川芎嗪对膝骨性关节炎大鼠软骨VEGF表达的影响

目的观察川芎嗪治疗膝骨关节炎大鼠(KOA)模型关节软骨中VEGF蛋白表达的变化,并探讨川芎嗪治疗KOA的作用机制。方法制作大鼠膝关节炎模型,将建模成功的大鼠纳入模型对照组,常规饲养,川芎嗪高剂量组、川芎嗪低剂量组、阳性对照组分别行川芎嗪和塞来昔布灌胃干预,正常组和模型组行等量生理盐水,予以干预6周,实验结束后,分别行各组大鼠HE切片软骨Mankin评分、Western Blot检测软骨组织VEGF表达的变化。结果软骨Mankin评分中,川芎嗪各剂量组和阳性对照组均高于正常组、且均低于模型组(P0.05),而阳性对照组评分低于川芎嗪低剂量组,但高于川芎嗪高剂量组(P0.05)。正常组、川芎嗪各剂量组及阳性对照组中软骨VEGF相对表达量均低于模型组,差异有统计学意义(P0.05);与阳性对照组相比,川芎嗪高剂量组VEGF表达量明显低于阳性对照组(P0.05)、而川芎嗪低剂量组其表达则高于阳性对照组。结论川芎嗪对可能通过下调早期KOA大鼠VEGF的表达,抑制早期软骨血管新生而减轻炎症,这可能是在某种程度上减轻关节软骨退变、修复软骨损伤的作用机制之一。     

微小颗粒骨自体异位成骨过程中BMP-2、TGF-β1的表达

目的:探讨自体微小颗粒骨在异位诱导成骨过程中BMP-2及TGF-β1的表达及该方法的成骨机制。方法:日本大耳白兔48只,随机分为微小颗粒骨(A组)和块状骨(B组)两组,每组24只,取左侧髂骨,修剪成0.3×0.5×l.0cm骨块,A组将骨块制成微小颗粒骨,B组骨块不处理,均植入右侧臀大肌肌袋,于术后1、3、5、7、11、14、21、28d取材(包括移植物及周围软组织)切片,免疫组化染色后显微镜下观察结果,并行计算机图像分析。结果:术后5d颗粒骨组开始有软骨生成,7d时达到高峰,21d后有骨吸收;块骨组则以骨吸收为主。各时段颗粒骨组BMP-2和TGF-β1含量与块状骨组比较均有显著性增高,差异有显著性。结论:自体微小颗粒骨异位成骨强于块状骨,BMP-2及TGF-β1在此过程中发挥重要作用。     

姜黄素对大鼠腹膜纤维化的作用及其对BMP-7、TGF-β1，表达的影响

目的探讨姜黄素对腹膜纤维化大鼠腹膜的作用及对腹膜骨形态发生蛋白-7（BMP-7）、转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的影响。方法将36只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、姜黄素组各12只。28d后，通过腹膜平衡试验及HE染色、Masson染色对大鼠腹膜进行组织结构和功能检测。利用免疫组化对BMP-7和TGF-β1，在腹膜的表达进行检测。结果与对照组和姜黄素组相比，模型组大鼠超滤量和初始腹膜透析液葡萄糖浓度（D0）与透析液葡萄糖浓度（D1）比值（D1／D0）明显减少，而透析液尿素浓度与血浆尿素浓度比值（Durea／Purea）明显增加（P〈0．05）。模型组的腹膜组织厚度较对照组和姜黄素组明显增加（P〈0．05）。免疫组化可见与对照组相比，模型组TGF-β1，表达明显增加（P〈0．05）；而姜黄素组较模型组TGF--β1，表达明显减少（P〈0．05）。BMP-7在对照组中高度表达，而在模型组中表达明显减少（P〈0．05），姜黄素组BMP-7表达较模型组明显增加（P〈0．05）。结论姜黄素对腹膜纤维化有明显疗效，其机制可能是通过上调BMP-7的表达，拮抗TGF-β1的作用，从而抑制腹膜纤维化。     

