一贯煎诱导骨髓间充质干细胞分化为肝细胞样细胞的实验研究

目的体外实验观察一贯煎诱导分离培养的大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesen-chymal stem cell,BMSC）定向分化肝细胞的作用。方法采用全骨髓贴壁法分离原代大鼠BMSC,第3代细胞采用流式细胞仪分析表面细胞因子、诱导分化为脂肪细胞鉴定其干细胞特征;采用肝细胞生长因子联合成纤维细胞生长因子和一贯煎含药血清2种诱导方案连续培养BMSC共21天,PCR检测细胞甲胎蛋白（α-fetoprotein,AFP）、白蛋白（albumin,AIb）、肝细胞核因子4eL（hepatocyte nuclear factor4α,HNF4α）mRNA表达情况,细胞免疫荧光检测细胞AFP和细胞角蛋白18（cytokeratin18,CKl8）的表达,染色高碘酸一希夫反应法观察细胞糖原形成,Western blot法检测细胞CK18、Wnt 3α、α-catenin蛋白的表达情况。结果全骨髓贴壁法分离的BMSC高表达白细胞分化抗原（cluster of differentiation,CD）90、29、44,低表达CD34和CD11b,成脂诱导2周后油红O染色可见大量脂滴。一贯煎药物血清和细胞因子诱导均可提高BMSC表达AIb、AFP、HNF4αmRNA表达水平,促进CK18蛋白表达,诱导21天后可检测到AFP和CK18的表达,可见细胞合成糖原颗粒,观察到BMSC内Wnt 3α和β-catenin表达下调。结论一贯煎可诱导大鼠BMSC向肝细胞样细胞分化,其机制与下调Wnt／β-catenin信号通路有关。     

七叶皂甙钠对实验性肝损伤的影响

目的:研究七叶皂甙钠对四氯化碳(CCl4) 导致大鼠肝损伤的影响.方法:大鼠用15?l4石蜡油溶液皮下注射4次(每隔3天一次)造模引起肝损伤.在造模前三天开始以七叶皂甙钠腹腔注射给药,直至实验结束.末次注射CCl4后16小时检测血清ALT、AST水平,第二天取肝测丙二醛(MDA) 含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,并作组织病理学检查.结果:七叶皂甙钠组能保护CCl4引起的大鼠肝损伤,表现为血清ALT、AST活力和肝脏MDA含量下降,以及肝脏SOD活性增高,同时其肝脏病变较造模组为轻.结论:七叶皂甙钠对CCl4致大鼠肝损伤具有保护作用.     

一贯煎合丹参抗CCl4慢性肝损伤的实验研究

目的：探讨一贯煎合丹参抗CCl4慢性肝损伤的疗效。方法：利用一贯煎、丹参、一贯煎合丹参对抗CCl4对肝纤维化模型大鼠造成的慢性肝损伤,在第8周肝硬化形成以前检测血清』蝴、AST以及肝组织SOD、MDA含量。结果：一贯煎、丹参及一贯煎合丹参均显示出较好的抗慢性肝损伤作用,其中以一贯煎合丹参效果最好。结论：一贯煎合丹参抗慢性肝损伤具有叠加作用。     

