柚皮苷对共培养体系中成骨细胞活性及破骨细胞分化的影响

目的研究在成骨细胞-破骨细胞共培养体系中,柚皮苷对成骨细胞活性和破骨细胞分化的影响。方法将成骨细胞(MC3T3-E1细胞株)和破骨细胞(RAW264.7细胞株)以2∶1的比例分别培养至Transwell小室的上室和下室。根据培养基是否含有柚皮苷分为对照组和柚皮苷(2ng/ml组、20 ng/ml组、200 ng/ml组),培养7 d后对下室破骨细胞进行TRAP染色和骨吸收陷窝鉴定;荧光定量PCR分析成骨细胞骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)基因和破骨细胞分化基因活化T细胞核因子-1(NFATc-1)、活化T细胞核因子-2(NFATc-2)和核因子κB受体激活蛋白(receptor activator of NF-κB,RANK)的相对表达量。结果与对照组相比,柚皮苷可以促进成骨细胞OPG、RANKL的表达量且可提高OPG/RANKL的比值,差异有统计学意义(P0.05);20 ng/ml柚皮苷TRAP(+)细胞数(5.82±3.37)明显少于对照组(20.56±7.69),差异有统计学意义(P0.05);柚皮苷可抑制破骨细胞NFATc-1、NFATc-2的表达,促进RANK的表达,差异有统计学意义(P0.05)。结论柚皮苷可促进共培养条件体系中成骨细胞OPG和RANKL的表达以及抑制破骨细胞的分化,与上调OPG/RANKL的比值有关。     

Transwell小室内建立小鼠成骨-破骨细胞共培养体系

目的 :Transwell小室内建立体外小鼠成骨-破骨细胞共培养体系,并检测体系对成骨及破骨细胞活性的影响。方法:体外培育小鼠成骨细胞MC3T3-E1和小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,RANKL诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7分化为成熟破骨细胞后,于Transwell小室内建立成骨-破骨细胞共培养体系。通过CCK-8实验、茜素红染色、TRAP染色检测细胞的成骨、破骨活性。采用PCR、Western Blot方法检测成骨细胞MC3T3-E1中OPG、ALP、RANKL、TGF-b1的基因表达以及RANKL的蛋白表达,检测破骨细胞RANK、NF-κB的基因表达和蛋白表达。结果 :小鼠成骨细胞MC3T3-E1和小鼠破骨细胞可在Transwell小室内建立共培养体系;共培养体系影响小鼠成骨细胞与破骨细胞的分化活性,镜下可见成骨细胞分化增多,破骨细胞分化稍减少。共培养体系中成骨细胞基因OPG(0.65±0.08)、ALP(0.16±0.01)较单独培养OPG(1.00±0.08)、ALP(1.01±0.16)表达下降,而TGF-b1(4.42±0.21)、RANKL(4.12±1.04)较单独培养组TGF-b1(1.00±0.10)、RANKL(1.00±0.09)表达上升;破骨细胞相关RANK(0.63±0.06)、NF-κB(0.64±0.08)基因表达较单独培养组的RANK(1.00±0.08)、NF-κB(1.00±0.09)下降,差异均有统计学意义。同时共培养组的OPG(0.43±0.05)、NF-κB(0.59±0.05)的蛋白表达较单独培养组的OPG(0.84±0.06)、NF-κb(1.13±0.03)减少;共培养组RANKL(0.54±0.03)的蛋白表达则较单独培养组的RANKL(0.31±0.03)增加,差异有统计学意义,均与基因表达变化趋势一致。结论:小鼠成骨细胞MC3T3-E1和小鼠破骨细胞可在Transwell小室内建立共培养体系,共培养体系中成骨细胞活性高于破骨细胞活性。     

骨保护素防治骨质疏松症的研究进展

骨保护素(osteoprotegerin, OPG)、核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand, RANKL)、核因子-κB受体活化因子(receptor activator of NF-κB, RANK)是调节骨吸收和骨形成的重要的调控因子.骨质疏松症是多种原因使破骨细胞功能活跃,破坏骨的动态平衡造成的.OPG与RANK竞争性结合RANKL,从而抑制破骨细胞的分化、激活,促进其凋亡.应用重组OPG蛋白和OPG基因治疗的方法 是目前防治骨质疏松症的关注热点.笔者针对这方面的研究现状作简要的综述.     

