金花茶叶的降血糖作用及急性毒性研究

目的 考察金花茶叶提取物对实验性糖尿病小鼠的调节血糖作用及其对小鼠的急性毒性.方法 采用改良寇氏法测定金花茶叶提取物的半数致死量(LD50).利用静脉四氧嘧啶造成糖尿病模型,将造模成功的小鼠分为模型组,二甲双胍组,金花茶提取物高剂量、中剂量及低剂量组,另取正常小鼠作为空白对照组,连续灌胃28 d,分别于给药前,给药后第7,14,21,28天测定空腹血糖,并于末次空腹血糖测定后给所有动物灌胃6 g/kg葡萄糖溶液,测定灌胃30 min、60 min及120 min后的血糖值,考察动物糖耐量水平.结果 金花茶叶提取物对小鼠的LD50为106.7 g生药/kg体质量.金花茶叶提取物给药1周后能显著降低糖尿病小鼠空腹血糖(P＜ 0.001),但仅高剂量组的降糖作用能持续出现,至给药第4周高剂量和低剂量组能显著降低糖尿病小鼠的血糖(P＜0.05).在糖耐量实验中,金花茶叶提取物能显著抑制餐后血糖的升高(P＜0.001),在餐后120 min将血糖降低至接近餐前水平.结论 金花茶叶提取物毒性较低,对四氧嘧啶致高血糖小鼠有可靠的降血糖作用,可能用于辅助控制糖尿病患者的血糖水平.     

金花茶叶降血糖胶囊辅助治疗2型糖尿病的临床观察

目的:探讨金花茶叶降血糖胶囊辅助治疗2型糖尿病的降血糖效果。方法:选取60例糖尿病患者,随机分为治疗组(予基础治疗、盐酸二甲双胍片、金花茶叶降血糖胶囊治疗)及对照组(予基础治疗、盐酸二甲双胍片治疗)各30例,1个月为1个疗程,两组均治疗3个疗程。结果:治疗组显效5例,有效23例,无效2例,总有效率为93.33%;对照组显效2例,有效17例,无效11例,总有效率为63.33%;两组疗效比较差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗组空腹血糖(FPG)、糖耐量试验(OGTT 2h PG)指标与对照组比较下降明显,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论:金花茶叶降血糖胶囊辅助治疗2型糖尿病,能辅助降低血糖水平,且安全性较高。     

HepG2细胞胰岛素抵抗模型的建立及在筛选两色金鸡菊活性化合物中的应用

目的:体外建立人肝癌细胞(HepG2)胰岛素抵抗模型,并初步筛选两色金鸡菊中可有效改善胰岛素抵抗的萃取部位及活性化合物。方法:用不同浓度的胰岛素、棕榈酸或葡萄糖分别对HepG2细胞进行不同时间的诱导,通过MTT法对细胞活性进行评价及葡萄糖氧化酶法对HepG2细胞葡萄糖消耗量测定,明确建立稳定的HepG2胰岛素抵抗模型的试剂诱导浓度及诱导时间。模型建立后,应用不同浓度的两色金鸡菊粗提物、各萃取部位及七个单体化合物奥卡宁(Okanin,2)、3',4',8-三羟基黄酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3',4',8-trihydroxyflavone-7-O-β-D-glucopyranoside,3)、槲皮素(Quercetin,4)、黄诺马苷(Flavanomarein,5)、马里苷(Marein,6)、豆甾醇(Stigmasterol,13)、紫铆花素(Butein,16)预处理细胞24 h,再用55 mmol·L-1葡萄糖刺激24h,用葡萄糖氧化酶法或2-NBDG荧光标记葡萄糖法分别观察不同浓度的上述成分对胰岛素抵抗模型HepG2细胞糖消耗或糖吸收的影响。MTT法对各组细胞活性进行评价。结果:HepG2细胞在10-7mol·L-1浓度的胰岛素中作用24 h,或在55 mmol·L-1的葡萄糖中刺激24 h,细胞葡萄糖消耗量明显减少(P0.01)且稳定性良好,并且对细胞存活率未造成影响,可作为胰岛素抵抗模型;而棕榈酸组虽然糖消耗显著下降但细胞存活率也显著降低。两色金鸡菊总提物、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水部位及2号、3号、5号和16号化合物均有改善细胞胰岛素抵抗作用,其中5号黄诺马苷和6号马里苷效果较好。结论:黄诺马苷和马里苷可能是两色金鸡菊中改善胰岛素抵抗的主要活性成分。     

