Wnt/β-catenin、BMP-2/Runx2/Osterix、OPG/RANKL、LGR4/RANKL通路的相关因子在绝经后骨质疏松性骨折中的表达

目的通过检测绝经后骨质疏松性骨折患者(PMOPF组)和对照组中血清、骨组织中因子LRP5、β-catenin、Runx2、Cmyc、Osterix、OPG、RANKL、LGR4水平的表达,分析相关的通路与PMOPF的相关性。方法选取胫骨骨折患者分为对照组、PMOPF组。RNAiso Plus法提取骨组织总RNA,RT-qPCR法检测各因子表达。对照组通过酶联免疫分析方法(ELISA)检测血清各因子水平; PMOPF组按采血时段分A～F组,ELISA检测各因子水平。比较对照组与PMOPF组、PMOPF组中各邻组之间的变化。结果 (1) RT-qPCR法检测PMOPF组骨组织LRP5、β-catenin、Runx2、C-myc、Osterix、OPG、LGR4水平明显下降(P0.05),RANKL水平明显上升(P0.05)。(2) ELISA法检测PMOPF组中A～F组各因子血清水平LRP5、β-catenin、Runx2、Cmyc、Osterix、OPG、LGR4水平明显下降(P0.05),RANKL水平明显上升(P0.05)。LRP5、Runx2在B组最低,β-catenin、Cmyc在C组最低,RANKL在C组最高,Osterix在D组最低,OPG、LGR4在E组最低。结论 Wnt/β-catenin、BMP-2/Runx2/Osterix、OPG/RANKL、LGR4/RANKL通路的相关因子与PMOPF发生关系密切。LRP5、Runx2在骨折3 d内水平降至最低,β-catenin、C-myc在骨折7 d内水平降至最低,反映了其在成骨阶段中的变化一致; Osterix在骨折14 d内水平降至最低,OPG、LGR4在骨折28 d内水平降至最低,可能与PMOPF短期内较难愈合有关; RANKL在骨折7 d内水平升至最高,可能与PMOPF后成骨有所增加有关。     

机械刺激联合铁治疗介导TGFβ/Wnt通路对小鼠胫骨骨愈合的影响

目的 研究机械刺激联合铁治疗通过TGFβ/Wnt信号通路介导细胞增殖促进骨愈合的潜在机制。方法 将18只10周龄雄性Balb/c小鼠随机分成正常组、骨折组、机械刺激/铁组,每组6只。制作小鼠胫骨骨折动物模型,酶联免疫吸附试验检测骨钙素、碱性磷酸酶、Runx2浓度,组织学分析骨组织体积,成骨细胞培养检测成骨细胞活力,Western Blot检测TGFβ/Wnt信号通路相关蛋白水平。结果 机械刺激/铁组骨钙素、碱性磷酸酶、Runx2浓度较骨折组高,骨折组较正常组高。Western Blotting检测机械刺激/铁组上调COL2A1蛋白表达水平,下调COL10A1和SOX9蛋白表达水平。与正常组相比,骨折组增殖细胞核抗原和Ki67蛋白水平低,机械刺激/铁组增殖细胞核抗原和Ki67蛋白水平较骨折组高。RT-PCR结果显示,与正常组相比,骨折组TGFβ、GSK3β和β-catenin mRNA水平上调,机械刺激/铁组mRNA水平上调被抑制,各组smad3 mRNA无明显变化。机械刺激/铁组成骨细胞COL2A1蛋白水平上调,TGFβ和β-catenin蛋白水平下调,促进成骨活性。结论 机械刺激联合...     

