线粒体靶向抗氧化剂Mitoquinone对人精子冻融氧化应激损伤的保护作用

目的:探讨线粒体靶向抗氧化剂Mitoquinone(Mito Q)对冻融人精子的保护作用。方法:选取60份健康生育男性精液标本,每份精液一式6份,不含Mito Q者设为对照组(G0),而G1、G2、G3、G4、G5实验组混合液中分别含有2 nmol/L、20 nmol/L、200 nmol/L、2μmol/L、20μmol/L Mito Q,37℃孵育1 h后检测活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)和线粒体膜电位(MMP)变化。选取合适Mito Q浓度B1、B2组用于精子冷冻保存,B0组未添加Mito Q,B1、B2组在精子冷冻保护液中分别含有200 nmol/L和2μmol/L Mito Q,进行冷冻保存,检测冷冻复苏后的ROS水平、MDA含量和MMP改变。结果:新鲜精液添加Mito Q孵育后,G3组和G4组前向运动精子百分率[(30.8±10.2)%和(32.7±13.5)%]和总活动率[(70.6±9.0)%和(70.3±11.9)%]显著高于G0组[(17.6±5.0)%、(54.9±11.5)%](P0.05);随着Mito Q浓度的增加,ROS水平呈下降趋势,G3、G4、G5组(分别为86.5±31.6、93.6±42.0、45.1±15.0)显著低于G0组(160.8±39.7)(P0.05);MDA含量G3、G4组[分别为(0.9±0.5)、(0.9±0.5)μmol/mg]明显低于G0组[(1.9±1.1)μmol/mg](P0.05),而G5组[(1.7±0.7)μmol/mg]不但没有降低,反而显著高于G3、G4组(P0.05);与G0组MMP(1 701±251)相比,G5组(1 156±216)显著降低(P0.05),而G1、G2、G3、G4组(分别为1 810±298、1 995±437、1 950±334、1 582±314)无明显变化。冷冻复苏后各组前向运动精子百分率和总活动率均较新鲜精液明显下降(P0.01),B1组前向运动精子百分率[(3.2±2.3)%]较B0组[(0.8±0.6)%]明显改善(P0.05);B1组精子总活动率[(43.0±9.5)%]较B0组[(26.5±11.4)%]明显改善(P0.05);B1组ROS[(34.6±12.3)]和B2组ROS[(37.0±10.5)]均较B0组[(56.9±14.3)]显著下降(P0.05),B1组MDA[(1.4±0.5)μmol/mg]和B2组MDA[(1.4±0.6)μmol/mg]均较B0组[(2.6±1.0)μmol/mg]显著下降(P0.05),B1组MMP[(1 010.0±131.5)]和B2组MMP[(880.6±128.6)]均显著高于B0组[(721.1±24.8)](P0.05)。结论:在精液冻存液中添加200 nmol/L的Mito Q能有效提高人精子质量,可作为精液冷冻保护添加剂用于精液的冷冻保存。     

神经生长因子与尼莫地平对糖尿病周围神经病变预处理的影响

目的 比较神经生长因子(NGF)与尼莫地平两种药物对大鼠糖尿病周围神经病变(DPN)预处理的影响.方法 用链脲佐菌素(STZ)诱导建立糖尿病(DM)大鼠模型并随机分组:Ⅰ:空白对照组(Control);Ⅱ:糖尿病组(DM);Ⅲ:糖尿病+β-神经生长因子组(DM+ β-NGF);Ⅳ:糖尿病+尼莫地平组(DM+ Nimodipine).检测各组坐骨神经运动传导速度(MNCV)以及坐骨神经病理改变.结果 坐骨神经MNCV的测量结果:8周时,Control组[(50.70±1.12) m/s]与DM组[(45.80±1.12) m/s]比较,差异有统计学意义(P＜0.05),β-NGF组[(49.50±1.08) m/s]、尼莫地平组[(48.50±0.81) m/s]分别与DM组[(45.80±1.12) m/s]比较,差异有统计学意义(P＜0.05);12周时,β-NGF组[(49.50±1.08) m/s]、尼莫地平组[(48.50±0.81) m/s]分别与Control组[(50.90±1.31) m/s]比较,差异有统计学意义(P＜0.05),β-NGF组[(49.50±1.08) m/s]与尼莫地平组[(48.50±0.81) m/s]比较,差异有统计学意义(P＜0.05).与Control比较,其余3组坐骨神经形态学结构均有不同程度的破坏,DM组＞尼莫地平组＞β-NGF组.结论 NGF和尼莫地平均对大鼠坐骨神经糖尿病周围神经病变有预保护作用,但不能阻止其发生和发展,NGF对其预保护作用要优于尼莫地平,并随时间延长效果也逐渐明显.     

