热疗联合顺铂诱导人胃癌MKN45细胞凋亡作用的研究

为研究顺铂及同时合并43℃30min热疗作用下胃癌细胞的凋亡过程,采用细胞培养的方法,通过AO染色、DNA微电泳及电镜观察,发现人胃癌MKN 45细胞在25mg/L浓度的顺铂作用2h、43℃30min热疗作用及两者同时作用下,呈现不同程度的凋亡。电镜观察到凋亡的细胞表;现DNA微电泳呈拖尾现象,提示凋亡细胞内DNA片断化;凋亡细胞AO染色呈阳性反应,且顺铂与热疗共同作用时AO阳性率高于两者单独作用时,有显著性差异(P<0.05),但两者单独作用时AO染色比较无显著性差异。提示热疗与顺铂合用时对人胃癌细胞的凋亡具有协同作用。     

逆转胃癌顺铂耐药的研究进展

国家综合癌症网络(National Comprehensive Cancer Network, NCCN)发布的2020版医学指南指出,顺铂是胃癌术前化疗、姑息治疗、晚期患者和转移性胃癌患者全身治疗的优选药物,它作为治疗胃癌的经典化疗药物之一,其广谱抗肿瘤效应得到了广泛的临床肯定。但是在临床实践中,顺铂的持续使用往往会激活胃癌细胞的保护性调节信号,最终导致胃癌耐药的发生。本文就逆转胃癌顺铂耐药机制的研究进展情况进行阐述。     

核仁素调控多药耐药基因MDR1参与胃癌顺铂耐药

目的:探讨核仁素(Nucleolin,NCL)与胃癌顺铂耐药的关系,为胃癌的耐药机制研究和治疗提供新的基因靶点。方法:通过Western blot检测胃癌细胞SGC7901和胃癌顺铂耐药细胞SGC7901/DDP中NCL的表达量;通过转染siRNA干扰NCL的表达量,MTT实验检测敲低NCL表达对胃癌细胞耐药性的影响;通过转染GFP-NCL真核表达质粒,过表达NCL并检测多药耐药基因MDR1的表达变化。结果:Western blot结果表明NCL在耐药细胞SGC7901/DDP中表达量明显升高;MTT实验结果表明,干扰NCL的表达后,胃癌细胞对顺铂DDP的敏感性明显增高;荧光显微镜显示GFP-NCL定位在核仁区域,Western blot显示,NCL过表达能够明显促进MDR1的表达。结论:核仁素NCL通过调控多药耐药基因MDR1的表达参与胃癌细胞顺铂耐药。     

褪黑素联合顺铂对人胃癌细胞增殖及相关凋亡蛋白表达的影响

目的 探究褪黑素（MLT）联合顺铂（CDDP）对人胃癌AGS细胞的疗效及相关凋亡蛋白表达的影响。方法 将体外培养的人胃癌细胞AGS细胞株分为4组,即AGS对照组、AGS MLT组（2mmol/L）、AGS CDDP组（4μg/ml）和AGS MLT+CDDP组（2mmol/L MLT和4μg/ml CDDP）。采用CCK8试验检测各组细胞增殖的抑制情况,Annexin Ⅴ FITC/PI凋亡试剂盒检测各组细胞早晚期细胞凋亡情况,Western blot法检测各组细胞凋亡蛋白表达情况。结果 MLT+CDDP组细胞的生存率明显低于AGS对照组和AGS 单药组;流式细胞术检测细胞凋亡情况表明,正常对照组、单药组和联合组细胞的早期凋亡率依次增加;蛋白水平研究表明,相比单药组和正常组,联合组的Bcl-2、原形态caspase-3表达显著降低,Bax及活化态cleaved-caspase-3表达明显增高。结论 与单用顺铂相比,褪黑素联合顺铂能明显抑制胃癌AGS细胞增殖并加强促凋亡能力,这可能与联合药影响相关凋亡蛋白表达有关。     

顺铂腹腔热灌注化疗对人胃癌细胞系凋亡的影响及其作用机制

目的 初步探究顺铂腹腔热灌注对人胃癌细胞系(SGC-7901)凋亡的影响及其作用机制.方法 实验分为对照组、顺铂组、热疗组和热化疗组.CCK-8检测各组细胞活力,Hoechst染色法检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测Caspase-3、Bcl-2、Bax和Bid蛋白表达水平.结果 与对...     

