十四种蛇胆胆汁酸成分的高效薄层色谱分析

本文应用高效薄层色谱对十四种蛇胆胆汁酸进行了分析,并用薄层扫描法对其中的牛磺胆酸进行了含量测定。结果表明,不同蛇胆的胆汁酸有相似的化学成分,但其主要成分之一的牛磺胆酸含量不同。     

基于1H-NMR结合LC-MS技术分析熊胆粉及常见胆类中药中的胆酸类成分

目的 建立基于核磁共振氢谱技术（¹H-NMR）结合液质联用技术（LC-MS）的分析方法,阐明熊胆粉中胆酸类成分组成,找出熊胆粉与其他常见胆类中药中的差异性成分。方法 利用¹H-NMR非靶标分析熊胆粉及其他常见胆类中药的化学成分组,通过信号归属表征熊胆粉中胆酸类成分组成,以¹H-NMR图谱分段积分后峰面积为变量进行多元统计分析。利用LC-MS对熊胆粉及其他常见胆类中药中10个胆酸类成分（胆酸、熊去氧胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸、牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、甘氨熊去氧胆酸、甘氨猪去氧胆酸、牛磺胆酸、甘氨胆酸）进行含量测定,并以含量为变量进行多元统计分析。结果 基于¹H-NMR图谱及多元统计分析发现胆酸类成分为胆类中药的主要成分,也是熊胆粉与其他常见胆类中药的主要差异性成分。结合文献及对照品比对,从熊胆粉中初步鉴定出7个胆酸类成分。进一步结合LC-MS含量测定结果和多元统计分析验证熊胆粉与其他常见胆类中药的主要差异性胆酸类成分为熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸、牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸。结论 熊胆粉与其他常见胆类中药的胆酸类成分存在显著差异。与其他胆类中药相比,熊胆粉中熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸及其牛磺型结合胆酸含量较高。¹H-NMR技术具有对化学成分组全面、快速分析的优势,可与LC-MS检测相互补充,共同应用于中药复杂体系成分分析和代谢组学的深入研究。     

蛇胆中胆汁酸类化学成分分析

蛇胆作为传统的名贵中药广泛应用于多种名优中成药的制备,胆汁酸为其主要活性成分。阐明蛇胆中的胆酸类成分,对于建立完整的蛇胆质量控制方法和阐明药效物质均具有重要意义。该文首先利用1H-NMR技术对蛇胆提取物非靶标性检测,再利用自动馏分接收器剔除蛇胆中的牛磺胆酸部分,收集目标成分,浓缩处理后利用LC-MS对其中的胆酸类成分深入分析。非靶标检测结果表明胆汁酸为蛇胆的主要成分,结合文献及对照品比对,从蛇胆1H-NMR图谱中初步归属了6个胆酸类成分,分别为鹅去氧胆酸、胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、牛磺胆酸、牛磺去氧胆酸和甘氨胆酸。由于其中牛磺胆酸含量过高从而影响微量成分的检出,通过自动接收器剔除蛇胆中的牛磺胆酸后,将处理过的蛇胆提取物经LC-MS平台检测,通过多级质谱数据分析,保留时间匹配,并结合对照品及数据库搜索,共发现并鉴定了57个胆酸类成分。该文基于1H-NMR和LC-MS平台并半制备蛇胆化学成分对蛇胆中胆酸类成分进行了全面、系统地表征,对蛇胆的质量控制和评价方法的建立具有一定的参考价值。     