丙泊酚抑制过氧化氢诱导人红细胞衰亡

目的 观察过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)在体外诱导人红细胞磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)外露及前向散射值(forward scatter,FSC)的变化,探讨丙泊酚对此的影响和机制.方法 健康成年人红细胞制成2％悬液,分为5组:对照组(C组)、H2O2组(H组)、丙泊酚10 μmol/L+H2O2组(P10+H组)、丙泊酚50 μmoL/L+ H2O2组(P50+H组)、丙泊酚100μmol/L+H2O2组(P100+H组).以离子霉素、维生素E和英脱利匹特为阳性和阴性对照.各组H2O2的反应浓度均为200μmol/L,孵育1h后用流式细胞仪检测红细胞PS标记率及FSC.所得数据用SPSS软件统计处理.结果 红细胞PS标记率H组比C组(15.20±1.01)、(1.45±0.21)(P＜0.001)明显增高,P50+H组(3.09±1.66)和P100+H组(1.68±0.28)均比H组(15.20±1.01)明显低(P＜0.001).FSCH组比C组小(1 768±9)、(1 808±26)(P=0.047),P50+H组比H组明显恢复(1 811±16)、(1 768±9)(P=0.037).结论 H2O2能诱导人红细胞衰亡,丙泊酚对其有明显抑制作用,其机制在于丙泊酚有较强的抗氧化及清除自由基功能.     

结肠慢传输型便秘与突触素和 P物质及血管活性肠肽的临床研究

目的探讨突触素(synapses,SY)、P物质(substanceP,SP)和血管活性肠肽(vasoactiveintestinepolypeptide,VIP)在结肠慢传输型便秘(slowtransitconstipation,STC)中的变化及病理学意义。方法应用免疫组织化学技术和病理显微镜分析图像系统,在中倍光镜下计算22例STC患者(STC组)和12例非梗阻性结直肠癌患者(对照组)的阳性染色区域的面积并进行对比。结果STC组患者结肠内SY、VIP和SP镜下阳性面积均较对照组明显减少。STC组和对照组SY分别为[(1.53±0.92)×105]μm2和[(3.33±1.09)×105]μm2;两组比较,P<0.001。SP分别为[(1.41±0.85)×105]μm2和[(2.22±1.31)×105]μm2,两组比较,P<0.05。VIP分别为[(1.22±0.72)×105]μm2和[(2.14±1.35)×105]μm2,两组比较P<0.05。结论STC患者存在肠神经系统突触功能障碍,从而导致肠神经递质下降。     

聚集蛋白聚糖对盘源性下腰痛椎间盘内神经生长的影响

目的探讨痛性椎间盘神经纤维内生长的原因。方法以正常、内破裂及突出椎间盘中提取的聚集蛋白聚糖与培养基一起培养人骨髓神经母细胞瘤(SH-SY5Y),磷酸盐缓冲溶液(PBS)作对照处理,检测比较神经细胞轴突发生率及轴突长度。结果浓度为100 mg/L时,内破裂及突出椎间盘髓核和纤维环聚集蛋白聚糖处理组中神经细胞轴突发生率及其长度[(44.8±2.8)%/(41.8±2.0)μm和(34.2±2.9)%/(37.2±3.1)μm;(56.0±1.5)%/(51.8±2.2)μm和(48.8±1.5)%/(48.2±2.2)μm]较正常对照组[(34.2±2.6)%/(29.0±2.5)μm和(23.4±2.6)%/(26.2±2.2)μm]明显增加(P<0.05);浓度为10mg/L或1000mg/L时,3者之间差异无统计学意义(P>0.05),但均具有类似的上升趋势。结论痛性椎间盘中聚集蛋白聚糖对神经生长抑制能力减弱,有利于椎间盘源性下腰痛的产生。     

番茄红素对缺氧/复氧诱导小鼠心肌细胞内质网应激和凋亡的影响

目的 评价番茄红素对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)引起的小鼠心肌细胞内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)和凋亡的影响. 方法 建立C57BU6乳鼠心肌细胞H/R模型,采用随机数字表法将C57BL/6小鼠心肌细胞分为正常对照组(C组)、番茄红素组(Lyc组,含5μmol/L番茄红素的培养基预处理4h)、H/R组(H/R组,缺氧4h复氧6h)和番茄红素+H/R组(Lyc+H/R组,给予5μmol/L番茄红素预处理4h后行H/R处理).采用水溶性四氮唑-8(cell counting Kit-8,CCK-8)法检测心肌细胞存活率,倒置显微镜下观察细胞搏动频率,TUNEL法检测细胞凋亡率,二氯荧光素法(dichlomnuorescein diacetate,DCFH-DA)检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,实时荧光定量PCR (real-time PCR)检测葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)及半胱天冬氨酸蛋白酶-12 (cysteme aspartate specific protease-12,caspase-12)mRNA的表达,Western blot法分析剪切的半胱天冬氨酸蛋白酶-12(cleaved cysteme aspartate specific protease-12,Cleaved-caspase-12)和剪切的半胱天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved cysteme aspartate specific protease-3,Cleaved-caspase-3)的表达. 结果 与C组比较,H/R组心肌细胞存活率显著降低[(100±5)％,(69±6)％](P＜0.01),搏动频率显著降低[(94±6),(28±5)次/min](P＜0.01),心肌细胞凋亡率[(4.9±1.5)％,(25.6±2.6)％]和ROS含量[(100±11)％,(226±10)％]显著升高(P＜0.01);CHOP mRNA[(1.00±0.10)、(2.60±0.19)]和GRP78 mRNA[(1.00±).18)、(4.12±0.23)]表达水平显著升高(P＜0.05);caspase-12 mRNA[(1.00±0.09)、(1.79±0.14)]、Cleaved-caspase-12[(1.00±0.08)、(1.85±0.10)]和Cleaved-caspase-3[(1.00±0.07)、(1.89±0.14)]表达水平显著升高(P＜0.05).与H/R组比较,Lyc+H/R组心肌细胞存活率明显升高[(69±6)％、(84±7)％](P＜0.05),搏动频率增加[(28±5)、(73±6)次/min] (P＜0.05),凋亡率显著降低[(25.6±2.6)％,(18.2±2.2)％](P＜0.05),细胞内ROS含量[(226±10)％、(140±16)％]明显降低,CHOP mRNA [(2.60±0.19)、(1.71±0.14)]和GRP78 mRNA[(4.12±0.23),(1.98±0.19)]表达水平显著降低(P＜O.05);caspase-12 mRNA[(1.79±0.14)、(1.38±0.11)]、Cleaved-caspase-12[(1.85±0.10)、(1.26±0.12)]和Cleaved-caspase-3[(1.89±0.14)、(1.36±0.12)]表达水平显著降低(P＜0.05). 结论 番茄红素可抑制H/R过程中的ERS及其凋亡信号途径而减轻心肌细胞损伤.     