Flavopiridol联合顺铂对人U2-OS细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨Flavopiridol（FP）联合顺铂（DDP）对人骨肉瘤细胞株（U2-OS）的增殖及凋亡的作用。方法将不同浓度的FP(0、50、100、200、400、1000nmol·L^-1)分别与人U2-OS细胞共同培养24、48h后,采用MTT法检测U2-OS细胞增殖,以确定FP作用48h的半数抑制浓度（IC50）;采用Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡的形态学改变;采用流式细胞术测定U2-OS细胞凋亡率。然后将培养后的U2-OS细胞分为4组:空白对照组、单用FP组、单用DDP组、联合用药组（FP+DDP组）,每组设5个复孔,分别加入0.1%DMSO、FP（IC50）、DDP、FP（IC50）+DDP处理,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期。结果 FP对人U2-OS细胞的增殖抑制作用呈现浓度依赖性,作用48h的IC50值为340nmol·L^-1,Hoechst33258染色后细胞出现明显的核固缩、核浓聚等凋亡改变,随着FP浓度的增加,流式细胞术检测细胞凋亡率升高。FP+DDP联合作用于人U2-OS细胞,随着时间的增加抑制率逐渐增大（P<0.05）;与FP和DDP单独用药组比较,抑制率、凋亡率及周期阻滞差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 FP可明显抑制人U2-OS细胞增殖并诱导凋亡,联合顺铂对人U2-OS细胞的增殖抑制及凋亡促进具有协同作用。     

MDR1基因多态性与胃癌顺铂化疗疗效的相关性

目的 研究多药耐药基因MDR1 C3435T基因多态性与胃癌患者对顺铂化疗疗效的关系。方法 选取102例经病理学确诊的胃癌患者进行顺铂方案的化疗,通过采集患者外周静脉血提取基因组DNA并测序分析,检测MDR1 C3435T基因多态性并分析基因多态性与患者化疗疗效及生存预后的关系。结果 102例胃癌患者中,MDR1 C3435T C/C基因型患者40例(39.2%),C/T基因型患者29例(28.4%),T/T基因型患者33例(32.4%),其中,C/C基因型患者的完全缓解率CR为3.9%,部分缓解率PR为23.6% ,有效治疗率CR+PR为27.6%,明显高于C/T(CR=1%, PR=2%, CR+PR=3%)和T/T(CR=0, PR=9.8%, CR+PR=9.8%)基因型患者。与MDR1 C3435T C/T和T/T基因型患者相比,C/C基因型患者的无进展生存时间(PFS)和总生存时间(OS)更长(PFS:P=0.046; OS:P=0.011)。Log-rank和COX多因素回归模型证实MDR1 C3435T基因多态性是影响顺铂化疗的胃癌患者生存的独立预后因素(PFS:HR=3.488, P=0.005; OS:HR=2.418, P=0.035)。结论MDR1基因 C3435T位点多态性与胃癌患者对顺铂化疗疗效和生存预后相关。     

槲皮素联合顺铂对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨槲皮素单独及联合顺铂对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法选取对数生长期的卵巢癌SKOV-3细胞作为研究对象,实验分6组:阴性对照组(生理盐水),槲皮素低(25μmol/L)、中(50μmol/L)、高剂量组(100μmol/L),顺铂组(10μmol/L),联合组(槲皮素50μmol/L+顺铂10μmol/L)。采用MTT法检测不同浓度槲皮素单独及联合顺铂对SKOV-3细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡率;免疫细胞化学法检测槲皮素作用于SKOV-3细胞Bcl-2及MtP53蛋白表达水平的变化。结果与阴性对照组相比,槲皮素可明显抑制SKOV-3细胞的增殖,并具有显著的时间和剂量依赖关系,槲皮素高剂量组在72 h的抑制率可达63.49%(P<0.05);流式细胞仪分析发现槲皮素可使G0/G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少(P<0.05),提示其将细胞周期阻滞于G1期;槲皮素还可明显诱导SKOV-3细胞凋亡,高剂量组的凋亡率可达29.51%;槲皮素作用后,Bcl-2及MtP53表达则明显降低(P<0.05)。结论槲皮素在体外可抑制SKOV-3细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,其机制可能与降低凋亡相关蛋白MtP53和Bcl-2的蛋白表达水平有关;槲皮素与顺铂联用有协同作用。     