OPG/RANKL/RANK系统与软骨及软骨下骨

OPG/RANKL/RANK系统在调节骨代谢和骨重塑方面具有重要作用。成骨细胞表达的核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)与破骨细胞表面的核因子-κB受体活化因子(RANK)结合促进破骨细胞分化成熟,骨保护素(OPG)则结合RANKL而抑制这一功能。研究表明,OPG/RANKL/RANK系统在软骨及软骨下骨内也有表达,可能成为类风湿关节炎及骨关节炎的治疗靶点。该文就OPG/RANKL/RANK系统在软骨及软骨下骨内表达及其作用研究进展作一综述。     

甲状旁腺激素联合辛伐他汀对成骨细胞分化及OPG和RANKL mRNA表达的影响

目的联合甲状旁腺激素(rhPTH1-34)和辛伐他汀(SIM)在体外对乳鼠颅盖骨成骨细胞分化及骨保护素(OPG)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)基因表达的影响。方法以乳鼠成骨细胞为体外试验模型,rhPTH1-34(10-9mol/L)联合不同浓度SIM(10-8、10-7、10-6mol/L)作用于体外培养的乳鼠成骨细胞,采用对硝基苯磷酸盐(PNPP)法测定碱性磷酸酶(ALP)活性;RT-PCR法测定OPG和RANKL基因的表达。结果 rhPTH1-34和SIM单独给药均可促进成骨细胞ALP活性及OPG基因、降低RANKL基因表达(P0.05);两者联合后与SIM单独作用组比较,ALP活性明显增加,并能协同促进OPG、降低RANKL基因表达(P0.05)。结论 rhPTH1-34和SIM联合应用对成骨细胞分化和代谢有协同作用。     

共轭亚油酸c9,t11-CLA及t10,c12-CLA对大鼠骨髓细胞骨代谢相关基因表达的影响

目的 观察c9,t11-CLA及t10,c12-CLA干预后,大鼠骨髓细胞过氧化物酶体增殖物激活受体2(PPARγ2)及核因子(NF)-κB活化受体配体(RANKL)、碱性磷酸酶(ALP)、骨保护素(OPG)、NF-κB活化受体(RANK)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP) mRNA表达的变化,探讨其对骨代谢的影响.方法 体外培养大鼠骨髓细胞,分别加入c9,t11-CLA及t10,c12-CLA干预24h,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测PPARγ2、RANKL、ALP、OPG、RANK、TRAP mRNA表达水平,比较其对骨髓细胞上述基因表达的影响.结果 (1)c9,t11-CLA呈剂量依赖性下调RANK、TRAP mRNA表达,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01),而其对RANKL、ALP、OPG及PPARγ2 mRNA 表达的影响不明显.(2) t10,c12-CLA呈剂量依赖性上调RANKL、OPG mRNA的表达,同时下调 RANK、TRAP及PPARγ2 mRNA的表达,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01),但对ALP mRNA的表达无明显影响.结论 c9,t11-CLA可能通过抑制破骨细胞标记物基因表达阻断骨髓细胞向破骨细胞分化,而t10,c12-CLA在抑制破骨细胞标记物基因表达的同时也可促进成骨细胞标记物基因表达,两者均有利于骨形成.     

