的影响。结果生物信息学预测LHCGR为miR-449b的潜在靶基因,双荧光素酶测定证实LHCGR是miR-449b的靶基因。与GG基因型相比,rs10061133 AA基因型显著减弱LHCGR 3’UTR的荧光素酶活性。结论 LHCGR为miR-449b的靶基因,多态性位点rs10061133 AG可能通过差异调控LHCGR表达在POI的发生发展中发挥作用。     

miR-23a与RUNX1在胃癌中的表达及其临床意义

目的:探讨miR-23a与转录因子RUNX1在胃癌中的表达情况及意义。方法:运用荧光素报告基因活性分析检测miR-23a与RUNX1基因3’UTR区结合情况。收集胃癌患者手术标本(胃癌及癌旁组织)87例,分别运用原位杂交、免疫组化方法检测胃癌组织及癌旁组织中miR-23a,RUNX1的表达。结果:荧光素酶报告基因活性分析提示RUNX1是miR-23a的靶基因。在87例胃癌组织中miR-23a阳性表达率为82.76%,RUNX1蛋白阳性表达率为14.94%,与癌旁对照组(分别为25.29%,80.46%)比较,差异均具有统计学意义(P<0.01);有淋巴结转移组的miR-23a的表达明显高于无淋巴结转移组(P<0.01),且miR-23a的表达随着胃癌浸润深度和临床分期演进而上调(P<0.01);有淋巴结转移组的RUNX1的表达明显低于无淋巴结转移组(P<0.01),且RUNX1的表达随着胃癌浸润深度和临床分期演进而下调(P<0.01);miR-23a与RUNX1的表达呈明显负相关(r=-0.474,P=0.004)。结论:RUNX1是miR-23a直接调控的靶基因;miR-23a高表达和RUNX1蛋白低表达可能是胃黏膜恶性转变以及发生浸润转移的重要生物学标志。     

miR-126在胃癌中的表达及其靶基因Crk的鉴定

目的:分析miR-126在胃癌中的表达水平并鉴定miR-126的靶基因,以阐明miR-126在胃癌发生机制中的功能。方法:采用qRT-PCR分别检测miR-126在胃癌细胞株、正常胃黏膜组织、永生化胃黏膜上皮细胞、胃癌及配对癌旁组织的表达水平,并与胃癌组织的临床病理指标进行相关性分析。采用生物信息学方法预测出miR-126的靶基因,并通过荧光素酶报告系统加以验证;采用qRT-PCR及Western印迹法检测miR-126对靶基因mRNA及蛋白质表达水平的影响。结果:qRT-PCR检测结果显示,miR-126在胃癌细胞株中的表达水平明显低于其在正常胃黏膜组织及永生化胃黏膜上皮细胞株的表达水平。miR-126在60例病人的胃癌组织中表达的水平显著低于其在配对癌旁组织中表达的水平;且胃癌组织miR-126表达水平低者,肿瘤组织体积较大,胃壁浸润较深,易发生淋巴结转移,病理分期也较晚。生物信息学分析提示Crk mRNA的3′UTR含有miR-126直接作用的靶序列,荧光素酶报告系统检测进一步验证了该靶序列,qRT-PCR及Western印迹法证实miR-126对Crk蛋白表达的调控发生在转录后水平。结论:miR-126有望成为研究胃癌的新型标志物;miR-126通过对其靶基因Crk的调控参与了胃癌的发生、发展过程。     

miR-490-3p在胃癌中的表达及其临床价值

目的 探讨miR-490-3p表达水平与胃癌临床病理特征和预后的关系。方法 通过实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测80例胃癌患者的癌组织与癌旁正常组织中miR-490-3p的相对表达量,分析其与临床病理特征的关系,采用Kaplan-Meier曲线、Cox比例风险回归模型进行预后分析。结果 miR-490-3p在癌组织中的相对表达量为(0.652±0.072),低于癌旁正常组织中的(1.259±0.069),差异有统计学意义(t=40.528,P<0.05);miR-490-3p表达与浸润深度、淋巴结转移及TMN分期显著相关(P<0.05);miR-490-3p低表达和高表达患者无进展生存期差异有统计学意义(23个月vs 30个月,χ²=8.583,P=0.03);miR-490-3p、淋巴结转移及TNM分期是胃癌预后的独立影响因素(HR=2.396、0.472、0.230,均P<0.05)。结论 mi R-490-3p表达降低可促进胃癌的增殖、分化和迁移,可成为胃癌诊断和预后的潜在分子标志物。     

