疏肝健脾解毒方含药血清对MDA-MB-231乳腺癌细胞凋亡及Bax、Bcl-2的影响

目的：研究疏肝健脾解毒方含药血清对MDA-MB-231三阴性乳腺癌(TNBC)细胞凋亡及相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达的影响。方法：给大鼠灌胃疏肝健脾解毒方制备含药血清,设置空白对照组、含药血清低剂量组、含药血清中剂量组、含药血清高剂量组及阳性对照组,以流式细胞术检测细胞凋亡,Western Blot测定Bcl-12、Bax蛋白表达量。结果：各给药组凋亡率及Bax、Bcl-12蛋白表达水平与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);含药血清低、中、高剂量组Bax、Bcl-2蛋白表达水平与阳性对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论：疏肝健脾解毒方对MDA-MB-231 TNBC细胞具有凋亡诱导作用,其机制可能与干预Bax、Bcl-2蛋白表达有关。     

龟龙坚骨汤对TNF-α诱导大鼠成骨细胞凋亡中Fas和Bcl-2表达的影响

目的:探讨龟龙坚骨汤对TNF-α诱导大鼠成骨细胞凋亡中Fas和Bcl-2表达的影响。方法:将原代培养的SD大鼠颅骨成骨细胞分为中药组和对照组,中药组给予龟龙坚骨汤含药血清培养,对照组给予常规血清培养,培养7d后,用含量为30ng/mL TNF-α刺激成骨细胞,采用流式细胞术检测细胞凋亡,应用免疫组化结合计算机图像分析技术检测细胞Fas和Bcl-2蛋白表达。结果:TNF-α刺激成骨细胞后,中药组中Bcl-2蛋白表达升高,Fas蛋白表达不明显;而对照组的Fas蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达不明显。在细胞凋亡率方面,中药组在早期及晚期细胞凋亡率均低于对照组,两组差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:龟龙坚骨汤能上调Bcl-2蛋白表达,对Fas蛋白表达不明显,在一定程度上可以抑制成骨细胞的凋亡,但能否促进成骨细胞的增殖,有待下一步的研究。     

乳宁Ⅱ号方对HER-2过表达型乳腺癌PI3K/Akt信号通路的作用机制研究

目的:采用乳宁Ⅱ号方血清干预人乳腺癌细胞株MDA-MB-453细胞,观察中药调控乳腺癌细胞HER-2过表达后对PI3K/Akt通路的影响,探讨乳宁Ⅱ号方治疗HER-2过表达型乳腺癌的作用靶点。方法:选用雌性Wistar大鼠分组给药制备含药血清,给药血清干预MDA-MB-453细胞。采用Western blot技术检测中药血清干预乳腺癌细胞后HER-2、p-HER-2表达以及PI3K/Akt通路相关蛋白p-Akt、Bad表达。结果:Western blot结果显示,联合组HER-2、p-HER-2灰度比较对照组明显降低,但HER-2、p-HER-2表达含量差异无统计学意义(P>0.05);中药组、西药组、联合组p-Akt主条带灰度比较对照组显著降低,表达含量差异有统计学意义(P<0.05)。联合组Bad灰度比较对照组显著降低,Bad表达含量差异有统计学意义(P<0.05)。结论:实验各用药组p-Akt蛋白表达含量均较对照组显著降低,表明用药组能够通过抑制Akt蛋白的磷酸化水平发挥抗乳腺癌的作用。联合组Bad表达含量明显较对照组明显升高,表明用药后可通过诱导调亡蛋白的变化引起细胞凋亡。     

补中益气汤含药血清干预A549/DDP细胞Bad、NF-κb、Caspase-9表达的实验研究

目的 探讨补中益气汤含药血清对A549/DDP细胞中Bad、NF-κb、caspase-9表达的影响。方法 用MTT法筛选最佳浓度的含药血清。用免疫印迹法、real time PCR方法检测A549、A549/DDP细胞各组中Bad、NF-κb、Caspase-9蛋白和mRNA的表达水平。采用SPSS 16.0进行数据处理,P0.05有统计学意义。结果 中剂量含药血清培养48h为最佳浓度含药血清;A549/DDP对照组中Bad、NF-κb蛋白和基因的表达明显高于A549对照组(P0.05),A549/DDP最佳含药血清组Bad、NF-κb的蛋白和基因表达减少,与A549/DDP对照血清组比较有统计学意义(P0.05)。A549/DDP对照组中caspase-9蛋白和基因的表达明显低于A549对照组(P0.05),A549/DDP最佳含药血清组caspase-9的蛋白和基因表达增加,与A549/DDP对照血清组比较有统计学意义(P0.05)。结论 补中益气汤含药血清抑制A549/DDP的作用可能是通过调节Bad、NF-κb、caspase-9蛋白、基因的表达,促进细胞凋亡实现的。     