rhIGF-1对成骨细胞增殖、BMP-2及Cbfa1基因表达的影响

目的通过重组人胰岛素样生长因子(rhIGF-1)对体外成骨细胞增殖、骨形态蛋白-2(BMP-2)及核心结合因子1(Cbfa1)基因表达的影响,探讨rhIGF-1对骨代谢影响的可能机制。方法不同浓度的rhIGF-1(0、10、50、100ng/ml)刺激体外培养的大鼠成骨细胞,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,用半定量RT-PCR法检测成骨细胞BMP-2、Cbfa1基因的表达。结果rhIGF-1可明显促进成骨细胞增殖(P0.05),并促进成骨细胞BMP-2、Cbfa1基因的表达(P0.01),具有浓度依赖性。结论rhIGF-1可促进成骨细胞的增殖、分化及成熟,可能是通过增强BMP-2、Cbfa1基因的表达来实现的。     

双膦酸盐联合降糖药对2型糖尿病合并骨质疏松症大鼠BMP-2、TGF-β1、IGF-1的影响

目的观察研究双膦酸盐联合降糖药对2型糖尿病合并骨质疏松症大鼠BMP-2、TGF-β1和IGF-1表达的影响,以探讨其防治DOP的作用机制。方法 60只雌性SD大鼠随机分为对照组、模型组、双膦酸盐组、降糖药组、联合组,构建2型糖尿病合并骨质疏松症大鼠动物模型并给予不同药物干预。分别检测糖代谢、骨密度和骨生物力学指标; RT-PCR和免疫组化分别检测骨组织BMP-2、TGF-β1、IGF-1mRNA和蛋白表达。结果双膦酸盐组、降糖药组、联合组血清FPG、2hBPG、Hb Alc较模型组均显著降低(P0.05);双膦酸盐组、降糖药组、联合组血清FINS较模型组显著升高(P0.05)。双膦酸盐组、降糖药组、联合组骨组织BMC和骨生物力学指标较模型组均显著升高(P0.05)。双膦酸盐组、降糖药组、联合组骨组织BMP-2、TGF-β1、IGF-1mRNA和蛋白表达较模型组均显著升高(P0.05)。结论双膦酸盐联合降糖药可能通过调控2型糖尿病合并骨质疏松大鼠BMP-2、TGF-β1、IGF-1表达,以改善糖代谢,增加骨密度和提高骨生物力学性能,发挥防治DOP作用。     

局部注射BMP-2对老年大鼠股骨上端骨密度和骨强度变化的影响

目的观察局部注射骨形态发生蛋白(BMP2)后老年大鼠股骨上端骨密度及骨强度的变化。方法22月龄大鼠10只,同一个体双侧对照,股骨上端以Pluronicf127为载体局部注射BMP2,对照侧仅注入Pluronicf127,术后4周、8周处死取材,应用CT扫描、双能X线骨密度测定及生物力学测试来观察局部皮质厚度、骨密度及骨强度的变化。结果4周时,试验侧与对照侧局部皮质厚度、骨密度及骨强度无明显差异;8周时,试验侧骨密度及骨强度较对侧明显增高(P<0.05和P<0.01)。结论局部注射BMP2可显著提高老年大鼠股骨上端局部皮质厚度、骨密度及骨力学强度,其可能是预防老年性骨质疏松骨折的一种有效方法。     

脊柱后外侧融合过程中BMP-2、BMP-4基因的动态表达

目的：研究脊柱后外侧融合过程中骨形态发生蛋白(BMP)的表达情况，探讨BMP对融合过程的作用。方法：36只成年雄性新西兰白兔，制作L4、L5双侧横突间自体骨植骨模型，按术后处死时间(0d、2d、4d、1周、2周、3周、4周、5周、6周、10周、6个月、10个月)随机平均分为12组。将融合组织平均分为3等份，与横突交界的上、下区域定为边缘区，中间区域定为中央区。以RT-PCR法检测不同时间段、不同融合区域BMP-2 mRNA、BMP-4 mRNA的表达水平。结果：在脊柱融合术后1～6周，BMP-2和BMP-4表达量明显增高，并各自出现相应的峰值。中央区BMP表达水平的增幅及峰值明显低于边缘区，其开始增高的时间及峰值出现的时间滞后于边缘区1～3周，表现出明显的时间和空间差别：结论：脊柱融合中央区BMP低表达及时间滞后可能是不融合发生的重要原因。在融合早期补充外源性BMP可能有助于提高融合率。     