分光光度法测定金花茶叶降血糖胶囊茶多酚的含量

目的:建立金花茶叶降血糖胶囊的质量控制方法。方法:采用可见分光光度法测定金花茶叶降血糖胶囊中茶多酚的含量。结果:没食子酸浓度在10～50μg/ml范围内与吸光度呈良好线性关系,方程为:Y=0.008X+0.018(r=0.9995),平均回收率为102.95%,RSD=1.81%(n=6)。结论:该方法简便可靠,结果准确稳定,重复性好,可作为金花茶叶降血糖胶囊定量的质量控制方法。     

金花茶叶乙醚部位的GC-MS分析

目的:采用气相-质谱(GC-MS)分析金花茶叶乙醚部位的化学成分。方法:采用75%乙醇回流提取金花茶叶,滤液浓缩后用乙醚萃取,得到乙醚部位,用GC-MS法分析鉴定其化学成分,结合计算机检索技术及美国国家标准技术研究所(NIST)化合物谱库检索进行鉴定,再用面积归一化法确定其相对含量。结果:金花茶叶乙醚部位的成分共分离鉴定出61个化合物,相对含量占总含量的78.41%,主要化学成分是2-(氧代十八烷基)乙醇,二十五烷,1-碘代十六烷等。结论:可用GC-MS法快捷、简便、准确地分析金花茶叶乙醚部位成分。初步揭示了该药材化学成分,对进一步研究其化学成分、为药材的质量评价提供实验基础。     

丹皮多糖降血糖有效成分的筛选及其作用研究

目的：筛选丹皮多糖降血糖的有效成分,研究其降糖作用及机理。方法：用小鼠和大鼠制造葡萄糖性高血糖及四氧嘧啶性糖尿病模型,氢化可的松琥珀酸钠（HCSS）造成胰岛素抵抗,观察丹皮多糖粗品和纯品对正常和高血糖模型动物血糖的影响,并测定糖尿病动物SOD、Insulin、GHb、ApoA1等水平。结果：丹皮多糖纯品2b（PSM2b）可降低葡萄糖和四氧嘧啶诱发的鼠高血糖,优于粗品和其他纯品,并能升高糖尿病小鼠SOD和大鼠ApoA1水平,降低GBb水平,改善小鼠品服葡萄糖耐量和胰岛素抵抗。结论：PSM2b为丹皮多糖中降血糖有效成分,它可有效地控制实验性高血糖,其降糖机理可能与促进外周组织对葡萄糖的作用,提高机体对胰岛素的敏感性有关。     

降脂平肝汤含药血清对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响

目的:探讨降脂平肝汤含药血清对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响.方法:以浓度分别为5×10-5,5×10-6,5×10-7,5×10-8,5×10-9mol·L-1的胰岛素孵育HepG2细胞24 h,建立并筛选最佳HepG2胰岛素抵抗模型,分别以20％大鼠空白血清及5 μmol· L-罗格列酮为对照,采用细胞培养、糖原染色、葡萄糖摄取分析等方法检测20％降脂平肝汤含药血清对HepG2细胞胰岛素抵抗相应指标的变化.结果:以5×10-7 mol· L-1的胰岛素成功建立HepG2胰岛素抵抗模型.与胰岛素抵抗模型组相比,降脂平肝汤含药血清组及罗格列酮组在基础状态下和胰岛素刺激状态下细胞的葡萄糖摄取以及糖原含量均明显增加,细胞糖原颗粒显著增多,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:降脂平肝汤含药血清能减轻HepG2细胞的胰岛素抵抗.     

齐墩果酸对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响

目的：采用高浓度胰岛素体外诱导培养HepG2细胞,建立胰岛素抵抗的细胞模型,观察齐墩果酸对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响。方法：用CCK-8法筛选齐墩果酸作用于HepG2细胞的实验浓度,然后用高浓度胰岛素诱导HepG2细胞胰岛素抵抗,给予不同浓度的齐墩果酸（0.1、1、10、100μmol·L-1）、吡格列酮（10μmol·L-1）干预,以葡萄糖氧化酶法检测葡萄糖消耗量。结果：1不同浓度齐墩果酸对HepG2细胞增殖无明显影响。2与对照组比较,高浓度胰岛素作用24 h后,模型组葡萄糖消耗量明显降低（P〈0.01）;与模型组比较,齐墩果酸组HepG2细胞葡萄糖消耗量随浓度增加而增加,成一定的量效关系,浓度为10μmol·L-1和100μmol·L-1时葡萄糖消耗量显著增加（P〈0.01或P〈0.05）。结论：齐墩果酸能改善高浓度胰岛素诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗。     

