紫草素对人肝癌HepG2细胞生长的影响及机制研究

目的:研究紫草素对人肝癌HepG2细胞生长的影响并探讨其可能的作用机制。方法:以不同浓度紫草素(0.3、0.5、0.7μg/ml)和顺铂(40μg/ml)分别干预对数生长期人肝癌HepG2细胞;采用MTT比色法测定细胞增值抑制率,通过流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡状况,采用RT-PCR法检测细胞中Bax mRNA、Bcl-2 mRNA表达并计算Bax/Bcl-2比值,采用Western blotting技术检测Caspase-3蛋白表达。结果:经紫草素干预48 h能够显著提高HepG2细胞增殖抑制率,延长细胞周期G_0/G_1期并缩短G_2/M期,提高细胞凋亡率(Apoptosis Index,AI),上调Bax mRNA表达并下调Bcl-2 mRNA表达、提高Bax/Bcl-2表达比值,上调Caspase-3蛋白表达,上述作用均具有一定的剂量依赖性。结论:紫草素能够通过抑制增殖并促进凋亡而对人肝癌HepG2细胞生长起到一定抑制作用,其机制可能与紫草素能够调节细胞周期以及调节凋亡相关基因、蛋白表达有关。     

紫草素对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的研究紫草素(Shikonin)对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法体外培养Ishikawa细胞,设空白对照组、紫草素0.3μg/m L组、紫草素0.5μg/m L组、紫草素0.7μg/m L组和顺铂40μg/m L组,每组设10个复孔。各组给予相应干预48 h后,采用MTT比色法测定细胞增殖抑制率,Flow Cytometry法检测细胞周期和细胞凋亡状况并计算细胞凋亡率,RT-PCR法检测细胞中bcl-2 mRNA、bax mRNA表达情况并计算bax/bcl-2比值,Western blotting法检测细胞中Caspase-3蛋白表达情况并进行半定量分析。结果与空白对照组相比,紫草素0.5μg/m L组、紫草素0.7μg/m L组和顺铂40μg/m L组Ishikawa细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例、bax mRNA表达量及bax/bcl-2比值、Caspase-3蛋白表达量均显著升高(P均0.05),而G2/M期细胞比例及bcl-2 mRNA表达量均显著降低(P均0.05);且紫草素0.7μg/m L组Ishikawa细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、bax/bcl-2比值和Caspase-3蛋白表达量均明显高于顺铂40μg/m L组(P均0.05),bcl-2 mRNA表达量明显低于顺铂40μg/m L组(P均0.05)。结论紫草素具有抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖并促进其凋亡的作用,机制可能与紫草素调节凋亡相关基因和蛋白表达有关。     

熊果酸对人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的:研究熊果酸(Ursolic Acid,UA)对人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法:体外培养并取对数生长期的人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞分为空白对照组、UA(12.5、25、50μmol/L)组和顺铂(6μmol/L)组,每组设10个复孔。药物干预24h后,采用MTT比色法测定增值抑制率,通过流式细胞术检测细胞周期、观察细胞凋亡状况并计算凋亡率,逆转录-PCR(RT-PCR)法检测bcl-2 mRNA和Bax mRNA表达并计算Bax/bcl-2表达比值,Western blotting法检测caspase-3蛋白表达。结果:UA(25、50μg/m L)组和顺铂组Hep-2细胞增殖抑制率较空白对照组显著升高,G_0/G_1期显著增长、G_2/M期显著缩短,细胞凋亡率显著升高,细胞中bcl-2 mRNA表达显著下调且Bax mRNA显著上调、Bax/bcl-2表达比值显著升高,caspase-3蛋白表达显著上调,上述差异均具有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:UA具有抑制人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖并促进其凋亡的作用,其机制可能与UA能够改变细胞周期以及调节凋亡相关基因和蛋白表达有关。     

番茄红素对人肝癌HepG2细胞生长的影响及其机制

目的:研究番茄红素(Lycopene,LP)对人肝癌Hep G2细胞生长的抑制作用及其机制。方法:体外培养并取对数生长期人肝癌Hep G2细胞,分别给予不同质量浓度LP(5、10、20μg·m L~(-1))和顺铂(40μg·mL~(-1))进行干预,48 h后通过MTT比色法测定细胞增殖抑制率,通过流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡状况,采用Western blotting技术检测Bax、bcl-2、Cleaved Caspase-3蛋白表达。结果:经LP或顺铂干预48 h能够有效提高人肝癌Hep G2细胞增殖抑制率,延长细胞周期G_0/G_1期并缩短G_2/M期,提高细胞凋亡率(Apoptosis Index,AI),上调Bax表达、下调bcl-2表达、提高Bax/bcl-2比值,上调Cleaved Caspase-3蛋白表达,LP上述作用均具有一定的剂量依赖性。结论:LP能够通过抑制细胞增殖并促进其凋亡而对人肝癌Hep G2细胞生长具有一定的抑制作用,其机制可能与LP能够影响细胞周期进程并调节凋亡相关基因蛋白表达有关。     