毒痰瘀脾虚方含药血清对HepG2肝癌细胞影响的实验研究

目的:研究毒痰瘀脾虚方含药血清对Hep G2肝癌细胞Wnt/β-catenin信号通路中相关基因及细胞侵袭、迁移、凋亡的影响。方法:采用RT-qPCR实验观察毒痰瘀脾虚方含药血清对Hep G2肝癌细胞Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin mRNA、MMP2 mRNA、Cyclin D1 mRNA表达的影响;Transwell细胞侵袭和迁移实验,观察其对Hep G2肝癌细胞侵袭和迁移的影响;AnnexinV-FITC双染流式细胞法检测其对Hep G2肝癌细胞凋亡的影响。结果:RT-qPCR结果显示,与阴性组比较,毒痰瘀脾虚方含药血清能下调HepG2肝癌细胞Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin mRNA、MMP2 mRNA、Cyclin D1 mRNA的表达,差异有统计学意义(P0.01或P0.05);Transwell细胞侵袭实验和迁移实验结果显示,毒痰瘀脾虚方含药血清能抑制Hep G2细胞的侵袭(P0.01),对细胞的迁移无明显影响(P0.05);细胞凋亡实验结果显示,毒痰瘀脾虚方含药血清能促进Hep G2细胞的凋亡,与阴性组比较,差异有统计学意义(P0.01)。结论:毒痰瘀脾虚方含药血清能抑制Hep G2细胞侵袭,促进细胞凋亡,并能抑制Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin mRNA、MMP2 mRNA、Cyclin D1 mRNA表达。     

补肾活血复方含药血清对大鼠成骨细胞磷酸化GSK-3β、p38MAPK及ERK1/2蛋白的影响

目的:观察补肾活血复方含药血清对大鼠成骨细胞磷酸化糖原合成激酶3β(GSK-3β)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)蛋白的作用。方法:3月龄SD雌性大鼠灌胃制备空白血清和含药血清,并分离培养1日龄新生鼠颅骨成骨细胞。实验分为空白血清组和含药血清组,分别采用MTT、ELISA、Western-blot等方法检测两组成骨细胞的增殖、ALP和BGP的分泌及磷酸化GSK-3β、p38 MAPK和ERK1/2蛋白的变化。结果:与空白血清组相比,含药血清组可明显促进成骨细胞的增殖、ALP和BGP的分泌,并促进胞内磷酸化p38 MAPK和ERK1/2蛋白的表达,对磷酸化GSK-3β蛋白的表达未见明显影响。结论:补肾活血复方含药血清可促进大鼠成骨细胞的增殖和分化,提高p38 MAPK和ERK1/2蛋白磷酸化水平。     

内障丸加减方对氧化损伤大鼠晶状体上皮细胞中Bcl-2及Bax表达的影响

目的观察中药单体与含药血清对氧化损伤大鼠晶状体上皮细胞(LECs)中Bcl-2及Bax表达的干预作用异同,探讨内障丸加减方预防或延缓白内障发生发展的作用机制。方法取3只8周龄大鼠,予内障丸加减方45 g/(kg.次)灌胃,每日2次,连续3 d,末次灌胃后1 h,制备含药血清。以Medium199培养液30 mL+青霉素注射液20万U/L+链霉素注射液25万U/L制备成培养液5份,分别为空白对照组、模型组、槲皮素组、含药血清组及空白血清组,除空白对照组外,其余各组培养液以30%过氧化氢(H2O2)溶液诱导Fenton反应。然后含药血清组及空白血清组分别加入相应的血清,将各培养液置于无菌6孔培养板中,每孔含培养液3 mL。另取15只4～5周龄大鼠随机分为5组,分别为空白对照组、模型组、槲皮素组、含药血清组及空白血清组,每组各3只。无菌操作提取晶状体,将晶状体放入含有相应培养液的培养孔中,每孔3枚。经24 h后,取囊膜铺片,以免疫组化法检测LECs的凋亡相关基因Bcl-2及Bax表达,在光学显微镜下观察Bcl-2及Bax的表达情况。结果空白对照组、槲皮素组及含药血清组Bcl-2及Bax表达与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05),空白血清组与模型组Bcl-2及Bax表达无统计学意义(P>0.05)。空白对照组、槲皮素组及空白血清组Bcl-2及Bax表达与含药血清组比较差异有统计学意义(P<0.05)。过氧化氢诱导的大鼠LECs凋亡,模型组和空白血清组Bax的表达上调明显,而Bcl-2的表达下调。槲皮素及含药血清组与模型组及空白血清组相比,LECs的Bcl-2的表达显著上调,而Bax的表达明显下调。含药血清组比槲皮素组更能有效上调Bcl-2的表达,降低Bax的表达。结论内障丸加减方的血清活性成分能有效保护LECs的细胞结构,上调Bcl-2基因的表达,抑制细胞凋亡。     

