周细胞与血管新生及其研究进展

周细胞是微血管的必要组成成分之一，它与血管内皮细胞相互作用，在调节体内血管发育、稳定、成熟以及血管重塑中起到重要作用，并且介导体内多种生理病理修复过程，因此成为许多血管新生性疾病如肿瘤、糖尿病视网膜病等潜在的治疗靶点，也为长期腹透患者腹膜血管新生所导致的超滤衰竭提供了崭新的治疗思路。本文就周细胞的生物学特性及其与血管新生的关系与研究进展做一综述。     

成人主动脉血管平滑肌细胞的体外培养

目的:建立成人主动脉血管平滑肌细胞的体外培养方法:方法:无菌条件下分离出成人胸主动脉的平滑肌层,剪成1 mm×1 mm×1 mm的碎片,用组织块贴壁法,以含胎牛血清的DMEM培养基进行培养,牛长融合的细胞用0.25%的胰酶消化、传代。观察培养细胞的形态学特点,并用免疫荧光的方法检测血管平滑肌肌动蛋白α(α-SMA)的表达。结果:在贴壁培养10～12天后,组织块的边缘开始有少量细胞爬出,呈长梭形,胞浆透亮、丰富:继续培养1～2周后组织块边缘融合,呈典型的"峰谷"样表现。消化传至3～8代,细胞的生长特性未见明显改变,免疫荧光显示细胞α-SMA的表达丰富。结论:组织块贴壁法培养人主动脉血管平滑肌细胞是一种稳定、可行的实验方法。     

周细胞在视网膜新生血管疾病中的研究现状

周细胞包裹血管内皮细胞形成血管腔,具有重要的功能,周细胞减少导致出现血管扩张、渗血,导致水肿、新生血管等病变。近年研究发现周细胞通过多种信号通路对于视网膜血管调节、代谢等方面起着重要的作用,具有调节内皮细胞增殖、分化,调控新生血管生长及稳定性等多种功能。现就周细胞在视网膜新生血管疾病中的研究现状予以综述。     

周细胞对大鼠角膜新生血管渗漏的影响

目的 探讨周细胞对大鼠角膜新生血管渗漏的影响.方法 建立角膜基质层间植入微粒体诱生新生血管的大鼠模型,数字法随机分配大鼠一只眼为实验组,另一只眼为对照组,实验组植入含有血管内皮细胞生长因子(VEGF)和血小板衍生生长因子-B中和抗体(抗PDGF-B)的微粒体,对照组植入含有VEGF和磷酸盐缓冲液(PBS)的微粒体,术后5d伊文氏兰示踪法检测新生血管渗漏率,角膜称重,α平滑肌激动蛋白抗体(抗α-SMA)和血小板内皮细胞黏附分子抗体(抗CD31)对角膜切片及铺片行双重免疫荧光染色法观察并计算周细胞包裹指数(MPI).结果 实验组MPI为11.3％,角膜重量为(8.96±1.09) mg,新生血管渗漏率为(0.68±0.36) μg·ml-·mm-2;对照组MPI为56.5％,角膜重量为(7.36±0.56) mg,新生血管渗漏率为(0.24±0.07) μg· ml-1·mm4,3个指标在实验组和对照组之间比较差异均有统计学意义(PM1＜0.01,P渗漏率=0.01,P重量=0.01).结论 周细胞具有抑制角膜新生血管渗漏的作用,为新生血管性疾病的抗渗漏治疗提供了理论指导.     

α-SMA在先天性发育不良肾脏中的表达

目的 :检测先天性肾发育不良患肾组织α -平滑肌肌动蛋白 (α -SMA)的表达并探讨其意义。方法 :应用免疫组织化学方法对 14例先天性发育不良肾、5例正常肾组织α -SMA的表达进行检测。结果 :患肾α -SMA表达较对照组明显增高 (t值 4 .6 9,P <0 .0 0 1)。除在血管组织呈强阳性外 ,原始小管上皮细胞、基膜 ,少数肾小球系膜细胞亦有中等程度表达。结论 :α -SMA蛋白表达的异常参与先天性肾发育不良的发病机制。     