熊胆粉不同极性部位HPLC指纹图谱及化学模式识别研究

目的 建立熊胆Fel Ursi粉不同极性部位的HPLC指纹图谱,比较不同提取部位化学成分之间的差异,为全面评价熊胆粉的质量评价提供参考。方法 将熊胆粉分别用醋酸乙酯、三氯甲烷、丙酮、无水乙醇、乙腈依次提取,浓缩干燥,用甲醇溶解,建立HPLC指纹图谱,并采用相似度评价系统软件进行数据分析。结果 10批熊胆粉醋酸乙酯部位共有模式共标记6个共有峰,三氯甲烷部位共有模式共标记8个共有峰,丙酮部位共有模式共标记8个共有峰,乙腈部位共有模式共标记10个共有峰,乙醇部位共有模式共标记16个共有峰,5种溶剂提取物均指认了4个共有指纹峰（牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸）。综合聚类分析和主成分分析（principal component analysis,PCA）结果,发现相同产地的熊胆粉,受不同厂家加工方法不同的影响,也存在一定的质量差异。通过正交偏最小二乘-判别分析（orthogonal partial least squares- discriminant analysis,OPLS-DA）,发现牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸、乙醇部位10号峰、乙腈部位1、2号峰可能是熊胆粉质量差异的主要标志性成分。结论 所建立的HPLC指纹图谱可以反映熊胆粉的化学成分分布,为熊胆粉的整体质量评价提供参考,并为熊胆粉谱效关系研究提供一定依据。     

天然熊胆粉与人工合成熊胆粉的红外吸收特征比较

熊胆为中医药瑰宝,自古以来被视为中医药圣药,雄居各胆之首,为名贵中药.来源于熊科动物黑熊Selenarctos thibetanus Cuvier、棕熊 Ursus arctosL.的干燥胆或黑熊引流之胆汁(其干燥物称熊胆粉)[1].熊胆具有清热,平肝,明目之功效,临床用于惊风抽搐,咽喉肿痛.文献报道,熊胆的主要化学成分为牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)、牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)、牛磺胆酸(TCA)、少量的熊去氧胆酸(UDCA)、鹅去氧胆酸(CDCA)、胆酸(CA)、去氧胆酸(DCA)、胆固醇(CS)、胆红素,以及各种氨基酸和微量的无机元素,其中TUDCA的量最高,是熊胆的特有成分[2].现代药理研究证实熊胆具有保肝利胆、溶解胆石、镇静、抗惊厥、解痉,抗炎、抑菌、解热,临床上广泛用于眼科、五官科、消化科、神经科[3].     

胆汁类动物药中胆汁酸化学成分和药理作用研究进展

动物胆汁作为药物应用防治疾病有着悠久的历史,主要包括鸡、猪、蛇、牛、熊等的胆汁,而胆汁酸类成分是胆汁的重要活性成分。研究表明,胆汁酸类成分主要包括胆酸、去氧胆酸、鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸等,能通过肝肠循环与肠道微生物互相影响,在营养吸收和分配、代谢调节和动态平衡方面起着重要的作用。胆汁中胆汁酸类成分具有保肝、利胆、溶胆结石、抗癌、保护肾脏、保护心脑组织、保护神经、镇咳、平喘、祛痰、治疗眼病、调节肠道功能、调节血糖等药理作用,在临床上应用广泛。为了更好地发挥胆汁酸的药用价值以及在产品开发中的应用,该文通过对药用动物胆汁中胆汁酸类化学成分和药理作用研究进展进行归纳、总结与分析,以期为胆汁酸的进一步开发利用提供科学依据和参考。     

人工引流熊胆与熊胆的薄层和纸层色谱比较

本文用薄层层析等方法对人工引流熊胆和熊胆的化学成分进行了比较,并用薄层扫描法测定了两者游离胆汁酸的含量,结果引流熊胆与熊胆中的胆汁酸及氨基酸类成分一致,而且前者熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸的含量高于后者。     