温阳振衰颗粒对阿霉素致心肌细胞损伤ERK5/CREB的影响

目的观察温阳振衰颗粒含药血清对H9C2心肌细胞损伤模型ERK5/CREB表达的影响。方法 H9C2心肌细胞分为正常对照组,H9C2损伤组,5%含药血清组和10%含药血清组。H9C2损伤组的培养基中加入2.67μmol/L的ADR,两含药血清组培养基中加入2.67μmol/L的ADR和5%或10%的温阳振衰颗粒含药血清,共培养44h。检测实验末各组细胞p-ERK5、ERK5、p-CREB、CREB的表达水平。结果与正常对照组相比,各组p-ERK5表达明显下调,p-CREB表达明显上调,差异具有统计学意义(P0.05),10%含药血清组p-ERK5下调及p-CREB上调均相对缓慢(P0.05)。各组细胞ERK5、CREB的表达无明显差异(P0.05)。结论温阳振衰颗粒能抑制ERK5蛋白的过度去磷酸化和CREB蛋白的过度磷酸化,这可能是其治疗慢性心衰的重要机制之一。     

基于MAPK/ERK信号通路探讨加味芍药甘草汤对AM病灶细胞的干预机制

目的 通过丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路,探讨加味芍药甘草汤治疗子宫腺肌病(Adenomyosis, AM)的可能机制。方法 临床收集因AM和宫颈病变行全子宫切除术患者的组织标本,分别作为病例组和对照组,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、免疫蛋白印迹法(Western blot)检测AM组异位病灶与对照组正常肌层及两组间在位内膜中MAPK/ERK信号通路因子蛋白表达水平的差异。对AM病灶细胞分别用加味芍药甘草汤含药血清、正常血清、MAPK/ERK信号通路抑制剂U0126、米非司酮进行干预,采用qRT-PCR、Western blot检测不同干预方法对病灶细胞MAPK/ERK信号通路因子蛋白表达水平的差异。结果 AM组异位病灶ERK2 mRNA、MEK-2蛋白的表达量高于对照组正常肌层,差异有统计学意义(P<0.05)。筛选10%含药血清组为药物血清浓度。U0126组与空白对照组相比,ERK1 mRNA表达量明显减低,差异有统计学意义(P<0.05);10%含药血清组、米非司酮组、U0126组与10%正常大鼠血清组、空白对照组相比...     

