阿托伐醌通过ROS介导的自噬抑制结直肠癌细胞增殖的研究

目的研究阿托伐醌抑制结直肠癌细胞增殖的作用机制。方法通过MTT法和细胞克隆实验检测阿托伐醌对结直肠癌细胞增殖的影响;免疫荧光、免疫印迹和流式细胞术检测阿托伐醌处理结直肠癌细胞后凋亡、自噬水平的变化以及胞内活性氧(ROS)的产生。结果阿托伐醌对结直肠癌细胞的增殖有浓度依赖性抑制作用,但凋亡水平无明显变化;阿托伐醌可促进结直肠癌细胞自噬,激活胞内ROS的产生;且抑制自噬可削弱阿托伐醌对结直肠癌增殖的抑制;同时,ROS清除剂NAC能抑制阿托伐醌诱导的结直肠癌细胞自噬。结论阿托伐醌通过促进结直肠癌细胞胞内ROS的产生诱导细胞自噬,进而抑制结直肠癌细胞增殖。     

米诺环素通过自噬抑制结肠癌细胞增殖的作用研究

目的 研究米诺环素对结肠癌细胞增殖的抑制作用及其作用机制。方法 采用MTT法和细胞克隆形成法检测米诺环素对人结肠癌细胞LoVo细胞增殖的影响;TUNEL染色、免疫荧光和免疫印迹检测米诺环素处理LoVo细胞后凋亡和自噬水平的变化;结果 米诺环素处理LoVo细胞后,细胞增殖受到抑制且呈浓度依赖性,凋亡水平无明显变化,而自噬水平上升;同时,抑制自噬能抵抗米诺环素对LoVo细胞增殖的抑制。结论 米诺环素通过促进自噬进而抑制结肠癌细胞增殖。     

伊曲康唑促进结肠癌细胞自噬的作用及机制研究

目的 研究伊曲康唑促进人结肠癌细胞SW480自噬的作用及机制.方法 通过MTT法及克隆形成实验检测伊曲康唑对细胞生长增殖的影响,采用免疫荧光及免疫印迹检测伊曲康唑对自噬相关标志蛋白的表达,免疫印迹检测AKT-mTOR信号通路关键蛋白的表达.结果 伊曲康唑显著抑制SW480细胞的增殖速率,并且抑制程度呈药物浓度依赖性.免疫荧光和免疫印迹实验结果表明,伊曲康唑促进细胞自噬,并通过调控AKT-mTOR信号通路来实现.结论 伊曲康挫通过抑制AKT-mTOR信号通路来促进结肠癌细胞自噬.     

活性氧簇及其介导的自噬

活性氧簇与自噬的关系复杂,近年的科学研究发现,活性氧簇作为一种信号分子具有多种功能,不仅参与细胞的增殖和分化,还参与细胞内自噬的形成。现对活性氧簇与自噬的相关联系,包括调节自噬的活性氧分子,活性氧簇介导自噬的机制,以及活性氧簇和自噬在缺血/再灌注损伤、肿瘤和感染中的作用进行综述,以期为相关疾病的治疗提供新的策略。     

自噬在染料木素抑制结肠癌HCT116细胞增殖中的作用

目的:观察染料木素(genistein)对结肠癌HCT116细胞的自噬诱导作用并探讨其在抗肿瘤增殖中的作用。方法:不同浓度(0、5、10、20、40、60、80 mg/L)染料木素及80 mg/L染料木素联合2 mmol/L自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)分别作用于HCT116细胞24、48、72 h后,CCK8法检测细胞增殖活力。通过双荧光素酶慢病毒载体构建LC3及突变LC3(LC3 Mu)基因过表达的HCT116细胞,经100 mg/L的染料木素处理24 h后,荧光显微镜观测荧光在细胞内聚集情况。不同浓度(0、10、50、100 mg/L)染料木素处理HCT116细胞24 h后,Western blot检测细胞内LC3蛋白Ⅱ/Ⅰ的比例。结果:CCK8法细胞增殖实验的结果表明,染料木素对HCT116细胞具有显著的增殖抑制作用,染料木素对HCT116细胞的增殖抑制呈时间-剂量依赖性(P0.01)。染料木素对HCT116细胞的24 h、48 h、72 h半数抑制浓度IC50分别为85.70 mg/L、34.44 mg/L、20.56 mg/L,而3-MA可以降低染料木素对HCT116细胞的抗增殖作用(P0.01)。荧光显微镜观测结果表明,染料木素可以诱导HCT116细胞中LC3荧光蛋白的聚集(P0.01),从而参与自噬小体的形成;Western blot结果显示,随着染料木素浓度的增加,LC3蛋白Ⅱ/Ⅰ的比例逐渐升高(P0.01)。结论:染料木素可能通过上调LC3蛋白Ⅱ/Ⅰ的比例诱导细胞内自噬体的产生,从而抑制结肠癌细胞的增殖。     