白子菜对HepG2细胞胰岛素抵抗改善作用的实验研究

目的 探讨白子菜对HepG2细胞胰岛素抵抗的改善作用.方法 用葡萄糖临床检测试剂盒检测白子菜对正常HepG2细胞葡萄糖消耗的影响,并于葡萄糖消耗实验结束后用MTT法检测白子菜对细胞增殖的影响;将HepG2细胞置于10-8 mol·L-1胰岛素培养液中36h复制胰岛素抵抗模型;用葡萄糖临床检测试剂盒检测白子菜对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗的影响.结果 白子菜对HepG2细胞增殖无影响,并可促进正常HepG2细胞和胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗.结论 白子菜可明显改善HepG2细胞胰岛素抵抗.     

金花茶种子对体外培养不同肿瘤细胞增殖作用的影响

目的 观察金花茶种子95％乙醇提取物及95％乙醇提取物的乙酸乙酯部分、正丁醇部分、水溶部分3个极性部位对体外培养不同肿瘤细胞增殖作用的影响.方法 用RPMI1640培养基,常规传代培养人肺癌A549细胞、乳腺癌MCF-7细胞.采用噻唑蓝比色法(MTT)检测A549细胞和MCF-7细胞活性.结果 金花茶种子醇提取物部分、正丁醇部分和水溶部分对A549细胞和MCF-7细胞增殖均有抑制作用,其IC50分别为95.2,99.06,107.72 μg/ml;215.7,200.35,203.24 μg/ml,且均具有剂量依赖性的抑制作用.结论 金花茶种子95％乙醇提取物的正丁醇部分和水溶部分为其抗癌活性的有效部位,并且对A549细胞增值的活性更强.     

金花茶种子对激素相关性肿瘤体外抑制作用的实验研究

目的 观察金花茶种子不同提取物对激素相关性肿瘤体外抑制作用.方法 采用噻唑蓝比色法(MTT)检测金花茶种子不同提取物对人宫颈癌HeLa S3细胞和人前列腺癌PC3 细胞增殖的影响.结果 金花茶种子乙醇提取物、正丁醇部分和水溶部分都显示了较强的抑制人宫颈癌HeLa S3细胞和人前列腺癌PC3 细胞增殖的作用,其IC50分别为85.88,67.62,55.71 μg/ml和63.06,56.20,68.53 μg/ml,且抑制作用和样品浓度呈量效关系.结论 金花茶种子乙醇提取物的正丁醇部分和水溶部分在体外对激素相关性肿瘤具有抑制作用,为其抗癌活性的有效部位.     

金花茶种子诱导人前列腺癌PC3细胞凋亡及其机制的研究

目的 探讨金花茶种子诱导人前列腺癌PC3细胞凋亡的机制.方法 用不同浓度金花茶种子乙醇提取物的正丁醇萃取物(CCEB)干预人前列腺癌PC3细胞,分别采用流式细胞仪、Western印记法等检测其对细胞凋亡及Bax、Bcl-2等表达的影响.结果 CCEB作用于人前列腺癌PC3细胞后,引起PC3细胞DNA片段化率增大,线粒体膜电位下降,细胞内caspase-3活性增高,Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达减少,胞浆中细胞色素c含量增加.结论 CCEB诱导PC3细胞凋亡与caspase依赖性线粒体途径相关.     

桑叶中降糖活性成分筛选及其药效学研究

目的:筛选桑叶中α-葡萄糖苷酶(α-GS苷酶)抑制活性最佳组分,并进行体内降糖活性研究。方法:采用柱层析法对桑叶水提物进行分离,利用体外细胞实验筛选出α-葡萄糖苷酶抑制活性最佳组分,并采用链脲霉素诱导的大鼠高血糖动物模型进行跟踪验证。结果:细胞实验结果表明,桑叶提取物中生物碱的α-葡萄糖苷酶抑制活性最强。体内试验中,与模型组比较,生物碱给药组糖尿病大鼠的血糖有明显降低。结论:桑叶中的生物碱具有显著的降血糖的作用(P0.05)。     