硫化氢对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗和脂代谢的影响

目的 观察硫化氢对2型糖尿病(T2DM)大鼠胰岛素抵抗和脂代谢的影响.方法 65只大鼠采用高糖高脂饮食+腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法建立T2DM模型,将45只成模大鼠随机分为糖尿病(DM)、DM+硫氢化钠(NaHS)和DM+ DL-炔丙基甘氨酸(PAG)组,每组各15只,另设正常对照组.DM+ NaHS组大鼠腹腔注射NaHS[56 μmol/(kg·d)],DM+ PAG组腹腔注射PAG[50 mg/(kg·d)],对照组和DM组给予相同体积的生理盐水,连续给药2周.给药结束后,测定大鼠空腹血糖(FBG)、胰岛素(FIns)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、游离脂肪酸(FFA),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素敏感指数(ISI);测定胰腺组织中硫化氢(H2S)浓度,免疫组织化学方法检测胰腺组织胰岛素表达.结果 与对照组比较,DM组大鼠FBG[(18.22±3.99) mmol/L]、TG[(1.54 ±0.16) mmol/L]、TC[(3.27±0.38) mmol/L]、FFA[(504.68±37.70) μmol/L]水平及HOMA-IR升高(P＜0.05),FIns[(41.79±3.43) mU/L]和ISI(-6.57 ±0.37)降低,胰腺组织H2S浓度[(96.98±19.44) μmol/L]升高,胰腺组织胰岛素阳性表达细胞面积(AIEP)和胰岛素阳性染色率(PRSI)降低,差异均有统计学意义(P＜0.05);与糖尿病组比较,NaHS干预后,糖尿病大鼠FBG[(25.42 ±0.21) mmol/L]、TG[(2.40 ±0.21) mmol/L]、TC[(4.80 ±0.16) mmol/L]、FFA[(633.96±25.64)μmol/L]水平及HOMA-IR升高更明显,FIns[(29.36±2.65) mU/L]和ISI(-6.58±0.27)降低,胰腺组织H2S浓度[(134.50±12.70)μmol/L]明显升高,AIEP和PRSI降低,差异均有统计学意义(P＜0.05);应用PAG后,糖尿病大鼠血浆FBG[(10.83±1.10) mmol/L]、TG[(1.30±0.12) mmol/L]、TC[(2.79 ±0.33) mmol/L]、FFA[(383.39±69.00) μmol/L]水平明显降低,胰岛素抵抗改善,FIns[(51.58±1.49) mU/L]和ISI(-6.32±0.11)明显升高,胰腺组织H2S浓度[(71.48±10.94) μmol/L]明显降低,AIEP和PRSI增加.结论 H2S通过影响T2DM大鼠胰岛素抵抗和脂代谢参与糖尿病发生发展.     

5-ALA-纳米金光动力治疗小鼠光老化的初步研究

目的:初步探讨5-ALA-纳米金光动力治疗小鼠皮肤光老化的作用。方法:48只雄性健康ICR小鼠分为正常对照组(8只)、光老化组(40只),正常组不予特殊处理,光老化组照射紫外线,肉眼观察和HE染色验证光老化模型。40只光老化组小鼠分为B组光老化对照组,C组红光组、D组纳米金组、E组5-ALA组、F组5-ALA-纳米金组,C、D、E、F组小鼠背部分别涂抹不同溶液0.5ml(分别为生理盐水、纳米金溶液、5-ALA溶液和5-ALA-纳米金组溶液)避光封包3h,红光照射10min,2周治疗1次,共治疗2次,A组为正常组对照组不予任何处理。观察各组小鼠皮肤表现和组织病理改变。结果:与A组比较,紫外线照射后,B组小鼠皮肤皮肤增厚,出现皮屑、深皱纹、缺乏弹性等光老化特征;组织切片显示,B组小鼠表皮厚度[(168.235±13.665)μm]较A组[表皮(87.165±2.627)μm]增厚(P0.05),而胶原纤维面积密度[(7.390±2.5)%]均较A组[(40.114±3.0)%]明显减少(P0.05)。与B组相比,C、D、E和F组小鼠的表皮变薄[分别为(154.458±2.942)μm,(114.958±2.229)μm,(50.623±4.203)μm和(31.694±1.970)μm,P0.05],胶原纤维面积密度增加[分别为(15.840±3.0)%,(27.320±2.5)%,(60.812±2.0)%和(70.024±3.0)%,P0.05],其中以F组效果最显著。结论:5-ALA结合体能提高光动力疗法治疗小鼠光老化的疗效,同时纳米金的光热作用可能用于治疗光老化。     