青环海蛇胆中牛磺胆酸的TLC分析

用硅胶薄层鉴别青环海蛇胆中主要化学成分为牛磺胆酸,并用双波长薄层扫描法测定青环海蛇胆中主要成分牛磺胆酸的含量。本法灵敏度高,重现性好。     

猪牛羊胆汁HPLC指纹图谱研究

为有效控制猪、牛和羊胆汁质量,采用高效液相色谱法(HPLC),以AcclaimTMRSLC 120 C18色谱柱(3.0 mm×100mm,2.2μm,120);在柱温35℃下,以乙腈-1%高氯酸为流动相体系,0.5 m L·min-1流速梯度洗脱,200 nm波长检测,以中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2004A版)生成指纹图谱。以对照品归属各共有指纹峰,并采用蒸发光散射检测器(ELSD)和液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)验证。结果显示,猪、牛、羊胆汁色谱图分别有14,9,8个共有指纹峰,各相似度均大于0.92。以甘氨猪脱氧胆酸(GHDCA)、牛磺胆酸(TCA)分别作为猪胆汁和牛、羊胆汁HPLC指纹图谱的参照物,方法学考察结果符合指纹图谱建立要求,各共有指纹峰相对保留时间RSD小于1.5%,相对峰面积RSD均小于5.0%。归属猪胆汁共有指纹峰有牛磺猪脱氧胆酸(THDCA)、牛磺鹅脱氧胆酸(TCDCA)、甘氨猪脱氧胆酸(GHDCA)和甘氨鹅脱氧胆酸(GCDCA),牛、羊胆汁共有指纹峰有牛磺胆酸(TCA)、牛磺鹅脱氧胆酸(TCDCA)、甘氨胆酸(GCA)、甘氨鹅脱氧胆酸(GCDCA)和甘氨脱氧胆酸(GDCA)。研究结果表明,猪牛羊胆汁主要成分为结合型胆汁酸,猪胆汁与牛羊胆汁中的胆汁酸类成分存在显著性差异;三者的HPLC指纹图谱,特征性强、重复性好,可用于鉴别猪牛羊胆汁,控制胆汁质量。以快速液相色谱柱建立指纹图谱,可在HPLC系统分析,简便快速,具有可操作性。     

体外培育牛黄的药学研究

目的：解决牛黄原料匮乏问题，为民族医药工业发展提供充足的优质牛黄原料药。方法：根据胆红素钙结石体内形成的原理和生物化学过程，应用现代生物工程技术，在体外牛胆囊胆汁内培育牛胆红素钙结石(体外培育牛黄)；采用电镜扫描、红外光谱法、紫外分光光度法等检测体外培育牛黄的性状、结构、成分和主要成分含量。结果：体外培育牛黄呈类球形，椋黄色；有同心层纹状结构，扫描电镜下见呈网状结构，网架富集胆红素钙颗粒；含胆红素、胆酸、胆固醇、磷脂、去氧胆酸、牛磺酸、糖蛋白、18种氨基酸及21种微量元素；在避光、密封、防潮条件下存放三年稳定。结论：体外培育牛黄的性状、结构、成分、含量与天然牛黄相似。     

熊胆及其潜在替代资源研究概况

对比分析天然熊胆与熊胆的人工制品以及其他动物胆汁在化学成分、药理作用、临床应用等方面的异同。研究发现,人工合成熊胆在结合型胆汁酸牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)、牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)的含量以及利胆、镇静、抗菌等药理作用方面在一定程度上已经达到天然熊胆的水平,可为寻找天然熊胆的替代资源提供参考。     

柱前衍生RP-HPLC测定熊胆粉中牛磺熊去氧胆酸的含量

目的:建立一种高灵敏的熊胆粉中牛磺熊去氧胆酸含量的测定方法。方法:以吡啶-苯甲酰氯为柱前衍生化试剂,以RP-HPLC(UV)测定牛磺熊去氧胆酸衍生产物的含量。结果:冰浴下衍生化反应,密封,室温存放24h。色谱条件C18色谱柱,检测波长235nm;流动相:甲醇-水-四氢呋喃(90∶6∶4)为流动相;线性范围:2.8×10-6～3.6×10-6mg/L,最低检测限14ng,用于熊胆粉实际样品的分析,结果满意。结论:方法灵敏、准确,为熊胆粉中牛磺熊去氧胆酸的分析提供了一种方法。     

牦牛胆中胆汁酸类化学成分分析

胆汁酸为胆类中药的主要活性成分,也是多种疾病,特别是肝脏类疾病的潜在生物标志物。建立这类成分的系统分析方法,对于胆类中药药效物质的深入阐明和相关疾病的诊断及治疗均具有重要意义。该文在前期研究的基础上,着重关注于同分异构体的区分,完善胆酸类成分分析方法,并将其应用于牦牛胆中胆酸类化学成分的快速、系统表征。对于胆酸类成分的同分异构体,利用高效液相色谱串联三重四极杆-线性离子阱质谱(HPLC-Qtrap-MS)构建相对响应值-碰撞能曲线(RRCEC),发现最佳碰撞能(OCE)和半数响应碰撞能(CE_(50))均表现出较强的结构特异性,能有效地区分游离胆酸、甘氨胆酸、牛磺胆酸的同分异构体。在牦牛胆中,通过多级质谱数据分析,OCE/CE_(50)比较,保留时间匹配,并结合对照品及数据库检索,共发现并鉴定了30个胆酸类化学成分。该文建立的方法可以用于胆类中药和生物样品中胆酸类成分的快速、系统表征。     