积雪草酸对结肠癌HCT116细胞增殖及自噬水平的影响

目的:观察积雪草酸对结肠癌HCT116细胞增殖和自噬水平的影响。方法:用10、30、60、90μmol/L的积雪草酸作用于结肠癌HCT116细胞24、48 h,用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测细胞存活率;用MDC自噬特异性荧光染料观察自噬囊泡的形成情况;蛋白质印迹法检测30、60、90μmol/L的积雪草酸作用12 h和90μmol/L积雪草酸作用4、8、12 h的细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、p62、p-m TOR、p-4EBP1的表达。结果:积雪草酸90μmol/L对结肠癌HCT116细胞有明显抑制作用;30、60、90μmol/L积雪草酸均可以诱导结肠癌细胞发生自噬,90μmol/L积雪草酸作用4、8、12 h,自噬蛋白LC3-Ⅱ生成明显增加;90μmol/L积雪草酸与氯喹5μmol/L共同作用于癌细胞12 h,能促进自噬潮的产生;积雪草酸可抑制p-m TOR、p-4EBP1的表达。结论:积雪草酸能明显抑制结肠癌HCT116细胞的增殖,并呈时间、剂量依赖性地抑制m TOR-4EBP1通路来诱导自噬潮的产生。     

柚皮素通过自噬抑制乳腺癌细胞增殖的作用机制

目的 探讨柚皮素对人乳腺癌细胞株MCF-7和小鼠乳腺癌细胞系4T1的作用机制。方法 选择人乳腺癌细胞株MCF-7和小鼠乳腺癌细胞系4T1为实验对象,设置对照组和柚皮素组,其中柚皮素组分为20、40、80和120μmol/L 4个浓度,利用CCK-8、平板克隆形成实验检测柚皮素对乳腺癌细胞的增殖作用,应用流式细胞术检测柚皮素对乳腺癌细胞的凋亡作用。建立乳腺癌移植瘤模型,应用柚皮素作用于模型小鼠,探讨柚皮素在体内抗肿瘤作用。通过荧光定量PCR和蛋白免疫印迹实验检测自噬相关基因,分析其作用机制。结果 经柚皮素处理后,乳腺癌细胞的增殖明显受到抑制,正常乳腺癌细胞增殖情况变化不大,MCF-7乳腺癌细胞和小鼠乳腺癌4T1均出现明显的凋亡（P<0.001）。结论 柚皮素可以抑制乳腺癌细胞的增殖,且对正常乳腺细胞无明显毒副作用。柚皮素通过凋亡和自噬方式促进乳腺癌细胞的死亡,体内实验结果显示柚皮素具有抗肿瘤作用,并可促进其坏死。     

三氧化二砷通过自噬作用抑制A549肺癌细胞的生长

目的探讨三氧化二砷对肺癌细胞生长的影响,揭示三氧化二砷抗癌作用的机制。方法培养人肺癌细胞A549,给予不同药物浓度三氧化二砷药物处理;利用CCK8检测三氧化二砷对A549细胞活力的影响;以自噬试剂盒观测细胞的自噬情况。结果 10、25、50和100μmol/L三氧化二砷明显抑制A549的细胞活力(P<0.05)。三氧化二砷处理后镜下见阳性自噬细胞增多,自噬率增加。结论 AS2O3可抑制A549肺癌细胞生长,这种效应可能通过诱导细胞自噬来发挥作用。     