显微镜下三种术式治疗精索静脉曲张疗效比较

目的:探讨显微镜下精索静脉结扎不同术式治疗精索静脉曲张的效果。方法:选取147例精索静脉曲张患者作为研究对象,依据采取的术式不同将其分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组各49例。Ⅰ组行经腹股沟精索静脉高位结扎术,Ⅱ组行经腹膜后精索静脉高位结扎术,Ⅲ组行精索静脉低位结扎术。对比3组的手术相关指标以及住院时间、精子质量以及并发症和复发情况。结果:Ⅰ组手术时间(55.28±15.36)min、Ⅱ组手术时间(56.04±16.730)min,均明显短于Ⅲ组(75.29±16.97)min;3组出血量及总住院时间差异无统计学意义(P0.05)。术后1年,3组精子密度、存活率及(A+B)级活动力精子比例较术前均显著提高,Ⅲ组精子密度[(185.36±49.37)×10~6/m L]较Ⅰ组[(149.65±38.22)×10~6/mL]和Ⅱ组[(148.77±39.62)×10~6/m L]显著升高(P0.05),Ⅲ组存活率[(99.55±22.16)%]较Ⅰ组[(73.45±17.21)%]和Ⅱ组[(74.08±18.06)%]显著升高;Ⅲ组(A+B)级活动力精子比例[(91.79±25.68)%]较Ⅰ组[(70.25±15.16)%]和Ⅱ组[(72.83±17.58)%]显著升高。Ⅲ组术后并发症发生率为5.56%,较Ⅰ组(23.61%)和Ⅱ组(20.83%)显著降低。3组复发情况差异无统计学意义(P0.05)。结论:显微镜下精索静脉结扎术治疗精索静脉曲张效果确切,精索静脉低位结扎术相对于经腹膜后或腹股沟精索静脉高位结扎术,更有利于提高精子质量、降低术后并发症风险。     

西格列汀联合二甲双胍对2型糖尿病伴骨质疏松症患者骨代谢的影响

目的探讨西格列汀联合二甲双胍对2型糖尿病伴骨质疏松患者骨转换标志物和骨密度的影响。方法选取2015年1月至2016年1月在本院明确诊断的2型糖尿病合并骨质疏松患者95例,随机分为3组,二甲双胍(metformin,M)+阿卡波糖组(acarbose,A)(M+A组)32例、西格列汀(sitagliptin,S)+阿卡波糖组(S+A组)31例、西格列汀+二甲双胍+阿卡波糖组(S+M+A组)32例,治疗随访48周。治疗前及治疗48周后测定体质量指数(body mass index,BMI)、血清空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、餐后2小时血糖(2-hour postprandial plasma glucose,2h PG)、糖化血红蛋白(glycated hemoglobin A1c,Hb A1c)、25-羟基维生素D[25-hydroxyvitamin D,25(OH)D]、骨钙素(osteocalcin,OC)、I型胶原羧基端肽β特殊系列(β-cterminal cross-linked telpeptide,β-CTX)、骨特异碱性磷酸酶(bone specific alkaline phosphatase,b-ALP)。采用双能X线吸收测定法(dual energy X-ray absorptiometry,DXA)测定患者腰椎2~4及股骨颈的骨密度(bone mineral density,BMD)。比较各组治疗前后BMI、生化指标、骨转换指标和BMD的变化。结果 5例患者因药物不耐受而脱落,90例患者完成治疗随访,3组各30例。M+A组、S+A组、S+M+A组患者治疗前BMI[(25.1±1.5、25.2±1.6、25.1±1.7)kg/m2]、FPG[(8.45±0.81、8.43±0.83、8.46±0.91)mmol/L]、2h PG[(11.54±1.58、11.68±1.61、11.72±1.70)mmol/L]、Hb A1c[(7.92±0.71、7.95±0.73、7.94±0.75)%]比较差异无统计学意义(均P0.05);治疗后BMI[(24.2±1.6、24.1±1.5、23.5±1.4)kg/m2]、FPG[(6.51±0.69、6.49±0.67、6.15±0.71)mmol/L]、2h PG[(9.10±0.72、9.18±0.89、8.11±0.51)mmol/L]、Hb A1c[(6.71±0.51、6.74±0.53、6.18±0.58)%]均较治疗前显著下降,差异有统计学意义(均P0.05);治疗后S+M+A组与M+A组和S+A组BMI、FPG、2h PG、Hb A1c比较下降更显著,差异有统计学意义(均P0.05);M+A组与S+A组BMI、FPG、2h PG、Hb A1c比较差异无统计学意义(均P0.05)。M+A组、S+A组、S+M+A组患者治疗前b-ALP[(12.5±1.9、12.6±2.1、12.4±2.4)U/L]、OC[(14.2±1.8、14.3±1.7、14.1±1.9)μg/L]、β-CTX[(413.5±65.3、420.4±70.5、428.1±69.6)ng/L]和腰椎2~4的BMD[(0.417±0.091、0.415±0.086、0.419±0.095)g/cm2]及股骨颈的BMD[(0.483±0.086、0.492±0.092、0.487±0.094)g/cm2]比较差异无统计学意义(均P0.05);治疗后b-ALP[(15.8±2.4、16.1±2.5、20.4±2.9)U/L]、OC[(16.9±2.2、17.2±2.4、20.5±2.6)μg/L]明显升高,β-CTX[(351.7±45.8、352.9±47.9、319.5±50.9)ng/L]明显下降,腰椎2~4的BMD[(0.552±0.087、0.572±0.079、0.632±0.084)g/cm2]及股骨颈BMD[(0.617±0.073、0.621±0.073、0.715±0.083)g/cm2]增加,与治疗前比较差异有统计学意义(均P0.05);治疗后S+M+A组与M+A组和S+A比较,b-ALP、OC、BMD升高更显著,β-CTX下降更显著,差异有统计学意义(均P0.05);M+A组与S+A组b-ALP、OC、β-CTX、BMD比较差异无统计学意义(均P0.05)。3组患者治疗前、后25(OH)D变化无统计学意义(均P0.05)。结论西格列汀和二甲双胍除了具有降低血糖的作用外,还能够促进骨形成、抑制骨吸收,增加糖尿病合并骨质疏松患者骨密度,且两药联合应用有叠加增强作用。     

