乙酰肝素酶与相关疾病的研究进展

乙酰肝素酶（HPA）是人体内唯一能降解硫酸肝素蛋白多糖（HSPG）的一种β-D-葡萄糖醛酸内切酶。HSPG是细胞外基质（ECM）的重要组成部分,广泛分布于细胞表面,在正常组织的发育与病理学改变的发展中具有重要作用。HPA能识别 HSPG的硫酸肝素链（HS）并将其降解,进而影响 ECM与上皮细胞及内皮细胞基底膜结构,释放与 HSPG结合的各种细胞因子。除通过降解 HS产生间接生理作用外, HPA还以聚集、脱落、分裂素绑定的方式影响多配体聚糖的生物效应。另外,HPA 可以增强信号级联效应,促进蛋白激酶的磷酸化和基因转录。因此,HPA的激活会引起一些病理生理学改变,包括炎性反应、血管形成、肿瘤转移、胚胎植入等。笔者拟就 HPA与相关疾病的研究进展,进行综述如下。     

乙酰肝素酶在人类妊娠过程中的作用研究

目的:探讨乙酰肝素酶(heparanase,HPSE)与人类自然流产的关系及在正常妊娠和自然流产过程中所起的作用。方法:采用免疫荧光法和Western blot检测非意愿性正常妊娠者流产绒毛组织和早期自然流产者流产绒毛中HPSE的表达情况。结果:正常妊娠组的HPSE表达率明显高于自然流产组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HPSE参与正常妊娠的胚胎植入过程,自然流产的发生可能与HPSE的低表达、胚胎的低植入率有关。     

乙酰肝素酶在人类自然流产过程中的作用研究

目的:研究乙酰肝素酶(HPSE)与人类自然流产的关系以及在妊娠中的作用。方法:采用反转录PCR和Western Blot检测正常妊娠者和早期自然流产者流产绒毛组织中HPSE mRNA和蛋白的表达。结果:反转录PCR实验结果显示,正常妊娠组的HPSE mRNA阳性表达比例(12/15)高于自然流产组(9/20),(χ2=4.375,P=0.036);Western Blot正常妊娠组的HPSE蛋白的阳性表达比例(11/15)高于自然流产组(7/20),(χ2=5.042,P=0.025)。结论:HPSE参与正常妊娠过程,自然流产的发生可能与HPSE的低表达有关。     

乙酰肝素酶与宫颈病变的相关性研究

目的:探讨乙酰肝素酶(Hpa)与宫颈病变之间的相关性。方法:免疫组化染色检测宫颈癌、正常宫颈、宫颈上皮内瘤样病变组织中乙酰肝素酶的表达,χ2检验分析乙酰肝素酶的表达与临床特征之间的关系。结果:58例子宫颈浸润癌患者癌组织中,乙酰肝素酶阳性表达的43例,阳性表达率为74.14%。明显高于正常宫颈组织、宫颈CINⅠ～Ⅱ和宫颈原位癌。乙酰肝素酶的表达与宫颈癌临床分期、淋巴结转移、浸润深度显著正相关(P<0.01),而与宫颈癌的组织类型、分化程度、年龄无明显关系。结论:Hpa可能在宫颈癌的发展、浸润、转移中起重要作用,可作为临床预测宫颈癌浸润转移的一个重要参考指标和有价值的治疗靶点。     

乙酰肝素酶、MMP-9在肝素干预的自然流产大鼠模型胎盘组织中的表达及意义

目的:比较正常妊娠模型大鼠、自然流产模型大鼠、肝素干预模型大鼠胎盘组织乙酰肝素酶、MMP-9表达特征的差异,探讨两者与自然流产的关系。方法:建立正常妊娠大鼠模型、自然流产大鼠模型和肝素干预大鼠模型,采用免疫组化SABC法测定3组模型孕14天胎盘组织中乙酰肝素酶和MMP-9的表达。结果:与正常妊娠模型组和肝素干预模型组相比,自然流产模型组大鼠胎盘组织中类肝素酶和MMP-9的表达显著升高(P0.01)。结论:胎盘组织中乙酰肝素酶和MMP-9的表达与自然流产的发生、发展有关,肝素可对自然流产起到一定的预防和治疗作用。     