金属离子刺激小鼠成骨细胞骨保护素及其配体表达的实验研究

目的在人工全髋关节翻修术中发现假体周围大量金属离子聚集和NF-κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κBligand,RANKL)表达的增加,通过观察Co2+、Cr3+对小鼠成骨细胞RANKL、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)表达的影响,探讨金属离子与假体无菌性松动关系。方法取浓度为1×105个/mL体外培养的小鼠成骨细胞,根据培养基不同分两组:实验组采用含10mg/L CoCl2及150mg/L CrCl3溶液的培养基;对照组采用不含金属离子的培养基。培养24、48h,采用RT-PCR和ELISA法检测RANKL、OPG mRNA及蛋白表达。结果RT-PCR检测示培养24、48h两组均见RANKL、OPGmRNA的表达,实验组表达量较对照组高,以RANKL增加显著,差异有统计学意义(P0.05);培养24、48h,实验组RANKL/OPG mRNA的比值分别为0.860、1.232,较对照组0.695、0.688明显增加,差异有统计学意义(P0.05)。ELISA检测显示,实验组RANKL、OPG蛋白表达量较对照组明显增多,差异有统计学意义(P0.05)。结论Co2+、Cr3+可刺激小鼠成骨细胞RANKL、OPG mRNA的表达并促进其蛋白的分泌,以RANKL增加显著,从而促进破骨细胞的形成与活化以及假体无菌性松动的发生。     

RANKL/RANK/OPG信号通路参与调控磷酸三钙磨损颗粒诱导假体周围骨溶解的研究

目的探讨RANKL/RANK/OPG信号通路在磷酸三钙磨损颗粒诱导假体周围骨溶解中的作用。方法将30只小鼠随机分为假手术组、模型组和OPG组,制备小鼠颅骨溶解模型,OPG组于术后第2天在颅顶局部注射骨保护素(osteoprotegerin,OPG)(3 mg/kg),每隔2 d 1次;假手术组和模型组给予等量生理盐水,共2周。测定破骨细胞数和骨溶解面积,检测白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、OPG、NF-kappa B的受体激活因子(receptor activator of nuclear factor-κB,RANK)和RANK配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)的水平。结果与假手术组比较,模型组小鼠颅骨破骨细胞数、骨溶解面积均增加,IL-1β、IL-6和TNF-α水平均增加,RANKL和RANK mRNA的相对表达量均增加,OPG mRNA的相对表达量降低(P0.05);与模型组比较,OPG组小鼠颅骨破骨细胞数和骨溶解面积减少,IL-1β、IL-6和TNF-α水平减少,RANKL和RANK mRNA的相对表达量均降低,OPG mRNA的相对表达量增加(P0.05)。结论 RANKL/RANK/OPG信号通路参与调控磷酸三钙磨损颗粒诱导假体周围骨溶解,通过给予外源性OPG能显著抑制磷酸三钙磨损颗粒诱导的骨溶解。     

骨重建过程中降钙素基因相关肽与RANK/RANKL/OPG作用机制的研究进展

目的总结骨重建过程中降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)与核因子κB受体活化因子(receptor activator of nuclear factorκB,RANK)/核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factorκB ligand,RANKL)/骨保护蛋白(osteoprotegerin,OPG)信号系统作用机制的研究进展,为进一步研究骨相关疾病的预防及治疗提供理论依据。方法广泛查阅国内外近年来骨重建过程中CGRP与RANK/RANKL/OPG信号系统相关文献,并加以分析总结。结果骨重建过程中,CGRP与RANK/RANKL/OPG信号系统发挥着重要调控作用。结论目前对于骨重建过程中CGRP与RANK/RANKL/OPG信号系统的作用机制研究仍不够深入,需进一步研究二者在骨重建过程中的具体作用方式、相互联系,明确作用机制,为临床上骨相关疾病的治疗带来新思路、新方法。     