归芍颗粒对四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化的保护作用

目的:观察归芍颗粒(Guishao granules,GG)对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)诱导的SD大鼠肝纤维化的作用。方法:90只雄性SD大鼠,除正常组15只不造模外,其余大鼠背部ih CCl4(1 m L·kg-1),每周2次,共13周制备肝纤维化模型,随机分为5组,分别为模型组,GG低、中、高剂量组(3.5,7.0,14 g·kg-1)和秋水仙碱组(0.1 mg·kg-1),每组15只。13周后,测定大鼠肝脏指数;取部分肝组织做苏木素-伊红(HE)和马松三色(Masson)染色;取血测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性;放射免疫法检测血清中透明质酸(HA)和层粘连蛋白(LN)的水平;分光光度法检测大鼠肝脏中羟脯氨酸(Hyp)含量;免疫组化法检测肝脏中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠肝损伤,肝纤维化程度明显,肝纤维化大鼠血清中ALT,AST和HA,LN水平明显升高,肝组织中Hyp的含量明显升高,肝组织中α-SMA蛋白的表达明显升高(P0.05,P0.01);GG能明显改善大鼠肝损伤,减轻肝纤维化程度,同时显著降低肝纤维化大鼠血清中ALT,AST和HA,LN水平,GG能降低肝组织中Hyp的含量,抑制肝组织中α-SMA蛋白的表达(P0.05,P0.01)。结论:GG可以明显改善CCl4诱导的大鼠肝纤维化,其作用机制可能与GG抑制肝星状细胞活化有关。     

葛根枳椇子栀子胶囊对大鼠急性肝损伤的保护作用

目的:研究葛根枳椇子栀子胶囊对大鼠急性肝损伤的保护作用及其机制。方法:采用50%CCl4橄榄油溶液和乙醇分别复制大鼠急性肝损伤模型,检测葛根枳椇子栀子胶囊干预后血清ALT、AST活性和肝匀浆SOD、MDA、GSH的含量,光镜观察大鼠肝脏病理组织学并进行病理学检测评分;测定样品对正常大鼠胆汁分泌量的影响。结果:与模型对照组比较,葛根枳椇子栀子胶囊高剂量组可降低CCl4肝损伤模型大鼠血清ALT、AST含量及肝组织病理学评分(P0.01或0.05),葛根枳椇子栀子胶囊高、中、低剂量组大鼠肝脏损伤均可见不同程度的改善;低剂量组可降低酒精性肝损伤模型大鼠MDA含量(P0.05),高剂量组可降低酒精性肝损伤模型大鼠肝组织病理学评分(P0.05);高剂量组可升高正常大鼠的胆汁分泌量增加率。结论:葛根枳椇子栀子胶囊对CCl4大鼠急性肝损伤具有保护作用,其机制可能与保护细胞膜及提高肝细胞抗脂质过氧化作用有关。     

复方片仔癀肝保片对大鼠四氯化碳诱导的慢性肝损伤的治疗作用

目的探讨复方片仔癀肝保片对大鼠四氯化碳诱导的慢性肝损伤的保护作用。方法采用皮下注射CCl4制备大鼠慢性肝损伤模型,2次/周,连续8周。于造模第4周开始给药,每日1次,连续4周。末次给药24 h后,检测血清ALT、AST和ALP的活性;ELISA法检测血清中透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)的表达;HE观察病理组织学改变。结果各用药组不同程度降低了CCl4升高的ALT、AST、ALP的活性(P0.05);ELISA结果发现各用药组显著降低HA和LN的含量(P0.05);HE染色发现各用药组不同程度减轻肝组织病理损伤的程度。结论复方片仔癀肝保片是通过减轻肝脏炎症反应和抗纤维化实现对CCl4诱导的大鼠慢性肝损伤的保护作用     

苦碟子对四氯化碳所致大鼠急性肝损伤的防治作用

目的:观察苦碟子注射液对四氯化碳(CCl4)所致大鼠急性肝损伤的防治作用.方法:建立CCl4所致大鼠急性肝损伤模型,设空白对照组、模型对照1组、苦碟子预防组、模型对照2组、苦碟子治疗组,并分别用药.通过测定各组动物血清谷丙转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)和观察肝脏组织病理学变化,以评价肝脏损伤程度和药物的防治作用.结果:该药能显著降低CCl4所致急性肝损伤大鼠血清中ALT、AST含量,病理切片示肝组织变性、坏死明显减轻.结论:苦碟子注射液对此模型大鼠的肝损伤具有显著的防治作用,其可能的机制还有待研究.     