乙酰肝素酶在妇产科的研究进展

乙酰肝素酶(Hpa)是裂解细胞外基质(ECM)和细胞基底膜(BM)中乙酰硫酸肝素盐蛋白聚糖(HSPGs)中乙酰硫酸肝素盐(HS)的内源葡萄糖醛酸酶的统称。大量的研究发现Hpa广泛存在与细胞滋养层细胞、内皮细胞、血小板、乳突细胞、角质层细胞、嗜中性粒细胞、巨噬细胞、T、B淋巴细胞、淋巴瘤细胞、黑色素细胞和癌细胞等细胞中。它在妊娠、组织形成、炎症、血管生成和肿瘤转移等生理和病理过程中发挥着重要作用。Hpa与妇产科许多疾病之间有密切的联系。本文根据所查阅的有关文献,就乙酰肝素酶在妇产科领域中的研究进展做一综述。1Hpa简介HSPGs作…     

乙酰肝素酶在子宫颈癌组织中的表达与肿瘤转移及血管形成的关系

目的:乙酰肝素酶是一类裂解硫酸乙酰肝素的糖苷内切酶,通过降解肿瘤细胞细胞外基质和基底膜以及诱导新生血管的形成而促进肿瘤扩散和转移。本研究探讨子宫颈癌组织中乙酰肝素酶的表达与子宫颈癌转移及血管生成的关系。方法:应用免疫组织化学SABC法检测50例子宫颈鳞癌、12例子宫颈腺癌、10例子宫颈正常组织中乙酰肝素酶的表达情况及微血管密度(MVD)。结果:子宫颈癌中乙酰肝素酶的表达率(62.9%)明显高于其在子宫颈正常组织中的表达率。在子宫颈癌组织中的阳性表达率与子宫颈癌的临床分期、肿瘤直径大小以及有无淋巴结转移密切相关,P均<0.05。子宫颈正常组织、子宫颈癌组织中MVD的平均值分别为(11.33±2.38)、(42.97±9.99)(P=0.00)。子宫颈癌组织中乙酰肝素酶的阳性表达组MVD显著高于其阴性表达组MVD,P<0.05。结论:乙酰肝素酶在子宫颈癌的浸润、转移及血管生成过程中起重要作用。     

妊娠期糖尿病中细胞因子信号传导抑制蛋白-3过表达对滋养细胞增殖与凋亡的作用研究

目的 探讨细胞因子信号传导抑制蛋白-3(suppressor of cytokine signaling-3,SOCS-3)在妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)患者胎盘组织中的表达,及其过表达对滋养细胞增殖和凋亡的影响.方法 收集西安市第四医院2018年6月至2019年1...     

乙酰肝素酶、碱性成纤维细胞生长因子的表达与子宫内膜癌浸润、转移及预后的关系

目的:探讨乙酰肝素酶、碱性成纤维细胞生长因子的表达与子宫内膜癌浸润、转移及预后的关系。方法:选择2008年3月～2010年10月期间,在该院切除并存档的子宫内膜癌患者子宫内膜石蜡包埋组织标本48例作为研究组,另选同期该院妇产科收治的其他疾病患者,手术切除或刮宫的子宫内膜标本34例作为比较组,及正常子宫内膜21例作为对照组,分别比较分析Hpa和bFGF的染色强度及表达阳性率。结果:与FIGOⅠ期相比,Ⅱ期和Ⅲ期患者Hpa和bFGF的阳性率明显提高;与G1分化相比,G2分化患者Hpa和bFGF的阳性率明显提高;与无肌层浸润相比,肌层浸润浅部和深部患者Hpa和bFGF的阳性率明显提高,差异均具有统计学意义(P<0.05);与对照组患者相比,比较组患者和研究组患者的Hpa和bFGF阳性率均明显提高,差异均具有统计学意义(P<0.05),且研究组的阳性率高于比较组。结论:乙酰肝素酶和碱性成纤维细胞生长因子的表达与子宫内膜癌浸润、转移、预后密切相关,并且有望成为子宫内膜癌联合诊断和病情评估以及疗效观察和预后预测的重要检测指标,同时也可能为子宫内膜癌的治疗提供一种更为有效的解决方案。     