RNA干扰沉默神经干细胞Nogo-66受体基因阻断Nogo-66抑制神经突生长作用的研究

目的检测Nogo-66是否对大鼠脊髓来源神经干细胞分化形成的神经元具有神经突生长抑制作用,以及其抑制作用是否可以通过沉默Nogo-66受体（Nogo-66 receptor,NgR）基因的方法进行阻断。方法体外培养大鼠脊髓来源神经干细胞,经小分子干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）转染以沉默NgR基因表达,用免疫荧光法和Western blot检测神经干细胞在转染前后NgR基因的表达。取神经干细胞分为四组,均在含10%胎牛血清的培养基中分化。对照组不加干预因素;Nogo-P4组在分化过程中加入Nogo-66的活性片段Nogo-P4;siRNA组神经干细胞经siRNA转染使NgR基因表达沉默后开始分化;siRNA加Nogo-P4组神经干细胞经siRNA转染后在含有10%胎牛血清和Nogo-P4的培养基中分化。免疫荧光法标记分化形成的神经元,测量神经突长度,比较各组神经突长度的变化。结果悬浮培养的细胞形成典型的神经球,经免疫荧光检测Nestin表达阳性。加入10%胎牛血清分化1周后,可观察到神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白质和髓鞘碱性蛋白标记阳性的细胞。siRNA转染后24h,大部分神经干细胞NgR基因染色转为阴性,Western blot检测神经干细胞NgR基因表达显著降低,NgR基因阻断效率为90.35%±3.10%。神经干细胞分化第3天形成的神经元神经突长度在对照组为97.80±6.97μm,Nogo-P4组为80.54±6.75μm,siRNA组为92.14±7.27μm,siRNA加Nogo-P4组为94.01±8.37μm。Nogo-P4组与其他各组比较差异有统计学意义（P〈0.01）,对照组、siRNA组和siRNA加Nogo-P4组间比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论Nogo-66对神经干细胞分化形成的神经元有神经突生长抑制作用,可以通过RNA干扰技术使神经干细胞NgR基因表达沉默,并阻断Nogo-66抑制神经突生长的作用。     

表没食子儿茶素-3-没食子酸(EGCG)对大鼠自体移植静脉桥狭窄的抑制作用及其机制研究

目的探讨表没食子儿茶素-3-没食子酸(EGCG)对大鼠自体静脉移植再狭窄的抑制作用及其相关机制。方法 90只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,随机分为对照组、实验组(自体静脉移植组)和EGCG干预组(自体静脉移植+EGCG干预组),术后1、2和4周通过病理切片检测各组颈外静脉内膜、中膜厚度,免疫组化检测颈外静脉中反映平滑肌细胞增殖的Ki-67表达情况,通过蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测颈外静脉中转录因子发状分裂相关增强子1(HES1)蛋白表达情况。结果第2周实验组与对照组和EGCG干预组相比,颈外静脉内膜[(46.76±4.89)μm vs.(8.93±0.82)μm,(46.76±4.89)μm vs.(34.24±3.57)μm]、中膜厚度[(47.28±4.37)μm vs.(16.33±1.52)μm,(47.28±4.37)μm vs.(36.27±3.29)μm],Ki-67阳性率(21.59%±2.29%vs.1.12%±0.22%,21.59%±2.29%vs.15.38%±1.30%)和HES1蛋白表达均显著增加(P0.05)。第4周实验组与对照组和EGCG干预组相比,颈外静脉内膜[(66.38±6.23)μm vs.(8.29±0.79)μm,(66.38±6.23)μm vs.(48.39±4.23)μm]、中膜厚度[(63.27±6.18)μm vs.(15.29±1.49)μm,(63.27±6.18)μm vs.(44.63±4.49)μm],Ki-67阳性率(33.19%±3.03%vs.1.09%±0.19%,33.19%±3.03%vs.24.37%±2.73%)和HES1蛋白表达也显著增加(P0.05)。结论 EGCG可能通过抑制Notch通路发挥保护自体静脉桥移植后再狭窄作用。     