青娥丸调控Wnt1/β-catenin信号通路治疗糖尿病骨质疏松

目的 探究青娥丸对糖尿病骨质疏松（diabetic osteoporosis，DOP）小鼠模型Wnt/β-catenin通路的影响。方法 采用高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲菌素建立DOP小鼠模型，对小鼠进行药物干预，分为空白组、模型组、青娥丸低、中、高剂量组及阿仑膦酸钠组，进行一般状态观察，股骨组织进行HE染色，验证造模成功情况。生化检测各组小鼠碱性磷酸酶（ALP）、尿素氮（BUN）、天冬氨酸转氨酶（AST）的水平，免疫组化检测股骨Wnt/β-catenin信号传导通路中相关蛋白Wnt1、β-catenin、Runx2表达水平，HE染色观察各组股骨组织细胞形态，qPCR检测股骨组织中GSK-3β、低密度脂蛋白受体相关基因5(LRP5)、COL1A1 mRNA水平。结果 与对照组相比，模型组小鼠骨小梁间隔增大，骨小梁之间连接减少，小鼠多饮多尿少动，尾静脉血糖值增加（P＜0.01），血清中ALP、BUN、AST含量和GSK-3β mRNA水平均增加（P＜0.01），体重和LRP5、COL1A1 mRNA水平下调（P＜0.01），Wnt1、β-catenin、Runx2蛋白呈少量阳性表达（P＜0.01）。与模型组相比，青娥丸组和阿仑膦酸钠组骨小梁间隔变小，骨小梁间的连接增多，尾静脉血糖值下降（P＜0.01），血清中ALP、BUN、AST含量和GSK-3β mRNA水平均减少（P＜0.01），体重和LRP5、COL1A1 mRNA水平上调（P＜0.01），Wnt1、β-catenin、Runx2蛋白阳性表达增多（P＜0.01）。结论 青娥丸可增强DOP小鼠骨组织的修复作用，其机制可能与Wnt1/β-catenin信号通路的激活有关。 关键词：中医中药；青娥丸；糖尿病性骨质疏松；骨组织；Wnt1/β-catenin信号通路     

1,25(OH)2D3对人骨肉瘤MG63细胞基质GLA蛋白及Wnt信号通路的影响

目的观察1,25(OH)_2D_3对人成骨肉瘤MG63细胞株Wnt信号通路及MGP表达的影响,探讨其在骨质疏松发病中可能的新机制。方法分别使用10-8mol/L 1,25(OH)_2D_3、200 ng/ml Wnt信号通路阻断剂DKK-1、10-8mol/L 1,25(OH)_2D_3+200 ng/ml DKK-1干预人骨肉瘤细胞MG63细胞株48 h,使用实时荧光定量RT-PCR及western-blot技术测定Wnt/β-catenin信号通路中相关因子β-catenin、Runx2、LRP5及MGP基因及蛋白表达的影响。结果 (1)10-8mol/L 1,25(OH)_2D_3上调MG63细胞中Wnt/β-catenin信号通路中相关因子β-catenin、Runx2、LRP5及MGP的基因表达及蛋白的表达,其中上调基因分别是对照组的2.73倍、3.72倍、1.53倍、2.31倍,差异有统计学意义(P0.05);上调蛋白表达分别是对照组的1.13倍、1.17倍、1.14倍、1.21倍,差异有统计学意义(P0.05)。(2)DKK1下调β-catenin、LRP5、Runx2、MGP的基因及蛋白表达,其中下调基因表达分别是对照组的0.34倍、0.52倍、0.42倍、0.78倍,差异有统计学意义(P0.05)。下调蛋白表达分别是对照组的0.93倍、0.92倍、0.87倍、0.86倍,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 1,25(OH)_2D_3有可能通过Wnt/β-catenin信号通路影响MGP的表达。     

过表达miR-664a-5p激活Wnt/β-catenin信号通路促进骨质疏松大鼠骨重建

目的 探究过表达miR-664a-5p的脂肪间充质干细胞（miR-664a-5p-ADSCs）通过激活Wnt/β-catenin信号通路对骨质疏松（OP）大鼠骨重建的促进作用。方法 将大鼠分为Sham组、OVX组、ADSCs组和miR-664a-5p-ADSCs组。切除卵巢建立OP大鼠模型,Sham组仅切除脂肪组织。3个月后,ADSCs组和miR-664a-5p-ADSCs组分别尾静脉注射miR-664a-5p-ADSCs及其阴性对照ADSCs;Sham组和OVX组注射等量生理盐水。1个月后进行指标检测。micro-CT、HE染色、TRAP染色检测OP大鼠骨重建情况;免疫组化染色、RT-qPCR、Western blot检测Runx2、ALP、OCN、Wnt、β-catenin mRNA和蛋白的表达。结果 Sham组骨小梁完整,破骨细胞较少;与Sham组相比,OVX组骨小梁稀疏且变薄,破骨细胞较多;Runx2、ALP、OCN、Wnt、β-catenin mRNA和蛋白水平明显降低（P<0.05）;与OVX组相比,ADSCs组、miR-664a-5p-ADSCs组骨小梁增加且增厚,破骨细胞较少;Runx2、ALP、OCN、Wnt、β-catenin mRNA和蛋白水平明显升高,且miR-664a-5p-ADSCs组上述效果强于ADSCs组（P<0.05）。结论 过表达miR-664a-5p的ADSCs通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进OP大鼠骨重建。     