胰岛素下调AP-1抑制血管平滑肌α肌动蛋白的表达以及对细胞增殖的影响

目的研究胰岛素诱导大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)转录因子激活蛋白-1(activator protein 1,AP-1)表达下调对VSMC表型转换标志蛋白α肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,SM-α)表达调控及细胞增殖的影响。方法流式细胞术检测不同浓度(0、25、50、100、125 nmol/L)的胰岛素刺激VSMC 24 h后的细胞周期。设计AP-1表达质粒载体,转染至血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)。分为4组:空白对照组、胰岛素实验组、AP-1表达载体组、胰岛素+AP-1表达载体组。分别采用Western blot、RT-PCR检测AP-1蛋白及SM-α蛋白的表达及mRNA水平。结果细胞周期分布结果显示,不同浓度的胰岛素刺激VSMC 24 h后,VSMC的S期百分比升高至峰值后开始下降[(23.49±1.17)%、(28.08±0.68)%、(30.44±1.77)%、(47.47±0.88)%、(46.23±1.65)%,P<0.05],100 nmol/L的胰岛素刺激VSMC 24 h后,VSMC的S期百分比达到峰值(47.47±0.88)。RT-PCR及Western blot检测结果显示,胰岛素刺激VSMC可下调AP-1[(0.47±0.09)、(0.46±0.14),P<0.05]及抑制SM-α的表达[(0.41±0.03)、(0.32±0.03),P<0.05]。结论胰岛素能下调转录因子AP-1表达,进而抑制表型转换标志蛋白SM-α的表达,诱导VSMC发生增殖。     

乳腺癌间质成纤维细胞α-SMA表达的意义

目的 探讨乳腺癌间质成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-CSMA)在乳腺癌浸润机制中的作用以及与乳腺癌预后的关系.方法 通过免疫组化的方法检测α-SMA在乳腺癌及正常乳腺组织间质中的表达,结合5年随访资料分析α-SMA表达与浸润性导管癌预后的关系.结果 α-SMA在原位癌间质成纤维细胞和早期浸润性导管癌表达阳性率分别为12.5%(2/16),42.9%(9/21),两者差异有统计学意义(P＜0.05);α-SMA在浸润性导管癌间质与原位癌及早期浸润癌表达差异均有统计学意义(P＜0.01).在浸润性导管癌中,α-SMA在Ⅲ期、Ⅳ期表达阳性率高于Ⅰ期、Ⅱ期,差异有统计学意义(P＜0.05).对68例浸润性导管癌进行生存分析,α-SMA表达阴性组5年生存率高于α-SMA表达阳性组,两者差异有统计学意义(P＜0.05).结论 α-SMA与乳腺癌浸润机制有一定关系,可能是影响乳腺癌预后的因素之一.     

糖尿病小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中脑周细胞的变化

目的 探讨糖尿病高血糖状态下局灶脑缺血再灌注损伤中脑周细胞的变化特点.方法 采用四氧嘧啶一次性腹腔注射制备1型糖尿病高血糖C57BL/6小鼠模型,以线栓法为基础使大脑中动脉缺血建立局灶性脑缺血再灌注小鼠模型,使用行为学、组织化学、qRT-PCR及Western blot等方法,对比观察假手术组(空白对照组)、正常血糖脑缺血再灌注组(缺血组)、糖尿病高血糖脑缺血再灌注组(高糖并缺血组)大脑皮质区周细胞数量改变和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的相对表达情况.结果 免疫组化及TTC染色显示,与空白对照组比较,缺血组缺血1h再灌注24 h后脑组织中α-SMA阳性细胞数量明显增多,梗死脑组织水肿明显(P＜0.05);高糖并缺血组再灌注24 h,α-SMA阳性细胞数目较同期缺血组更多,梗死区域水肿极严重(P＜0.05);qRT-PCR和Western blot分别显示高糖并缺血组α-SMA蛋白对应基因、α-SMA蛋白的相对表达量均高于缺血组(P＜0.05).结论 糖尿病高血糖与缺血再灌注两种损伤机制同时作用于脑组织时,使脑组织损伤更严重,损伤区域α-SMA的表达增强,周细胞数量明显增加.     