雄激素缺乏对大鼠阴茎海绵体H2S信号通路的影响

目的:研究H2S信号通路在雄激素缺乏引起勃起功能下降中的作用。方法:8周龄健康雄性SD大鼠30只,随机分成6组:假手术2周组(A组)、假手术4周组(B组)、去势2周组(C组)、去势4周组(D组)、去势后雄激素替代治疗2周组(E组)和去势后雄激素替代治疗4周组(F组)。E、F去势术后给予生理剂量丙酸睾酮3 mg/(kg·d)皮下注射。测定各组大鼠血清睾酮、阴茎海绵体内压(ICP)、平均颈动脉压(MAP),测定血浆和阴茎组织内H2S浓度,免疫组化和Western印迹检测胱硫醚-β-合成酶(CBS)、胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)蛋白的表达。结果:血清睾酮水平结果显示C组[(0.63±0.15)nmol/L]较A组[(16.55±4.17)nmol/L]、E组[(18.99±4.62)nmol/L]显著降低(P0.05);D组[(0.70±0.22)nmol/L]较B组[(15.44±5.18)nmol/L]、F组[(20.99±6.41)nmol/L]显著降低(P0.05)。予以5、7 V电刺激盆神经后,ICP/MAP在C组较A、E组显著降低(P0.05),D组较B、F组显著降低(P0.05)。血浆及阴茎组织内H2S浓度含量C组较A、E组显著降低(P0.05),D组较B、F组显著降低(P0.05)。免疫组化和Western印迹检测阴茎海绵体组织内CBS、CSE蛋白表达量,C组较A、E组显著降低(P0.05),D组较B、F组显著降低(P0.05)。C组较D组CBS、CSE蛋白表达量显著降低(P0.05)。结论:阴茎海绵体组织CBS、CSE表达下降引起H2S信号通路受抑可能是雄激素缺乏引起大鼠勃起功能下降的机制之一。     

褪黑素与全反式维甲酸共同作用对大鼠脊髓神经干细胞分化的影响

[目的]研究全反式维甲酸(all-trans retinoic ac id,ATRA)与不同浓度的褪黑素(m elaton in,MT)共同作用对体外培养的胚胎大鼠脊髓神经干细胞(neural stem cells,NSCs)向神经元方向分化的影响。[方法]取孕14 d的胚胎大鼠脊髓,原代培养出脊髓NSCs,传4代后分别加入ATRA与不同浓度的MT组合。采用细胞计数结合免疫荧光检测法,观察NSCs细胞的生长增殖及分化状况,并作统计学分析。[结果]与对照组[(8.8±1)%]相比,单纯ATRA作用组神经元分化比率[(10.6±2%]无明显差异;单纯MT作用组100 mol/L[(24.8±2)%]与10 nmol/LMT[23.4±1%)]2组都能明显促进脊髓NSCs向神经元分化,2组间比较无明显差异;ATPA与100μmol/LMT共同作用组[(53.9±2)%],进一步提高了脊髓NSCs向神经元分化的比率;ATRA与10 nmol/LMT共同作用组[(26.7±2)%]也能促进脊髓NSCs向神经元方向分化(与对照组相比较),但其分化率与单一使用MT的2组比较无明显差异。[结论]单纯应用不同浓度的MT都促进脊髓源性的NSCs向神经元分化,但ATRA与不同浓度的MT联用对神经元分化率有着不同影响。     

三种不同给药途径对剖宫产产妇术后胃肠道功能的影响

目的探讨三种不同给药途径对剖宫产产妇术后胃肠道功能的影响。方法选择2016年6月至2017年1月在我院行剖宫产术的产妇90例,年龄23~35岁,BMI 25~35kg/m2,ASAⅠ或Ⅱ级。按随机数字表法将产妇分为三组:静脉镇痛泵组(J组)、皮埋镇痛泵组(P组)和硬膜外镇痛泵组(Y组),每组30例。J组:术毕静脉滴注舒芬太尼5μg,将镇痛泵(舒芬太尼3.0μg/kg+生理盐水100ml)与静脉通道连接;P组:术毕皮下注射舒芬太尼5μg,将套管针埋置于皮下与镇痛泵(舒芬太尼3.0μg/kg+生理盐水100ml)连接;Y组:术毕予硬膜外腔推注1%利多卡因复合0.5%罗哌卡因混和液4 ml,将镇痛泵(0.15%罗哌卡因+舒芬太尼50μg+生理盐水100ml)与硬膜外导管连接。记录首次下床活动时间、肠鸣音恢复时间、首次肛门排气时间、术后48h内恶心、呕吐及腹胀的情况。结果 Y组肠鸣音恢复时间[(14.6±2.3)h]明显早于J组[(18.3±3.6)h]和P组[(18.8±4.1)h](P0.05),首次肛门排气时间[(20.5±7.9)h]明显早于J组[(28.7±8.2)h]和P组[(27.9±9.3)h](P0.05),恶心[5例(17.0%)]及腹胀发生率[6例(20.0%)]明显低于J组[恶心11例(36.7%),腹胀14例(47.0%)]和P组[恶心10例(33.3%),腹胀13例(43.0%)](P0.05)。结论硬膜外途径的术后镇痛可在满足术后镇痛的基础上,更有利于胃肠道功能的恢复。     