顺铂对肺癌细胞耐药基因表达水平的影响

目的:研究顺铂(DDP)对肺癌细胞耐药基因MRP1,MGMT,XPA和XPB表达水平的影响,探讨不同耐药机制在肺癌耐药过程中的作用。方法:以噻唑蓝还原法(MTT)检测DDP对肺癌细胞A549生存率的影响,实时荧光定量PCR技术检测DDP处理前后肺癌细胞MRP1,MGMT,XPA和XPB mRNA的表达水平。结果:不同浓度DDP(1.25~40μg/ml)处理肺癌细胞48 h,细胞的生存率从74.7%降至17.4%。4μg/ml DDP处理肺癌细胞12,24和48h后,细胞生存率分别为96.1%,73%和48.5%。DDP处理引起细胞的MRP1 mRNA表达水平先下降后上升;MGMTmRNA表达水平下降;XPB和XPA mRNA表达水平均增高。结论:DDP可以导致肺癌细胞耐药基因MRP1,MGMT,XPA和XPB mRNA表达水平的改变,提示多种耐药机制参与了DDP引起的肺癌细胞耐药。     

人成骨肉瘤顺铂耐药细胞系的建立

目的建立顺铂诱导的人成骨肉瘤多药耐药细胞系(MG63/R)并观察其生物学特性。方法以顺铂为诱导剂,采用大剂量冲击与逐步增加剂量相结合的方法诱导人成骨肉瘤MG63细胞,建立多药耐药系MG63/R。MTT法检测药物敏感性;光镜、透射电镜观察MG63、MG63/R细胞形态及超微结构变化;生长曲线、克隆形成试验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期、凋亡指数、P-pg、bcl-2、P53蛋白表达。结果经顺铂186d的诱导,建立了MG63/R,其对顺铂的耐药指数为83.557±4.841,对阿霉素、长春新碱、氨甲基蝶呤、环磷酰氨亦产生不同程度的交叉耐药;光镜观察可见MG63/R细胞排列不规则,形态呈三角形、多角形及多核现象;透射电镜显示MG63/R细胞表面突起增加,粗面内质网丰富;细胞周期分析显示细胞增殖能力明显增加而细胞凋亡明显降低;MG63/R细胞P-pg、bcl-2阳性表达较MG63细胞明显增加,P53表达则明显降低。结论本研究建立了稳定的人成骨肉瘤多药耐药细胞系MG63/R,为进一步研究顺铂的多药耐药机制和耐药治疗提供了一种新的实验模型。     

顺铂与5-氟尿嘧啶对体外人胃癌细胞影响的研究

[目的]研究顺铂（DDP）与5-氟尿嘧啶（5-FU ）在合并用药前后对体外培养的人胃癌细胞的影响.[方法]采用MTT法观察体外培养的人胃癌细胞系SGC-7901在DDP与5-FU合并用药前后细胞存活率的差异,并通过流式细胞仪检测细胞周期变化, 透射电镜观察细胞超微结构变化.[结果]DDP与5-FU合用与单独应用化疗药相比细胞存活率明显下降,其增效倍数为单独用药的2.73～4.48倍（P＜0.01）, 细胞生长停止在S期,S期数分数为0.51,有效抑制了细胞有丝分裂及DNA合成, 细胞超微结构显示：联合用药后,细胞核固缩、空泡形成、微绒毛减少、线粒体及内质网肿胀.[结论]结果表明顺铂与小剂量化疗药合用,可获得强于化疗药单独用药的疗效,5-氟尿嘧啶增加了化疗药物对肿瘤细胞的毒性,增加了细胞对药物的敏感性,降低了药物的副作用.     