仙茅苷对成骨细胞增殖分化和炎症因子表达的影响及机制分析

目的仙茅苷(curculigoside,CCG)能有效防治去卵巢大鼠的骨量丢失,但是其分子机制尚不清楚,因此,研究CCG在地塞米松(dexamethasone,DEX)诱导下对成骨细胞增殖分化和炎症因子释放的影响,并探讨其相关机制。方法将大鼠颅骨成骨细胞与DEX共同孵育24～72 h,同时采用不同浓度的CCG对其干预,采用细胞计数试剂盒检测成骨细胞增殖情况,流式细胞术检测成骨细胞线粒体膜电位(mitochondria membrane potential,MMP)和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、重组人胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)和巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)等细胞因子的表达。采用蛋白质印迹法检测骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)、β-连环蛋白(β-catenin)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、核因子κB受体活化因子配体(receptor activators of NF-κB ligand,RANKL)和核因子κB受体活化因子(receptor activator of NF-κB,RANK)的蛋白表达。结果地塞米松1μmol/L处理成骨细胞后,成骨细胞增殖明显低于未处理组,25～100μg/mL CCG预处理可明显逆转DEX对成骨细胞的杀伤作用。25～100μg/mL的CCG预处理可提高DEX诱导下成骨细胞的MMP水平,降低ROS的生成。此外,CCG明显逆转DEX对碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、OPG、BMP-2、β-catenin、IGF-1和M-CSF水平的抑制作用以及对RANKL和RANK等分化指标的促进作用。CCG还能抑制DEX诱导的TNF-α、IL-1β、IL-6、COX-2等炎症细胞因子的释放。结论这些结果为进一步研究CCG的成骨细胞保护机制提供了新的思路,通过诱导细胞增殖和分化,减少炎症反应,提示CCG可用于防治骨质疏松症。     

二甲双胍对去卵巢大鼠骨质疏松症的影响及机制研究

目的 以雌二醇为对照,观察二甲双胍(metformin, MF)对去卵巢大鼠骨密度及骨矿含量的影响,并从细胞、分子水平探究MF可能的骨保护机制。方法 将60只雌性SD大鼠随机均分4组：假手术（SHAM）组、去卵巢（OVX）组、去卵巢+二甲双胍（OVX+MF）组和去卵巢+雌二醇(OVX+E2 )组。分组灌胃给药60 d后测量大鼠右侧胫骨骨密度和骨矿含量;分离培养各组大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）并诱导其向成骨细胞分化,用MTT法测定细胞活性及增殖能力;测定各组碱性磷酸酶（ALP）活性、矿化结节数目、钙含量以及I型胶原（collagen type I）、骨钙素（OC）、骨保护素 (OPG)、NFκB受体的配体 (RANKL)、白细胞介素-6（IL-6）基因表达水平。结果 与OVX组相比,OVX+MF组和OVX+E2组成骨细胞的增殖能力与ALP活性明显增强,骨密度、骨矿含量以及钙沉积量显著增加(P均<0.05),且两组collagen type I、OC、OPG mRNA的表达水平显著升高,而RANKL、IL-6mRNA表达明显受到抑制;但OVX+MF组去卵巢大鼠成骨细胞的增殖能力、ALP活性、钙沉积量、collagen type I、OC、OPG mRNA表达水平低于OVX+E2组,RANKL、IL-6mRNA表达高于OVX+E2组（P均<0.05）;与SHAM组比较,OVX+MF组的collagen type I、OC、OPG mRNA的表达水平更高（P<0.05）。结论 二甲双胍可能通过OPG/RANKL/RANK信号通路促进BMSCs向成骨细胞分化,有效逆转去卵巢大鼠骨质疏松的状态,这种潜在的骨保护作用可能会改善糖尿病引起的骨质疏松。     

加味阳和汤含药血清对MC3T3-E1与RAW264.7细胞共育体系的影响

目的 观察加味阳和汤含药血清对MC3T3-E1与 RAW264.7细胞共育体系的影响,探究其防治骨质疏松症（OP）肾阳虚证的可能作用机制。方法 制备加味阳和汤含药血清,于Transwell共培养板建立MC3T3-E1与RAW264.7细胞共育体系,设置肾阳虚血清组、空白组、含药血清+肾阳虚血清组及含药血清组。干预48 h后,通过碱性磷酸酶（ALP）和抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色观察成骨、破骨分化;运用TRAP和ALP试剂盒分别检测细胞上清液中TRAP、ALP活性;通过Western blot检测各组OPG、RANKL、RANK蛋白表达。结果 与肾阳虚血清组比较,含药血清+肾阳虚血清组ALP活性增加（P<0.05）,TRAP活性及OC数目减低（P<0.05,P<0.05）,OPG蛋白表达上调（P<0.05）,RANKL、RANK蛋白表达下调（P<0.05,P<0.05）。结论 加味阳和汤对OP肾阳虚证有相应治疗作用,其机制可能与增加OPG及降低RANKL、RANK蛋白表达有关。     