益肝灵分散片对化学性肝损伤的保护作用

目的:研究益肝灵分散片(YGLFS)对化学性肝损伤的保护作用。方法:采用CCl4和D-GalN所致小鼠急性肝损伤模型,检测血清ALT、AST的活性。以CCl4所致大鼠慢性肝损伤模型,检测血清ALT、AST活性及TP、ALB及肝组织HYP含量,求出肝脏系数,对肝组织进行病理形态学观察。结果:YGLFS能明显降低急性肝损伤小鼠血清ALT、AST活性,明显降低慢性肝损伤大鼠血清ALT、AST活性,升高ALB和A/G;能明显降低肝脏系数及肝组织HYP含量;明显减轻肝纤维组织增生程度。结论:YGLFS对急慢性化学性肝损伤均具有明显保护作用。     

虎杖方剂对四氯化碳致大鼠肝损伤的保护作用研究

目的 观察虎杖方剂对四氯化碳(CCl4)致大鼠肝损伤的保护作用.方法 参照文献.方法 制备CCl4致大鼠肝损伤模型,实验分正常对照组、药物对照组、CCl4肝损伤组、药物预防组、药物不同剂量治疗组.测定肝组织超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(AKP)活性及血清一氧化氮(NO)与肿瘤坏死因子(TNF-α)水平,并进行肝组织学检查.结果 CCl4致大鼠肝损伤组肝组织SOD活性明显降低,MDA含量显著升高(P<0.01);血清ALT、AST、AKP活性及NO与TNF-α水平显著升高(P<0.01).虎杖方剂本身对正常肝脏无损伤作用,而且虎杖方剂预防组与治疗组均能明显提高肝组织SOD活性,降低肝组织MDA含量;显著降低血清ALT,AST,AKP活性及NO与TNF-α水平(P<0.01).肝组织学检查发现虎杖方剂能明显减轻CCl4引起的肝组织及肝细胞损伤.结论 虎杖方剂本身对肝组织无明显损伤作用,通过抑制脂质过氧化、抑制TNF-α的表达和保护内皮细胞功能减轻CCl4引起的肝损伤.     

蛇床子素对小鼠实验性肝损伤的保护作用

目的:探讨蛇床子素对小鼠CCl4肝损伤的保护作用。方法:采用CCl4小鼠急性肝损伤模型,测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性、肝组织MDA含量,并观察肝组织病理变化。结果:蛇床子素能保护CCl4所致小鼠肝损伤,表现为血清ALT、AST活力和肝脏MDA含量下降,同时其肝脏病变较模型组为轻。结论:蛇床子素对CCl4所致小鼠肝损伤具有保护作用。     

A reliable and rapid pharmacokinetic study of pueraria isoflavones using pueraria reference extractive substance in beagle plasma: Application to study of Yufeng Ningxin Tablets

Objective: In order to evaluate the reliability and feasibility of pueraria reference extractive substance (RES) used in biological sample, the pharmacokinetics of 3''-hydroxy puerarin (3''-HP), puerarin, 3''-methoxy puerarin (3''-MP), and daidzein-8-C-apiosyl-(1-6)-glucoside (DAG) in beagle plasma following oral administration of Yufeng Ningxin Tablet were quantitated. Methods: A reliable and sensitive high-performance liquid chromatography-tandem triple quadrupole mass spectrometry (HPLC-QQQ-MS/MS) method developed with chromatographic separation was operated on a Merck C18 column, and acetonitrile-5 mmol/L ammonium was used as mobile phase in gradient elution. The plasma samples were deproteinized by acetone, detected by triple quadrupole mass spectrometry with an electrospray ionization interface, and quantified using selected ion monitoring mode. The pharmacokinetic parameters were calculated by Winnonlin 4.1. Results: The calibration curves of the reference extractive substance and standard substance methods were linear over the ranges 0.0417–11.3309 μg/mL and 0.0394–10.0000 μg/mL. The intra-day and inter-day precision of the two methods at three concentrations were less than 13.63%, and the average recoveries of 3''-HP, puerarin, 3''-MP, and DAG were more than 70.67%. The RSD of the mean plasma concentrations of the analytes calculated by the two methods was less than 5%, and cos (?) = 1.000. Among the analytes, puerarin showed the highest blood concentration [(940 ± 185) ng/mL] and the longest retention time [(5 ± 1) h] in the dog’s bodies. Conclusion: Pueraria reference extractive substance can be seen as an alternative to the standard substance to overcome the scarcity of standard substance for the analysis of biological samples.     