促炎细胞因子对肠上皮细胞紧密连接调控的分子机制

促炎细胞因子是由细胞分泌的、具有促进和调节炎性反应作用的小分子多肽,主要有IL-1、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ)等.炎症性肠病病人血清中促炎细胞因子水平显著增高,并且能引起肠上皮细胞紧密连接的改变.现就促炎细胞因子对肠上皮细胞紧密连接调控的分子机制作一综述,旨在为开展基础研究和临床提供参考.     

子痫前期滋养细胞ABCG2表达的研究

目的探讨正常及子痫前期胎盘滋养细胞分化前、后胎盘表达的主动转运因子ATP结合匣式转运子G2 (ABCG2)mRNA及蛋白的表达变化。方法酶消化法原代培养正常及子痫前期胎盘绒毛滋养层细胞,经传代与纯化后免疫鉴定滋养细胞及其纯度。收集培养后72 h (未分化状态)及培养后6 d (分化状态)的细胞,裂解后应用实时荧光定量PCR及Western Blot检测各组细胞ABCG2 mRNA及蛋白的表达水平。结果成功自正常及子痫前期胎盘中原代培养人绒毛滋养层细胞,未分化状态下子痫前期滋养细胞ABCG2mRNA及蛋白的表达平均值为正常的2. 54及2. 06倍,分化状态下子痫前期滋养细胞ABCG2mRNA及蛋白的表达为正常的1. 65及1. 53倍;正常胎盘滋养细胞分化后ABCG2 mRNA及蛋白表达增高3. 55及4. 06倍,子痫前期组仅增加2. 31及3. 03倍。结论自子痫前期及正常胎盘原代培养滋养细胞区分不同分化状态,实时荧光定量PCR及Western Blot检测子痫前期滋养细胞不同分化时期ABCG2 mRNA及蛋白的表达均高于正常,但滋养细胞分化后子痫前期ABCG2 mRNA及蛋白表达增长的程度低于正常。     

缺氧对滋养细胞E-钙黏蛋白表达的影响

目的:了解在缺氧条件下,单层贴壁培养的滋养细胞系TEV-1中,E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)的表达在mRNA水平和蛋白水平变化情况,探讨缺氧环境对滋养细胞迁移能力的影响,深入了解缺氧环境诱发子痫前期发病的潜在分子机制。方法:体外贴壁培养的滋养细胞系(TEV-1),分别直接接种于24孔板进行细胞爬片和培养瓶内,分为常氧组和缺氧组。常氧组加新鲜DMEM/F12培养基,缺氧组加含终浓度为300μmol/L二氯化钴的培养基,然后在正常条件下(37℃,5%CO2)培养。两组细胞培养48 h后,分别收集细胞,采用Trizol法抽提mRNA,并进行RT-PCR,检测E-钙黏蛋白的mRNA表达水平;细胞爬片采用免疫组织化学法进行染色,检测E-钙黏蛋白的蛋白表达水平。统计数据分析两组差异性。结果:二氯化钴化学缺氧条件下培养后,滋养细胞E-钙黏蛋白的mRNA和蛋白表达水平均较常氧对照组升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:缺氧环境可能导致滋养细胞E-钙黏蛋白的mRNA和蛋白的表达水平升高,由此降低了滋养细胞的迁移能力。这可能是缺氧造成胎盘浅着床、继而发生子痫前期的重要分子机制。     