温阳补肾药对抗骨髓间充质干细胞凋亡的实验研究

目的:探讨温阳补肾药对骨髓间充质干细胞凋亡的影响及作用机制。方法:建立白细胞介素1β诱导体外培养的SD大鼠骨髓间充质干细胞凋亡体系,分别向其中加入巴戟天含药血清(A组)、鹿角胶含药血清(B组)、淫羊藿含药血清(C组)、骨碎补含药血清(D组)和空白血清(F组),E组不加入血清。各组细胞培养48 h后,采用RT-PCR法检测bcl-2和Bax的mRNA表达量,采用电泳法检测骨髓间充质干细胞凋亡体系的建立,采用Western Blot法检测bcl-2和Bax的蛋白表达量。结果:①骨髓间充质干细胞表面标记结果。流式细胞仪检测结果显示CD34、CD45表达阴性,CD90表达阳性。②bcl-2和Bax的mRNA表达量。各组bcl-2mRNA表达量比较,差异有统计学意义(22.25±1.15,15.18±1.51,15.36±0.72,16.12±0.95,16.79±1.39,16.02±1.14;F=182.000,P=0.000)。A组bcl-2mRNA表达量高于B组、C组、D组、E组和F组(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000);E组高于B组(P=0.030)。各组BaxmRNA表达量比较,差异有统计学意义(19.17±0.67,15.37±1.02,18.18±0.23,17.37±0.72,28.36±0.93,23.52±1.26;F=28.422,P=0.000)。A组BaxmRNA表达量高于B组和D组(P=0.001,P=0.018),低于E组(P=0.001);B组低于C组、E组和F组(P=0.013,P=0.000,P=0.000),B组与D组比较,差异无统计学意义(P=0.052);D组低于F组(P=0.000);E组高于C组和F组(P=0.000,P=0.000)。③bcl-2DNA和BaxDNA电泳结果。电泳图谱显示,E组条带与A组、B组、C组、D组有明显差异。④bcl-2和Bax的蛋白表达量。各组bcl-2蛋白表达量比较,差异有统计学意义(11 526.18±697.38,20 096.88±953.73,16 784.88±504.36,14 856.65±546.90,8 549.29±313.63,9 004.79±399.12;F=341.740,P=0.000)。A组bcl-2蛋白表达量低于B组、C组和D组(P=0.000,P=0.000,P=0.000),高于E组和F组(P=0.000,P=0.000);B组高于C组、D组、E组和F组(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000);C组高于D组、E组和F组(P=0.000,P=0.000,P=0.000);D组高于E组和F组(P=0.000,P=0.000)。各组Bax蛋白表达量比较,差异有统计学意义(12 435.09±1002.35,4 590.96±71.45,11 721.90±855.08,10 393.54±662.79,13 874.83±541.16,12 774.15±674.40;F=136.305,P=0.000)。A组Bax蛋白表达量高于B组和D组(P=0.000,P=0.039);B组低于C组、D组、E组和F组(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000);C组低于E组(P=0.010);D组低于E组和F组(P=0.000,P=0.002)。结论:温阳补肾药含药血清有对抗白细胞介素1β诱导的骨髓间充质干细胞凋亡的作用,其机制主要是上调抑制凋亡基因Bcl-2的表达,下调促进凋亡基因Bax的表达,抑制其蛋白酶活性从而降低细胞凋亡率。     

补肾强筋胶囊含药血清对骨关节炎滑膜细胞、软骨细胞PGE2、NGF基因表达的影响

目的:观察补肾强筋胶囊含药血清对骨关节炎滑膜细胞、软骨细胞PGE2、NGF、COX-2、MMP13基因表达的影响。方法:选取拟行全膝关节置换手术的膝关节骨性关节炎,术中取病变滑膜、软骨进行原代细胞培养,用IL-1β刺激复制骨关节炎细胞模型,用补肾强筋胶囊含药血清干预后,RT-qPCR检测PGE2、NGF、COX-2、MMP13基因表达。结果:滑膜细胞RT-qPCR检测,与OA组比较,正常组、含药血清组PGE2、NGF、COX-2、MMP-13基因表达均有统计学差异(P<0.05);与正常组比较,含药血清组PGE2、NGF、COX-2、MMP-13基因表达的差异均有统计学意义(P<0.05)。软骨细胞RT-qPCR检测,与OA组比较,含药血清组PGE2、COX-2、MMP-13基因表达比较差异均有统计学意义(P<0.05);与正常组比较,含药血清组PGE2、COX-2、MMP-13基因表达比较差异均有统计学意义(P<0.05)。3组间NGF基因表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:补肾强筋胶囊含药血清治疗骨关节炎能下调滑膜细胞PGE2、NGF、COX-2、MMP13基因表达,下调软骨细胞PGE2、COX-2、MMP13基因表达,但对软骨细胞NGF基因表达无明显调节作用。     

