β-葡萄糖苷酶水解黄芪甲苷的研究

目的采用β-葡萄糖苷酶水解黄芪甲苷,并对其酶水解动力学进行初步研究。方法以HPLC-ELSD法检测水解液中黄芪甲苷及水解产物环黄芪醇-6-O-β-D-葡萄糖苷(CMG)的量,以黄芪甲苷的水解转化率为指标,考察各反应因素对转化率的影响,并对该反应进行动力学研究。结果最佳反应条件为反应温度50℃,溶液pH值5.0,酶浓度460 U/mL,底物初始浓度0.1 mmol/L,反应时间48 h;在此条件下,水解转化率达到90%以上。在最佳反应条件下,该水解反应过程符合单底物Michaelis Menten方程,其中最大反应速率(Vm)值为0.037 mmol/(L.min),米氏常数(Km)值为5.8 mmol/L。结论采用β-葡萄糖苷酶水解黄芪甲苷制备CMG可行;商品化的β-葡萄糖苷酶并非黄芪甲苷的特异性水解酶。     

利用一种耐热耐糖β-葡萄糖苷酶制备黄芩素的研究

对利用一种耐热耐糖β-葡萄糖苷酶水解黄芩苷制备黄芩素进行了研究。该酶催化黄芩苷转化为黄芩素的反应能在醋酸-醋酸钠缓冲液中良好地进行,酶的最适pH 5.5,最适反应温度85 ℃,温度在85 ℃以下,pH 5~7.5酶的稳定性良好。酶的最大反应速率V_max为0.41 mmol·L^-1·min^-1,米氏常数K_m为3.31 mmol·L^-1。不同的金属离子对酶的活性有不同的影响,醋酸-醋酸钠缓冲液中的Na⁺对酶有活化作用。反应体系中葡萄糖醛酸浓度低于0.6 mol·L^-1时,对酶有活化作用,当单糖浓度大于0.6 mol·L^-1时,对酶有抑制作用,当单糖浓度达到1.2 mol·L^-1时,酶活抑制率为50%,糖耐受性较好。通过实验得出较佳反应条件为黄芩苷-酶液1 g : 0.2 mL,pH 5.5的醋酸-醋酸钠缓冲液,反应时间为10 h时,反应温度为85 ℃,酶解率可达97%。     

黄芩-黄连自沉淀中黄芩素、汉黄芩素、黄芩苷、汉黄芩苷含量测定

目的：建立高效液相色谱法(HPCL)测定黄芩-黄连水煎物自沉淀中黄芩素、汉黄芩素、黄芩苷、汉黄芩苷的含量,为黄芩黄连新型产品研发提供质量控制参考。方法：采用DIMA-C18色谱柱(5μm, 250 mm×4.6 mm),甲醇-0.2%的磷酸水溶液配比为47∶53作为流动相,流速为1.00 mL·min^-1,检测器检测波长为280 nm,柱温25℃。结果：汉黄芩苷、黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素分别在0.041 8～0.669 0、0.035 7～0.572 0、0.031 8～0.510 0、0.035 1～0.562 0 mg·mL^-1内呈现良好的线性关系(r=0.999 6,n=5),精密度、稳定性、重复性RSD值均<2.0%,黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素平均回收率为99.2%、100.2%、96.7%、98.6%,其RSD值为1.29%、0.90%、1.50%、1.78%(n=6)。结论：该方法稳定可靠,重复性、稳定性及精密度较好,简便可行,可为黄芩-黄连新型产品研发提供部分质量控制评价。     

双相体系中固定化酶水解黄芩苷制备黄芩素的研究

该文研究了双相体系中固定β-葡萄糖苷酶水解黄芩苷制备黄芩素的最佳工艺条件并考察其产率,考察了黄芩素在多种有机溶剂中的溶解性及其在水与有机溶剂中的分配系数,确定了固定化酶催化黄芩苷酶解反应在醋酸缓冲液和氯仿组成双相体系中进行。以海藻酸钠为载体,用交联-包埋法固定化β-葡萄糖苷酶,并测定了其最适反应温度,最适反应pH,米氏常数,热稳定性和pH稳定性等酶学性质。比较了固定化酶在双相体系中水解黄芩苷的产率,得出最佳反应条件：pH 5.0的醋酸缓冲液和三氯甲烷组成的双相体系,反应温度50 ℃,反应时间10 h,黄芩素产率为85.28%。与单相反应体系相比,双相反应体系中反应速度和产率均有所提高。     