辅助性T细胞亚群分化在Ⅲ型前列腺炎免疫发病机制中的作用

目的 探讨前列腺液(EPS)中CD+4T细胞亚群辅助性T细胞(Th细胞)分化在Ⅲ型前列腺炎免疫发病机制中的作用. 方法门诊诊断前列腺炎患者76例,年龄18～47岁,平均32岁.患者均有慢性前列腺炎典型临床症状,病程均＞3个月.按美国国立卫生院分类方法分为ⅢA型组(47例)、ⅢB型组(29例).其中ⅢA型组根据炎症程度又分为ⅢAl组(轻度炎症26例)和ⅢA2组(重度炎症21例).另设健康对照组(16例),年龄19～45岁,平均31岁.采用双抗体夹心酶联免疫法检测EPS中Th1类细胞因子(IFN-γ)、Th2类细胞因子(IL-4)水平及Th1/Th2比值(IFN-γ/IL-4),比较各组问差异.结果 ⅢA、ⅢB组IFN-γ水平[(134.78±43.67),(109.82±30.09)pg/m1]与对照组[(60.63±15.16)pg/m1]比较,差异有统计学意义(P＜0.05),ⅢA组较ⅢB组升高更明显(P＜0.05);ⅢA组IL-4水平[(51.99±20.59)pg/m1]与对照组[(53.88±17.92)pg/m1]比较差异无统计学意义P＞0.05),ⅢB组IL-4水平[(76.40±17.99)pg/m1]明显上调(P＜0.05);ⅢA组IFN-γ/IL-4水平(2.94±1.12)明显高于对照组(1.20±0.48,P＜0.05),Ⅲ B组(1.49±0.48)无明显改变(P＞0.05).与对照组比较,Ⅲ A1组IL-4水平[(63.03±18.86)pg/m1]无明显变化(P＞0.05),而ⅢA2组水平[(30.20±13.16)pg/m1]显著下调(P＜0.05);ⅢA1组和m A2组IFN-γ水平均明显上调[(127.65±36.57),(143.49±50.76)pg/m1],P＜0.05),但2组间差异无统计学意义(P＞0.05);ⅢA2组IFN-γ/IL-4明显高于ⅢA1组(3.67±0.82 vs 2.34±0.97,P＜0.05).结论 ⅢA型前列腺炎Th1细胞分化占优势,Th1/Th2平衡向Th1漂移,以细胞免疫反应为主;Th细胞分化也参与了ⅢB型前列腺炎的发病,但Th1/Th2处于相对平衡状态.Th1的优势分化可能是导致前列腺局部炎症发展的原因之一.     

急性胰腺炎后胰腺内分泌变化临床研究

目的:观察研究急性胰腺炎后胰腺内分泌变化。方法:选取既往无糖尿病病史的急性胰腺炎住院患者60例为急性胰腺炎组,既往无糖尿病病史正常体检者30人为对照组。测定入院时、入院次日晨空腹、入院后第3 d晨空腹、入院后第7 d晨空腹血糖、胰岛素和C肽,比较两组结果。结果:急性胰腺炎组血糖在入院时[(7.2±1.4)mmol/L]、24 h[(7.3±2.3)mmol/L]、3 d[(9.4±1.6)mmol/L]较对照组[(4.3±1.8)mmol/L]升高,具有统计学意义,入院后7 d血糖([4.5±1.2)mmol/L]较对照组无明显升高。急性胰腺炎组血清胰岛素在入院后24 h([10.0±3.0)μIU/m L]、3 d([9.5±2.6)μIU/m L]较对照组[(11.4±0.6)μIU/m L]降低,具有统计学意义(P0.05),入院时[(11.8±2.7)μIU/m L]及入院后7 d[(11.9±2.7)μIU/m L]血清胰岛素较对照组无明显变化。急性胰腺炎组血清C肽在入院后24 h[(1.3±0.6)ng/m L]、3 d[(1.3±0.3)ng/m L]较对照组[(1.5±0.5)ng/m L]降低,入院时[(1.4±0.3)ng/m L]及入院后7 d[(1.5±0.3)ng/m L]血清C肽较对照组无明显变化。急性胰腺炎组血糖值随着发病时间延长呈现先升后降趋势,发病后7 d血糖基本恢复。血清胰岛素及C肽值则呈现先降后升趋势。结论:急性胰腺炎患者随着病情发展血糖先升后降,胰岛素及C肽先降后升,提示急性胰腺炎患者胰腺内分泌功能失调。     