溶酶体膜蛋白sidt2介导肝脏细胞的凋亡：不通过抑制自噬溶酶体途径

目的 研究溶酶体膜蛋白Sidt2敲除后在肝脏细胞中调控凋亡的途径。方法 利用Crispr-Cas9技术构建Sidt2敲除的人肝脏(HL7702)细胞模型,检测Sidt2和自噬关键蛋白LC3-/、P62蛋白水平,MDC染色观察自噬体形成情况,通过EdU和流式细胞实验观察Sidt2对肝脏细胞增殖活性和凋亡的影响,并且使用0、10、25、50、100、200μmol/L的氯喹(CQ)摸索肝脏细胞CQ饱和浓度,检测对其自噬流的影响,以及使用CQ进一步探索影响肝脏细胞的增殖活性其凋亡水平的机制。结果 成功构建HL7702细胞Sidt2^+/+组及Sidt2^-/-组。Sidt2基因缺失可导致肝脏细胞增殖被抑制和凋亡水平的增加,自噬关键蛋白LC3-/和P62在蛋白水平上的表达均增加且自噬体含量增加(P<0.05)。结果显示50μmol/L CQ作用下肝脏细胞自噬达到饱和状态,50μmol/L CQ使Sidt2基因缺失时LC3B和P62的表达均增加(P<0.05),且CQ进一步降低肝脏细胞活性,并促进其凋亡水平(P<0.05)。结论在离体水平...     

阿托伐他汀通过抑制氧化应激预防对比剂肾病

摘要：目的观察不同剂量阿托伐他汀对接受冠脉造影术或者PCI术的患者术后肾功能的影响并探讨其可能的机制。方法入
选在我院因急性冠脉综合征（ACS）接受冠脉造影术或者PCI术的患者180例,随机分为2组,阿托伐他汀低剂量治疗组（A组）和
阿托伐他汀高剂量治疗组（B组）,90例/组。检测血肌酐、肾小球率过滤（eGFR）、血胱抑素等指标,评估患者的肾功能。测定外
周血髓过氧化物酶（MPO）水平,丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）等氧化应激指标。结果术后3d内,高剂量阿托伐他
汀治疗组有6例发生对比剂肾病（CIN),而常规剂量他汀治疗组有18例诊断CIN,P<0.05。术后48~72h,阿托伐他汀高剂量治
疗组（B组）血肌酐、血胱抑素低于阿托伐他汀低剂量治疗组（A组）,eGFR高于阿托伐他汀低剂量治疗组（A组）,P<0.05。术后
24h阿托伐他汀高剂量治疗组（B组）患者MPO和MDA水平低于阿托伐他汀低剂量治疗组（A组）,SOD活性高于阿托伐他汀低
剂量治疗组（A组）,P<0.05。结论术前强化阿托伐他汀治疗可能可以预防对比剂肾病,机制可能与抑制氧化应激有关。
     

阿托伐他汀对血管内皮细胞自噬作用的影响

目的 观察不同时相使用阿托伐他汀对血管内皮细胞自噬的影响,探讨其保护血管内皮细胞的可能机制. 方法 采用Hanks液替代培养基进行饥饿诱导血管内皮细胞发生自噬.在诱导自噬前和诱导过程中,使细胞分别与含或不含阿托伐他汀的正常培养基或Hanks液共孵育,随机分为空白对照组、诱导前和诱导中都应用阿托伐他汀组、仅在诱导中应用阿托伐他汀组和仅在诱导前应用阿托伐他汀组,并应用透射电镜检测各组细胞发生自噬的情况. 结果电镜下各组细胞均出现典型自噬细胞形态学改变.与对照组相比,诱导前和诱导中都应用阿托伐他汀组和仅在诱导中应用阿托伐他汀组的自噬泡占胞质总面积的比值均明显降低(P＜0.01).诱导前应用阿托伐他汀组的该比值低于对照组,无明显差异(P>0.05).诱导前和诱导中都应用阿托伐他汀组的该比值低于仅在诱导中应用阿托伐他汀组,无明显差异(P>0.05). 结论 阿托伐他汀可以抑制血管内皮细胞自体吞噬,这一作用可能与阿托伐他汀改善血管内皮功能的机制有关.     

丹皮酚对大肠癌细胞增殖、凋亡及自噬的影响

目的 观察丹皮酚(Paeonol)对大肠癌细胞增殖、凋亡及自噬的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 用不同浓度的丹皮酚(0、30、60、120mg/L)在体外处理大肠癌LoVo细胞,分别用CCK-8比色法、PI/Annexin V双染法、蛋白质印迹法检测LoVo细胞活力、细胞凋亡率、细胞凋亡相关蛋白(Bax和Bcl-2)及自噬相关基因蛋白(Atg5、LC3-Ⅱ和Beclin1)的表达情况。结果 通过丹皮酚处理后,CCK-8比色法显示丹皮酚以剂量、时间依赖的方式抑制LoVo细胞的增殖;PI/Annexin V双染后流式细胞仪检测显示,随着药物浓度的增加,LoVo细胞凋亡率也逐渐增加;免疫印迹结果显示,LoVo细胞凋亡相关蛋白Bax蛋白表达增加,抗凋亡相关蛋白Bcl-2蛋白的表达降低;此外,丹皮酚能上调LoVo细胞自噬相关基因Atg5、LC3-Ⅱ和Beclin1蛋白的表达。结论 丹皮酚对大肠癌LoVo细胞有明显的抗增殖和促凋亡作用,其机制可能是通过诱导细胞自噬实现的。     