黄瓜籽总皂苷对MC3T3-E1细胞分化及SPARC、OPG/RANKL表达的影响

目的观察黄瓜籽总皂苷提取物(cucumber seed saponins,CSS)对小鼠成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化和矿化的影响,以及与骨质疏松相关的SPARC、OPG/RANKL/RANK信号通路的作用。方法通过MTT实验、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性检测、茜素红染色,考察不同浓度CSS对MC3T3-E1细胞增殖、分化及矿化的影响;采用RT-PCR方法检测SPARC、OPG/RANKL mRNA表达水平; Western blot检测SPARC、OPG/RANKL的蛋白表达量。结果与阳性对照组相比,CSS能明显促进MC3T3-E1细胞增殖(P0.05),CSS高、中剂量组能明显提高MC3T3-E1细胞ALP活性及钙化结节数量(P0.05);与空白组相比,CSS不同剂量组均明显上调SPARC、OPG/RANKL mRNA及蛋白表达水平(P0.05)。结论黄瓜籽总皂苷能够促进成骨细胞MC3T3-E1的增殖、分化及矿化能力,并通过上调SPARC、OPG/RANKL的表达水平提高MC3T3-E1细胞的成骨能力。     

基于OPG/RANKL/RANK轴观察加味阳和汤及其拆方对去卵巢骨质疏松大鼠的影响

目的观察加味阳和汤及其拆方对OPG、RANKL、RANK含量的影响,探讨其防治绝经后骨质疏松症可能的作用机制及组方配伍的合理性。方法选取48只雌性SD大鼠,加味阳和汤按君臣佐使关系拆方,将大鼠等量随机分为假手术组(SHAM)、模型组(OVX)、君药+臣药组(A组)、君药+臣药+佐药组(B组)、君药+臣药+佐药+使药组(C组)、戊酸雌二醇组(E2V)。除SHAM组外,均采用去卵巢骨质疏松大鼠模型,干预给药后(灌胃90 d),处死动物后取右侧股骨及胫骨通过双能X射线骨密度仪检测骨密度(bone mineral density,BMD)及骨矿含量(bone mineral content,BMC),取左侧股骨行HE染色观察骨显微结构,检测血清中骨代谢指标ALP、Ca~(2+)、P~(3-)、E2及血清OPG、RANKL、RANK含量。结果与SHAM组相比,OVX组大鼠股骨及胫骨BMD、BMC降低(P0.05),骨小梁变细、间隙增大、结构缺失,血清Ca~(2+)、P~(3-)、E2、OPG水平下降(P0.05),血清ALP、RANKL、RANK水平上升(P0.05);与OVX组比较,除A组大鼠股骨及胫骨BMD、BMC、血清Ca~(2+)、P~(3-)、E2、OPG、RANKL及B组P~(3-)水平无显著差异外(P0.05),各给药组大鼠股骨及胫骨BMD、BMC均显著升高(P0.05),骨小梁增多、间隙减小、结构趋向完整,血清Ca~(2+)、P~(3-)、E2、OPG水平上升(P0.05),血清ALP、RANKL、RANK水平下降(P0.05)。结论加味阳和汤及其拆方通过提高去卵巢骨质疏松大鼠BMD、BMC,降低骨代谢,改善骨显微结构从而发挥治疗作用,调节OPG/RANKL/RANK轴是可能的机制。     