杞精明目汤含药血清对结膜松弛症MAPK信号通路的影响

目的探讨杞精明目汤含药血清对结膜松弛症(CCh)成纤维细胞表达丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的影响及其作用机制。方法体外培养结膜松弛症结膜成纤维细胞并鉴定,分为CCh对照组、CCh+20%含药血清组(含药血清组)、CCh+20%无药血清组(无药血清组),予20%的含药或无药血清干预48 h。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测p38MAPK、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)及其磷酸化水平的光密度值,Western Blot检测p38 MAPK、JNK、ERK蛋白及其磷酸化水平,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测p38 MAPK、JNK、ERK的m RNA表达,并行统计学分析。结果 ELISA结果显示:含药血清组较CCh对照组p38 MAPK、p-p38 MAPK光密度值明显降低(P0.05),而无药血清组与CCh对照组差异无统计学意义(P0.05)。含药血清组较CCh对照组JNK光密度值降低(P0.05),而无药血清组与CCh对照组差异无统计学意义(P0.05);含药血清组、无药血清组较CCh对照组p-JNK光密度值下降(P0.05)。含药血清组较CCh对照组ERK、p-ERK光密度值下降,差异有统计学意义(P0.05);而无药血清组与CCh对照组差异均无统计学意义(P0.05)。Western Blot结果显示:含药血清组、无药血清组较CCh对照组p-p38MAPK蛋白表达量明显下降(P0.05),且20%含药血清的p38 MAPK蛋白磷酸化水平下调更为明显。含药血清组、无药血清组与CCh对照组JNK、p-JNK蛋白表达量差异无统计学意义(P0.05)。含药血清组、无药血清组与CCh对照组ERK蛋白表达量差异无统计学意义(P0.05);含药血清组、无药血清组较CCh对照组p-ERK蛋白表达量均明显降低(P0.05),其中含药血清组的ERK蛋白磷酸化水平下调更为明显。RT-PCR结果显示:无药血清组和含药血清组较CCh对照组p38 MAPK、JNK、ERK的m RNA表达水平均显著下降,差异有统计学意义(P0.05),且20%含药血清组p38 MAPK、JNK、ERK m RNA水平下调更为明显。结论杞精明目汤含药血清可下调结膜松弛症成纤维细胞MAPK信号通路相关蛋白和基因的表达,其对p38 MAPK、ERK蛋白的磷酸化水平和基因表达的抑制,可能是该方疗效机制的关键。     

化瘀消癥杀胚复方含药血清对体外培养输卵管妊娠滋养细胞凋亡的影响

目的:探讨化瘀消癥杀胚复方含药血清对体外培养的输卵管妊娠滋养细胞凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的影响。方法:取化瘀消癥杀胚复方含药血清及甲氨喋呤、生理盐水组血清对体外培养的输卵管妊娠滋养细胞进行培养,通过蛋白质印迹法(Western Blot)检测与含药血清作用72h后,滋养细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。结果:滋养细胞与含药血清共同作用72h后,可降低Bcl-2蛋白表达量,与对照组比较,差异具有显著统计学意义(P0.01)。而Bax蛋白表达量未见有明显变化,两组含药血清与对照组比较,差异均无统计学意义。结论:化瘀消癥杀胚复方可能通过下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,降低Bcl-2/Bax比值,从而促进凋亡的途径起到治疗输卵管妊娠的作用。     

鹤蟾片诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的实验研究

目的研究鹤蟾片对A549人肺腺癌细胞凋亡的影响。方法制备大鼠含药血清,MTT法检测鹤蟾片含药血清对A549细胞的生长抑制率。利用PI染色观察和流式细胞术研究该含药血清对A549细胞凋亡的影响。RT-PCR检测含药血清对细胞表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)mRNA表达的调节作用。结果鹤蟾片含药血清明显抑制A549细胞生长,并使该细胞呈凋亡形态学改变。10%、20%含药血清组的细胞凋亡率为20.5%、33.2%,与对照组(6.1%)比较,差异均有统计学意义(P0.05)。含药血清组的细胞EGFR表达明显低于对照组(P0.05)。结论鹤蟾片具有诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的作用,分子机制可能与抑制EGFR基因的转录有关。     