肉芽组织内血管生成过程中周细胞的作用

目的：研究周细胞的肉芽组织血管生成过程中作用。方法：采用双重免疫组织化学染色技术及形态定量分析方法对7例患者的肉芽组织进行研究。结果：周细胞不仅参与血管成熟过程，而且肉芽组织内血管新生的早期即有周细胞存在。结论：周细胞参与肉芽组织血管生成的全过程。     

生物素标记的免疫电镜技术对α-平滑肌肌动蛋白在乳腺癌新生血管表达研究中的应用

目的 :探讨生物素标记的免疫电镜技术在观察周细胞的形态特点及确定α-平滑肌肌动蛋白在乳腺癌组织中表达部位的应用。方法 :应用免疫电镜技术检测乳腺癌中 α-平滑肌肌动蛋白的表达。结果 :周细胞紧贴内皮细胞外侧 ,周细胞胞质中可见散布大量圆形黑色颗粒 ,而内皮细胞中见不到这些黑色颗粒。结论 :免疫电镜技术可作为蛋白精确定位的有效手段 ,α-平滑肌肌动蛋白可作为周细跑的标记物     

脑出血患者脑小动脉壁α-平滑肌肌动蛋白的表达

目的　探讨脑出血时脑小动脉平滑肌肌动蛋白 (α- SMA)表达与动脉粥样硬化的关系。方法　应用免疫组化技术并结合计算机图像分析 ,检测人类高血压脑出血脑小动脉内 α- SMA的表达程度。结果　在脑出血组脑小动脉内 α- SMA的表达明显增加。结论　 α- SMA的表达可作为血管平滑肌细胞 (VSMC)激活的标志 ,它的出现标志着 VSMC被激活并处于增殖 /分泌表型。     

脑出血患者脑小动脉壁α-平滑肌肌动蛋白的表达

目的探讨脑出血时脑小动脉平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达与动脉粥样硬化的关系.方法应用免疫组化技术并结合计算机图像分析,检测人类高血压脑出血脑小动脉内α-SMA的表达程度.结果在脑出血组脑小动脉内α-SMA的表达明显增加.结论α-SMA的表达可作为血管平滑肌细胞(VSMC)激活的标志,它的出现标志着VSMC被激活并处于增殖/分泌表型.     

局灶性脑缺血再灌注损伤对小鼠脑组织平滑肌细胞α-SMA表达的影响

目的 探讨局灶性脑缺血再灌注损伤对小鼠脑组织平滑肌细胞平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响.方法 采用C57BL/6小鼠模型,通过右侧大脑栓塞缺血方法建立局灶性脑缺血再灌注小鼠模型,使用qRT-PCR、Western blot及免疫组织化学等方法,对比观察脑缺血再灌注组小鼠组脑缺血2 h再灌注24 h(实验组)和假手术组及空白对照组大脑组织平滑肌细胞a-SMA的表达情况.结果 氯化三苯四氮唑(TTC)染色结果显示实验组小鼠脑梗死面积明显大于假手术组和空白对照组,实验组小鼠脑水肿明显. Western blot及qRT-PCR结果显示局灶性脑缺血再灌注小鼠组脑缺血2 h再灌注24 h后脑a-SMA的表达明显高于假手术组和空白对照组(P＜0.05).结论 局灶性脑缺血再灌注损伤能刺激小鼠脑组织平滑肌细胞a-SMA的表达.小鼠脑缺血2 h再灌注24 h后脑a-SMA的表达明显高于假手术组和空白对照组.     

子宫恶性血管周上皮样细胞肿瘤1例

患者,女,28岁。2006年4月曾因直肠腺癌行直肠、肛管经腹会阴联合切除术。2009年9月29日因＂月经周期缩短,经期延长2个月＂来我院就诊,妇检：宫体前位,大如4个月,质硬无压痛,余无殊;B超示子宫前壁肌层见一92mm×73mm大小低回声团块,血供丰富。     

肉芽组织内血管生成过程中周细胞的作用

目的 :研究周细胞在肉芽组织血管生成过程中作用。方法 :采用双重免疫组织化学染色技术及形态定量分析方法对 7例患者的肉芽组织进行研究。结果 :周细胞不仅参与血管成熟过程 ,而且肉芽组织内血管新生的早期即有周细胞存在。结论 :周细胞参与肉芽组织血管生成的全过程。     