miR-214通过对BMP-2和Smad4的靶向调控作用对骨质疏松的影响

目的探究miR-214能否靶向调控BMP-2和Smad4对骨质疏松症产生影响。方法将大鼠分为2组(假手术组、手术组),对手术组进行手术构建去卵巢骨质疏松模型,对两组大鼠血清中相关因子、骨密度、股骨进行病理学染色观察,同时将各组大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)进行体外培养,使用q PCR检测其miR-214表达水平,Western blot检测其BMP-2和Smad4相关蛋白表达水平。体外培养大鼠成骨细胞,将细胞分为3组(对照组、过表达组和抑制组),向过表达组和抑制组分别转染miR-214 mimics及anti-miR-214,对各组大鼠成骨细胞的增殖能力、细胞凋亡情况和BMP-2和Smad4相关蛋白表达水平进行检测。结果与假手术组相比,手术组大鼠血钙、碱性磷酸酶(ALP)水平及骨密度(BMD)明显下降,血磷水平明显上升,差异具有统计学意义(P0.05)。两组大鼠的BMSCs增长速率相比差异无统计学意义(P0.05),同时假手术组大鼠BMSCs ALP水平显著高于手术组,差异具有统计学意义(P0.05)。手术组与假手术组的BMSCs相比较,细胞中miR-214表达明显上升,BMP-2及Smad4表达水平明显下降,差异具有统计学意义(P0.05)。对转染后各组大鼠成骨细胞检测,与对照组相比,过表达组细胞增殖能力明显下降,细胞凋亡情况显著增高,BMP-2及Smad4水平下降,抑制组细胞增殖能力显著升高,细胞凋亡数量明显下调,BMP-2及Smad4表达水平升高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 miR-214可能通过靶向调控BMP-2与Smad4抑制成骨细胞的增殖,从而发生或发展成骨质疏松症。     

骨质疏松症大鼠模型生物力学性能和OPG/RANKL/RANK信号通路研究

摘要：目的 研究针刺对骨质疏松症（osteoporosis，OP）模型大鼠生物力学性能和骨保护素（OPG）/核因子-κB受体活化因子（RANKL） /核因子-κB受体活化因子受体（RANK）信号通路的影响，探讨针刺防治OP的作用机制。方法 选取50只雌性SD大鼠，通过摘除卵巢建立OP大鼠模型，分为假手术组、模型组、针刺低剂量组、针刺高剂量组、阿仑膦酸钠组，每组10只。成功建立模型并对大鼠进行适应性喂养2个月后，连续灌胃给药12周，再进行腹主动脉取血并处死大鼠。通过双能X射线仪测定各组大鼠右侧下肢股骨骨矿含量；用酶联免疫吸附法测定法检测血清钙（Ca2+）、磷（P）和OPG、RANKL、RANK的水平；采用AG-IX万能实验机检测股骨的生物力学性能；采用蛋白质印迹法检测骨组织OPG、RANKL、RANK蛋白的表达。结果 与假手术组比较，模型组大鼠骨组织中骨矿含量、血清Ca2+、P、OPG的表达、股骨组织中OPG蛋白含量和股骨最大载荷、刚度及弹性模量均明显降低（P＜0.01）；血清RANKL和RANK的表达及股骨组织中RANKL、RANK蛋白含量明显升高（P＜0.01）。与模型组比较，针刺低剂量组和针刺高剂量组以及阿仑膦酸钠组上述指标均有明显改善（P<0.05或P<0.01），且针刺的作用具有剂量依赖性（P<0.05或P<0.01）。结论 针刺具有明显的抗OP作用，可能与其改善骨组织生物力学特性以及调控OPG/RANKL/RANK通路有关。     