鲜人参皂苷β-葡萄糖苷酶生物转化研究

目的研究β-葡萄糖苷酶对鲜人参皂苷粗提物和乙酰氨基葡萄糖的生物转化过程。方法利用高效液相色谱与电喷雾质谱联用技术分析鉴定了3种不同生物转化工艺的产物类型。结果不同的酶法转化工艺,鲜人参皂苷得到的产物不同。3种工艺下都能发生β-葡萄糖苷酶对鲜人参皂苷抽提物的水解反应,但只有第2种工艺发生了N-乙酰氨基葡萄糖和葡萄糖的转移反应,所得到的新的N-乙酰氨基糖代皂苷化合物转化率较高,第1种工艺和第3种工艺主要发生的β-葡萄糖苷酶的酶水解反应。结论在β-葡萄糖苷酶和人参皂苷混合24h,再添加乙酰氨基葡萄糖,可形成新的氨基皂苷,经过电喷雾HPLC-ESI-MS分析,[M+Na]+979.9,[M+K]+995.6,M.W 957.6。     

牛蒡苷元α-葡萄糖苷酶抑制活性的研究

目的:探讨牛蒡苷元对α-葡萄糖苷酶活性的抑制.方法:以4-硝基酚α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG)为底物,研究牛蒡苷元对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用.结果:牛蒡苷元具有显著的α-葡萄糖苷酶抑制活性,其IC50为0.62mg·mL-1.结论:牛蒡苷元是一种α-葡萄糖苷酶抑制剂.     

鲜地黄中α-半乳糖苷酶和β-葡萄糖苷酶的提取与初步纯化

目的:从鲜地黄中提取并初步纯化α-半乳糖苷酶和β-葡萄糖苷酶。方法:以总酶活为考察指标,通过正交试验确定两种酶的最佳提取条件。以酶活力和蛋白质含量为考察指标,确定两步盐析法的硫酸铵饱和度。结果:提取温度和溶剂量对α-Gal的提取具有显著性影响,而提取溶剂对-βG lu的提取具有显著性影响,因此确定以3倍量(v/w)磷酸盐缓冲液,4℃提取4 h为两种酶的最佳提取条件。以30%和60%为两步盐析的最佳硫酸铵饱和点。结论:鲜地黄中存在α-半乳糖苷酶和β-葡萄糖苷酶,两步盐析法可以使二者得到初步纯化。     

壳聚糖交联介孔二氧化硅固定化β-葡萄糖苷酶生物转化淫羊藿苷研究

目的 制备壳聚糖交联SBA-15型介孔二氧化硅(SBA-15)固定化β-葡萄糖苷酶(β-G1c),促进淫羊藿苷高效转化为稀有宝藿苷Ⅰ.方法 采用吸附-交联法将β-G1c固定在壳聚糖交联SBA-15上,以载酶量和相对酶活力为评价指标,对其固定化条件进行优化;采用透射电子显微镜(TEM)、扫描电子显微镜(SEM)、傅里叶变...     

大鼠灌胃黄芩苷及其苷元黄芩素的药动学研究

目的 研究大鼠灌胃黄芩苷及其苷元黄芩素后的体内药动学特征.方法 分别对大鼠灌胃给予等量黄芩素和黄芩苷,采用高效液相方法测定大鼠血浆中黄芩苷,比较其药动学参数及生物利用度.结果 大鼠灌胃黄芩苷后体内的黄芩苷血浓经时曲线具有典型的双峰现象,灌胃黄芩素后体内的黄芩苷血浓经时曲线无双峰现象,黄芩素的相对生物利用度是黄芩苷的200.9%.结论 黄芩苷制备成黄芩素后可提高其口服生物利用度.     

黄芩的黄芩甙分解酶(β-葡糖醛酸酶)

黄芩(scutellariae Radix)含有属类黄酮的葡萄糖醛酸的黄芩甙,经常在治疗胃脘堵塞并伴有呕吐等症的汉方方剂中配伍使用。经研究确认,将黄芩以冷水浸泡后,黄芩甙分解成黄芩黄素,认为这是由于酶反应而引起的。此次,作者根据黄芩浸出液中的黄芩甙及     

UPLC测定银黄颗粒中绿原酸、咖啡酸、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素6种成分

目的:建立采用UPLC同时测定银黄颗粒中绿原酸、咖啡酸、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素6种成分含量的方法。方法:采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm),流动相乙腈-0.2%磷酸水梯度洗脱,在326nm波长处进行检测。结果:绿原酸、咖啡酸、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的线性关系良好,加样回收率分别为96.34%(RSD 0.90%),101.4%(RSD 1.53%),95.64%(RSD 1.34%),98.01%(RSD1.72%),98.61%(RSD 1.96%),102.7%(RSD 1.42%)。结论:该方法简便、快速,分离效果好,可为全面控制银黄颗粒的质量提供参考。     

水提工艺中黄芩内源酶降解黄芩苷的研究

目的 研究黄芩药材中内源酶在不同温度下降解黄芩苷的活性,减少提取过程中黄芩苷的损失.方法 采用HPLC法检测在不同温度下浸泡处理不同时间后的提取液中黄芩苷的量.结果 黄芩药材中内源酶在不同温度下,降解黄芩苷的活性存在显著差异;其中在水温为50℃时,黄芩内源酶降解黄芩苷的活性最强,并且0～45min内黄芩苷的量随时间的变化符合一级动力学过程.结论 在以水为溶媒提取黄芩药材中的黄芩苷时,宜在80℃以上条件下浸泡处理,或者将黄芩药材预先通过炮制将内源酶灭活,以减少黄芩苷的降解.     