血清剥夺对滋养细胞生物行为的影响及其机制研究

目的:观察人滋养细胞(TEV-1)经血清剥夺刺激后,VEGF、Netrin-1的表达及分布,同时监测TEV-1增殖、凋亡及管腔形成等生物学行为的变化,探讨血清剥夺对滋养细胞生物行为的影响及其机制。方法:行早孕期滋养细胞株TEV-1培养,并随机分为实验组(无血清培养基处理)及对照组(15%胎牛血清培养基处理),应用MTT比色法、流式细胞术(FCM)检测细胞增殖凋亡情况,并监测管腔形成的变化。同时利用免疫荧光细胞化学染色法及实时定量PCR检测VEGF、Ne-trin-1蛋白表达定位及mRNA变化情况。结果:MTT及FCM检测表明,血清剥夺能抑制TEV-1细胞增殖、诱导TEV-1凋亡。滋养细胞培养24 h后可出现管腔形成现象,且这一现象不受血清剥夺的抑制。VEGF、Netrin-1蛋白均表达于TEV-1细胞胞浆,此外,实验组TEV-1VEGF mRNA与Netrin-1mRNA的表达水平依次为对照组的(0.94±0.02)、(0.62±0.11)倍。结论:血清剥夺后,滋养细胞出现凋亡增加及增殖抑制现象,并且VEGF、Netrin-1表达减少。血清剥夺可能通过影响VEGF、Netrin-1的表达来参与对滋养细胞增殖凋亡的调控。     

微小RNA-195靶向趋化因子5抑制滋养细胞增殖、迁移和侵袭及其机制研究

目的 探讨微小RNA(miR)-195通过靶向调控趋化因子(CCL)5对胎盘滋养细胞增殖、侵袭的影响及其分子机制。方法 采用随机数字表法,选取2018年8月至2019年8月在徐州市中心医院定期产前检查的70例孕妇,按照是否合并子痫前期(PE),将其分为PE组(n=40)和对照组(n=30)。选取2组受试者分娩时自胎盘母-胎界面组织中分离的滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞为研究对象,针对PE组胎盘滋养层细胞分别转染miR-195及RNA阴性对照序列。根据转染结果,将PE组胎盘滋养层细胞分为miR-195 mimics亚组、miR-NC亚组、miR-195+pcDNA亚组、miR-195+pcDNA-CCL5亚组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测研究组与对照组胎盘组织中miR-195、CCL5 mRNA相对表达水平;MTT实验检测各亚组滋养细胞增殖能力,Transwell侵袭实验观察细胞侵袭能力,细胞划痕实验观察各亚组滋养细胞迁移能力,Western blotting法检测CCL5、PI3K及AKT蛋白相对表达水平;Pearson相关性分析对miR-195及CCL5表...     

维生素C对缺氧诱导人滋养细胞凋亡的影响研究

目的:探讨外源性维生素C对缺氧诱导人滋养细胞凋亡的影响。方法:行实施人早孕期滋养细胞株TEV-1培养,经95%氮气处理30 min,行递增浓度的维生素C(0、1、5、50 ng/ml)继续孵育24 h后,各组细胞均应用噻唑兰(MTT)比色法、流式细胞术(FCM)法检测细胞增殖指数、凋亡率,同时利用黄嘌呤氧化酶法测定各组细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性变化。结果:滋养细胞经缺氧诱导30 min后,与对照组相比,添加不同浓度组(1、5及50 ng/ml)维生素C对其增殖行为无明显影响。但维生素C具有增强滋养细胞SOD活性,减弱其凋亡程度的作用(P<0.05)。结论:维生素C能明显提高缺氧损伤滋养细胞的抗氧化能力,可能参与了妊娠的病理生理过程。     