麝香对骨缺损模型大鼠HMGB1和BMP2表达的影响

目的探讨麝香对高迁移率族蛋白1(highmobilitygroupbox-1protein,HMGB1)和骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP2)在颅骨骨缺损模型大鼠组织中表达的变化。方法 SD大鼠300只,建立颅骨骨缺损模型。随机分为对照组和给药组,每组150只,再将这两个组按照第7、14和28天分为3个小组,每组50只。给药组按42 mg/kg给予天然麝香灌胃,对照组灌服等体积的生理盐水,均每日1次。第7、14和28天采用蛋白印迹法检测HMGB1和BMP2的表达。结果给药组HMGB1、BMP2在第7天的表达均达到峰值(P0.05),第14天时降低,第28天时表达最低;与对照组比较,第7天HMGB1、BMP2表达均有统计学意义(P0.05);给药组第7和14天HMGB1的表达明显高于本组第28天(P0.05)。结论麝香促进大鼠HMGB1、BMP2的表达增加,可能是颅骨骨缺损处的愈合原因之一。     

补肾活血中药对膝骨性关节炎家兔血清、滑膜及关节软骨一氧化氮水平的影响

目的探讨补肾活血中药对膝骨性关节炎家兔血清、关节软骨及滑膜一氧化氮(NO)水平的影响.方法 48只6～10个月龄新西兰大白兔,雌雄各半,随机分为正常组(18只),空白对照组(18只),中药组(12只).采用Hulth造模法建立OA模型.造模6周后分别给正常组和空白对照组、中药组每日灌服生理盐水、中药煎剂.分别于造模后6周、8周、12周测定各组血清、关节软骨及滑膜NO水平.结果空白对照组血清、关节软骨及滑膜NO水平均高于正常组,以关节软骨最为显著,而在灌服中药煎剂后,上述各项指标均有明显下降,与空白对照组比较有显著性差异(P＜0.05).结论补肾活血中药能够降低血清、关节软骨及滑膜NO水平,延缓OA的组织学改变进程,抑制本病的发生发展.     

肾小管间质纤维化大鼠BMP-7、TGF-β1表达的动态变化

目的:探讨骨形态发生蛋白-7(bonemorphogenetic protein-7,BMP-7)TGF-β1在腺嘌呤诱导的肾小管间质纤维化大鼠中的表达及意义.方法:按照文献要求,利用SD大鼠建立小管间质纤维化大鼠动物模型.随机将实验动物分为模型组(30只)和对照组(30只),并分别于实验第7周、12周、17周收获动物各10只,进行功能学和肾脏组织病理学的检测和观察.利用免疫组化对BMP-7和TGF-β1在肾小管间质纤维化大鼠中的表达变化进行动态观察.结果:和对照组比较,模型组大鼠7周时即有肾小管管型和轻微扩张,肾皮质可见异物肉芽肿,间质单核细胞浸润,间质纤维组织轻度增生.随着病程进展小管损伤和间质纤维化呈进行性加重.BMP-7表达随着小管间质纤维化进展呈明显降低趋势(P＜0.01),并同TGF-β1的表达呈负相关(r=-0.981,P＜0.01).结论:BMP-7与TGF-β1可能是肾小管间质纤维化过程中一对重要拮抗因子.     