脂多糖对小鼠胫骨骨髓去除后早期骨形成的影响

目的 利用小鼠胫骨骨髓去除模型（bone marrow ablation, BMX）,观察脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）对BMX后早期骨形成的影响,并初步探讨其机制。方法 建立小鼠胫骨BMX模型后,分为对照组（PBS处理）和LPS处理组,每组6只。BMX后1周,通过组织病理切片染色和组织形态计量观察胫骨骨髓腔中骨形成情况。通过免疫组化检测BMX后4 d骨髓腔中增殖细胞核抗原（PCNA）表达情况,BMX后1周β-catenin和Runx2表达情况。采用RT-PCR检测BMX后1周新生骨组织中成骨分化相关基因和Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因表达水平。结果 BMX后1周,LPS处理组胫骨骨髓腔中新生骨组织较对照组减少,LPS处理组新生骨组织BV/TV较对照组显著减少;BMX后4 d,LPS处理组PCNA阳性细胞较对照组明显减少;BMX后1周,LPS处理组新生骨组织中Runx2阳性细胞和β-catenin阳性细胞较对照组明显减少;BMX后1周,LPS处理组新生骨组织中成骨分化相关基因和Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因表达水平较对照组明显降低。结论 LPS可以抑制间充质细胞增殖,抑制成骨分化,导致BMX后早期骨形成减少,Wnt/β-catenin信号通路可能参与了LPS抑制BMX后早期骨形成的过程。     

Wnt/β-catenin信号通路主要因子与成骨细胞研究进展

经典Wnt/β-catenin信号通路在成骨细胞的增殖、分化及骨形成过程中起关键作用.Wnt信号通路中主要因子Wnt配体、β-catenin及转录因子Runx2表达与功能的改变,将会影响成骨细胞的增殖、分化、骨基质的形成和矿化,进而导致骨量的变化.通路中不同因子在成骨细胞分化与成熟的过程中所起作用又有所不同,而且在此过程中又会受到其它因素的影响,进而增强或减弱成骨细胞分化与成熟的进程.     

中医药介导Wnt/β-catenin信号通路防治骨质疏松的研究进展

骨质疏松症（osteoporosis,OP）的发生多由骨吸收大于骨形成导致骨稳态失衡所引起,随着人口老龄化的到来,已逐渐发展成为困扰50岁以上人群的常见慢性代谢性骨病。Wnt/β-catenin信号通路在骨骼相关细胞增殖、分化中发挥着重要作用,通过激活其核心蛋白β-catenin,上调骨形态发生蛋白-2、骨保护素及下调核因子κB受体活化因子配体的表达,进而促进间充质干细胞成骨分化和抑制破骨细胞活性,达到促进骨形成和抑制骨吸收的目的,在骨骼靶向重建及骨稳态中发挥着重要作用。中医药可通过激活Wnt/β-catenin通路影响相关因子表达防治OP,但其分子机制研究尚未完全阐明。笔者旨在探讨Wnt/β-catenin通路在OP发病中的分子机制及综述中医药介导Wnt/β-catenin信号通路防治OP的研究成果,为中医药防治OP提供依据和新思路。     