miR-200c在腹膜透析流出液细胞中的表达变化及意义

目的检测腹膜透析(PD)患者PD流出液细胞发生上皮-间充质细胞转换(EMT)的分子标志物蛋白及miR-200c的表达,初步探讨miR-200c与人腹膜间皮细胞(HPMCs) EMT的关系。方法随机选取PD患者28例,将其分为新开管组(12例)和PD≥6个月组(16例),分离培养并鉴定2组患者PD流出液细胞;通过实时定量荧光(Realtime)PCR检测流出液细胞中miR-200 c的表达;利用Realtime PCR及蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测流出液细胞中E-钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、纤维连接蛋白(FN)、胶原蛋白(Collagen)的mRNA及蛋白表达。结果 PD流出液细胞经鉴定为HPMCs,不同透析龄患者流出液细胞存在形态学改变。新开管组流出液HPMCs中miR-200c相对表达量为(7. 55±0. 34),PD≥6个月组流出液HPMCs中miR-200c的相对表达量为(1. 7±1. 1),较新开管组明显下降(P 0. 01); PD≥6个月组患者流出液HPMCs中E-cadherin mRNA及蛋白表达均显著低于新开管组(P 0. 05),而在PD≥6个月组流出液HPMCs中Vimentin、Col-1及FN mRNA及蛋白表达明显高于新开管组(P 0. 05)。结论 PD患者腹透流出液细胞经证实为HPMCs,并表达miR-200c;随PD时间延长,miR-200c表达显著降低并同时伴有EMT发生,提示miR-200c与HPMCs的EMT相关,并可能参与了HPMCs的EMT的调控。     

miR-155和miR-21在乳腺癌组织中的表达

微小RNA(miRNA)是近年来发现的一类新型内源性小分子非编码RNA[1],参与调控许多细胞生理过程,它们的异常表达与癌症发生密切相关[2].本研究旨在探讨miRNA家族成员miR-155及miR-21在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌临床病理学特征的关系.一、材料和方法1.标本收集:收集2007年7月至2007年12月于复旦大学附属中山医院普外科住院治疗、资料完整的36例女性乳腺癌的乳腺组织标本,包括肿瘤组织、癌旁组织和正常组织.     

miR-130b和RUNX3mRNA在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的 研究miR-130b和RUNX3mRNA在胃癌组织中的表达,并评价miR-130b对抑癌基因RUNX3表达的影响.方法 用荧光定量PCR技术检测40对胃癌组织及其对应的癌旁正常胃黏膜组织中miR-130b和RUNX3mRNA的表达量;用免疫组织化学SP法检测RUNX3蛋白的表达.结果 胃癌组织中miR-130b的表达显著高于对应的癌旁组织(2.18±3.75)比(2.59±3.45),P＜0.05;而胃癌组织中RUNX3mRNA的表达显著低于对应的癌旁组织(8.76±2.82)比(7.58±2.87),P ＜0.05.miR-130b和RUNX3mRNA的表达与胃癌的淋巴结转移、临床分期有关(P＜0.05),而与患者的年龄、性别、肿瘤大小、远处转移、有无浸润周边器官组织无关(均P ＞0.05).miR-130b的表达与RUNX3蛋白的核表达、细胞核+细胞质的表达存在负相关(P＜0.05),而与RUNX3mRNA、RUNX3蛋白的细胞质表达无相关性(P＞0.05).结论 miR-130b和RUNX3mRNA的异常表达与胃癌预后有关;miR-130b可能通过减少RUNX3蛋白的表达水平导致肿瘤的发生.     