黏附力测定新装置及其在预测中药喷雾干燥热熔型黏壁中的应用

设计一套可测定黏附力的新装置,并利用此装置对中药提取液进行喷雾干燥热熔黏壁预测研究。该装置以物性测定仪为基础测试平台,添加一套提供热风的设备,并配上摄像头,温湿度探头等搭建而成,可以模拟喷雾干燥仪的干燥环境,分析药液的黏附性随干燥进程的变化。采用数据挖掘机器,建立预测喷雾干燥热熔型黏壁的模型并进行验证,结果显示该装置可以通过物料的黏附力预测喷雾干燥热熔型黏壁。研究还发现热熔型黏壁的物料黏附性随水分的蒸发而逐渐变大,不黏壁的物料的黏附力则是先变大后急速下降。     

中医骨伤科旋提手法规范化操作传承模式初探

目的通过对不同传承模式效果的比较筛选中医骨伤科手法传承模式。方法 27名手法传承人随机分为视频教学、师承和仪器培训组各9名,每组传承人接受相应传承模式学习颈椎旋提手法规范化操作2周后分别进行仪器和专家考核,其中仪器考核指标包括预牵引力、提扳力、最大作用力、提扳时间、旋转幅度、俯仰幅度合格次数及合格率,专家考核指标包括颈椎定位、颈椎固定、预牵引、提扳力度、提扳方向、提扳技巧合格次数及合格率。结果仪器考核中仪器培训组、视频教学组、师承组总平均合格率分别为82.22%、67.84%、69.91%,专家考核中仪器培训组、视频教学组和师承组总平均合格率分别为91.11%、66.96%和83.80%。全部考核后总合格次数分别为视频教学组(5.89±2.54)次,师承组(4.44±2.18)次,仪器培训组(3.11±1.69)次。各组合格次数比较差异具有统计学意义(P<0.05),仪器培训组合格次数明显少于视频教学组(P<0.05),视频教学组与师承组、师承组与仪器培训组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论仪器培训传承模式在旋提手法治疗颈椎病手法考核时合格率较高,其传承效果优于视频教学和师承模式。     

附子与干姜配伍前后对附子中4种乌头类生物碱成分含量的影响

 目的 以附子-干姜药对为研究对象,采用高效液相色谱法测定附子单煎液及附子与干姜合煎液中次乌头碱(HA)、苯甲酰乌头原碱(BAC)、苯甲酰次乌头原碱(BHA)及苯甲酰新乌头原碱(BMA)4种乌头类生物碱,探讨两药相须配伍增效原理。方法 Kromasil C₁₈柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）;流动相：A相为乙腈,B相为0.2%醋酸水溶液（三乙胺调pH为6.2）,梯度洗脱（0～15 min：25%～31%A;15～36 min：31%～35%A;36～40 min：35%～25%A）;流速1.0 mL·min^-1,检测波长240 nm,柱温30 ℃。结果 4种乌头类生物碱均达到基线分离,线性关系良好（r>0.999）,加样回收率为96.9%～101.9%,RSD＜3%。与附子单煎液相比,附子与干姜合煎液中次乌头碱及苯甲酰新乌头原碱煎出量增加,苯甲酰乌头原碱及苯甲酰次乌头原碱煎出量稍有减少,但4种乌头类生物碱煎出量总和呈增加趋势。结论 附子与干姜配伍可促进乌头类总生物碱的溶出,从成分角度解释附子与干姜相须配伍增效原理。     