大蒜素对人喉癌Hep-2细胞周期与细胞凋亡的影响

目的研究大蒜素对人喉癌Hep-2细胞周期与细胞凋亡的影响。方法实验分为空白对照组、大蒜素25μg/m L组、大蒜素50μg/m L组、大蒜素100μg/m L组和顺铂40μg/m L组,取对数生长期人喉癌Hep-2细胞,每组分别给予相应干预24 h后,采用MTT法测定细胞增殖抑制率,通过流式细胞术检测细胞周期、观察细胞凋亡状况并计算凋亡率,RTPCR法检测bcl-2 mRNA和bax mRNA表达并计算bax/bcl-2表达比值,Western blotting法检测Caspase-3蛋白表达情况。结果与空白对照组比较,大蒜素50μg/m L组、大蒜素100μg/m L组和顺铂40μg/m L组人喉癌Hep-2细胞增殖抑制率显著升高,细胞周期G0/G1期显著增长、G2/M期显著缩短,细胞凋亡率显著升高,bcl-2 mRNA表达显著下调而bax mRNA显著上调,bax/bcl-2表达比值显著升高,Caspase-3蛋白表达显著上调,差异均有统计学意义(P均<0.05)。大蒜素100μg/m L组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和Caspase-3蛋白表达量均显著高于顺铂40μg/m L组(P均<0.05)。结论大蒜素具有阻滞人喉癌Hep-2细胞周期进程和促进其凋亡的作用,机制可能与其能够调节凋亡相关基因和蛋白表达有关。     

基于Keap1/Nrf2通路介导的自噬探讨紫草素对膀胱上皮癌BUC细胞化疗敏感性的影响

目的基于Kelch样ECH相关蛋白1/核因子E2相关因子2(Kelch-likeECH-associated protein-1/nuclearfactor E2-related factor 2,Keap1/Nrf2)通路介导的自噬探讨紫草素对膀胱上皮癌BUC细胞化疗敏感性的影响。方法体外培养人BUC细胞BIU-87,CCK-8法检测不同质量浓度(10、20、40、80、160μg/mL)顺铂和不同浓度(2、4、8、16、32μmol/L)紫草素+顺铂(40μg/mL)对BIU-87细胞增殖的影响。细胞转染实验,设置对照组、顺铂组(40μg/mL)、紫草素组(40μg/mL顺铂+8μmol/L紫草素)和NC组(转染negative control-Nrf2+40μg/mL顺铂+8μmol/L紫草素)和Nrf2组(转染hsa-Nrf2mimic+40μg/mL顺铂+8μmol/L紫草素),实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法检测转染后BIU-87细胞中Nrf2 mRNA表达情况;CCK-8法检测各组BIU-87细胞增殖情况;流式细胞仪检测各组BIU-87细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹(Western blotting)法检测BIU-87细胞中Keap1、Nrf2、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)?、LC3II蛋白表达情况。结果与对照组相比,10、20、40、80、160μg/mL顺铂可显著抑制BIU-87细胞增殖(P0.05);2、4、8、16、32μmol/L紫草素联合顺铂可显著抑制BIU-87细胞增殖(P0.05)。细胞转染实验中,与对照组相比,顺铂组BIU-87细胞增殖抑制率、凋亡率、细胞中Nrf2和LC3II蛋白表达水平显著升高,细胞中Keap1、LC3?蛋白表达水平显著降低(P0.05);与顺铂组相比,紫草素组BIU-87细胞增殖抑制率、凋亡率、细胞中Keap1和LC3?蛋白表达水平显著升高,Nrf2和LC3II蛋白表达水平显著降低(P0.05);紫草素组、NC组以上指标差异不具有统计学意义(P0.05);与NC组相比,Nrf2组BIU-87细胞增殖抑制率、凋亡率、细胞中Keap1、LC3?蛋白表达水平显著降低,Nrf2蛋白和mR NA及LC3II蛋白表达水平显著升高(P0.05)。结论紫草素可能通过抑制Keap1/Nrf2通路介导的自噬反应,增强BUC细胞BIU-87对顺铂的敏感性。     