雌激素对去势骨质疏松症大鼠骨密度和骨代谢影响的实验研究

目的研究雌激素对去势骨质疏松症模型大鼠骨密度(bone mineral density,BMD)和骨代谢的影响,并探讨其治疗骨质疏松症的机制。方法将48只雌性SD大鼠随机分配成对照组、模型组、雌激素组和雌激素+三苯氧胺组,每组12只。除对照组外,其他各组大鼠采用双侧卵巢摘除法制备骨质疏松症模型。雌激素组给予尼尔雌醇(1 mg/kg)灌胃,1次/周;雌激素+三苯氧胺组给予尼尔雌醇(1 mg/kg)和三苯氧胺(3 mg/kg)灌胃,1次/周;对照组和模型组分别使用等量生理盐水灌胃,均持续3个月。3个月后取材,检测大鼠左侧股骨BMD和股骨骨矿物盐含量、血清钙含量以及胫骨中骨骼钙含量;酶联免疫法检测大鼠血清碱性磷酸酶(alkaline phosphates,ALP)、血清抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(tartrate resistant acid phosphatase-5b,TRAP-5b)的含量;免疫组化检测大鼠胫骨中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)和核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)蛋白的表达情况。结果治疗前,与对照组比较其他各组血清钙含量和血清TRAP-5b含量均显著升高(P0.05),骨钙含量、BMD和骨矿物盐含量显著降低(P0.05),血清ALP含量无显著性变化(P0.05);治疗后,与模型组比较雌激素组血清钙含量、血清TRAP-5b含量以及胫骨组织RANKL蛋白表达均显著降低(P0.05),骨钙含量、血清ALP含量、BMD、骨矿物盐含量以及胫骨组织OPG蛋白表达均显著升高(P0.05),而治疗后,与模型组比较雌激素+三苯氧胺组各项指标变化差异无统计学意义(P0.05)。结论雌激素通过显著性提高去卵巢骨质疏松模型大鼠骨骼钙、ALP、股骨骨密度、骨矿物盐以及OPG的含量,抑制骨钙流失、TRAP-5b及RANKL蛋白表达,达到改善骨质疏松的作用。     

Effects of coumestrol on expression of bone markers during primary osteoblastic cells differentiation

目的 观察植物雌激素香豆雌酚对成骨细胞增殖分化的作用并探讨其作用机制.方法 从小鼠颅盖骨获得成骨细胞并用0,10-9～10-5 M香豆雌酚孵育48 h,以17β雌二醇为阳性对照,用酶消化法测定碱性磷酸酶及Ⅰ型胶原含量,放免法测定骨钙素含量,RT-PCR法测定OPG及RANKL mRNA表达情况,Western Blot测定OPG蛋白含量.结果 干预48 h,不同浓度香豆雌酚呈剂量依赖性增加碱性磷酸酶及Ⅰ型胶原含量,10-6 M时达到最大效应(P<0.05),但10-5 M效应有所降低,香豆雌酚轻度增加成骨细胞骨钙素含量,各组间无统计学差异.香豆雌酚呈剂量依赖性增加OPG基因及蛋白的表达(P<0.05),轻度降低RANKL基因的表达.结论 香豆雌酚能增加成骨细胞增殖及分化,可能其部分通过OPG/RANKL发挥作用.     

静磁场不同处理时间对体外培养成骨细胞增殖与分化的影响

目的:研究静磁场不同处理时间对体外培养成骨细胞增殖与分化成熟的影响。方法:原代培养大鼠颅骨成骨细胞,传代后随机分为9组,用磁场强度为3.9mT的静磁场,分别处理0(对照组)、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0h。倒置相差显微镜下观察细胞形态;48h后检测细胞增殖情况;第3、6、9、12天测定碱性磷酸酶活性和钙盐沉积量;第8天进行碱性磷酸酶染色;第10天进行茜素红钙化结节染色;在SMFs(static magnetic fields)处理0、24、48、72h后,Real-time PCR检测骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein-2,BMP-2),Runx-2,骨保护素(osteoprotegerin,Opg)的mRNA表达水平变化。结果:与对照组相比,磁场组均促进细胞增殖(P<0.01或P<0.05),也能明显促进其分化成熟,表现为提高细胞的ALP活性,促进钙盐沉积量,提高BMP-2、Runx-2和Opg的mRNA表达。结论:磁感应强度为3.9mT的静磁场处理体外培养成骨细胞2.5h时,其对成骨细胞的增值与分化效果最为明显。