Wnt/β-catenin信号通路探讨羌活鱼超微粉抗去卵巢大鼠骨质疏松的作用机制

目的 探讨羌活鱼超微粉对去卵巢大鼠骨代谢、骨微观结构及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法 选取75只4月龄SPF级雌性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、羌活鱼超微粉组、羌活鱼普通粉组、仙灵骨葆组,除假手术组外均采用去势法建立骨质疏松症动物模型。药物干预12周后通过ELISA检测各组血清骨代谢指标、通过Micro-CT扫描测定各组大鼠的股骨骨微结构变化、运用Western Blot法测定骨组织中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达。结果 药物干预12周后,与模型组相比,羌活鱼组、仙灵骨葆组的ALP、OPG、PINP及BMD、BV/TV、Tb.Th、Tb.N显著升高,SMI、Tb.Sp、TRACP显著降低,Wnt2、β-catenin、Runx2的蛋白表达增加,但仍较假手术组低,差异有统计学意义（P<0.05）;羌活鱼超微粉组在改善大鼠骨代谢、骨微观结构及蛋白表达方面均优于羌活鱼普通粉组,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 羌活鱼能够延缓去卵巢大鼠骨质疏松的发生、发展,且超微粉剂优于普通粉剂,其作用机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。     

不同中药调控Wnt/GSK-3β/β-连环素蛋白通路治疗骨质疏松症的研究现状

Wnt/GSK-3β/β-连环素蛋白(β-catenin)通路是一种作用广泛的经典信号通路,在骨骼生长发育及骨髓干细胞转化等多种过程起重要作用。笔者就不同中药通过该通路对骨重建影响的文献研究,了解到苦味药独活、藜芦、姜黄、黄连、黄芩,补肾药龟板、淫羊藿、骨碎补,补气药黄芪等单味中药及左归丸、右归丸、金贵肾气丸等补肾中药复方通过调控Wnt/GSK-3β/β-catenin通路,抑制GSK-3β的表达,促使更多的β-catenin向核内转移,进而诱导骨髓干细胞向成骨细胞分化,抑制破骨,以达到增加骨密度、增强骨的机械应力、治疗骨质疏松的作用效果,通过观察中药对Wnt/GSK-3β/β-catenin通路各种蛋白表达的影响,阐明中药对骨代谢的调节作用,为开展中药复方治疗骨质疏松症的研究与开发提供思路。     

Wnt/β-catenin信号通路与骨关节炎

近年大量研究证实Wnt/β-catenin信号通路通过调节胚胎期软骨发育及出生后软骨发生、成骨细胞和破骨细胞生成、软骨内成骨、骨重塑、骨折修复等过程,调控骨骼系统相关疾病和骨代谢,对骨关节炎(OA)发生发展、骨软骨组织诱导和修复起着至关重要的作用。基因敲除小鼠模型常用于Wnt/β-catenin信号通路与OA关系研究,全基因组扫描已发现一些与OA密切相关的单核苷酸多态性位点。目前在多个水平进行Wnt/β-catenin信号通路靶向治疗OA研究,重点考虑药物安全性。该文就Wnt/β-catenin与OA关系的研究进展作一综述。     

透骨消痛胶囊对膝骨关节炎大鼠软骨下骨Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨透骨消痛胶囊对膝骨关节炎大鼠软骨下骨Wnt/β-catenin信号通路表达的影响。方法:将60只SD大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、透骨消痛胶囊组,每组20只。除空白对照组外,其余大鼠采用改良Hulth法建造膝骨关节炎模型。空白对照组、模型对照组给予生理盐水灌胃,透骨消痛胶囊组给予10 mg·mL-1透骨消痛胶囊溶液灌胃。干预后,置于麻醉下取材,经RT-PCR、Western Blot分别检测软骨下骨中Wnt4、GSK-3β、β-catenin mRNA与蛋白含量变化。结果:RT-PCR、Western Blot结果显示,与空白对照组比较,模型对照组大鼠软骨下骨中Wnt4、GSK-3β、β-catenin mRNA与蛋白含量表达显著升高(P < 0.01);与模型对照组比较,透骨消痛胶囊组大鼠软骨下骨中Wnt4、GSK-3β、β-catenin mRNA与蛋白含量表达显著降低(P < 0.01或P < 0.05)。结论:透骨消痛胶囊可通过调控改良Hulth法制备的膝骨关节炎大鼠模型软骨下骨中Wnt4、GSK-3β、β-catenin mRNA与蛋白含量表达,从而延缓膝骨关节炎软骨下骨硬化。     