四逆散含药血清对皮质酮损伤PC12细胞钙敏感受体相关作用机制研究北大核心CSCD

目的探讨四逆散对皮质酮诱导PC12细胞损伤的干预作用是否与钙敏感受体(CaSR)以及细胞凋亡密切相关。方法以四逆散含药血清为干预药物,将PC12细胞分为空白血清组、皮质酮组、2.5%、5%、10%含药血清组,MTT法检测细胞存活率。通过AnnexinⅤ/PI流式细胞分析法、蛋白免疫印迹技术对细胞凋亡率以及C-Caspase3、C-Caspase9、Bax(6A7)、细胞Cytochrome C蛋白进行检测。通过AnnexinⅤ/PI流式细胞分析法检测四逆散含药血清联合CaSR激动剂(GdCl3)或CaSR抑制剂(NPS2390)各组细胞的凋亡率。结果与空白血清组比较,皮质酮组存活率、CaSR蛋白表达量降低(P<0.01,P<0.05);皮质酮组凋亡率、C-Caspase3、C-Caspase9、Bax(6A7)以及胞浆Cytochrome C蛋白表达量增加(P<0.01,P<0.05)。与皮质酮组比较,含药血清组存活率增加(P<0.01),5%、10%含药血清组CaSR蛋白表达量及皮质酮+NPS2390组凋亡率增加(P<0.01,P<0.05);含药血清组、皮质酮+GdCl3组凋亡率降低(P<0.01)和10%含药血清组C-Caspase3、C-Caspase9、Bax(6A7)、胞浆Cytochrome C蛋白表达量降低(P<0.01)。与皮质酮+10%含药血清组比较,皮质酮+10%含药血清+NPS2390组凋亡率增加(P<0.01)。与皮质酮+GdCl3组比较,皮质酮+10%含药血清+GdCl3组凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。结论四逆散含药血清可以抑制皮质酮诱导的PC12细胞凋亡,其作用机制与CaSR有关。     

补肾复方含药血清对大鼠成骨细胞OPG、ODF表达的影响

为研究补肾复方对大鼠成骨细胞OPG、ODF表达影响。以补肾活血方、补肾健脾方、龟鹿二仙膏、金匮肾气丸、六味地黄丸、左归丸6种补肾中药复方及生理盐水给体重为250g左右的大鼠灌胃,提取含药血清;采用酶消化法从初生2天SD大鼠头盖骨中分离出成骨细胞,用含药血清及生理盐水进行成骨细胞传代培养;取第2代细胞,培养至细胞铺满培养瓶约80%时,更换含药血清培养液24小时;用含药血清培养液24小时后终止培养,提取总RNA,应用RT-PCR方法观察六种补肾复方对大鼠成骨细胞OPG、ODF表达影响。结果显示补肾活血方、补肾健脾方、金匮肾气丸、六味地黄丸和左归丸含药血清培养的大鼠成骨细胞OPG的表达量高于生理盐水对照组,龟鹿二仙膏含药血清培养的大鼠成骨细胞OPG的表达量低于生理盐水对照组,其中补肾活血方组、补肾健脾方组大鼠成骨细胞OPG表达量明显高于生理盐水对照组,统计学有显著性差异(P<0.05)。6种补肾复方含药血清培养的大鼠成骨细胞ODF表达量均低于生理盐水对照组,其中补肾活血方组、补肾健脾方组和金匮肾气丸组大鼠成骨细胞ODF表达量明显低于生理盐水对照组,统计学有显著性差异(P<0.05)。表明补肾活血方、补肾健脾方含药血清能增加大鼠成骨细胞OPG表达量,降低大鼠成骨细胞ODF表达量。     

基于MEK/ERK信号通路探讨阳和汤含药血清对乳腺癌4T1细胞的影响

目的 通过阳和汤含药血清干预小鼠乳腺癌4T1细胞,探索阳和汤对乳腺癌4T1细胞及其内丝裂原活化蛋白激酶（MEK）/细胞外调节蛋白激酶（ERK）信号通路的影响。方法 制备阳和汤SD大鼠含药血清。将其随机分组为空白组、阳和汤低、中、高剂量组（5.8、11.6、23.2 g·kg^-1）,空白组用生理盐水代替。各组按10%含药血清和90% RMPI 1640完全培养基均匀混合,干预细胞。采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）法分别在24、48、72 h检测阳和汤含药血清对4T1细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测4T1细胞的凋亡情况;采用划痕实验检测4T1细胞迁移情况;采用Transwell实验检测细胞侵袭能力;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测MEK1/2、磷酸化（p）-MEK1/2、ERK1/2、p-ERK1/2、大鼠肉瘤病毒（RAS）蛋白的表达水平。结果 与空白组比较,阳和汤干预24、48、72 h,阳和汤含药血清低、中、高剂量组对4T1细胞增殖具有明显抑制作用（P<0.05,P<0.01）;阳和汤干预48 h,阳和汤含药血清低、中、高剂量组细胞凋亡率显著升高（P<0.01）;阳和汤含药血清低、中、高剂量组在24、48 h的细胞划痕愈合能力显著降低（P<0.01）;阳和汤含药血清低、中、高剂量组细胞侵袭能力显著降低（P<0.01）;阳和汤含药血清低、中、高剂量组细胞内MEK1/2、ERK1/2表达差异无统计学意义,p-MEK1/2、p-ERK1/2、RAS蛋白表达显著降低（P<0.01）。结论 阳和汤可抑制乳腺癌细胞4T1增殖、迁移、侵袭,促进其凋亡。其凋亡机制与MEK/ERK信号通路受抑制,p-MEK1/2、p-ERK1/2、RAS蛋白表达下调有关。     