羟丙基-β-环糊精对黄芩苷角膜透过性研究

[目的]研究羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)对黄芩苷离体角膜透过率的影响,探讨其在眼用制剂中的应用.[方法]采用体外扩散实验考察小同浓度的HP-β-CD对黄芩苷兔角膜透过率的影响.[结果]11%和15%的HP-β-CD使黄芩苷的表观渗透系数分别增加了1.66倍和1.33倍,与对照组相比有差异(P<0.05),而7.0%和20%的HP-β-CD未能屁著增大黄芩苷的表观渗透系数(P>0.05).[结论]11%和15%HP-β-CD能够显著增人黄芩苷的表观渗透系数,且对角膜无刺激性.     

三黄颗粒中黄芩素代替黄芩苷素的药理比较

目的比较三黄颗粒(大黄、含量70%以上黄芩苷浸膏和盐酸小檗碱)和三黄颗粒中以黄芩素代替黄芩苷制备的素代三黄颗粒的解热、镇痛和抗炎药效。方法采用自身酶解法提取黄芩素提取物(含黄芩素63.5%)代替黄芩浸膏粉入药制备素代三黄颗粒,采用干酵母致Wistar大鼠发热试验、醋酸致昆明小鼠扭体试验和鲜蛋清致大鼠足肿胀试验比较素代三黄颗粒和三黄颗粒的药理作用。结果制得的黄芩素提取物中黄芩素含量为63.5%。素代三黄颗粒能明显抑制干酵母所致大鼠发热的体温变化、醋酸致小鼠扭体次数(镇痛率为62.68%)和鲜蛋清致大鼠足肿胀(足肿胀度在2,3,4 h时明显低于三黄颗粒组),效果均优于三黄颗粒。结论素代三黄颗粒具有较好的解热、镇痛和抗炎作用,以黄芩素代替黄芩苷进行制剂具有一定的应用前景。     

马蓝叶中β-葡萄糖苷酶的提取及酶学性质的研究

目的建立pNPG法测定马蓝叶中β-葡萄糖苷酶的活性,研究马蓝叶中β-葡萄糖苷酶的基本酶学性质,为进一步阐明青黛炮制原理提供依据。方法采用pNPG法考察马蓝叶中β-葡萄糖苷酶活性测定的最佳条件。结果最适反应条件为总反应体积1 mL,反应时间45 min,底物pNPG体积0.2 mL,浓度25 mmol/L,缓冲液pH值6,反应温度55℃。在此条件下研究马蓝叶的粗酶液中β-葡萄糖苷酶的基本酶学性质,结果表明该酶在30~60℃热稳定性较差。该酶在pH 5.0~7.0比较稳定,而在酸性条件下酶活下降较快,酶的pH值稳定性范围较窄。酶在4℃下的保存稳定性较好。结论确定了测定马蓝叶中β-葡萄糖苷酶活性的最佳条件,探索了马蓝叶中β-葡萄糖苷酶的酶学性质,该酶的热稳定性、pH值稳定性和保存稳定性的研究为青黛炮制原理的研究奠定了理论依据。     

黄芩素与黄芩苷微生物和肝脏代谢异同研究

目的研究黄芩素和黄芩苷微生物和肝脏代谢异同。方法采用大鼠肠道菌和肝匀浆体外代谢模型,利用HPLC-Q-TOF-MS-MS技术,在正离子模式下通过分析化合物的质谱裂解规律来鉴定黄芩苷和黄芩素的代谢产物。结果在体外孵育液中共鉴定出18个黄芩素和黄芩苷的代谢物,其中4个未曾报道。在体外肝匀浆孵育液中,黄芩素的代谢途径为脱水、羟基化、脱羟基化、糖基化、葡萄糖醛酸化、甲基化,黄芩苷的代谢途径为羟基化、脱羟基化、甲基化、脱葡萄糖醛酸化,共有的代谢物有12个,4个只存在于黄芩苷肝匀浆孵育液中,1个只存在于黄芩素肝匀浆孵育液中。在肠道菌孵育液中,黄芩苷首先发生脱糖反应生成黄芩素,然后会继续发生羟基化、脱羟基化、甲基化的代谢反应。同时,黄芩苷、黄芩素在肝脏中可以发生相互转化,但在肠道菌中黄芩苷仅能单向转化为黄芩素,黄芩素却无法转化为黄芩苷。结论本研究明确了黄芩苷和黄芩素代谢物的生成位点,可为阐释两者体内代谢行为提供科学依据。     