骨碎补经骨髓间充质干细胞调节OPG/RANKL/RANK通路抑制破骨细胞的实验研究

目的研究骨碎补作用绝经后骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)调节OPG/RANKL/RANK通路及对破骨细胞分化成熟的影响并探讨其可能的作用机制。方法实验大鼠去双侧卵巢造模,分为实验组(OVXDF,造模+骨碎补水煎液灌胃)、模型组(OVX,造模+0.9%生理盐水灌胃)、假手术组(SHAM,假手术+0.9%生理盐水灌胃),造模成功后提取BMSCs,将BMSCs和骨髓单核细胞共培养于Transwell小室的上室和下室,分为实验组+破骨细胞(OVXDF+OC)、模型组+破骨细胞(OVX+OC)、假手术组+破骨细胞(SHAM+OC)。下室加入破骨细胞诱导剂,倒置相差显微镜观察破骨细胞的分化成熟情况并计数,酶联免疫吸附剂测定(ELISA)检测下室培养液中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、RANKL的含量,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测BMSCs中Wnt10b、β-catenin、RANKL、OPG mRAN及蛋白表达并计算RANKL/OPG。结果在共培养系统中,与去卵巢灌胃大鼠BMSCs共培养的破骨细胞(OVXDF+OC)数量较单纯模型组+破骨细胞(OVX+OC)明显减少(P0.05)。下室培养液OPG含量及共培养BMSCs中Wnt10b、β-catenin、OPG mRAN及蛋白表达模型组+破骨细胞(OVX+OC)最低,RANKL及RANKL/OPG最高,经骨碎补灌胃后(OVXDF+OC)培养液中OPG含量及BMSCs细胞中Wnt10b、β-catenin、OPG mRAN及蛋白表达明显升高,培养液及BMSCs细胞中RANKL及RANKL/OPG明显降低(P0.05)。结论骨碎补可调节BMSCs细胞OPG、RANKL的表达,激活OPG/RANKL/RANK信号通路抑制破骨细胞的分化和成熟,此作用可能与BMSCs的Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。     

基于OPG/RANKL/RANK信号通路探讨益肾健骨方防治绝经后骨质疏松的作用机制

目的 通过研究益肾健骨方对破骨细胞的影响，进一步揭示益肾健骨方对绝经后骨质疏松症的作用机制。方法 大鼠去双侧卵巢造模后分为实验组(去势+益肾健骨方灌胃)、模型组(去势+生理盐水灌胃)、假手术组(假手术+生理盐水灌胃)、阳性药物对照组(去势+阿仑膦酸钠灌胃)，提取各组BMSCs进行培养、传代后备用，同时分离刚出生不久的大鼠破骨前体细胞进行体外培养，将各组骨髓间充质干细胞与破骨前体细胞共培养构建共培养体系。观察破骨细胞分化与成熟情况，并采用Real-time PCR与Western blot检测骨髓间充质干细胞与破骨前体细胞共培养体系中Wnt10b、β-Catenin、OPG、RANKL的表达情况。结果 在共培养体系中模型+OC组Wnt10b、β-Catenin、OPG mRNA与蛋白表达最低，RANKL mRNA与蛋白表达最高，假手术+OC组表达最高，益肾健骨方与阳性对照物组处理后可提升Wnt10b、β-Catenin、OPG mRNA与蛋白的表达情况，且两组间比较差异无统计学意义。在共培养体系中模型+OC组RANKL mRNA与蛋白表达最高，假手术+OC组表达最低，益肾健骨方与阳性对照物组处理后可降低RANKL mRNA及蛋白的表达，且两组间比较差异无统计学意义。结论 益肾健骨方可通过调节BMSCs抑制破骨细胞的形成，提高骨质量，同时通过激活OPG/RANKL/RANK信号通路抑制破骨细胞的分化与成熟，影响骨代谢从而防治PMOP。     