小檗胺及其衍生物对恶性黑色素瘤细胞增殖的影响

观察小檗胺及其衍生物（B2、B4、BB、EBB）对培养的恶性黑色素瘤细胞（BowesCell）增殖都有明显的抑制作用，其抑制增殖的IC50值分别为小檗胺（Bo）9．5μmol、B2：3．34μmol、B4：3.04μmol、BB：4．5μmol、EBB：1．5μmol。对3H-TdR掺入和单细胞集落形成（克隆）以及脱氢酶活性同样有明显的抑制作用，其作用特点是经化学修饰后的小梁胺的作用比母体小檗胺强；而4种衍生物中，EBB的抑制效果最强。     

顺铂或奥沙力铂联合热疗对人胃癌细胞系BGC-823抑制作用的比较

目的：比较顺铂或奥沙力铂联合热疗对人未分化胃腺癌细胞系BGC-823增殖的抑制作用。方法：使用MTY法检测细胞增殖，确定顺铂和奥沙力铂对BGC-823抑制的工作浓度，并以该浓度进行化疗或与热疗联合应用，根据Veleriote法判断热、化疗联合应用后24h或48h的作用效果，并将顺铂和奥沙力铂联合热疗的作用进行比较。结果：以20％～30％抑制率的药物浓度作为试验的工作浓度，确定顺铂和奥沙力铂的工作浓度分别为1μg／ml和5μg／ml。单纯43℃热疗1h后，在24h时和48h时对BGC-823的抑制作用无统计学意义（P〉0．05）；应用顺铂1μg／ml和奥沙力铂5μg／ml后24h对BGC-823无显著的抑制作用（P〉0．05），48h时呈现显著的抑制作用（P〈0．01）。应用两药联合43℃热疗1h，在24h和48h对BGC-823均有显著的抑制作用（P〈0．05），随着时间的延长，对BGC-823的抑制作用增强（P〈0．05）。单药化疗在24h或48h时，两药的抑制作用无统计学差异（P〉0．05），顺铂联合热疗对BGC-823的抑制作用在24h和48h时均比奥沙力铂联合热疗的抑制作用强（P〈0．05）。根据Veleriote法判断：顺铂1μg／ml联合热疗在24h和48h时均呈明显的协同作用；奥沙力铂5μg／ml联合热疗在24h时产生次加作用，在48h产生协同作用。结论：顺铂或奥沙力铂联合热疗在24h和48h时呈现次加或协同作用，两种药物相比，顺铂比奥沙力铂作用更强。     

胡桃醌联合顺铂对肝癌HepG2细胞增殖的影响

目的 探讨胡桃醌与顺铂（DDP）联合应用对人肝癌HepG2细胞增殖的影响.方法采用不同浓度的胡桃醌或（和）顺铂处理肝癌HepG2细胞24 h,采用倒置显微镜观察细胞的形态学变化,通过MTT法检测其对HepG2细胞生长的抑制作用.结果 不同浓度的药物作用可导致HepG2细胞发生形态学变化,MTT比色法测定显示,采用胡桃醌、顺铂合用,可显著抑制HepG2细胞的增殖,单用不同浓度的胡桃醌与顺铂分别作用于肝癌HepG2细胞后可以抑制其增殖且呈剂量依赖性.胡桃醌联合顺铂增强了HepG2细胞的凋亡.结论 胡桃醌联合顺铂与单药相比能更显著抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,促进其凋亡,两药对肝癌细胞的杀伤效应具有一定的协同作用.     