α-SMA的表达与软骨细胞的去分化

目的:探讨细胞骨架蛋白α-SMA的表达与软骨细胞去分化之间的联系.方法:分离、培养大鼠肋生长板软骨细胞(RGCs),对原代至第5代RGCs进行细胞生长动力学分析,阿尔新兰染色、免疫细胞化学法和蛋白质印迹分别检测蛋白多糖,α-SMA和Ⅱ型胶原的表达.结果:随着传代次数的增加,前3代RGCs的每日倍增指数逐渐增加,随后不断下降.原代RGCs的阿尔新兰和Ⅱ型胶原染色均呈强阳性,仅个别细胞α-SMA弱阳性染色.随着传代次数的增加,阿尔新兰和Ⅱ型胶原阳性染色的细胞比例迅速下降,第3代以后的RGCs阿尔新兰染色均为阴性,第5代RGCs也仅有圆形细胞仍保持了Ⅱ型胶原阳性染色,而α-SMA阳性染色细胞的比例则不断增加.蛋白质印迹所揭示的Ⅱ型胶原和α-SMA蛋白表达的变化趋势与免疫细胞化学染色的结果一致.结论:α-SMA从无到有并随着RGCs去分化程度的增强而增加的表达模式,提示它是引起软骨细胞"去分化"的重要原因.     

TGFβ1在乳腺癌间质新生血管周细胞中的表达

目的：研究转化生长因子β(TGFβ₁)在乳腺癌周细胞中的表达情况。 方法：取50例手术切除乳腺癌新鲜标本,通过免疫组织化学染色、原位杂交技术,同时采用Western印迹法、RT-PCR进行蛋白和mRNA半定量分析,观察TGFβ₁在乳腺癌中的表达情况。 结果：TGFβ₁蛋白质可表达在新生血管周细胞的胞浆中,同时也可表达于乳腺癌癌细胞及新生血管内皮细胞;TGFβ₁ mRNA主要表达在血管周细胞的胞浆中,极少数癌细胞呈弱阳性表达。通过Western印迹法进行蛋白定量分析发现,随着血管密度的提高,TGFβ₁的蛋白增高（P<0.01）。RT-PCR结果显示,随着血管密度的提高,TGFβ₁的mRNA增高（P<0.01）。结论：TGFβ₁通过周细胞参与血管生成。     

姜黄素对哮喘小鼠α-SMA的表达及气道重构的影响

目的：观察腹腔注射姜黄素对小鼠α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的影响,验证其对哮喘小鼠气道炎症的防治和对肺的保护作用,探讨姜黄素在哮喘气道重构的治疗作用.方法：36只雄性SD小鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组、姜黄素治疗组各12只,采用卵蛋白致敏小鼠哮喘模型,ELISA检测支气管肺泡灌洗液中浓度并进行嗜酸粒细胞计数,HE染色观察各组气道炎症发生及气道结构改变情况,同时采用免疫组化法检测α-SMA在肺组织的表达.结果：正常对照组、哮喘模型组、姜黄素治疗组的EOS分别是（0.74±0.26）×108/L,（5.32±0.41）×108/L,（3.55±0.46）×108/L,哮喘模型组明显比正常对照组增高,两组比较有统计学意义（P〈0.01）.哮喘模型组小鼠具有明显的气道炎症,以淋巴细胞、嗜酸粒细胞为主,出现上皮细胞增生、平滑肌肌层增厚、结缔组织增生、黏液分泌旺盛并伴小气道栓塞.支气管黏膜下、血管壁及周围、肺间质均有大量胶原纤维沉积.姜黄素治疗组小鼠炎症明显改善,黏液产生减少,上皮增生、平滑肌层增厚不明显,气道周围胶原纤维及黏液颗粒均减少,无明显气道痉挛.正常对照组α-SMA的表达阳性率为8%（1/12）,哮喘模型组达58%（7/12）,姜黄素治疗组为33%（4/12）,两两比较差异有统计学意义（P〈0.01）.结论：姜黄素能够抑制α-SMA的表达,减轻气道炎症反应、延缓气道重构进程.     

抗纤复方Ⅰ号对酒精性肝病大鼠α-SMA的影响

目的：探讨抗纤复方Ⅰ号对酒精性肝病时仅．平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的影响。方法：63只大鼠随机分为正常组，酒精组，中药组。酒精组及中药组分别用酒精和中药灌胃，在4、8、12周分别处死3组大鼠，观察肝脏病理改变及肝组织中α-SMA的表达。结果：随着酒精性肝病的发展，中药组痛理改变及α-SMA的表达与酒精组相比明显减弱。结论：α-SMA表达的强弱反映了酒精性肝痛时星状细胞活化及酒精肝病的程度；抗纤复方Ⅰ号能防止酒精性肝损害，有效地押制α-SMA的表达。