骨碎补通过骨髓间充质干细胞调节RANKL/OPG抑制破骨细胞的实验研究

目的　研究骨碎补对绝经后骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)RANKL/OPG及破骨细胞分化成熟的影响并探查其可能的作用机制。方法 实验大鼠去双侧卵巢造模,分为实验组（OVXDF,造模+骨碎补水煎液灌胃）、模型组（OVX,造模+0.9%生理盐水灌胃）、假手术组（SHAM,假手术+0.9%生理盐水灌胃）,造模成功后提取BMSCs,将BMSCs和骨髓单核细胞共培养于Transwell小室的上室和下室,分为实验组+破骨细胞（OVXDF+OC）、模型组+破骨细胞（OVX+OC）、假手术组+破骨细胞（SHAM+OC）。下室加入破骨细胞诱导剂,倒置相差显微镜观察破骨细胞的分化成熟情况并计数,酶联免疫吸附剂测定（ELISA）检测下室培养液中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、RANKL的含量,并计算RANKL/OPG,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测BMSCs中Wnt10b、β-catenin、RANKL、OPG mRAN及蛋白表达并计算RANKL/OPG。结果 在共培养系统中,与去卵巢灌胃大鼠BMSCs共培养的破骨细胞（OVXDF+OC）数量较单纯模型组+破骨细胞（OVX+OC）明显减少（P＜0.05）。下室培养液OPG含量及共培养BMSCs中Wnt10b、β-catenin、OPG mRAN及蛋白表达模型组+破骨细胞（OVX+OC）最低,RANKL及RANKL/OPG最高,经骨碎补灌胃后（OVXDF+OC）培养液中OPG含量及BMSCs细胞中Wnt10b、β-catenin、OPG mRAN及蛋白表达明显升高,培养液及BMSCs细胞中RANKL及RANKL/OPG明显降低（P＜0.05）。结论 骨碎补可调节BMSCs细胞OPG、RANKL的表达,激活OPG/RANKL/RANK信号通路抑制破骨细胞的分化和成熟,此作用可能与BMSCs的Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。     

骨代谢信号通路的研究进展

骨代谢包括骨形成及骨吸收两方面,受到多种因素的调控,其分子机制涉及遗传基因、信号通路、激素及旁分泌因子等多方面作用,而信号通路在其中起到了重要的调控作用。在目前的骨代谢信号通路研究中,BMP/Smads、Wnt/β-catenin及OPG/RANKL/RANK等3条通路已经得到较为深入的研究,并且公认为在骨代谢中起到了关键的信号调节作用,其中BMP/Smads及、Wnt/β-catenin通路主要影响骨形成,而OPG/RANKL/RANK则主要影响骨吸收。最新的研究表明,低氧/低氧诱导因子-la通路、PDGF、TGF-beta和FGF通路、AKt2选择通路、G蛋白信号通路、硫酸已酰肝素和硫酸软骨素通路、黏着斑激酶及胞外信号调节激酶通路等同样对成骨细胞及破骨细胞的分化增殖起到调节作用,并且发现BMP/Smads通路和Wnt/β-catenin通路之间存在着相互调节作用。对骨代谢信号通路的深入研究,可为骨代谢疾病尤其是骨质疏松症提供潜在的以细胞为基础的治疗新途径。     

基于Wnt信号通路研究骨康方对过表达DKK1大鼠骨形成影响

目的利用腺病毒过表达技术研究Wnt信号通路抑制因子Dickkopf1(DKK1)在大鼠骨形成中的作用并观察骨康方(补肾健脾活血方)对过表达DKK1转染大鼠骨形成的影响作用。方法选取成年SD大鼠18只,利用过表达DKK1(Ad-DKK1)腺病毒转染其中6只大鼠,空载腺病毒(Ad-EV)转染另外6只大鼠,用生理盐水对剩余的6只大鼠进行注射并设为对照组(NC)。转染成功后,每组随机选3只给予骨康方干预,另外3只给予等体积生理盐水,观察大鼠骨密度、Wnt信号通路相关因子DKK1,LRP6,β-catenin,APC,RUNX2,OPG表达量的变化。结果腺病毒成功转染大鼠,Ad-DKK1转染组DKK1表达量明显高于Ad-EV组及NC组,Ad-DKK1组骨密度低于Ad-EV组及NC组(P0.05);②中药干预后,Ad-DKK1组、Ad-EV组、NC组大鼠骨密度升高,Wnt信号通路抑制因子DKK1、APC表达量降低,Wnt信号通路成骨相关因子LRP6,β-catenin, RUNX2,OPG表达量升高(P0.05)。结论①过表达DKK1可导致大鼠股骨骨密度降低;②骨康方干预后,大鼠股骨骨密度升高,LRP6,β-catenin, RUNX2,OPG表达量增加, DKK1、APC表达量降低。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨太白楤木抗去卵巢大鼠骨质疏松症的作用和机制