1602例类风湿关节炎患者中医证候分布特点的多中心横断面调查

目的分析类风湿关节炎中医证候分布特点。方法采集全国18家研究中心1602例类风湿关节炎患者的病史及中西医诊断信息,设计类风湿关节炎病证规律调查表,将所有信息录入类风湿关节炎中医临床数据库。将患者辨证分为风湿痹阻证、寒湿痹阻证、湿热痹阻证、痰瘀痹阻证、气血两虚证、肝肾不足证。分析患者中医证候分布及组合特点。结果共收集符合标准的调查表1602份。因部分调查表证候诊断缺如,1418例证候填写完整的RA患者中,单一证候1232例占86.88%,其中湿热痹阻证比例最高共计622例,占43.86%,其他依次为寒湿痹阻证、肝肾不足证、痰瘀痹阻证、风湿痹阻证、气血不足证。RA患者不同证候分布差异具有统计学意义(P<0.05)。除西南地区外,其他各地区RA患者均以湿热痹阻证为主要证候,湿热痹阻证在华北地区的证候分布中所占比例最高为57.08%(137例/240例),西南地区最低为25.48%(66例/259例),西南地区以寒湿痹阻证为主要证候占32.82%(85例/259例)。各地区证候分布差异具有统计学意义(P<0.05)。痰瘀痹阻证、肝肾不足证病程与风湿痹阻证、寒湿痹阻证、湿热痹阻证、气血两虚证相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论湿热痹阻证是类风湿关节炎患者的主要证候类型,其地域分布广,病程较痰瘀痹阻证、肝肾不足证患者短。     

基于UHPLC-QTOF-MS/MS技术的铁筷子中3个香豆素在大鼠体内代谢研究

东莨菪苷(SC-1)、东莨菪内酯(SC-2)和异嗪皮啶(IS-1)是苗药铁筷子中主要活性成分,这3个香豆素类化合物的体内代谢还未报道,该研究对铁筷子中3个香豆素化合物SC-1,SC-2,IS-1在大鼠体内的代谢进行分析。采用超高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱(UHPLC-QTOF-MS/MS)技术,大鼠分别尾静脉注射3个香豆素化合物后,鉴定粪便、尿液、血浆中的代谢产物。总共鉴定了3个香豆素原型及其在大鼠体内的11个代谢产物。通过对代谢产物的鉴定分析了其主要代谢途径,发现在大鼠体内这3个香豆素成分发生了葡萄糖醛酸化、磺酸化、还原等代谢反应。对3个香豆素化合物代谢产物的分析,基本阐明了其在体内的代谢过程,为进一步的药理活性及其机制研究提供了依据。     

红花黄酮类成分与其色度值相关性研究

目的:初步探究不同产地红花中黄酮类成分含量与测色计所得红花颜色指数L*、a*、b*值间的关系,为红花药材质量评价提供科学依据。方法:采用测色计测得红花样本的粉末色度值,并利用HPLC法检测红花中羟基红花黄色素A(HSYA)、槲皮素、柚皮素和山柰酚的含量,对二者间的相关性进行研究分析。结果:测色计测定的色度值可用来反映红花中黄酮类成分的含量,与HSYA呈显著正相关,但无法直观反映槲皮素、柚皮素和山柰酚的含量;内蒙古、云南、甘肃的红花样品中4种黄酮类成分含量较高,其次主要集中于新疆塔城地区,而新疆伊犁霍城县和察布查尔县的红花样品黄酮类成分含量较低。结论:颜色指数可作为评价红花药材质量的指标,颜色红亮黄丝较少的红花其HSYA的含量更高。     

热毒宁联合西药对耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌体外抑菌实验研究

目的研究中药注射液热毒宁对耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌(CRAB)体外抑菌作用。方法采用肉汤稀释法,观察热毒宁注射液、热毒宁注射液联合头孢他啶、热毒宁注射液联合亚胺培南西司他丁钠对CRAB的体外抑菌效果。结果热毒宁对CRAB的最低抑菌浓度(MIC)为400μL/mL,热毒宁分别和头孢他啶、亚胺培南西司他丁钠联合作用于CRAB,与各自单独用药相比,其抑菌所需药物的浓度明显降低。结论热毒宁对CRAB有很好的抑制作用,中西药联用有很好的协同作用,既可以减少抗生素的用量,还能帮助临床拓宽耐药菌选择药物的思路。     