番茄红素对体外人骨肉瘤细胞增殖及荷骨肉瘤裸小鼠肿瘤生长的影响

[目的]研究番茄红素(LP)对体外人骨肉瘤MG-63细胞增殖及荷骨肉瘤裸小鼠肿瘤生长的影响,并初探其机制。[方法]取对数生长期人骨肉瘤MG-63细胞;设空白对照组,LP(5、10、20μg/mL)组和顺铂(40μg/mL)组;给药48 h后,观察细胞形态,检测细胞周期、细胞增值抑制率,观察细胞凋亡状况并测定细胞凋亡率。采用背部皮下注射接种人骨肉瘤细胞的方法建立荷骨肉瘤裸小鼠模型,设模型对照组,LP[5、10、20mg/(kg·d)]和顺铂[2 mg/(kg·d)],各20只;称量瘤体质量并计算抑瘤率,观察肿瘤组织形态结构变化和细胞凋亡状况,检测肿瘤组织凋亡相关蛋白(bcl-2、Bax、caspase-3)表达。[结果]体外实验:空白对照组人骨肉瘤MG-63细胞呈贴壁生长、增殖迅速,LP干预组和顺铂组细胞呈现变圆、脱壁、细胞间接触松散状态;与空白对照组比较,LP组和顺铂组细胞周期G_0/G_1期显著延长,细胞增殖抑制率显著升高,凋亡细胞数量明显增多、凋亡率显著升高,差异均具有统计学意义(P0.05,P0.01)。体内实验:与模型组比较,LP 10、20 mg/(kg·d)组瘤质量显著减轻、抑瘤率显著升高;LP组肿瘤组织呈片状坏死、瘤细胞皱缩等病理性改变,细胞凋亡指数(AI)显著升高,肿瘤组织bcl-2表达下调、Bax上调而Bax/bcl-2比值显著升高,caspase-3表达显著上调,差异均具有统计学意义(P0.05,P0.01)。[结论]LP具有抑制体外人骨肉瘤MG-63细胞增殖和荷骨肉瘤裸小鼠肿瘤生长的药理学作用,其机制可能与LP阻滞细胞周期、调节凋亡相关调控蛋白表达有关。     

紫草素对荷肝癌裸小鼠移植瘤生长的影响及其机制研究

目的:研究紫草素(Shikonin)对荷肝癌裸小鼠移植瘤生长的影响,并探讨其机制。方法:采用皮下注射接种肝癌HepG2细胞的方法建立荷肝癌裸小鼠模型,分别腹腔注射给予不同剂量紫草素(0.5、1、2 mg/kg)和顺铂(2 mg/kg)进行干预治疗,隔天一次,共给药6次。治疗完成后,观察各组裸小鼠一般生存状态及肿瘤生长状况,称取瘤体质量并计算抑瘤率;通过苏木精-伊红(HE)染色观察肿瘤组织形态结构改变,末端标记法(TUNEL)检测肿瘤组织细胞凋亡状况,免疫组织化学法(IHC)观察肿瘤组织凋亡相关蛋白(caspase-3、Bax、bcl-2)表达。结果:经紫草素治疗后荷肝癌裸小鼠饮食状况和精神状态明显改善,瘤体减小、活动度和硬度降低,肿瘤组织呈现细胞皱缩、片状坏死等病理性改变、凋亡细胞数量明显增多;瘤体质量显著减轻、抑瘤率显著升高;肿瘤组织中caspase-3和Bax表达显著上调而bcl-2显著下调,Bax/bcl-2比值显著升高;紫草素上述作用均具有一定的剂量依赖性。结论:紫草素对荷肝癌裸小鼠移植瘤生长具有一定的抑制作用,其机制可能与紫草素调节凋亡相关基因蛋白表达而促进肿瘤组织细胞凋亡有关。     

大蒜素对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究大蒜素对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:以不同浓度大蒜素(12.5、25、50μg/mL)和顺铂(40μg/mL)分别干预对数生长期Ishikawa细胞,采用MTT法检测Ishikawa细胞增值抑制;通过流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡状况,采用Western blotting法检测Ishikawa细胞中caspase-3蛋白表达,RT-PCR法检测Ishikawa细胞中Bax mRNA、bcl-2 mRNA表达并计算Bax/bcl-2表达比值。结果:大蒜素能够显著提高子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖抑制率,阻滞Ishikawa细胞周期于G2/M期,提高细胞凋亡率,上调caspase-3蛋白和Bax mRNA表达,下调bcl-2 mRNA表达,提高Bax/bcl-2表达比值,且上述作用均具有一定的剂量依赖性。结论:大蒜素对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖具有抑制作用以及促其凋亡的作用,机制可能与大蒜素能够改变Ishikawa细胞周期以及调节凋亡相关基因、蛋白表达有关。