目的 探索太白楤木对去卵巢大鼠骨质疏松症以及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法 40 只雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、仙灵骨葆胶囊组（0.3 g/kg）、太白楤木低剂量组（0.4 g/kg）和太白楤木高剂量组（0.8 g/kg）,每组8 只,除假手术组外其余组进行去卵巢手术。术后灌胃给药12周,三点弯曲试验测定骨生物力学性能,Micro-CT检测骨密度和微结构,ELISA法检测血清骨代谢指标,HE染色观察胫骨病理改变,Western blot法测定骨组织中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达情况。结果 经过12周治疗,与模型组相比,太白楤木高剂量组显著增大最大载荷、刚度和最大应力(P＜0.01),提高去卵巢大鼠骨密度(P＜0.01),保护骨小梁微结构不被破坏,骨吸收标志物NTX-Ⅰ和TRAP水平降低(P＜0.01),骨形成标志物BALP水平升高(P＜0.01),Wnt3a、β-catenin和RUNX2蛋白表达量升高(P＜0.01),p-β-catenin蛋白水平降低(P＜0.01)。结论 太白楤木对去卵巢大鼠生物力学性能、骨密度和骨微结构具有保护作用,太白楤木调节骨代谢可能和激活Wnt/β-catenin信号通路有关。     

miR-122-3p通过wnt/β catenin信号通道调控小鼠脂肪间充质干细胞成骨分化

[目的]探究miR-122-3p在小鼠脂肪间充质干细胞成骨分化中的调控机制。[方法]从6只雄性C57BL/6小鼠获取m ADSCs,成骨诱导培养基中培养,观察成骨情况。miR-122-3p、miR-NC、antimiR-122-3p和anti-NC基因慢病毒转染m ADSCs,q RT-PCR检测miR-122-3p表达以及成骨特异性基因Ocn及Alp的m RNA表达。Western blotting检测β-catenin的蛋白表达量。[结果]成骨诱导培养后,m ADSCs开始成骨分化,ALP染色和茜素红染色阳性。经转染后,过表达miR-122-3p会抑制m ADSCs成骨分化。反之,敲减miR-122-3p会促进m ADSCs成骨分化。Western Blotting检测表明,过表达miR-122-3p会激活Wnt/β-catenin信号通路。反之,敲减miR-122-3p会抑制Wnt/β-catenin信号通路。[结论] miR-122-3p通过调控Wnt/β-catenin信号通路,影响小鼠m ADSCs成骨分化。     

Wnt/β-catenin信号通路与肾性骨病

大量研究显示Wnt/β-catenin信号通路在肾性骨病发生发展中具有重要作用。本文从生理、病理两个层面综述了Wnt/β-catenin信号通路在肾骨调控中的作用。在生理状态下,Wnt/β-catenin信号通路不仅具有调节肾形成祖细胞自我更新与分化,进而形成足量的肾单位的作用,而且可以促进多能间充质干细胞分化成成骨细胞系,抑制其向软骨以及脂肪细胞系分化的同时抑制成骨细胞凋亡,延长其生命,促进骨形成,还可以通过调节OPG的表达抑制破骨细胞分化和骨吸收。当肾脏受损后,在SOST、DKK1、Vitamin D/VDR、FGF23/α-Klotho、PTH/PTH1R、TGF-β/BMPs等诸多因素直接或间接影响下,一方面骨细胞中Wnt/β-catenin信号表达异常,影响正常的骨形成与骨吸收,引起骨稳态失衡进而发生骨病,另一方面肾脏中Wnt/β-catenin信号的异常表达或加速或修复自身损伤,并进一步影响骨稳态。