补肾中药对骨质疏松症大鼠下丘脑BMP-4、Smad6 mRNA及蛋白表达的影响

目的探索肾虚骨质疏松症的病理机制,研究补肾中药对肾虚骨质疏松大鼠防治作用的机理。方法实验采用去双侧卵巢的方法,建立肾虚骨质疏松症模型。补肾中药复方（高、中、低）剂量对实验大鼠治疗12周,以骨疏康颗粒、盖天力牡蛎钙作为阳性对照药,并设正常对照组和模型空白组。用RT-PCR法、Western印迹法检测肾虚骨质疏松症大鼠下丘脑组织中BMP-4、Smad6 mRNA和蛋白表达。结果①与正常组比较,模型空白组大鼠下丘脑组织中的BMP-4 mRNA和蛋白表达水平明显增强;Smad6 mRNA和蛋白表达水平明显降低。②与模型空白组比较,补肾中药组对模型大鼠下丘脑组织中的BMP-4 mRNA和蛋白表达明显降低;而Smad6 mRNA和蛋白表达明显增强。结论肾虚骨质疏松症的病理机制为肾精不足,骨髓、脑髓失养,表现在下丘脑-垂体-靶腺轴的调控失常,包括下丘脑组织的细胞因子及其信号传导通路的异常。     

依普拉芬对新生大鼠颅盖骨成骨细胞BMP-2和TGF-β1 mRNA表达的影响

目的研究依普拉芬对体外培养的原代大鼠成骨细胞BMP-2(Bone Morphogenic Protein-2,骨形态发生蛋白-2)和TGF-β1(Transforming Growth Factor-β1,转化生长因子-β1)mRNA表达的影响,探讨其预防绝经后骨质疏松的机制。方法体外分离培养新生大鼠颅盖骨成骨细胞,取第二代细胞,将不同浓度的依普拉芬加入培养液,72h后用RT-PCR技术检测各组细胞BMP-2和TGF-β1mRNA表达情况。结果与阴性对照组比较,各浓度组的依普拉芬均可使成骨细胞BMP-2和TGF-β1mRNA表达量显著增加(P<0.01),其中,依普拉芬浓度在10-8~10-5mol/L之间作用最为显著。结论10-8~10-5mol/L浓度范围内的依普拉芬均可促进成骨细胞BMP-2和TGF-β1mRNA的表达,从而间接促进其增殖和分化,增加骨形成。     

胰岛素样生长因子1对成骨细胞中BMP-2、BMP-7基因表达的影响

目的研究胰岛素样生长因子1(IGF-1)对成骨细胞中BMP-2、BMP-7基因表达的影响,探讨IGF-1促进成骨细胞增殖、分化的分子机理.方法以不同浓度的IGF-1刺激分离培养的大鼠成骨细胞,提取细胞总RNA,RT-PCR扩增BMP-2及BMP-7基因cDNA,同时扩增管家基因βactin作为内对照.扫描PCR产物电泳照片,计算BMP-2/β-actin及BMP-7/-βactin的积分光密度比值,推算BMP-2及BMP-7基因的相对表达水平.结果 IGF-1可以在转录水平增加大鼠成骨细胞中BMP-2及BMP-7基因的表达,并呈明显的剂量依赖关系.结论 IGG-1促进成骨细胞增殖、分化的作用可能是通过增加BMP-2及BMP-7基因的表达来实现的.     

miR-214通过对BMP-2和Smad4的靶向调控作用对骨质疏松的影响

目的探究miR-214能否靶向调控BMP-2和Smad4对骨质疏松症产生影响。方法将大鼠分为2组(假手术组、手术组),对手术组进行手术构建去卵巢骨质疏松模型,对两组大鼠血清中相关因子、骨密度、股骨进行病理学染色观察,同时将各组大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)进行体外培养,使用q PCR检测其miR-214表达水平,Western blot检测其BMP-2和Smad4相关蛋白表达水平。体外培养大鼠成骨细胞,将细胞分为3组(对照组、过表达组和抑制组),向过表达组和抑制组分别转染miR-214 mimics及anti-miR-214,对各组大鼠成骨细胞的增殖能力、细胞凋亡情况和BMP-2和Smad4相关蛋白表达水平进行检测。结果与假手术组相比,手术组大鼠血钙、碱性磷酸酶(ALP)水平及骨密度(BMD)明显下降,血磷水平明显上升,差异具有统计学意义(P0.05)。两组大鼠的BMSCs增长速率相比差异无统计学意义(P0.05),同时假手术组大鼠BMSCs ALP水平显著高于手术组,差异具有统计学意义(P0.05)。手术组与假手术组的BMSCs相比较,细胞中miR-214表达明显上升,BMP-2及Smad4表达水平明显下降,差异具有统计学意义(P0.05)。对转染后各组大鼠成骨细胞检测,与对照组相比,过表达组细胞增殖能力明显下降,细胞凋亡情况显著增高,BMP-2及Smad4水平下降,抑制组细胞增殖能力显著升高,细胞凋亡数量明显下调,BMP-2及Smad4表达水平升高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 miR-214可能通过靶向调控BMP-2与Smad4抑制成骨细胞的增殖,从而发生或发展成骨质疏松症。     