慢性乙型肝炎患者肝肾阴虚证和湿热蕴结证血清胆汁酸谱变化

目的探索血清胆汁酸谱变化在慢性乙型肝炎肝肾阴虚证及湿热蕴结证中的辨识意义。方法临床招募355例慢性乙型肝炎患者,包括肝肾阴虚证74例、湿热内蕴证281例,以355名配对健康人作为对照组。采用超高效液相色谱三重四级杆质谱技术(UPLC-TQ-MS),定量检测血清胆汁酸谱,比较慢性乙型肝炎肝肾阴虚证、湿热蕴结证患者与健康人之间,慢乙肝患者两种证型之间血清胆汁酸谱变化差异。结果与配对的健康人比较,慢性乙型肝炎湿热蕴结证和肝肾阴虚证患者的血清总胆汁酸、甘氨酸结合型胆汁酸、牛磺酸结合型胆汁酸及未结合型胆汁酸含量,血清初级胆汁酸鹅脱氧胆酸(CDCA)、甘氨鹅脱氧胆酸(GCDCA)、牛磺鹅脱氧胆酸(TCDCA)、胆酸(CA)、甘氨胆酸(GCA)、牛磺胆酸(TCA)含量,血清次级胆汁酸甘氨熊脱氧胆酸(GUDCA)、牛磺熊脱氧胆酸(TUDCA)、脱氧胆酸(DCA)、甘氨脱氧胆酸(GDCA)、牛磺脱氧胆酸(TDCA)、石胆酸(LCA)、甘氨石胆酸(GLCA)、λ鼠胆酸(λ-MCA)、λ甘氨鼠胆酸(Gλ-MCA)、λ牛磺鼠胆酸(Tλ-MCA)、猪脱氧胆酸(HDCA)、甘氨猪脱氧胆酸(GHDCA)、3-酮胆酸(3-KCA)、7-酮脱氧胆酸(7-KDCA)、7-酮石胆酸(7-KLCA)含量显著升高(P0.05)。慢乙肝肝肾阴虚证患者的血清初级胆汁酸CDCA、GCDCA、TCDCA、CA、GCA、TCA及血清次级胆汁酸熊脱氧胆酸(UDCA)、GUDCA、TUDCA、λ-MCA、Tλ-MCA、HDCA、GHDCA、3-KCA、原胆酸(ACA)含量显著高于湿热蕴结证患者(P0.05)。慢乙肝湿热蕴结证患者的血清次级胆汁酸GLCA、牛磺石胆酸(TLCA)含量显著高于肝肾阴虚证患者(P0.05)。结论血清胆汁酸谱有助于判识慢性乙型肝炎肝肾阴虚证及湿热蕴结证。慢乙肝肝肾阴虚证的胆汁酸代谢障碍较湿热蕴结证更为显著。     

注射用熊胆粉质量标准研究

目的:建立注射用熊胆粉质量控制方法。方法:采用薄层色谱法对制剂中熊胆进行定性鉴别:用HPLC法测 定制剂中牛磺熊去氧胆酸含量。结果:薄层色谱中斑点清晰,易于识别:HPLC法精密度、重现性良好,牛磺熊去氧胆酸在 2．5～16μg内均较好的线性关系,加样回收率为99．75％,RSD为0．82％。结论:该法可有效控制注射用熊胆粉质量。     