miR-105-5p在胃癌中的表达及其意义与生物学功能

目的:探讨miR-105-5p在胃癌(GC)中的表达情况、临床意义及生物学功能及其潜在的作用机制。方法:应用real-time PCR检测miR-105-5p在GC组织与癌旁组织以及不同GC细胞(MGC-803,MKN-1,SGC-7901,BGC-823和AGS)与正常胃黏膜细胞(GES-1)中的表达;分析miR-105-5p的表达与GC临床病理特征及患者预后的关系;采用Transwell迁移和侵袭实验以及MTT实验检测miR-105-5p对GC细胞迁移与侵袭能力以及增殖能力的影响;应用生物信息学工具预测miR-105-5p的下游靶点,并应用荧光素酶报告实验以及Western blot分析miR-105-5p对靶点的调节作用。结果:miR-105-5p在GC组织的表达明显高于癌旁组织,在各GC细胞中的表达均明显高于正常胃黏膜细胞(均P0.05)。miR-105-5p的表达水平与肿瘤大小(P=0.020)和远处转移(P=0.004)明显有关;miR-105-5p低表达GC患者的总体生存率明显高于miR-105-5p高表达组的患者(P=0.001 8)。选择miR-105-5p表达量相对较低的BGC-823细胞和相对较高的MKN-1细胞,分别转染miR-105-5p模拟物和miR-105-5p抑制物,转染后结果显示,BGC-823细胞的迁移、侵袭和增殖能力明显增强,而MKN-1细胞的迁移、侵袭和增殖能力明显抑制(均P0.05)。生物信息学分析发现,DIRAS家族GTP结合RAS样3(DIRAS3)可能是miR-105-5p的作用靶点;荧光素酶报告实验显示,miR-105-5p能够负向调节DIRAS3-3'UTR的荧光素酶活性;Western blot显示,转染miR-105-5p模拟物的BGC-823细胞中DIRAS3的表达明显下调,转染miR-105-5p抑制物的MKN-1细胞DIRAS3的表达明显上调(均P0.05)。结论:miR-105-5p在GC中表达升高,其可能通过靶向作用于DIRAS3增强GC细胞的迁移、侵袭及增殖,进而促进GC的发生发展。     

miR-339-3p和miR-339-5p在体外胃癌细胞中的表达和意义

目的观察人胃癌细胞株及正常人胃黏膜上皮细胞株中miR-339-3p和miR-339-5p的表达水平,通过功能获得型（gain of function）实验验证miR-339-3p和miR-339-5p与胃癌的相关性,并阐明二者在肿瘤发生中的意义。方法采用SYBR GreenI嵌合荧光法实时定量PCR技术分别检测人正常胃黏膜上皮细胞GES-1,胃癌MKN．45、SGC．7901及BGC-823细胞株中miR-339-3p和miR-339-5p的表达水平;将外源性miR-339-3pmimics和miR-339-5p mimics转染胃癌MKN．45细胞株,采用RT-PCR法检测其转染率,并应用流式细胞术和CCK-8法分别检测转染72h后MKN．45细胞的凋亡及增殖能力的变化。结果miR-339-3p和miR-339-5p在胃癌MKN-45、SGC一7901及BGC-823细胞株中的表达均下调;与对照组相比,转染miR-339-3pmimics及miR-339-5pmimics后,MKN-45细胞株的凋亡率明显增高P〈0．05）,而增殖能力明显减弱（P〈0．01）。结论miR-339-3p和miR-339-5p在3种胃癌细胞株中均呈低表达。miR-339-3p和miR-339-5p可能参与了胃癌细胞的增殖与凋亡机理。     

直肠癌组织中miR-155和miR-200c的表达差异及意义

目的 分析人直肠癌组织miR-155和miR-200c的表达差异及其与直肠癌临床病理特征的关系.方法 选取手术切除的卣肠癌标本71例,以正常黏膜为对照,采用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)对miR-155和miR-200c作定量分析.结果 相对于正常黏膜组织,miR-155和miR-200c在直肠癌组织中表达上调,差异有统计学意义(P<0.05).miR-155的表达与患者年龄有关(P<0.05);miR-200c的表达与患者血清癌胚抗原(CEA)水平有关(P<0.05).不同的直肠癌性别、临床分期、浸润深度、淋巴结转移、远处转移和分化程度间miR-155、miR-200c表达的差异无统计学意义(P>0.05).结论 miR-155和miR-200c在直肠癌组织中显著表达,可能参与直肠癌的发生过程.miR-200c对于直肠癌町能具有潜在的辅助诊断、疗效判断及预后评估意义.     