适宜电刺激对成骨细胞平面培养下细胞增殖分化及BMP-2表达的实验研究

目的:观察适宜电流刺激成骨细胞在平面培养下成骨细胞增殖及分化,明确是否具有促进增殖、分化作用,并观察电流刺激下BMP-2表达的变化。方法:将来自家兔幼仔颅骨提取的成骨细胞进行平面培养,2代之后进行分类培养,实验组进行电流刺激,并给予相同的刺激时间和刺激强度,对照组未进行电流刺激。之后在不同时间点进行细胞增殖、分化检测及BMP-2蛋白表达分析。结果:实验组8d内光镜下可见大量成骨细胞增殖,成骨细胞呈多形性改变,6～8d细胞内出现少量钙化点,而对照组骨细胞增殖缓慢。实验组分化明显,碱性磷酸酶及钙结节染色阳性,碱性磷酸酶定量分析显示逐渐增加。实验组经免疫组化分析显示BMP-2量逐渐增加。结论:电刺激可促进成骨细胞的增殖分化而达到实现细胞数目的短时间增加,细胞内部经过免疫组化染色后显示BMP-2表达增加。     

治疗型关节炎护膝对实验性骨关节炎软骨细胞凋亡基因Bcl-2及p53的影响

目的：通过检测OA护膝对日本大耳白兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡基因Bcl-2、p53mRNA表达的影响,探讨OA护膝防治兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的分子生物学机制。方法：健康6月龄日本大耳白兔54只,雌雄各半,空腹体重2～2．2kg,采用改良Huhh法复制膝骨性关节炎模型,随机分为6组,即正常组、模型组、对照组（微波组）、实验1组（电组）、实验2组（热组）、实验3组（护膝组）．正常组10只,常规饲养;模型组9只,造模后常规饲养;对照组9只,微波仪治疗30min,每日1次;实验1组9只,电（疏密波）治疗30min,每日1次;实验2组8只,热（热软膜）治疗30min,每日1次;实验3组9只,电热（OA护膝）治疗30min,每日1次,连续治疗16周时处死。采用荧光定量RT—PCR法检测各组膝关节软骨细胞Bcl-2、p53mRNA的表达水平。结果：16周时,各组所有抽提的兔关节软骨组织总RNA的OD260／OD280值均在1．80～2．00范围内,表明RNA纯度高：模型组、对照组、实验1组、实验2纽、实验3组关节软骨细胞p53的mRNA相对呈高表达,而关节软骨细胞Bcl-2的mRNA相对低表达,与正常组差异有统计学意义（P〈0．01）：关节软骨细胞Bcl-2、p53的mRNA相对表达水平,对照组、实验1组、实验2组、实验3组与模型组差异有统计学意义（P〈0．01）;对照组、实验1组、实验2组与实验3组差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：OA护膝能提高关节软骨细胞Bcl-2 mRNA表达,减弱软骨细胞p53mRNA表达,从而抑制软骨细胞凋亡,延缓膝关节软骨的退变：     