自噬对血管平滑肌细胞增殖的影响

血管平滑肌细胞异常增殖是血管增殖性疾病的病理基础,自噬是真核生物维持细胞内环境稳态的一种自我保护机制。近年来的研究发现,自噬参与多种细胞因子、血管活性物质、剪切应力、ncRNA等诱导的血管平滑肌细胞增殖,一些抗血管增生性疾病的药物往往通过调节自噬通量和自噬活性发挥抗血管平滑肌细胞增殖作用。本文综述了自噬对血管平滑肌细胞增殖的影响,为探索血管增生性疾病的病理生理机制提供新的思路。     

自噬对血管平滑肌细胞增殖的影响

血管平滑肌细胞异常增殖是血管增殖性疾病的病理基础,自噬是真核生物维持细胞内环境稳态的一种自我保护机制。近年来的研究发现,自噬参与多种细胞因子、血管活性物质、剪切应力、ncRNA等诱导的血管平滑肌细胞增殖,一些抗血管增生性疾病的药物往往通过调节自噬通量和自噬活性发挥抗血管平滑肌细胞增殖作用。本文综述了自噬对血管平滑肌细胞增殖的影响,为探索血管增生性疾病的病理生理机制提供新的思路。     

miR-506在结肠癌中的表达及其对结肠癌细胞自噬的影响

目的研究miR-506在结肠癌中的表达及其对结肠癌细胞自噬的影响。方法收集74例结肠癌患者的癌组织和癌旁组织标本,采用RT-PCR检测miR-506和Beclin1的mRNA表达水平,并分析二者的相关性。培养结肠癌细胞系HCT116、SW48、COLO225细胞,分别转染miR-506 mimic、miR-506 inhibitor或miR-control,采用RT-PCR检测Beclin1的mRNA表达水平,并用Target scan分析Beclin1是否可能与miR-506结合。培养COLO225细胞,分别转染miR-506 mimic、miR-506 inhibitor或miR-control,采用Western blot检测p62、Beclin1和LC3BⅠ/Ⅱ的蛋白表达水平。结果结肠癌患者癌组织标本miR-506、Beclin1的mRNA表达水平显著高于癌旁组织标本[（0.607±0.092）比（0.251±0.089）、（0.546±0.121）比（0.266±0.156）,t=23.995、12.203,均P<0.001],而且二者的表达呈显著正相关（r=0.786、P<0.001）。在转染miR-506 mimic后,HCT116、SW48、COLO225细胞中Beclin1的表达均显著升高（P<0.05）,在转染miR-506 inhibitor后,HCT116、SW48、COLO225细胞中Beclin1的表达均显著降低（P<0.05）,Target scan分析表明,Beclin1上存在可与miR-506相互结合的序列。在转染miR-506 mimic后,COLO225细胞中p62、Beclin1的表达显著升高（P<0.05）,LC3BⅠ向LC3BⅡ转化增加;在转染miR-506 inhibitor后,COLO225细胞中p62、Beclin1的表达显著降低（P<0.05）,LC3BⅡ向LC3BⅠ转化增加。结论 miR-506可促进结肠癌中Beclin1的表达并可促进结肠癌细胞自噬。     

氟苯达唑促进结肠癌细胞自噬性凋亡的研究

目的 研究氟苯达唑对结肠癌细胞的抑制作用及其作用机制.方法 通过MTT法检测氟苯达唑对HCT116细胞的生长抑制作用及其有效作用浓度;免疫荧光检测氟苯达唑对细胞自噬水平的影响;免疫印迹检测经氟苯达唑及自噬抑制剂共处理后细胞凋亡标志蛋白的表达情况.结果 氟苯达唑可抑制HCT116细胞的增殖,并呈现药物浓度依懒性.免疫荧光及免疫印迹结果表明,氟苯达唑促进HCT116细胞自噬.自噬抑制剂3-MA与氟苯达唑共处理结果表明,自噬抑制剂能够抵抗氟苯达唑诱发的细胞凋亡.结论 氟苯达唑通过诱发结肠癌细胞自噬进而促进结肠癌细胞凋亡.