茶多酚调节STAT3/miR-126/端粒信号通路活性延缓高糖诱导的人肾小球系膜细胞衰老

探讨茶多酚(tea polyphenols,TP)在体外高糖环境下延缓人肾小球系膜细胞(human glomerular mesangial cells,HGMCs)衰老的作用及可能的机制。在体外培养HGMCs,分为正常组(normal group,N,5.5 mmol·L^-1葡萄糖)、甘露醇组(mannitol group,MNT,5.5 mmol·L^-1葡萄糖+24.5 mmol·L^-1甘露醇)、高糖组(high dose of D-glucose group,HG,30 mmol·L^-1葡萄糖)、低剂量TP组(low dose of TP group,L-TP,30 mmol·L^-1葡萄糖+5 mg·L^-1 TP)及高剂量TP组(high dose of TP group,H-TP,30 mmol·L^-1葡萄糖+20 mg·L^-1 TP),分别在37℃,5%CO2条件下培养,干预72 h后,首先观察TP对HGMCs形态的影响;其次,检测细胞周期、衰老相关半乳糖苷酶(senescence-associated-β-galactosidase,SA-β-gal)染色阳性率、端粒长度;最后,检测p53-p21-Rb信号通路中关键信号分子p53,p21,Rb的蛋白表达水平及p-STAT3,miR-126的表达水平。结果表明,高糖能诱导HGMCs衰老,不仅表现为细胞周期阻滞于G1期、SA-β-gal染色阳性率升高、端粒长度缩短,还表现为p53,p21,Rb蛋白表达水平升高和p53-p21-Rb信号通路激活。L-TP能延缓HGMCs衰老,不仅表现为HGMCs细胞周期G1期阻滞的改善、SA-β-gal染色阳性率的下降、端粒长度的延长,还表现为p53,p21,Rb蛋白表达水平的下降,端粒-p53-p21-Rb信号通路活性的抑制。此外,高糖诱导HGMCs p-STAT3表达水平上调、miR-126表达水平下调,而L-TP可使这些变化得到改善。总之,高糖能激活端粒-p53-p21-Rb信号通路而诱导HGMCs衰老;L-TP能调节STAT3/miR-126表达水平,抑制端粒-p53-p21-Rb信号通路活性而延缓高糖诱导的HGMCs衰老。这些发现为临床上防治糖尿病肾病相关的肾脏细胞衰老提供了有效的干预措施。     

银蓝调脂胶囊通过促进RCT和TG水解调控高脂血症小鼠脂质代谢的机制研究

目的:从脂类代谢角度探索银蓝调脂胶囊改善高脂血症的机制。方法:将ApoE^-/-雄性小鼠随机分为2组,分别采用普通饲料和高脂饲料饲养,8 w后将2组动物均分别分为模型组、阿托伐他汀组及银蓝调脂胶囊高、低剂量组,共8组,每组10只,另取10只正常C57BL/6小鼠作为正常对照组。给药4 w后,测定生化指标,用RT-qPCR测定肝脏和回肠中与脂类代谢相关的mRNA表达水平,并对肝脏进行病理学观察。结果:银蓝调脂胶囊可显著降低模型动物肝脏指数及血脂水平,显著下调肝脏HMG-CR、ApoB、CYP7A1 mRNA表达,上调LPL、LCAT、ApoA1、SRB1 mRNA表达,抑制回肠中ABCG5、ABCG8 mRNA表达,并能明显改善肝细胞的脂肪变性。结论:银蓝调脂胶囊能调控高脂血症ApoE^-/-小鼠模型的血脂水平,其作用机制与促进RCT进程及增强TG水解作用有关。