黄芩素通过BMP-2/Smad通路促进MC3T3-E1成骨作用的实验研究

目的 探讨黄芩素（BAI）对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞（MC3T3-E1）成骨分化的作用及其分子机制。方法 将MC3T3-E1分为对照组（正常培养）和BAI组（以Baicalein处理）,在成骨分化条件培养下采用CCK-8检测BAI对MC3T3-E1细胞增殖的影响;分别以碱性磷酸酶染色（ALP）、茜素红染色（ARS）检测MC3T3-E1细胞成骨分化水平与矿化能力,实时荧光定量PCR检测成骨标志基因ALP、COL1A1、RUNX2、OSX的mRNA表达水平,通过免疫印迹法（Western-blot）检测MC3T3-E1细胞中BMP-2、Smad1、p-Smad1蛋白表达水平,通过免疫荧光技术（IF）检测RUNX2、COL1A1表达水平。结果 与对照组比较,BAI干预1 d后发现,BAI组COL1A1（P<0.001）、RUNX2（P <0.05）、OSX（P <0.05） mRNA表达水平在成骨分化中表达上升;干预3 d后发现,与对照组比较,BAI组ALP（P <0.05）、RUNX2（P <0.001）mRNA表达上升;干预7 d后发现,与对照组比较,BAI组COL1A1（P <0.05）mRNA表达水平较对照组上升,BMP-2、p-Smad1/Smad1蛋白表达水平上升（P <0.05）。免疫荧光中成骨标志蛋白RUNX2、COL1A1表达增多（P <0.05）。结论 BAI可通过激活BMP-2/Smad通路促进MC3T3-E1成骨分化。     

骨形成蛋白-2和转化生长因子-β1双基因真核表达载体的构建

目的 构建骨形成蛋白(BMP)-2、转化牛长因子(TCF)-β1双基因真核表达载体.方法 以pGEM-T-BMP-2及pGEM-T-TGF-β1两个质粒为模板,分别用引入新的酶切位点引物,PCR扩增出长度为1188 bp的BMP-2和1 173 bp的TGF-β1两个目基因片段;将其分别定向连入真核双基因表达载体plRES;酶切分析及序列测定重组子.结果 双酶切分析电泳可见长度为1188bp的BMP-2条带和1 173 bo的TGF-β1条带,核酸序列测定证实重组质粒pIRES-BMP-2-TGF-β1构建正确.结论 成功构建了BMP-2及TGF-β1双基因真核表达载体.     

淫羊藿总黄酮对去卵巢大鼠骨组织OPG、 OPGL mRNA表达的影响

目的：探讨淫羊藿总黄酮（totalflavoneofepimedium,TFE）治疗骨质疏松症的分子机制,为传统中药的现代化和二次开发提供实验依据。方法：将60只4月龄健康雌性SD大鼠按随机数字表法分为对照组（A组,20只,行假手术处理）,去卵巢纽（OVX组,20只,切除卵巢后不给予淫羊藿处理）,淫羊藿组（TFE纽,20只,切除卵巢后给予淫羊藿灌胃）。所有大鼠术前及术后4周以DEXA骨密度仪检测L4骨密度变化（若BMD下降〉20％,则骨质疏松模型建立）。模型建立后TFE组大鼠给予淫羊藿总黄酮（浓度30mg／ml,10ml／kg,1次／d）灌胃4周。所有大鼠处死前再行DEXA骨密度检测,过量麻醉法处死后取其股骨下部,切片匀浆提取骨组织中RNA,应用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）技术检测骨组织护骨素（osteoprotegrin,OPG）、护骨素配体（0PGL）mRNA的表达。结果：①TFE组大鼠切除卵巢4周后,腰椎BMD均值降至（0．084±0．020）g／cm^2,降幅〉20％证明骨质疏松模型建立。TFE灌胃4周后其腰椎BMD提高至（0．112±0．009）g／cm^2,与给药前比较有明显改善,差异有统计学意义（P〈0．05）;②TFE组大鼠骨组织中OPGmR—NA的表达较OVX组相比,明显增强,且有统计学差异（P〈0．05）,但对OPGLmRNA表达促进作用不明显,组间无统计学差异（P〉0．05）。结论：TFE是通过促进骨组织中OPGmRNA的表达来抑制破骨细胞的分化和成熟,从而达到治疗骨质疏松症的目的。