核桃楸叶降血糖和抗氧化有效部位的筛选及其成分分析

目的:筛选核桃楸叶乙醇提取物降血糖和抗氧化有效部位并确定其活性成分。方法:制备核桃楸叶乙醇提取物的不同溶剂萃取部位:二氯甲烷萃取部位、乙酸乙酯萃取部位、水饱和正丁醇萃取部位以及剩余水溶性成分部位,采用体外α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制活性筛选模型,测定核桃楸叶乙醇提取物各萃取部位降血糖活性,以清除DPPH自由基能力研究其抗氧化活性,进而应用紫外分光光度法考察各萃取部位总黄酮含量,综合筛选并确定核桃楸叶乙醇提取物降血糖和抗氧化的有效部位,最终通过超高效液相色谱法(UPLC)确定其活性成分。结果:体外酶活性抑制试验显示,核桃楸叶乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位在体外有明显的抑制α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶作用,其最大半数抑制浓度(IC_(50))分别为0.014、0.13 mg·mL~(-1),均强于阳性药阿卡波糖(IC_(50)分别为0.044、0.158 mg·mL~(-1));DPPH自由基清除与黄酮含量测定实验结果表明,其乙酸乙酯萃取部位清除DPPH自由基能力亦强于其他萃取部位,其IC_(50)为6.89 mg·mL~(-1);乙酸乙酯活性部位中总黄酮质量分数为86.11%,为该部位的主要成分,经标品比对较好的3个活性成分为金丝桃苷、异槲皮素和紫云英苷。结论:核桃楸叶乙醇提取物乙酸乙酯萃取部位应为核桃楸叶降血糖和抗氧化有效部位,主要活性成分为金丝桃苷、异槲皮素和紫云英苷。     

毛葡萄叶水提物降脂有效部位的筛选

目的 筛选毛葡萄叶水提物降脂的有效部位,为进一步分离提纯提供依据.方法 采用大孔树脂AB-8柱乙醇-水系统分离毛葡萄叶水提物,建立昆明种小鼠高脂模型,检测血清中的血脂成分和肝中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)以及通过苏丹红染色检测肝内脂质的变化.结果 毛葡萄叶水提物的水洗部分能明显降低小鼠血清TC、TG、低密度脂蛋白(LDL)和肝脏TC、TG和丙二醛(MDA)水平,肝组织的苏丹红染色结果表明毛葡萄叶水提物的水洗部分有明显降肝脂作用.结论 毛葡萄叶水提物水洗部分是降血脂的有效部位,其效果与阳性药物非诺贝特相当.     

影响银杏叶有效成分的有关因素分析

对影响银杏叶有效成分的有关因素进行了综述,认为主要因素为产地,树龄,雌雄,采叶时间,采叶部位及加工方式的不同。另外,品种的影响也是亟待研究的一个问题。对历年来文献报道中存在的相互矛盾的问题进行了分析探讨。     

苗药黑骨藤有效部位的筛选研究(二)

根据黑骨藤的功效与主治，以镇痛和抗炎作为主要药效学指标，对已筛选出的有效部位——醇提部位进行进一步的分离（此前已经作过报道），得到不同的部分进行药理试验，以确定黑骨藤的有效部分。研究结果表明，其中正丁醇部分为有效部分，应从此部分中进一步分离出单体成分作为制定质量标准的指标成分。     

广西匙羹藤茎降血糖活性部位的研究

目的：研究广西匙羹藤茎降血糖活性部位。方法：利用系统溶剂分离法，提取分离广西匙羹藤茎，采用紫外光谱法和薄层色谱法对各部分的提取物进行理化鉴别，并观察提取物各部分对四氧嘧啶小鼠模型血糖值的影响。结果：光谱扫描图和TLC鉴别均表明，匙羹藤茎正丁醇和95％乙醇提取物的吸收峰与斑点相似，提示两者主要成分有可能相同；药理实验结果表明，匙羹藤茎正丁醇和95％乙醇提取物能够显著降低四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖值。结论：匙羹藤茎正丁醇和95％乙醇提取物对四氧嘧啶性糖尿病小鼠有明显的降血糖作用。     

金花茶叶中3种黄酮苷元的含量测定

目的:建立同时测定金花茶叶中槲皮素、木犀草素和山柰酚含量的高效液相色谱方法。方法:采用Agilent TC-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);以甲醇-0.6%磷酸(52∶48)为流动相等度洗脱;流速1 mL.min-1;柱温25℃;检测波长365 nm。结果:槲皮素、木犀草素和山柰酚分别在3.3～16.7,2.7～28.8,4.1～14.7 mg.L-1峰面积和质量浓度线性关系良好(r≥0.9992),平均加样回收率分别为98.00%,99.06%,98.11%,RSD分别为1.27%,0.62%,0.94%。结论:所建立的方法简便、准确、重复性好,可用于金花茶叶质量控制。