乙酰肝素酶在非黑素性皮肤癌中的表达及临床意义

目的 探讨乙酰肝素酶（heparanase,Hpa）在非黑素性皮肤癌[基底细胞癌（BCC）和皮肤鳞状细胞癌（CSCC）]组织中的表达及其与CSCC病理分级和淋巴结转移的关系.方法 采用RT-PCR法和免疫组化法检测38例CSCC、33例BCC及19例正常皮肤组织中Hpa的表达水平,分析Hpa的表达与CSCC临床病理特征的关系.结果 CSCC组织中Hpa mRNA、Hpa蛋白的阳性表达率（68.4%、60.5%）均显著高于它们在BCC组织（24.2%、18.2%）和正常皮肤组织（10.5%、5.3%）中的表达（均P〈0.01）;CSCC组织中有淋巴结转移（92.3%、84.6%）和Broders分类Ⅲ～Ⅳ级Hpa mRNA、Hpa蛋白的阳性表达率（92.3%、84.6%）明显高于无淋巴结转移（56.0%、48.0%）和Ⅰ、Ⅱ级（56.0%、48.0%）中的表达（均P〈0.05）.结论 CSCC组织中Hpa表达高于BCC组织和正常皮肤组织,并与CSCC病理分级和淋巴结转移有关.     

polyI:C诱导人胎盘滋养层细胞抗HBV感染的体外研究

目的:探讨体外polyI:C对人胎盘滋养层细胞乙型肝炎病毒(HBV)感染的作用。方法:将2μg或8μg HBV重组质粒pcDNA3.1(+)-HBV1.3转染人胎盘滋养层细胞Bewo,12 h后以Toll样受体3(TLR3)配体polyI:C处理3天,同时设对照组。采用微粒子酶免疫分析法(MEIA)和荧光定量PCR法分别检测细胞上清液HBsAg、HBeAg及HBV DNA水平,并以荧光定量RT-PCR和ELISA分别检测细胞TLR3 mRNA表达及细胞上清IFN-β水平。结果:与对照组比较,polyI:C均可显著抑制Bewo细胞HBV复制(P<0.01或0.05),但与2μg HBV重组质粒转染组比较,转染8μg HBV重组质粒组polyI:C对HBV复制的抑制率显著下降(P<0.01),且polyI:C诱导Bewo细胞TLR3 mRNA表达及IFN-β水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:polyI:C可诱导人胎盘滋养层细胞抗HBV感染,但随着HBV感染量的增大,通过下调细胞TLR3 mR-NA表达及IFN-β产生,其抗HBV感染的作用被显著削弱。     

miR-499 rs3746444多态性抑制宫颈癌细胞的增殖作用及分子机制

目的 探讨miR-499 rs3746444多态性与宫颈癌临床特征相关性及对宫颈癌细胞增殖的影响作用与机制.方法 应用病例对照研究方法,选取2012年6月至2018年12月于内蒙古自治区人民医院就诊的宫颈癌病人857例作为实验组,同期873例健康志愿者作为对照组,两组年龄均在23～62岁,采用TaqMan探针法对rs3...     

甘草提取物(GL-1)对Hela细胞增殖抑制及促凋亡作用

目的 提取甘草抗肿瘤成份（GL-1）,探讨其对人宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用。方法 通过水提法、丙酮萃取、甲醇分离提取得到甘草提取物GL-1,并通过液质连用技术分析其主要成分,通过MTT比色法观察GL-1对HeLa细胞增殖抑制作用;AO （吖啶橙）/EB （溴化乙锭）双荧光染色法检测HeLa凋亡情况;透射电镜观察细胞凋亡的形态学变化。结果 GL-1含有9种主要组成成份。GL-1对HeLa细胞的生长增殖有抑制作用,其作用于Hela细胞12、24、48 h的半数抑制浓度分别为51.90、22.30、16.10 μg/mL （P<0.05）;AO/EB染色观察到25、50 μg/mL剂量组HeLa细胞均有不同程度的凋亡作用;透射电镜观察可见典型细胞凋亡形态。结论 GL-1具有抑制HeLa细胞生长增殖作用,并可诱导HeLa细胞凋亡。