HPLC-ELSD法同时测定熊胆粉中4个胆汁酸成分含量

目的 建立高效液相色谱-蒸发光散射法(HPLC-ELSD)同时测定熊胆粉中牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸含量。方法 采用Waters XSelect^?HSS T3色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)，以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相，梯度洗脱，柱温40℃，流速1.0 mL/min,ELSD漂移管温度80℃，氮气流量2.0 L/min。结果 牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸的线性范围分别为1.012～5.060、0.808～4.040、0.068～0.340、0.176～0.880μg，相关系数r分别为0.999 5、0.999 7、0.999 6和0.999 8；平均加样回收率(n=6)分别为98.8%、99.7%、98.9%和98.7%。精密度、稳定性、重复性试验的RSD均<3.0%(n=6)。熊胆粉样品中牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸的平均含量分别为(34.82±0.18)%、(27.95±0.19)%、(1.23±0.02)%和(3.77±0.06)%。结论 本方法简便、灵...     

蛇胆的成分分析及临床应用

<正>蛇胆是眼睛蛇科动物眼镜蛇、金环蛇或者游蛇科动物灰鼠蛇的体内贮存胆汁的胆囊,以上三种蛇胆合称为三蛇胆。由于蛇胆的价格昂贵,资源较少,在物以稀为贵的情况下,就会有以其它动物的胆来冒充蛇胆的现象。蛇胆中主要含有胆汁酸、胆色素、胆固醇、无机盐、黏蛋白等成分。曾常青[1]等对14种胆汁酸成分进行高效薄层色谱分析得出:蛇胆胆汁酸以牛磺结合型胆汁酸属多,游离的胆汁酸较少。樊氏等~[2]从蛇胆中分得胆酸和牛磺胆酸,并通过实验验证了蛇胆主要     

高效薄层色谱扫描法测定熊胆粉中结合胆汁酸的含量

本文报导用高效薄层色谱扫描法测定熊胆粉中牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸的含量,并与熊胆作了比较。样品经甲醇提取,点样在国产高效硅胶G板上,以氯仿-异丙醇-甲苯-冰醋酸-水(15:15:10:12:1)为展开剂,两次展开。     

超滤在痰热清注射液制备中的应用研究

目的 选择适用于痰热清注射液(黄芩、熊胆粉、山羊角、金银花、连翘)制备的超滤膜及超滤参数.方法 通过超滤前后细菌内毒素检测,脱色效果、指标性成分(黄芩苷、熊去氧胆酸、氨基酸、总固体)透过率和指纹图谱相似度评价,对超滤膜进行筛选;并以膜通量为指标,对超滤参数进行优选.结果 用灵敏度0.25 EU/mL的鲎试剂检查,饮用水通过10 kDa、8 kDa、5 kDa、3 kDa的膜后均符合注射用水内毒素标准要求,不同孔径超滤膜对药液色泽和黄芩苷、熊去氧胆酸、总固体透过率影响较大,对氨基酸透过率和指纹图谱相似度影响较小;泵转速250 r/min、操作压力193.06 kPa、药液温度40℃时膜通量最大.结论 选择5 kDa超滤膜能有效去除细菌内毒素,改善痰热清注射液颜色,对注射液整体化学成分影响不大,指标性成分含量及指纹图谱相似度符合痰热清注射液质量标准.     

西藏产天然牛黄中19种游离氨基酸的分析及药理作用

<正> 牛黄(Calculus Bovis;Bezoar Bovis)是牛科动物的胆结石,也叫天然牛黄,又名土精、丑宝,是一种常用的珍贵中药材,具有镇静、抗惊、解热、强心、消炎、利胆作用。牛黄成分复杂,主要含有胆酸,胆红素、还含有麦角甾醇、脂肪酸、去氧胆酸、钙盐,Vc及部分微量元素。据研究报道从澳大利亚牛黄中已提取出三种类胡萝卜素及多种氨基酸。现代实验药理学己充分证明牛黄本身就是一种复方,其效能和作用表现在多方面。目前,国内外对牛黄中的胆红素,胆酸等进行了较为详细的分析与药理研究,探讨牛黄究竟是哪些成分具有上述药理作用,本文分析探讨了西藏产天然牛黄中牛磺酸和组成蛋白质的18种游离氨基酸的含量情况,以便对天然牛黄药用价值从氨基酸角度进行初步探讨,为牛黄的药理研究提供实验数据。