NS-398联合顺铂对Eca-109细胞增殖及凋亡的影响

目的:观察环氧化物酶-2选择性抑制剂NS-398联合顺铂对食管癌Eca-109细胞增殖及凋亡的影响.方法:采用细胞增殖抑制实验(CCK-8法)检测不同-质量浓度的顺铂(1.25、2.50、5.00和10.00 ms/L)单用及联合小剂量(1.00和10.00 μmol/L)NS-398作用于人食管癌Eca-109细胞24 h后细胞增殖抑制率;采用流式细胞仪检测细胞周期的改变及早期凋亡情况.结果:顺铂、N-398单用及2者联合对Eca-109细胞均有抑制增殖作用(F顺铂=1391.300,FNS-398=642.898,F交互=15.254,P均<0.001),可阻止细胞周期的进程(G0/G1期:F顺铂=1308.300,FNS-398=133.138,F交互=26.692,P均<0.001;S期:F顺铂=1470.300,FNS-398=149.638,F交互=30.000,P均<0.001),诱导细胞凋亡(F顺铂=39.493,P<0.001,FNS-398=0.000,P=0.987;F交互=4.325,P=0.006).顺铂联合NS-398对Eca-109细胞的作用明显强于顺铂单用,且随着NS-398剂量的增高而增高(P<0.01).结论:NS-398能够增强顺铂对食管癌细胞的生长抑制和诱导凋亡效应.     

槲皮素联合顺铂对宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨槲皮素联合顺铂对HeLa细胞增殖及凋亡的影响。方法:不同浓度槲皮素及不同浓度槲皮素联合顺铂处理HeLa细胞24 h后,采用MTT检测细胞的增殖活性、流式细胞仪Annexin V-FITC/PI法检测细胞的凋亡情况、激光扫描共聚焦显微镜观察用PI荧光标记的细胞核的形态学变化。结果:槲皮素能抑制HeLa细胞增殖,且呈剂量依赖性;槲皮素联合顺铂与相同浓度顺铂单用处理HeLa细胞相比,前者对HeLa细胞的抑制作用更显著(P<0.01);不同浓度槲皮素与顺铂联合处理HeLa细胞与顺铂单用相比,前者显著提高了HeLa细胞的凋亡率(P<0.01)。结论:槲皮素可显著抑制HeLa细胞增殖并诱导其凋亡,槲皮素与顺铂联合应用具有一定的协同效应。     

小檗碱对人肝癌Bel-7402细胞增殖和凋亡的影响

目的观察小檗碱对人肝癌Bel-7402细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用.方法体外培养人肝癌Bel-7402细胞,台盼兰活细胞计数及集落形成抑制实验观察不同浓度小檗碱对Bel-7402细胞的增殖抑制作用,Hochest33258染色观察凋亡形态学变化,流式细胞仪分析细胞周期及凋亡率.结果小檗碱可显著抑制Bel-7402细胞生长,使集落形成能力明显下降,均呈时间、剂量依赖性.小檗碱处理后72 h,Hochest33258染色可观察到细胞核边集、固缩,有明显凋亡小体形成,流式细胞仪检测出现明显Sub-G1峰.结论小檗碱可以抑制人肝癌Bel-7402细胞增殖,诱导细胞凋亡,小檗碱可能具有治疗人肝细胞癌的潜在应用价值.     

人胃癌SGC7901细胞株中干细胞对顺铂耐药的作用机制探讨

目的 探讨人胃癌SGC7901细胞中干细胞对顺铂耐药的作用机制.方法 胃癌顺铂耐药细胞株SGC7901/DDP为实验组,胃癌SGC7901细胞为对照组,分别以Hoechst33342染色法、免疫组织化学、Transwell小室检测实验组及对照组的SP细胞(side population,SP)比例、Nanog的表达及细胞侵袭力.结果 实验组中细胞株侧群SP细胞的比例为(5.51±1.68)％,显著高于对照组(2.45±0.63)％(P＜0.05);实验组中Nanog的阳性表达率为(79.06±10.37)％,显著高于对照组(55.18+3.64)％(P＜0.05);实验组穿膜细胞数为(65±7)个,显著高于对照组(41±6)个(P＜0.05).实验组胃癌细胞的生长抑制率均显著低于对照组(P＜0.05);顺铂对实验组和对照组细胞的IC50值分别为(3.9±1.1)μmol/L和(25.7±2.3)μmol/L,实验组显著高于对照组(P＜0.05).结论 胃癌干细胞可能与胃癌对顺铂耐药的机制密切相关,其中胃癌干细胞标志物SP细胞比例增高、Nanog基因高表达及细胞侵袭力增强发挥着重要作用.