解毒化浊方对HER-2阳性乳腺癌细胞PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达的影响

目的观察解毒化浊方血清对HER-2阳性乳腺癌细胞PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达的影响,探讨解毒化浊方治疗HER-2阳性乳腺癌的作用机制。方法将雌性Wistar大鼠分为对照组、中药组、西药组、联合组4组,分别给药制备含药血清,再以给药血清干预SK-BR-3细胞,采用Western blot检测HER-2、p-HER-2蛋白表达以及PI3K/Akt通路相关蛋白p-Akt、Bad、p-Bad表达。结果 Western blot检测显示,中药组、西药组、联合组HER-2、p-HER-2灰度比较对照组均降低;西药组、联合组HER-2、p-HER-2、p-Akt灰度比较对照组明显降低,西药组、联合组较对照组HER-2、p-HER-2、p-Akt表达含量差异有统计学意义(P0.05)。中药组、西药组、联合组Bad、p-Bad灰度比较对照组降低,总Bad表达含量各组间差异无统计学意义(P0.05)。西药组、联合组p-Bad表达含量差异有统计学意义(P0.05)。结论解毒化浊方具有下调PI3K/Akt信号通路中相关蛋白表达,协同抑制剂发挥减毒增效的抗肿瘤作用。     

补肾健脾方干预大鼠成骨细胞增殖和凋亡的实验研究

目的:通过对补肾健脾方调控细胞凋亡途径干预大鼠成骨细胞增殖和凋亡的实验研究,探讨其治疗骨质疏松症的作用机制。方法:15只6个月龄SD雌性大鼠,随机分为补肾健脾方组、阿伦膦酸钠组、空白对照组(等体积生理盐水),每组5只,连续给药12 d,腹主动脉采血收集血清备用。细胞实验分为3组:空白对照组,补肾健脾方含药血清组和阿伦膦酸钠含药血清组。运用MTS测定成骨细胞增殖,实时荧光定量聚合酶链式反应法(qRT-PCR)测定Caspase-3、ERO1、Bax和Bcl-2 mRNA表达量。结果:MTS测定结果显示48 h和72 h补肾健脾方含药血清均对大鼠成骨细胞的增殖无明显的影响,差异无统计学意义(P0.05)。qRT-PCR结果显示补肾健脾方含药血清相比于空白对照组能明显降低Caspase-3(P0.01)和Bax(P0.05)基因表达水平,提高Bcl-2 mRNA表达量,差异有统计学意义(P0.01),但阿伦膦酸钠含药血清组Caspase-3和Bax基因下调更明显。结论:补肾健脾方含药血清能减少成骨细胞的凋亡,可能是通过Caspase-3/Bcl-2途径实现的。补肾健脾方对治疗骨质疏松症有一定的作用。     

乌萸汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞ERK1／2 MAPK信号转导途径的影响

目的运用血清药理学方法观察乌萸汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞（Gc）细胞外调节蛋白激酶（ERKl／2MAPK）信号转导途径的影响。方法在大鼠（GC）细胞培养体系中分别加入乌萸汤大鼠含药血清、卵泡刺激素（FsH）大鼠含药血清及正常大鼠血清,培养48h后,用蛋白质印迹法（Westernblot）测定各组大鼠Gc的ERK1／2磷酸化蛋白的相对表达量。结果各用药组GCERK1／2磷酸化蛋白相对表达量均明显升高,其中乌萸汤低剂量、中剂量血清组升高多于西药组,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论乌萸汤含药血清能通过提高ERK1／2蛋白磷酸化水平促进Gc增殖,可以通过使用乌萸汤调控ERK1／2促进卯泡发育、成熟及排出。