普瑞巴林联合吴茱萸碱对神经病理性疼痛大鼠细胞因子和T细胞的影响

目的:观察普瑞巴林联合吴茱萸碱对神经病理性疼痛大鼠免疫细胞的影响。方法:SD大鼠30只。随机分为5组(每组6只):假手术组(S组)、对照组(C组)、普瑞巴林组(P组)、吴茱萸碱组(Q组)和普瑞巴林-吴茱萸碱复合物(F组)。大鼠暴露左侧L5脊神经并结扎,建立脊神经结扎(SNL)模型,S组大鼠暴露左侧L5脊神经,但不结扎。建立SNL模型7 d后P组腹腔注射普瑞巴林(5 mg/kg),Q组腹腔注射吴茱萸碱注射液(5 mg/kg),F组腹腔注射普瑞巴林-吴茱萸碱复合物(5 mg/kg),S和C组腹腔注射生理盐水(2 m L/kg),连续给药7 d,观察测量大鼠神经损伤侧的疼痛行为学的变化。给药7 d后取主动脉血3 m L检测大鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)和T淋巴细胞亚群中T细胞分化群4(CD4~+)、T细胞分化群8(CD8~+)的水平。结果:模型制成后S组大鼠活动如常,其它四组大鼠SNL 1周后,步态及姿势出现不同程度的异常;P组、Q组、F组三组动物SNL第10天开始,上述症状逐渐缓解,尤其F组症状表现轻微。给药7 d后C组TNF-α为(101.75±15.46)μg/L、IL-6为(32.98±6.64)μg/L、NE为(78.14±4.38)pg/mL、5-HT为(6.21±1.87)μmol/L,较S组TNF-α[(55.14±13.28)μg/L]、IL-6[(18.16±5.98)μg/L]、NE[(23.65±2.21)pg/mL]、5-HT[(1.89±0.76)μmol/L]显著升高(P0.01);F组TNF-α为(68.54±17.65)μg/L、IL-6为(20.21±4.23)μg/L、NE为(33.08±3.85)pg/mL、5-HT为(2.64±1.38)μmol/L较C组明显降低(P0.05)。给药7 d后C组CD4~+为(16.43±1.68)ng/mL、CD8~+为(11.26±2.31)ng/mL较S组CD4~+[(25.28±1.56)ng/mL]、CD8~+[(14.05±2.45)ng/mL]显著降低(P0.01);F组CD4~+为(32.45±3.45)ng/mL、CD8~+(21.47±1.08)ng/mL较C组升高(P0.01或P0.05)。结论:普瑞巴林联合吴茱英碱对神经病理性疼痛大鼠具有较好的协同镇痛作用,优于各自单独使用;两者合用能够使神经病理性疼痛家兔炎性细胞因子的表达下调,并能延缓神经病理性疼痛大鼠T淋巴细胞亚群CD4~+、CD8~+的下降。     

白细胞介素-6通过p38蛋白调控髓核细胞的增殖和迁移

目的 观察白细胞介素-6(IL-6)对髓核细胞增殖和迁移的调控作用.方法 体外分离培养大鼠髓核细胞,将其随机分为对照组、IL-6组、加压组、IL-6+加压组和IL-6+ p38蛋白抑制剂(SB203580)+加压组.给予相应处理后,应用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法评估髓核细胞增殖能力,应用划痕实验评估细胞迁移能力.结果 CCK-8法检测各组细胞吸光度值,未加压环境下,IL-6组吸光度值(1.08±0.02)较对照组(0.67±0.01)明显升高(P＜0.05);加压环境下,IL-6组吸光度值(1.51±0.06)也较对照组(0.88±0.04)明显升高(P＜0.05).细胞划痕实验中,未加压环境下,IL-6组迁移距离[(27.73±3.15)像素]较对照组[(12.90±4.77)像素]明显升高(P＜0.05);加压环境下,IL-6组迁移距离[(52.81±3.72)像素]也较对照组[(14.32±3.84)像素]明显升高(P＜0.05).加压环境下使用SB203580阻断p38蛋白后,吸光度值(0.81±0.04)和迁移距离[(33.82±3.72)像素]均较IL-6组[(1.51±0.06)、(52.81±3.72)像素]显著下降(P＜0.05).结论IL-6能通过p38蛋白通路促进髓核细胞的增殖和迁移.     

左卡尼汀对冷冻精子运动参数和精子线粒体功能的影响

目的:探讨左卡尼汀(LC)对人冷冻精子的影响。方法:将每份供精志愿者精液分为6组:新鲜精液组(FE组);常规冷冻组(Non-LC组,冷冻保护剂中未添加LC); LC 1～4组,冷冻保护剂中LC浓度分别为:1、2. 5、5、10 mmol/L。通过观察冷冻复苏后精子活力和运动参数改变,筛选最佳LC工作浓度。伊红-苯胺黑染色法评估精子质膜完整性(PMI),JC-1法评估精子线粒体膜电位(MMP),DCFH-DA法评估活性氧(ROS),探索LC对精子冷冻损伤的影响机制。结果:与FE组相比,冷冻复苏后精子(Non-LC组和LC各组),前向运动精子百分率(PR%)和运动参数(VAP、VSL、VCL)均明显下降(P 0. 05)。与Non-LC组相比,LC 3组PR%[(47. 0±4. 3)%vs(41. 9±4. 6)%,P=0. 0261)]和VAP [(38. 9±4. 2)μm/s vs (34. 9±2. 6)μm/s,P=0. 0152)]改善明显,确定5 mmol/L为实验最佳LC工作浓度。与FE组比较,Non-LC组冷冻复苏后精子PMI[(52. 7±5. 7)%vs (75. 5±5. 4)%]、MMP[(44. 5±3. 5)%vs(57. 3±4. 4)%]明显降低(P 0. 01),ROS[(12. 5±3. 9)%vs(6. 8±2. 4)%]明显升高(P 0. 01);与Non-LC组比较,LC组精子PMI[(70. 1±8. 2)%]和MMP[(50. 3±3. 4)%]明显升高(P 0. 01、0. 05),ROS[(8. 4±5. 3)%]明显降低(P 0. 05)。结论:LC可能通过降低精子ROS,提高精子MMP,保护精子质膜,改善冷冻后精子活力和运动参数。