黄芩苷、黄芩素对变形链球菌生物膜抑制作用的研究

目的探讨黄芩苷、黄芩素对变形链球菌生物膜形成的影响,为中药生物膜抑制剂的研究开发提供一定的基础。方法以变形链球菌10556为研究对象,以氯已定为阳性对照药,测试黄芩苷、黄芩素对变形链球菌的最低抑制浓度(MIC);采用倍比稀释法对生物膜内活菌菌落计数;以原子力显微镜和扫描电镜观察其对生物膜形态结构的影响;结晶紫染色法测定对生物膜的抑制率。结果形态学观察可见生物膜被破坏,基质样物变稀疏,细菌群聚大为降低;同时,黄芩苷、黄芩素对变形链球菌生物膜形成具有明显的抑制作用。结论黄芩苷、黄芩素具有明显的体外抑菌作用,该结果可为中药黄芩抗菌作用的物质基础研究提供依据。     

黄芩中黄芩苷与黄芩素的体内外转化研究进展

黄芩是我国常用大宗中药材之一,其含有多种黄酮类化合物,主要的黄酮类成分黄芩苷与黄芩素具有广泛的临床疗效。为探索黄芩中黄芩苷和黄芩素的吸收、代谢的机理及黄芩素与黄芩苷在体内外的相互转化进程,帮助含黄芩成方制剂的开发利用,本文通过检索查阅国内外相关文献,发现了黄芩苷为复原型前体药物,黄芩素是黄芩中真正起药效作用的物质基础,且黄芩素的口服及外用的吸收情况均好于黄芩苷,阐明了黄芩素与黄芩苷在体内的相互转化过程,并且总结出黄芩素的提取制备方法,以期认清黄芩中中药效作用的物质基础,为黄芩复方制剂的质量标准制定提供参考。     

HPLC同时测定糖痹康颗粒中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的含量

目的建立同时测定糖痹康颗粒中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素含量的方法。方法采用高效液相色谱法。色谱柱:Thermo syncronis C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:0.1%甲酸乙腈(A)-0.1%甲酸水(B);梯度洗脱:0~3 5 m i n,2 0%(B)~5 5%(B);3 5~4 0 m i n,1 0 0%(B);流速:1 m L/min;柱温为40℃;检测波长为275 nm;进样量为20μL。结果黄芩苷检测浓度在5~500μg/m L范围内与峰面积积分值呈良好线性关系Y=6×107X+62726(r=0.9996,n=7);平均回收率为100.06%,RSD=1.08%(n=9);汉黄芩苷检测浓度在1~85μg/m L范围内与峰面积积分值呈良好线性关系Y=90214X-51875(r=0.9997,n=7);平均回收率为100.11%,RSD=0.41%(n=9);黄芩素检测浓度在0.4~25μg/m L范围内与峰面积积分值呈良好线性关系Y=158201X-10020(r=0.9997,n=7);平均回收率100.00%,RSD=0.73%(n=9);汉黄芩素检测浓度在0.1~10μg/m L范围内与峰面积积分值呈良好线性关系Y=69606X-29918(r=0.9991,n=7);平均回收率为100.07%,RSD=1.17%(n=9);结论该方法操作简单,结果可靠,可为糖痹康颗粒的质量控制提供参考。     

HPLC-DAD同时测定洋甘菊中木犀草素-7-O-β-D葡萄糖苷和芹菜素-7-O-β-D葡萄糖苷的含量

目的建立同时测定洋甘菊中木犀草素-7-O-β-D葡萄糖苷和芹菜素7-O-β-D葡萄糖苷含量测定的HPLC方法。方法色谱柱:Agilent Zorbax SB-C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:甲醇-0.2%磷酸(34∶66);流速:1.0 ml/min;柱温25℃;进样量10μl;检测波长:350 nm。结果木犀草素-7-O-β-D葡萄糖苷和芹菜素-7-0-β-D葡萄糖苷的线性范围分别为5.11~409.00、12.56~1 005.00μg/ml,相关系数r>0.999 3,具有良好的线性。精密度、稳定性符合要求,木犀草素-7-O-β-D葡萄糖苷和芹菜素-7-0-β-D葡萄糖苷加样回收率分别为96.44%~103.55%、95.12%~101.52%,RSD均为0.03%。结论该方法简便、准确、重复性好,适用于洋甘菊中木犀草素-7-O-β-D葡萄糖苷和芹菜素7-O-β-D葡萄糖苷含量测定。