上调miR-449a表达对肝癌细胞生长和侵袭能力的影响

目的:探讨miR-449a在肝癌(HCC)细胞中的表达及其对HCC细胞生物学行为的影响。方法:用qRT-PCR检测miR-449a在正常肝细胞L02和4种HCC细胞株(HepG2、Hep3B、SMMC-7721和Bel-7402)的表达。用脂质体法将miR-449a模拟物或阴性对照序列转染HCC细胞后,分别用CCK-8法、流式细胞术、Transwell小室实验检测细胞增殖、细胞周期、侵袭能力的变化,并观察以上两种不同转染的HCC细胞在裸鼠体内的成瘤情况。结果:miR-449a在4种HCC细胞株的表达水平均明显低于L02细胞(均P0.05),其中在Bel-7402细胞表达的水平最低。与转染阴性对照序列的Bel-7402细胞比较,转染miR-449a模拟物的Bel-7402细胞增殖活性明显降低、G_1/S期阻滞明显增加、穿室细胞数明显减少(均P0.05);与转染阴性对照序列的Bel-7402细胞比较,转染miR-449a模拟物的Bel-7402细胞在裸鼠体内成瘤后的移植瘤质量与体积均明显减小(0.748 g vs.1.234 g;33.667 mm~3 vs.1 400.500 mm~3,均P0.05)。结论:HCC细胞中miR-449a表达降低,上调miR-449a表达可以抑制HCC细胞在体内外的生长。     

miR-539-5p、CAAP1在胃癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨微小RNA(miR)-539-5p、Caspase活性和凋亡抑制因子1(CAAP1)在胃癌组织中表达及其临床意义。方法 2018年1月～2019年12月我院接受手术治疗胃癌组织标本及对应的癌旁组织102例,检测癌组织miR-539-5p、CAAP1表达水平,探讨miR-539-5p、CAAP1表达与临床病理参数及预后的关系。Pearson法分析miR-539-5p与CAAP1表达相关性。Kaplan-Meier法分析胃癌病人生存期。采用Cox回归模型分析胃癌病人预后的影响因素。结果 胃癌组织中miR-539-5p表达水平低于癌旁组织,CAAP1表达水平高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。胃癌组织miR-539-5p与CAAP1表达水平存在负相关性(P=0.000)。胃癌组织miR-539-5p、CAAP1表达均与TNM分期、浸润深度、淋巴结转移、肿瘤直径显著相关(P<0.05)。miR-539-5p高表达组3年生存率高于低表达组(P=0.045),CAAP1高表达组3年生存率低于低表达组,差异有统计学意义(P=0.015)。Cox回归显示,TNM分期、...     

Menin在胃癌细胞中的表达

我们选取5株不同分化程度的人胃癌细胞,检测Menin的表达,现报道如下. 一、材料与方法 1.材料和细胞培养:Trizol、逆转录(RT)试剂盒、聚合酶链反应(PCR)试剂盒、荧光二抗、辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗、Menin和甘油醛-3-磷酸脱氢酶( GAPDH)抗体购自美国Santa公司.人胃癌细胞AGS、BGC-823、SGC-7901、MKN-28和人胃黏膜上皮细胞GES-1均为本实验室保存,细胞常规培养并进行后续实验. 2.RT-PCR检测:采用Trizol试剂,按说明书提取细胞总RNA,应用鼠白血病病毒(MMLV)逆转录酶将总RNA逆转录成cDNA并进行扩增和琼脂糖凝胶电泳分离,用Tanon-2500凝胶成像进行检测.     

胃癌组织中miR-497表达及其生物学意义

目的检测胃癌组织和癌旁组织中miR-497的表达差异,寻找其下游作用靶点。方法选取2010-2013年期间在中国医科大学附属第一医院胃肠外科手术切除的94例胃癌及其癌旁组织。用RT-PCR法定量检测miR-497在其中的表达;在线软件预测miR-497靶基因,用阴性对照及miR-497-mimics转染SGC-7901细胞系,RT-PCR及Western检测胃癌细胞miR-497过表达后靶点基因mRNA及蛋白水平的改变;MTT法检测miR-497-mimics组（miR-497过表达）细胞株与阴性对照组间对5-氟尿嘧啶（5-FU）化疗的敏感性。结果①miR-497表达量在胃癌组织中明显低于癌旁组织,差异有统计学意义（P〈0．01）。②BCL2L2被预测为miR-497的靶基因,miR-497在胃癌SGC-7901细胞中过表达后BCL2L2蛋白表达在miR-497-mimics组细胞中明显弱于阴性对照组细胞,BCL2L2mRNA在2组细胞中的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。miR-497-mimics组细胞对5-FU的Ic50值明显低于阴性对照组细胞（P=0．0046）。结论miR-497在胃癌组织中低表达,BCL2L2为miR-497的靶基因,miR-497过表达可提高胃癌细胞对5-Fu的敏感性,这为进一步研究miR-497与BCL2L2在胃癌中的作用及治疗提供了新的方向。